殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評價方法
【專利摘要】提供能夠提高殺菌效果的殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評價方法。使包含過氧化氫、以及含有黃芩或綠茶的過氧化氫酶活性抑制劑的殺菌劑接觸口腔內(nèi)的牙齒、假牙等殺菌對象。然后，利用包含半導(dǎo)體激光器的發(fā)光單元，對殺菌對象照射具有350nm～500nm的波長的光。從而，過氧化氫發(fā)生光分解、產(chǎn)生羥自由基，能夠利用所產(chǎn)生的羥自由基進行殺菌。
【專利說明】殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評價方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評價方法。

【背景技術(shù)】
[0002]作為現(xiàn)有的殺菌方法，有使過氧化氫等氧化劑接觸殺菌對象、對殺菌對象照射400nm~100nm的波長的光的方法(參照例如專利文獻I)。根據(jù)該方法，對過氧化氫照射400nm~100nm的波長的光、使其產(chǎn)生輕自由基,能夠利用該輕自由基進行殺菌。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)文獻
[0004]專利文獻
[0005]專利文獻1:日本特開2008-284312號公報


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題
[0007]專利文獻I所述的方法存在如下課題:在存在于殺菌對象中的細胞、微生物所具有的過氧化氫酶作用下，部分過氧化氫發(fā)生分解，因此對這些細胞、微生物的殺菌效果下降。
[0008]本發(fā)明正是著眼于這樣的課題而做出的，目的在于提供能夠提高殺菌效果的殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評價方法。
[0009]解決技術(shù)問題的技術(shù)手段
[0010]本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，存在于殺菌對象中的細胞、微生物所具有的過氧化氫酶，使生成具有高抗菌性的羥自由基的基質(zhì)即過氧化氫分解。本發(fā)明人等使用為過氧化氫酶陽性的細菌及真菌的金黃色葡萄球菌(Streptococcus aureus)ATCC12693及白色念珠菌(Candidaalbicans) JCM9061，對于它們與羥自由基的反應(yīng)測定DMPO-OH的變化并通過雙倒數(shù)作圖(Lineweaver-Burk Plot)進行解析。將其結(jié)果不于圖1。
[0011]如圖1所示，發(fā)現(xiàn):菌的細胞數(shù)不同的所有直線在1/DMP0濃度的負數(shù)側(cè)相交，不僅金黃色葡萄球菌及白色念珠菌與羥自由基反應(yīng)，而且這些微生物所具有的過氧化氫酶也與過氧化氫反應(yīng)。予以說明，若金黃色葡萄球菌及白色念珠菌僅與羥自由基反應(yīng)則菌的細胞數(shù)不同的所有直線在1/DMP0-OH濃度軸上相交，若過氧化氫酶僅與過氧化氫反應(yīng)則菌的細胞數(shù)不同的所有直線應(yīng)當平行。
[0012]需要說明的是，圖1所示的實驗如下實施，即，在對金黃色葡萄球菌及白色念珠菌的細胞數(shù)進行各種改變的200 μ L(微升)菌液的各試樣中，加入25~300mM的自由基捕捉劑:DMP0 (5, 5-Dimethyl-pyrrolin-N-oxide, 5，5- 二甲基-吡咯啉-N-氧化物)50 μ L,再加入0.5Μ的過氧化氫450 μ L，然后照射波長400±20nm的LED光I分鐘，I分鐘后進行ESR (電子自旋共振)測定。
[0013]本發(fā)明人等由圖1所示的結(jié)果，獲得了通過加入過氧化氫酶活性抑制劑來降低細胞、微生物的過氧化氫酶活性，從而能夠進行有效的羥自由基殺菌的見解，直至完成本發(fā)明。
[0014]即，本發(fā)明的殺菌劑的特征為，包含過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑。
[0015]本發(fā)明的口腔用殺菌劑的特征為，包含過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑。
