專利名稱：一種抗寒粗肋草多倍體的誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及粗肋草育種技術(shù)，尤其涉及一種抗寒粗肋草多倍體的誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
粗肋草是天南星科粗肋草屬(Aglaonema)植物的通稱，又名廣東萬年青、亮絲草， 原產(chǎn)于我國廣東、廣西、云南及東南亞的印度、泰國、越南、菲律賓、馬來西亞、印尼和新幾內(nèi)亞等地，為多年生常綠草本植物。其葉片、葉柄和葉脈具有多姿多彩的顏色搭配，具有很強(qiáng)的欣賞價(jià)值，深受人們的喜愛，在國際上被列為理想的室內(nèi)觀葉植物。但是，粗肋草普遍在 15°C以下即會出現(xiàn)凍傷現(xiàn)象，影響其冬季生產(chǎn)、銷售。為此，通過誘導(dǎo)多倍體，培育出具有抗寒性的粗肋草新品種，對滿足市場需要具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服粗肋草普遍在15°C以下即會出現(xiàn)凍傷現(xiàn)象、影響其冬季生產(chǎn)的不足，滿足市場需求，提供一種抗寒粗肋草多倍體的誘導(dǎo)方法。本發(fā)明一種抗寒粗肋草多倍體的誘導(dǎo)方法的技術(shù)方案是 本發(fā)明一種抗寒粗肋草多倍體的誘導(dǎo)方法，包括如下步驟
步驟一、叢生芽誘導(dǎo)取無病蟲害及健壯的粗肋草植株莖段或頂芽作為外植體，先用洗衣粉溶液擦洗，流水沖洗掉洗衣粉，在超凈工作臺上將外植體置于含有吐溫-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15 30min，無菌水沖洗，用滅菌濾紙吸干表面水分，插入?yún)惭空T導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)，置于溫度為25士2°C，光照10 12h · d-1，光照強(qiáng)度為60 IOOymol m—Y1的培養(yǎng)室內(nèi)誘導(dǎo)叢生芽；叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2-IP1 ;3mg/L+NAA0. 2 0. 5mg/L+白糖25 35g/L+ 卡拉膠 6 7g/L，pH 值為 6 士 0. 5 ；
步驟二、秋水仙素處理將叢芽去頂連同下面的愈傷一起，置于含0. 2% 0. 3%秋水仙素的溶液中黑暗條件下振蕩培養(yǎng)48 72h，無菌水沖洗，轉(zhuǎn)入不含秋水仙素的恢復(fù)培養(yǎng)基上，置于25士2°C溫室內(nèi)，光照條件下恢復(fù)培養(yǎng)；恢復(fù)培養(yǎng)基為MS+2-IPl ;3mg/L+6-BA 2 ％ig/L +白糖25 !35g/L+卡拉膠6 7g/L，pH值為6士0. 5 ；
步驟三、低溫處理將恢復(fù)培養(yǎng)15-20d的處理材料，置于0°C的培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng) M 48 h。將處理材料重新轉(zhuǎn)到25士2°C培養(yǎng)室內(nèi)恢復(fù)培養(yǎng)；
步驟四、變異植株擴(kuò)繁將外觀與對照有變異的新長出的植株，轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基 MS+2-IP1 3mg/L+NAA0. 2 0. 5mg/L+ 白糖 25 35g/L+卡拉膠 6 7g/L，PH值為 6士0. 5 上進(jìn)行擴(kuò)繁；每30d繼代一次，繼代5次；
步驟五、多倍體鑒定選擇外觀表現(xiàn)穩(wěn)定的變異株系，隨機(jī)挑選5株進(jìn)行根尖壓片，觀察染色體數(shù)目；在一個(gè)根尖上同時(shí)觀察到5個(gè)以上分裂相染色體數(shù)目加倍，即可確定該變異株系為多倍體；
步驟六、生根移栽鑒定為多倍體的株系，長到3-4cm長時(shí)，從基部切下，轉(zhuǎn)到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根；生根培養(yǎng)基為MS+2IP1 ^ig/L+IAAl ang/L+IBAO. 5 lmg/L+白糖25 35g/L+卡拉膠6 7g/L，PH值為6 士 0. 5 ；生根苗轉(zhuǎn)到日光溫室大棚煉苗7_10d ； 把生根苗取出，洗掉培養(yǎng)基后，移栽到泥炭及珍珠巖的基質(zhì)上，置于溫室大棚中，蓋上薄膜和陰網(wǎng)，14 16d后掀開陰網(wǎng)和薄膜正常管理。步驟六中的所述基質(zhì)中泥炭與珍珠巖的體積比為3:1。本發(fā)明是一種誘導(dǎo)抗寒性粗肋草多倍體植株的方法，具有突出的特點(diǎn)，其有益效果是其一，將變異植株經(jīng)過5代繁殖后，再進(jìn)行多倍體檢測，可以有效降低嵌合體的比例； 其二，多倍體植株比對照莖干粗壯，矮化，株型更加美觀；其三，多倍體植株具有抗寒性，能耐5°C低溫不出現(xiàn)凍傷，降低了冬季溫室大棚加溫費(fèi)用，經(jīng)濟(jì)效益大大提高。
