專(zhuān)利名稱(chēng)：用于保存臍帶組織的液體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一種用于保存生物組織成分的保存液體，更具體講是一種用于保存臍帶組織成分的保存液體。
背景技術(shù)：
人體臍帶組織可以制備分離出優(yōu)質(zhì)的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)。MSCs是一種具有自我更新和多項(xiàng)分化潛能的多能成體干細(xì)胞，其具有巨大的應(yīng)用潛力，例如，可以為造血干細(xì)胞(HSCs)提供合適的微環(huán)境、可以預(yù)防和治療異體造血干細(xì)胞移植后產(chǎn)生的移植物抗宿主病(GVHD)，以及治療自生免疫性疾病，如紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和硬皮病等。MSCs在通過(guò)體外的培養(yǎng)和擴(kuò)增達(dá)到臨床應(yīng)用細(xì)胞的過(guò)程中，其組織/細(xì)胞在制備培養(yǎng)的全過(guò)程中都需要處于無(wú)菌狀態(tài)。為保證采集好的臍帶在運(yùn)輸和貯存過(guò)程中能保持無(wú)菌，傳統(tǒng)采用將臍帶組織浸沒(méi)在PBS采集液里進(jìn)行保存。由于PBS的配制復(fù)雜，自行配制時(shí)， 在大批量制備上會(huì)增加大量的工作量，若購(gòu)買(mǎi)成品，則因其價(jià)格昂貴，使用成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于此，本發(fā)明提供了一種用于保存臍帶組織的液體，實(shí)驗(yàn)表明可以滿(mǎn)意解決上述問(wèn)題。本發(fā)明用于保存臍帶組織的液體，采用的是含有青霉素和鏈霉素的生理鹽水溶液。其中，每毫升生理鹽水中含青霉素50U-150U，含鏈霉素50mg-150mg。根據(jù)所使用的生理鹽水來(lái)源或配制等不同，還允許含有可接受量的其它雜質(zhì)性成分。優(yōu)選的是，上述用于保存臍帶組織的液體為每毫升生理鹽水中的青霉素含量為 100U，和/或每毫升生理鹽水中的鏈霉素含量為lOOmg。上述用于保存臍帶組織的液體中，所說(shuō)的生理鹽水優(yōu)選為采用醫(yī)用氯化鈉注射液。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在用于臍帶組織成分保存和/或培養(yǎng)、擴(kuò)增時(shí)，本發(fā)明上述含有青霉素和鏈霉素(雙抗)的生理鹽水保存液體完全可以替代傳統(tǒng)同樣使用雙抗的PBS。由于生理鹽水的顯著優(yōu)點(diǎn)，是滲透壓與人體的滲透壓一致，PH值也與人體的生理環(huán)境相當(dāng)，能很好地保護(hù)組織和細(xì)胞不受刺激和損害。特別是氯化鈉注射液作為一種臨床常用藥劑，已有多家大型專(zhuān)業(yè)藥廠(chǎng)生產(chǎn)，并都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗(yàn)，來(lái)源廣泛，質(zhì)量可靠，價(jià)格便宜。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，本發(fā)明的上述保存液體的有效期限已超過(guò)半年，并還可以繼續(xù)延長(zhǎng)。以下結(jié)合附圖所示實(shí)施例的方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。 但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段做出的各種替換或變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。


圖1是在存放0天的本發(fā)明的一種保存液體和傳統(tǒng)保存液中儲(chǔ)存24h內(nèi)臍帶分離制備的msc狀態(tài)示意圖。圖2是在存放0天的該同一種本發(fā)明和傳統(tǒng)保存液中儲(chǔ)存7天臍帶分離制備的 msc狀態(tài)示意圖。圖3是在存放30天的該同一種本發(fā)明和傳統(tǒng)保存液中儲(chǔ)存M小時(shí)內(nèi)臍帶分離制備的msc狀態(tài)示意圖。圖4是在存放30天的該同一種本發(fā)明和傳統(tǒng)保存液中儲(chǔ)存7天臍帶分離制備的 msc狀態(tài)示意圖。圖5是在存放9個(gè)月的該同一種本發(fā)明和傳統(tǒng)保存液中儲(chǔ)存M小時(shí)內(nèi)臍帶分離制備的msc狀態(tài)示意圖。圖6是在存放9個(gè)月的該同一種本發(fā)明和傳統(tǒng)保存液中儲(chǔ)存7天臍帶分離制備的 msc狀態(tài)示意圖。圖7是在本發(fā)明的另一種保存液體中儲(chǔ)存M小時(shí)內(nèi)臍帶分離制備的msc狀態(tài)示意圖。圖8是在本發(fā)明的又一種保存液體中儲(chǔ)存M小時(shí)內(nèi)臍帶分離制備的msc狀態(tài)示意圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
