專利名稱：黃花苜蓿組培快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及野生牧草繁殖方法，具體指黃花苜蓿組培快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
黃花苜蓿(Medicago falcata L.)是一種分布廣泛的野生豆科牧草，與紫花苜蓿相比，黃花苜蓿具有耐寒、抗病蟲害、抗逆性強等特點。在我國干旱、寒冷地區(qū)推廣種植黃花苜蓿能發(fā)揮重要的生態(tài)、經(jīng)濟價值。但是，由于黃花苜蓿是野生種，自身也有一些缺點，如 黃花苜?；ㄆ诓灰恢拢@導(dǎo)致種子成熟不一致、收獲產(chǎn)量低，硬實率高達83 %、發(fā)芽率較低。 這都影響了黃花苜蓿的擴大種植。因此，提高黃花苜蓿種子產(chǎn)量及繁殖系數(shù)有著重要的理論價值及現(xiàn)實意義。目前，國內(nèi)外對黃花苜蓿的研究主要集中在栽培引種馴化、遺傳多樣性及抗性基因等方面，其中涉及種子發(fā)芽及繁殖體系的相關(guān)研究報導(dǎo)較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種黃花苜蓿組培快速繁殖方法，這種方法具有繁殖速度快、成本低、培育周期短的特點。本發(fā)明要解決的技術(shù)問題由如下方案來實現(xiàn)黃花苜蓿組培快速繁殖方法，包括種子的滅菌，無菌苗的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)及分化，植株的再生，煉苗移栽。具體方法如下一、種子的滅菌及無菌苗的獲得取黃花苜蓿種子在流水條件下沖洗20 30min， 用濃度為70%的乙醇浸泡20 40s，濃度為0. I^HgCl2消毒4 12min，置于MS和1/2MS 固體培養(yǎng)基中發(fā)芽，獲得無菌苗；二、愈傷組織的誘導(dǎo)取上述無菌苗的子葉和下胚軸，子葉切割成4mmX4mm、下胚軸切割成4mm，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+濃度為0. 5 ang/L 2，4-D+濃度為0 1.5mg/L6-BA+3%蔗糖+0. 7%瓊脂，pH值均調(diào)至5. 89 5. 92，經(jīng)高溫120°C高壓滅菌20min，在19 25°C室內(nèi)散射光條件下培養(yǎng)， 即獲得愈傷組織；三、分化培養(yǎng)及植株的再生將上述愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，分化培養(yǎng)基為MS+濃度為0. 15 1. 5mg/L KT+濃度為0. 1 0. 2mg/LNAA+0. 7%瓊脂，初次分化時加蔗糖3%、繼代時加蔗糖2%，pH值均調(diào)至5. 89 5. 92，經(jīng)高溫120°C高壓滅菌20min， 在19 25°C室內(nèi)散射光并開白熾燈條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)約50d，即可再生出部分完整的分化苗；四、煉苗及移栽煉苗移栽前，去掉封口膜，將完整的分化苗進行煉苗1 2d，將煉好的苗從瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基后，將小苗移植到經(jīng)消毒處理的基質(zhì)中，基質(zhì)配比為壤土花卉土 蛭石=1 1 1，覆上遮陰網(wǎng)，保濕保溫，經(jīng)IOd后，去掉遮陰網(wǎng)，幼苗便可成活。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比所具有的優(yōu)點1、黃花苜蓿種子硬實率較高，前處理采用砂紙打磨，破除硬實，發(fā)芽率可提高 64. 9%。
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2、黃花苜蓿種子在打磨，流水下沖洗20min，散射光未開白熾燈室內(nèi)培養(yǎng)條件下， 用0. 的升汞消毒Smin后，其發(fā)芽率最高，可達79.6%。3、利用組織培養(yǎng)技術(shù)在短期內(nèi)可獲得黃花苜蓿大量愈傷組織和再生苗，分化率高達 80%。