具體實(shí)施例方式下面，介紹本發(fā)明的具體實(shí)施方式
。實(shí)施例一
步驟一、叢生芽誘導(dǎo)取無病蟲害及健壯的粗肋草植株莖段或頂芽作為外植體，先用飽和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水沖洗掉洗衣粉后，在超凈工作臺上將外植體置于含有幾滴吐溫-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15-30min，無菌水沖洗4-5次，用滅菌濾紙吸干表面水分后， 插入?yún)惭空T導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)，置于溫度為23°C，光照IOh · d-Ι，光照強(qiáng)度為60μπιΟ1 m^s"1的培養(yǎng)室內(nèi)誘導(dǎo)叢生芽。叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2-IPlmg/L+NAA0. 2mg/L+白糖25g/L+卡拉膠6g/L，pH5.5。步驟二、秋水仙素處理將叢芽去頂連同下面的愈傷一起，置于含0. 2%秋水仙素的溶液中黑暗條件下振蕩培養(yǎng)48h，無菌水沖洗4-5次后，轉(zhuǎn)入不含秋水仙素的恢復(fù)培養(yǎng)基上，置于23°C溫室內(nèi)，光照條件下恢復(fù)培養(yǎng)?；謴?fù)培養(yǎng)基為MS+2-IPlmg/L+6-BA 2mg/L + 白糖 25g/L+ 卡拉膠 6g/L，ρΗ5· 5。步驟三、低溫處理將恢復(fù)培養(yǎng)15-20d的處理材料，置于0°C的培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng) 24 h。將處理材料重新轉(zhuǎn)到23°C培養(yǎng)室內(nèi)恢復(fù)培養(yǎng)。步驟四、變異植株擴(kuò)繁將外觀與對照有變異的新長出的植株，轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基 MS+2-IPlmg/L+NAA0. 2mg/L+ 白糖 25g/L+ 卡拉膠 6g/L，pH5. 5 上進(jìn)行擴(kuò)繁。每 30d 繼代一次，繼代5次。步驟五、多倍體鑒定選擇外觀表現(xiàn)穩(wěn)定的變異株系，隨機(jī)挑選5株進(jìn)行根尖壓片，觀察染色體數(shù)目。在一個(gè)根尖上同時(shí)觀察到5個(gè)以上分裂相染色體數(shù)目加倍，即可確定該變異株系為多倍體。步驟六、生根移栽鑒定為多倍體的株系，長到3_4cm長時(shí)，從基部切下，轉(zhuǎn)到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。生根培養(yǎng)基為MS+2IPlmg/L+IAAlmg/L+IBA0. 5mg/L+白糖25g/ L+卡拉膠6g/L，pH5.5。生根苗轉(zhuǎn)到日光溫室大棚煉苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培養(yǎng)基后，移栽到泥炭及珍珠巖基質(zhì)上，置于溫室大棚中，蓋上薄膜和單層陰網(wǎng)，15d后掀開陰網(wǎng)和
薄膜正常管理。步驟六中的所述基質(zhì)中泥炭與珍珠巖的體積比為3:1。實(shí)施例二
步驟一、叢生芽誘導(dǎo)取無病蟲害及健壯的粗肋草植株莖段或頂芽作為外植體，先用飽和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水沖洗掉洗衣粉后，在超凈工作臺上將外植體置于含有幾滴吐溫-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15-30min，無菌水沖洗4-5次，用滅菌濾紙吸干表面水分后， 插入?yún)惭空T導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)，置于溫度為25°C，光照Ilh · d-Ι，光照強(qiáng)度為SOymol m^s"1的培養(yǎng)室內(nèi)誘導(dǎo)叢生芽。叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2-IPang/L+NAA0. 3mg/L+白糖30g/L+卡拉膠 6. 5g/L, ρΗ5· 8。步驟二、秋水仙素處理將叢芽去頂連同下面的愈傷一起，置于含0. 3%秋水仙素的溶液中黑暗條件下振蕩培養(yǎng)60h，無菌水沖洗4-5次后，轉(zhuǎn)入不含秋水仙素的恢復(fù)培養(yǎng)基上，置于25°C溫室內(nèi)，光照條件下恢復(fù)培養(yǎng)。