[0016]本發(fā)明的殺菌劑及口腔用殺菌劑按照下述方式使用。首先，將本發(fā)明的殺菌劑及口腔用殺菌劑涂布或噴霧到殺菌對象上使其接觸殺菌對象。此時，由于包含過氧化氫酶活性抑制劑，因此即使殺菌對象中存在過氧化氫酶陽性細菌和真菌等細胞、微生物，也能夠降低它們的過氧化氫酶活性，能夠防止過氧化氫酶與過氧化氫反應(yīng)。
[0017]然后，對殺菌對象照射規(guī)定波長的光。從而，過氧化氫發(fā)生光分解、產(chǎn)生羥自由基，因此能夠利用所產(chǎn)生的羥自由基進行殺菌。此時，能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑降低存在于殺菌對象中的細胞、微生物的過氧化氫酶活性，因此能夠防止通過過氧化氫酶與過氧化氫反應(yīng)而產(chǎn)生的羥自由基減少。
[0018]由此，本發(fā)明的殺菌劑及口腔用殺菌劑，能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑防止產(chǎn)生羥自由基的過氧化氫與存在于殺菌對象中的細胞、微生物所具有的過氧化氫酶反應(yīng)而減少，結(jié)果防止由過氧化氫產(chǎn)生的羥自由基的減少，因此能夠提高利用羥自由基實現(xiàn)的殺菌效果。
[0019]本發(fā)明的殺菌方法的特征為，使過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑接觸殺菌對象，對前述殺菌對象照射具有350nm~500nm的波長的光。
[0020]本發(fā)明的殺菌方法，在使過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑接觸殺菌對象時，SP使殺菌對象中存在過氧化氫酶陽性細菌、真菌等細胞、微生物，也能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑降低它們的過氧化氫酶活性，能夠防止過氧化氫酶與過氧化氫反應(yīng)。
[0021] 此外，通過對殺菌對象照射具有350nm~500nm的波長的光,過氧化氫發(fā)生光分解、產(chǎn)生羥自由基，因此能夠利用所產(chǎn)生的羥自由基進行殺菌。此時，由于能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑降低存在于殺菌對象中的細胞、微生物的過氧化氫酶活性，因此能夠防止過氧化氫酶與過氧化氫反應(yīng)而產(chǎn)生的輕自由基的減少。
[0022]從而，根據(jù)本發(fā)明的殺菌方法，能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑，防止產(chǎn)生羥自由基的過氧化氫與存在于殺菌對象中的細胞、微生物所具有的過氧化氫酶反應(yīng)而減少，結(jié)果防止由過氧化氫產(chǎn)生的羥自由基的減少，因此能夠提高利用羥自由基實現(xiàn)的殺菌效果。
[0023]本發(fā)明的殺菌方法中，使過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑接觸殺菌對象的方法可以為涂布或噴霧本發(fā)明的殺菌劑及口腔用殺菌劑的方法、將殺菌對象浸潰在本發(fā)明的殺菌劑的溶液中的方法等任意方法。
[0024]本發(fā)明的殺菌裝置的特征為，具有過氧化氫、過氧化氫酶活性抑制劑和發(fā)光單元，所述發(fā)光單元設(shè)置為能夠?qū)佑|了前述過氧化氫和前述過氧化氫酶活性抑制劑的殺菌對象照射具有350nm~500nm的波長的光。
[0025]本發(fā)明的殺菌裝置能夠適當實施本發(fā)明的殺菌方法。根據(jù)本發(fā)明的殺菌裝置，能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑，防止產(chǎn)生羥自由基的過氧化氫與存在于殺菌對象中的細胞、微生物所具有的過氧化氫酶反應(yīng)而減少，結(jié)果防止由過氧化氫產(chǎn)生的羥自由基的減少，因此能夠提高利用羥自由基實現(xiàn)的殺菌效果。
[0026]本發(fā)明的殺菌裝置中，過氧化氫及過氧化氫酶活性抑制劑也可以由本發(fā)明的殺菌劑或口腔用殺菌劑構(gòu)成。此外，本發(fā)明的殺菌裝置中，殺菌對象包括口腔內(nèi)的牙齒、假牙等，過氧化氫酶活性抑制劑也可以由包含過氧化氫酶活性抑制劑的牙膏、漱口水等構(gòu)成。此時，在用該牙膏刷牙等、或用漱口水漱口之后，使殺菌對象接觸過氧化氫、利用發(fā)光單元照射光，從而使用。
