專利名稱：高效浮萍再生體系的建立的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物愈傷組織再生方法，特別是一種用無激素方法對浮萍科浮萍屬 L. minor快速高效再生的方法。
背景技術(shù)：
浮萍是單子葉水面漂浮植物，隸屬于浮萍科浮萍屬，廣布于世界各地，其個體小， 擴(kuò)繁快，蛋白含量高，通過光照可控制其無性繁殖等顯著優(yōu)點(diǎn)使其成為理想的高通量外源蛋白表達(dá)和基因研究體系。因此，自20世紀(jì)80年代以來，浮萍的組織培養(yǎng)和遺傳轉(zhuǎn)化方面的研究工作從未間斷，國際上所報導(dǎo)的浮萍科浮萍屬L. minor愈傷組織誘導(dǎo)不僅需要激素，而且其再生所需時間較長，成為制約浮萍轉(zhuǎn)基因等相關(guān)研究發(fā)展的重要瓶頸。國內(nèi)更因缺乏浮萍組培與再生的自主性技術(shù)，目前相關(guān)研究工作不能有效展開。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有浮萍組培不僅需要激素而且再生所需時間較長的問題， 提供一種新型無激素技術(shù)進(jìn)行浮萍科浮萍屬Lminor NKl愈傷組織誘導(dǎo)、繼代和再生方法及其相關(guān)試劑。本發(fā)明提供的浮萍(浮萍科浮萍屬L. minor NKl)愈傷組織誘導(dǎo)、繼代和再生方法的具體步驟包括1)浮萍愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代取長勢良好的浮萍植株，將其根部切除，并對其葉基部進(jìn)行橫切，將處理好的外植體放入浮萍誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光周期16小時/ 天，光強(qiáng)68 μ molnTY1，23°C條件下，9-11天后外植體膨大，兩周后愈傷開始形成，挑選綠色部分移至浮萍繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代，21天后長出長勢良好的愈傷組織；每兩周繼代一次愈傷組織；2)浮萍愈傷組織的再生將愈傷組織移至浮萍再生培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同第1) 步，11天后浮萍再生即可達(dá)到46. 15%，14天達(dá)到86. 67%，并且最終再生率可高達(dá)100%。其中，第1)步所述的浮萍誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成包括
權(quán)利要求
1.一種浮萍愈傷組織誘導(dǎo)、繼代和再生的方法，其特征在于該方法的具體步驟包括1)浮萍愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代取長勢良好的浮萍植株，將其根部切除，并對其葉基部進(jìn)行橫切，將處理好的外植體放入浮萍誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光周期16小時/天，光強(qiáng)68 μ Hi0InT2s-1, 23°C條件下，9-11天后外植體膨大，兩周后愈傷開始形成，挑選綠色部分移至浮萍繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代，21天后長出長勢良好的愈傷組織；每兩周繼代一次愈傷組織；2)浮萍愈傷組織的再生將愈傷組織移至浮萍再生培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同第1)步，11 天后浮萍再生即可達(dá)到46. 15%，14天達(dá)到86. 67%，并且最終再生率可高達(dá)100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于第1)步所述的浮萍誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成包括
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于第1)步所述的浮萍繼代培養(yǎng)基的組成包括
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于第幻步所述的浮萍再生培養(yǎng)基的組成包括
全文摘要
高效浮萍再生體系的建立。本發(fā)明涉及浮萍愈傷組織的快速誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)及高效再生方法。以浮萍科浮萍屬L.minor為材料，通過適宜比例的激素濃度，建立了浮萍快速愈傷組織誘導(dǎo)和繼代體系(


圖1a,b)，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步以KNO3,MgSO4,H3BO4,L-Ser等為主要成分的新型無激素體系使浮萍愈傷組織得到高效再生。浮萍的再生率在第11天可達(dá)到46.15%，14天達(dá)到86.67%(
圖1c)，并且最終再生率可高達(dá)100%(
圖1d)。本項(xiàng)發(fā)明的成套浮萍組織培養(yǎng)與再生體系不僅高效，而且周期短、成本低，是浮萍生理生化、基因表達(dá)、遺傳轉(zhuǎn)化等相關(guān)理論與應(yīng)用研究中不可缺少的關(guān)鍵操作。
文檔編號A01H4/00GK102487827SQ20111041347
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月9日
發(fā)明者劉苗苗, 周凱強(qiáng), 朱曄榮, 楊琳, 王勇, 白艷玲, 韓華均 申請人:南開大學(xué)