恢復(fù)培養(yǎng)基為MS+2-IPang/L+6-BA;3mg/L +白糖 30g/L+ 卡拉膠 6. 5g/L，ρΗ5· 8。步驟三、低溫處理將恢復(fù)培養(yǎng)15-20d的處理材料，置于0°C的培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng) 36 h。將處理材料重新轉(zhuǎn)到25°C培養(yǎng)室內(nèi)恢復(fù)培養(yǎng)。步驟四、變異植株擴(kuò)繁將外觀與對照有變異的新長出的植株，轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基 MS+2-IP2mg/L+NAA0. 4mg/L+ 白糖 30g/L+ 卡拉膠 6. 5g/L, pH5. 8 上進(jìn)行擴(kuò)繁。每 30d 繼代一次，繼代5次。步驟五、多倍體鑒定選擇外觀表現(xiàn)穩(wěn)定的變異株系，隨機(jī)挑選5株進(jìn)行根尖壓片，觀察染色體數(shù)目。在一個(gè)根尖上同時(shí)觀察到5個(gè)以上分裂相染色體數(shù)目加倍，即可確定該變異株系為多倍體。步驟六、生根移栽鑒定為多倍體的株系，長到3_4cm長時(shí)，從基部切下，轉(zhuǎn)到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。生根培養(yǎng)基為MS+2IP2mg/L+IAAang/L+IBAlmg/L+白糖30g/L+ 卡拉膠6.5g/L，pH5.8。生根苗轉(zhuǎn)到日光溫室大棚煉苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培養(yǎng)基后，移栽到泥炭及珍珠巖基質(zhì)上，置于溫室大棚中，蓋上薄膜和單層陰網(wǎng)，15d后掀開陰網(wǎng)和
薄膜正常管理。步驟六中的所述基質(zhì)中泥炭與珍珠巖的體積比為3:1。實(shí)施例三
步驟一、叢生芽誘導(dǎo)取無病蟲害及健壯的粗肋草植株莖段或頂芽作為外植體，先用飽和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水沖洗掉洗衣粉后，在超凈工作臺上將外植體置于含有幾滴吐溫-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15-30min，無菌水沖洗4-5次，用滅菌濾紙吸干表面水分后， 插入?yún)惭空T導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)，置于溫度為27°C，光照12h *(1-1，光照強(qiáng)度為lOOymol m^s"1的培養(yǎng)室內(nèi)誘導(dǎo)叢生芽。叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2-IP;3mg/L+NAAO. 5mg/L+白糖35g/L+卡拉膠7g/L，pH6. 5。步驟二、秋水仙素處理將叢芽去頂連同下面的愈傷一起，置于含0. 3%秋水仙素的溶液中黑暗條件下振蕩培養(yǎng)72h，無菌水沖洗4-5次后，轉(zhuǎn)入不含秋水仙素的恢復(fù)培養(yǎng)基上，置于27°C溫室內(nèi)，光照條件下恢復(fù)培養(yǎng)?；謴?fù)培養(yǎng)基為MS+2-IP;3mg/L+6-BA%ig/L +白糖 30g/L+ 卡拉膠 7g/L，ρΗ6· 5。步驟三、低溫處理將恢復(fù)培養(yǎng)15-20d的處理材料，置于0°C的培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng) 48 h。將處理材料重新轉(zhuǎn)到27°C培養(yǎng)室內(nèi)恢復(fù)培養(yǎng)。步驟四、變異植株擴(kuò)繁將外觀與對照有變異的新長出的植株，轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基 MS+2-IP3mg/L+NAA0. 5mg/L+ 白糖 350g/L+ 卡拉膠 7g/L，pH6. 5 上進(jìn)行擴(kuò)繁。每 30d 繼代一次，繼代5次。
步驟五、多倍體鑒定選擇外觀表現(xiàn)穩(wěn)定的變異株系，隨機(jī)挑選5株進(jìn)行根尖壓片，觀察染色體數(shù)目。在一個(gè)根尖上同時(shí)觀察到5個(gè)以上分裂相染色體數(shù)目加倍，即可確定該變異株系為多倍體。步驟六、生根移栽鑒定為多倍體的株系，長到3-4cm長時(shí)，從基部切下，轉(zhuǎn)到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。生根培養(yǎng)基為MS+2IPang/L+IAAaiig/L+IBAlmg/L+白糖35g/L+卡拉膠7g/L，pH6.5。生根苗轉(zhuǎn)到日光溫室大棚煉苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培養(yǎng)基后，移栽到泥炭及珍珠巖基質(zhì)上，置于溫室大棚中，蓋上薄膜和單層陰網(wǎng)，15d后掀開陰網(wǎng)和薄膜