在無(wú)菌條件下將經(jīng)過(guò)0. 22um濾膜過(guò)濾HYCL0NE公司生產(chǎn)的青-鏈霉素，用氯化鈉注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))配制成濃度為每毫升中含有青霉素100U和含鏈霉素 IOOmg的混合溶液)，然后無(wú)菌分裝至已滅菌的采集瓶?jī)?nèi)，每瓶150ml。實(shí)施例2
取本發(fā)明上述實(shí)施例1的保存液體，分別進(jìn)行了抑菌效果試驗(yàn)和臍帶存放后生長(zhǎng)性實(shí)驗(yàn)，同時(shí)取該保存液體適量，分別在2飛。C和常溫存放30天和9個(gè)月后，再進(jìn)行抑菌效果測(cè)定和臍帶存放后生長(zhǎng)性實(shí)驗(yàn)，并與傳統(tǒng)PBS保存液進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)對(duì)照。對(duì)照用的傳統(tǒng)PBS 保存液的配制方法
PBS溶劑組成NaCl
KCl
Na2HPO4 · 12H20
8. Og
0. 2g
2. 9g 0. 2g IOOOml0 990ml IOml IOOOml0
KH2PO4 超純水至PBS保存液組成PBS滅菌溶劑
青-鏈霉素混合溶液 "PBS+雙抗”保存液PBS保存液配制方法按以上組成稱(chēng)取各種藥品，用超純水溶解稀釋至規(guī)定量， 進(jìn)行濕熱蒸汽滅菌(12rC，20min)，將滅菌好的溶液在超凈工作臺(tái)內(nèi)按1:100的比例加入經(jīng)過(guò)0. 22um濾膜過(guò)濾的HYCL0NE公司生產(chǎn)的青-鏈霉素混合液(每毫升液體中含青霉素 100U，含鏈霉素lOOmg)，分裝到臍帶采集瓶?jī)?nèi)，每瓶分裝150ml，加蓋旋緊后，用滅菌復(fù)合袋進(jìn)行密封保存，放置在2 6°C和20°C下放置0天、30天和9個(gè)月后進(jìn)行抑菌效果測(cè)定和臍帶存放后，以同樣方式做抑菌效果試驗(yàn)和臍帶存放后生長(zhǎng)性實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行對(duì)比。一、采集品的抑菌實(shí)驗(yàn)
抑菌效果測(cè)定采用微量肉湯法，試驗(yàn)藥物濃度最大為50μ g (U)/ml，為實(shí)際藥物濃度
的一半。微量肉湯稀釋法步驟根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，用常規(guī)的MH肉湯(營(yíng)養(yǎng)肉湯)將增菌液稀釋至 IO5-IO6 個(gè) /ml ；
將混勻的菌液加至96孔板，每孔100 μ 1 ；
在第一列分別加入采集液100 μ 1，每批采集液兩個(gè)，充分吹打混勻后吸取100 μ 1至第二列，一直倍比稀釋至第11列，37°C培養(yǎng)12-1^1。結(jié)果記錄以無(wú)菌生長(zhǎng)的最后一列對(duì)應(yīng)的列數(shù)作為結(jié)果記錄，以高濃度和底濃度都長(zhǎng)菌為耐藥，高濃度不長(zhǎng)菌、低濃度長(zhǎng)菌表示為中度抑菌，高濃度和低濃度都不長(zhǎng)為高度抑菌。 保存液存儲(chǔ)0天和30天的抑菌效果，以及存儲(chǔ)9個(gè)月抑菌效果的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如表 1所示。其中，本發(fā)明實(shí)驗(yàn)組和PBS對(duì)照組各有3組平行的試驗(yàn)樣本。、
表ι 保存液存放不網(wǎng)時(shí)W后的的摔__果
權(quán)利要求
1.用于保存臍帶組織的液體，其特征是為含有青霉素和鏈霉素的生理鹽水溶液，每毫升生理鹽水中含青霉素50U-150U，含鏈霉素50mg-150mg。
2.如權(quán)利要求1所述的用于保存臍帶組織的液體，其特征是所說(shuō)的每毫升生理鹽水中含青霉素100U。
3.如權(quán)利要求1所述的用于保存臍帶組織的液體，其特征是所說(shuō)的每毫升生理鹽水中含鏈霉素lOOmg。
4.如權(quán)利要求1至3之一所述的用于保存臍帶組織的液體，其特征是所說(shuō)的生理鹽水為醫(yī)用氯化鈉注射液。
全文摘要
用于保存臍帶組織的液體，為每毫升生理鹽水中含青霉素50U-150U，含鏈霉素50mg-150mg的溶液。該保存液體來(lái)源廣泛，質(zhì)量穩(wěn)定、價(jià)格便宜，且實(shí)驗(yàn)顯示，本發(fā)明的液體與傳統(tǒng)的PBS保存源在抑菌性、對(duì)采集的臍帶組織的有效保存性等方面無(wú)明顯差別，保存液的有效期至少可達(dá)半年，并可繼續(xù)延長(zhǎng)。
文檔編號(hào)A01N1/02GK102550543SQ20121002995
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月10日
發(fā)明者任瑩瑩, 王榮, 鄧云濤 申請(qǐng)人:四川新生命干細(xì)胞科技股份有限公司