[0027]本發(fā)明的殺菌方法及殺菌裝置中，照射光的發(fā)光單元只要能夠照射具有350nm~500nm的波長的光即可，可以是任意發(fā)光單元，例如發(fā)熱燈、熒光燈、鹵素?zé)?、氙燈、LED (發(fā)光二極管)、半導(dǎo)體激光器等。所照射的光只要具有350nm~500nm的波長即可，既可以為單一波長，也可以包含多種波長，還可以由規(guī)定帶寬的波長構(gòu)成。
[0028]本發(fā)明的殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法及殺菌裝置中，過氧化氫酶活性抑制劑優(yōu)選包含例如黃芩、綠茶、茴香、枇杷、甘草、蘆薈、鼠尾草、金縷梅、洋甘菊、迷迭香、蜜蜂花或桃。特別優(yōu)選包含過氧化氫酶活性抑制效果高的黃芩或綠茶。
[0029]本發(fā)明的殺菌劑的評價方法的特征為，對采集自接觸了本發(fā)明的殺菌劑后的殺菌對象的試樣和4-羥基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧化物(TEMPOL)的混合液，進行電子自旋共振(ESR)測定，基于所獲得的電子自旋共振(ESR)譜的線寬，測定前述試樣中包含的細胞或微生物的過氧化氫酶活性，對前述殺菌劑的殺菌效果進行評價。
[0030]由于過氧化氫酶催化過氧化氫分解為水和氧的反應(yīng)，因此本發(fā)明的殺菌劑的評價方法中，利用ESR測氧法測定該反應(yīng)所產(chǎn)生的氧，從而測定過氧化氫酶活性。此外，由于TEMPOL的ESR譜的線寬和過氧化氫酶濃度之間可以視為正相關(guān)關(guān)系，因此可以基于ESR譜的線寬測定試樣中包含的細胞或微生物的過氧化氫酶活性，對殺菌劑的殺菌效果進行評價。需要說明的是，殺菌劑可以為本發(fā)明的口腔用殺菌劑。
[0031]發(fā)明效果
[0032]根據(jù)本發(fā)明，可以提供能夠提聞殺菌效果的殺菌劑、口腔用殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評價方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0033]圖1為示出通過過氧化氫的光分解而生成的羥自由基和(a)金黃色葡萄球菌的反應(yīng)動態(tài)解析、與(b)白色念珠菌的反應(yīng)動態(tài)解析的圖。
[0034]圖2為示出基于本發(fā)明的實施方式的殺菌劑評價方法的、過氧化氫酶濃度和TEMPOL的ESR譜的線寬的關(guān)系的圖。
[0035]圖3為示出研究作為本發(fā)明的實施方式的殺菌劑的過氧化氫酶活性抑制劑的用途的各種生藥的、過氧化氫酶活性的抑制作用的圖。
[0036]圖4為示出本發(fā)明的實施方式的殺菌劑的過氧化氫酶活性抑制劑的、對金黃色葡萄球菌的基于黃芩的殺菌效果的增強效果的圖(圖中的H表示過氧化氫、L表示激光照射、O表示黃岑(lmg/mL)、+表示有、-表示無)。
[0037]圖5為表示本發(fā)明的實施方式的殺菌劑的過氧化氫酶活性抑制劑的、對金黃色葡萄球菌的基于黃芩濃度的殺菌效果的圖。
[0038]圖6為表示本發(fā)明的實施方式的殺菌劑的過氧化氫酶活性抑制劑的對(a)金黃色葡萄球菌、(b)白色念珠菌的基于黃芩濃度的殺菌效果的圖，對(C)金黃色葡萄球菌、(d)白色念珠菌的基于綠茶濃度的殺菌效果的圖(圖中的H表示過氧化氫、L表示激光照射、+表不有、-表不無)。

【具體實施方式】
[0039]下面對本發(fā)明的實施方式的殺菌劑、殺菌方法、殺菌裝置及殺菌劑的評價方法進行說明。
[0040]本發(fā)明的實施方式的殺菌裝置具有本發(fā)明的殺菌劑和發(fā)光單元。
[0041]殺菌劑包含過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑。過氧化氫酶活性抑制劑包含黃芩或綠茶。
[0042]發(fā)光單元包含能夠照射具有350nm~500nm的波長的光的半導(dǎo)體激光器。
[0043]本發(fā)明的實施方式的殺菌方法優(yōu)選利用本發(fā)明的實施方式的殺菌裝置來實施。首先，使包含過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑的殺菌劑接觸殺菌對象。此時，即使殺菌對象中存在過氧化氫酶陽性細菌、真菌等細胞、微生物，也能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑降低它們的過氧化氫酶活性，能夠防止過氧化氫酶與過氧化氫反應(yīng)。