正常管理。步驟六中的所述基質(zhì)中泥炭與珍珠巖的體積比為3:1。
權(quán)利要求
1.一種抗寒粗肋草多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于，包括如下步驟步驟一、叢生芽誘導(dǎo)取無病蟲害及健壯的粗肋草植株莖段或頂芽作為外植體，先用洗衣粉溶液擦洗，流水沖洗掉洗衣粉，在超凈工作臺上將外植體置于含有吐溫-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15 30min，無菌水沖洗，用滅菌濾紙吸干表面水分，插入?yún)惭空T導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)，置于溫度為25士2°C，光照10 12h · d-1，光照強(qiáng)度為60 IOOymol m—Y1的培養(yǎng)室內(nèi)誘導(dǎo)叢生芽；叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2-IP1 ;3mg/L+NAA0. 2 0. 5mg/L+白糖25 35g/L+ 卡拉膠 6 7g/L，pH 值為 6 士 0. 5 ；步驟二、秋水仙素處理將叢芽去頂連同下面的愈傷一起，置于含0. 2% 0. 3%秋水仙素的溶液中黑暗條件下振蕩培養(yǎng)48 72h，無菌水沖洗，轉(zhuǎn)入不含秋水仙素的恢復(fù)培養(yǎng)基上，置于25士2°C溫室內(nèi)，光照條件下恢復(fù)培養(yǎng)；恢復(fù)培養(yǎng)基為MS+2-IPl ;3mg/L+6-BA 2 ％ig/L +白糖25 !35g/L+卡拉膠6 7g/L，pH值為6士0. 5 ；步驟三、低溫處理將恢復(fù)培養(yǎng)15-20d的處理材料，置于0°C的培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng) M 48 h ；將處理材料重新轉(zhuǎn)到25 士 2°C培養(yǎng)室內(nèi)恢復(fù)培養(yǎng)；步驟四、變異植株擴(kuò)繁將外觀與對照有變異的新長出的植株，轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基 MS+2-IP1 3mg/L+NAA0. 2 0. 5mg/L+ 白糖 25 35g/L+卡拉膠 6 7g/L，PH值為 6士0. 5 上進(jìn)行擴(kuò)繁；每30d繼代一次，繼代5次；步驟五、多倍體鑒定選擇外觀表現(xiàn)穩(wěn)定的變異株系，隨機(jī)挑選5株進(jìn)行根尖壓片，觀察染色體數(shù)目；在一個(gè)根尖上同時(shí)觀察到5個(gè)以上分裂相染色體數(shù)目加倍，即可確定該變異株系為多倍體；步驟六、生根移栽鑒定為多倍體的株系，長到3-4cm長時(shí)，從基部切下，轉(zhuǎn)到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根；生根培養(yǎng)基為MS+2IP1 ^ig/L+IAAl ang/L+IBAO. 5 lmg/L+白糖25 35g/L+卡拉膠6 7g/L，PH值為6 士 0. 5 ；生根苗轉(zhuǎn)到日光溫室大棚煉苗7_10d ； 把生根苗取出，洗掉培養(yǎng)基后，移栽到泥炭及珍珠巖的基質(zhì)上，置于溫室大棚中，蓋上薄膜和陰網(wǎng)，14 16d后掀開陰網(wǎng)和薄膜正常管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗寒粗肋草多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于步驟六中的所述基質(zhì)中泥炭與珍珠巖的體積比為3:1。
全文摘要
一種抗寒粗肋草多倍體的誘導(dǎo)方法涉及粗肋草育種技術(shù)。包括如下步驟叢生芽誘導(dǎo)，秋水仙素處理，低溫處理，變異植株擴(kuò)繁，多倍體鑒定，生根移栽。將變異植株經(jīng)過5代繁殖后，再進(jìn)行多倍體檢測，可以有效降低嵌合體的比例；多倍體植株比對照莖干粗壯，矮化，株型更加美觀；多倍體植株具有抗寒性，能耐5℃低溫不出現(xiàn)凍傷，降低了冬季溫室大棚加溫費(fèi)用，經(jīng)濟(jì)效益大大提高。
文檔編號A01H4/00GK102440193SQ201110315590
公開日2012年5月9日 申請日期2011年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月18日
發(fā)明者范俊強(qiáng), 鄭貴朝 申請人:東莞市生物技術(shù)研究所