[0044]然后,利用發(fā)光單元對殺菌對象照射具有350nm~500nm的波長的光。從而,過氧化氫發(fā)生光分解、產(chǎn)生羥自由基，因此能夠利用所產(chǎn)生的羥自由基進行殺菌。此時，由于能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑降低存在于殺菌對象中的細胞、微生物的過氧化氫酶活性，因此能夠防止過氧化氫酶與過氧化氫反應(yīng)而產(chǎn)生的羥自由基的減少。
[0045]從而，根據(jù)本發(fā)明的實施方式的殺菌劑、殺菌方法及殺菌裝置，能夠通過過氧化氫酶活性抑制劑，防止產(chǎn)生羥自由基的過氧化氫與存在于殺菌對象中的細胞、微生物所具有的過氧化氫酶反應(yīng)而減少，結(jié)果防止由過氧化氫產(chǎn)生的羥自由基的減少，因此能夠提高利用羥自由基實現(xiàn)的殺菌效果。
[0046]實施例1
[0047]進行求出過氧化氫酶活性和TEMPOL的ESR譜的線寬之間的關(guān)系的試驗。將100 μ L的過氧化氫酶(和光純藥工業(yè)株式會社制)、25 μ L的TEMPOL (西格瑪奧德里奇公司(Sigma-Aldrich Corporat1n)制)和125 μ L的過氧化氫(三德化學(xué)工業(yè)株式會社制)分別用超純水稀釋并按照達到表1所示的最終濃度的方式混合，制備過氧化氫酶的最終濃度為0、0.25,0.5、1.0,2.0U/mL的5種混合液。對制備的混合液進行ESR測定，將其測定結(jié)果示于圖2。
[0048][表 I]
份量敁終濃設(shè)
過氧化氫酶 100 μ!_ O, 0.25, 0.5, 1.0, and 2.0 U/m L
[0049]
TEMPOL25 μΙ_200 μΜ
過氧化氫125 μΙ_250 mM
[0050]如圖2所示，確認TEMPOL的ESR譜的線寬和過氧化氫酶濃度之間可視為高的正相關(guān)關(guān)系?？梢杂稍摻Y(jié)果基于ESR譜的線寬測定被測試樣的過氧化氫酶活性。
[0051]實施例2
[0052]使用圖2的結(jié)果，對過氧化氫酶活性抑制劑帶來的過氧化氫酶活性的抑制作用進行測定。將50 μ L的過氧化氫酶、25 μ L的TEMPOL、認為具有過氧化氫酶活性的抑制作用的50 μ L生藥和125 μ L的過氧化氫分別用超純水(Mill1-Q水)稀釋并按照達到表2所示的最終濃度的方式混合，制備混合液。作為生藥，使用黃岑、綠茶、蜜蜂花(lemon balm)。此外，生藥使用的是為了去除不溶于水的物質(zhì)而用0.22 μ m的過濾器過濾后的物質(zhì)。此外，為了進行比較，還制備了不加生藥的混合液試樣(Mill1-Q水:MQ)。
[0053][表2]

【權(quán)利要求】
1.一種殺菌劑，其特征在于，包含過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺菌劑，其特征在于，前述過氧化氫酶活性抑制劑包含黃芩或綠茶。
3.—種口腔用殺菌劑，其特征在于，包含過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑。
4.一種殺菌方法，其特征在于，使過氧化氫和過氧化氫酶活性抑制劑接觸殺菌對象，對前述殺菌對象照射具有350nm~500nm的波長的光。
5.一種殺菌裝置，其特征在于，具有:過氧化氫、過氧化氫酶活性抑制劑和發(fā)光單元，所述發(fā)光單元設(shè)置為能夠?qū)佑|了前述過氧化氫和前述過氧化氫酶活性抑制劑的殺菌對象照射具有350nm~500nm的波長的光。
6.一種殺菌劑的評價方法，其特征在于， 對采集自接觸了權(quán)利要求1或2所述的殺菌劑的殺菌對象的試樣和4-羥基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧化物(TEMPOL)的混合液，進行電子自旋共振(ESR)測定，基于所獲得的電子自旋共振(ESR)譜的線寬，測定前述試樣中包含的細胞或微生物的過氧化氫酶活性，對 前述殺菌劑的殺菌效果進行評價。
【文檔編號】A01N25/22GK104053363SQ201180075289
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月1日
【發(fā)明者】菅野太郎, 中村圭祐, 豬飼纮代, 河野雅弘, 庭野吉己 申請人:株式會社Az