圖1為黃花苜蓿組培快速繁殖方法流程圖。具體實施方法一、種子的滅菌及無菌苗的生產(chǎn)選取大小一致，光滑飽滿的黃花苜蓿種子(打磨和未打磨)用比重清選法進行清選，下沉的種子作為試驗樣品。將種子在流水下分別沖洗20 30min，移入超凈工作臺， 70 %的酒精浸泡20 40s，用0. 1 %的升汞消毒不同時間梯度后G 12min)，無菌水沖洗4 5遍，接種于MS和1/2MS固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為19 25 °C，培養(yǎng)條件為室內(nèi)散射光并開白熾燈下培養(yǎng)、室內(nèi)散射光未開白熾燈培養(yǎng)和培養(yǎng)箱光暗交替培養(yǎng)(光暗= 16 8)，發(fā)芽8d左右，觀察種子無菌苗萌發(fā)及生長狀況。二、愈傷組織的誘導(dǎo)取上述發(fā)芽8d左右的無菌苗的子葉和下胚軸，子葉切割成4X4mm、下胚軸切割成4mm左右，接入經(jīng)高壓滅菌的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分如下基本培養(yǎng)基MS，蔗糖3 %，瓊脂0.7%，激素種類及用量見表1。pH值均調(diào)至5. 89 5. 92，在 19 25°C室內(nèi)散射光條件下培養(yǎng)，約4d左右開始形成愈傷，3周后進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。表1黃花苜蓿愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基激素種類與用量
激素濃度(mg/L)
激素種類 ----------------------------------------------------
AlA2A3A4A5 A6 A7 A8A9AlOAllA122,4-D0.50.50.50.5111122226-BA00.511.50 0.5 1 1.500.511.5三、愈傷組織分化及植株再生將上述誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基中，分化培養(yǎng)基成分如下基本培養(yǎng)基MS,初次分化時蔗糖3 %，繼代時蔗糖2 %，瓊脂0. 7 %，激素種類及用量見表2。pH 值均調(diào)至5. 89 5. 92，經(jīng)高溫120°C高壓滅菌20min，在19 25°C室內(nèi)散射光并開白熾燈條件下培養(yǎng)，每隔20d繼代1次。培養(yǎng)50d后，即可再生出分化苗，并且40%以上分化苗都會有根系產(chǎn)生。將未形成根系的分化苗放入生根培養(yǎng)基中，20d后長出幼根。表2黃花苜蓿愈傷組織分化培養(yǎng)基激素種類與用量
權(quán)利要求
1.黃花苜蓿組培快速繁殖方法，包括種子的滅菌，無菌苗的產(chǎn)生，愈傷組織的誘導(dǎo)及分化，植株的再生，煉苗移栽，其特征是一、種子的滅菌及無菌苗的獲得取黃花苜蓿種子在流水條件下沖洗20 30min，用濃度為70%的乙醇浸泡20 40s，濃度為0. 1 % HgCl2消毒 4 12min，置于MS和1/2MS固體培養(yǎng)基中發(fā)芽，獲得無菌苗；二、愈傷組織的誘導(dǎo)取上述無菌苗的子葉和下胚軸，子葉切割成4mmX4mm、下胚軸切割成4mm，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+濃度為0. 5 ang/L 2，4-D+濃度為0 1. 5mg/L6-BA+3% 蔗糖+0. 7%瓊脂，pH值均調(diào)至5. 89 5. 92，經(jīng)高溫120°C高壓滅菌20min，在19 25 V 室內(nèi)散射光條件下培養(yǎng)，即獲得愈傷組織；三、分化培養(yǎng)及植株的再生將上述愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，分化培養(yǎng)基為MS+濃度為0. 15 1. 5mg/L KT+濃度為0. 1 0. 2mg/ LNAA+0. 7%瓊脂，初次分化時加蔗糖3%、繼代時加蔗糖2%，pH值均調(diào)至5. 89 5. 92，經(jīng)高溫120°C高壓滅菌20min，在19 25°C室內(nèi)散射光并開白熾燈條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)約50d， 即可再生出部分完整的分化苗；四、煉苗及移栽煉苗移栽前，去掉封口膜，將完整的分化苗進行煉苗1 2d，將煉好的苗從瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基后，將小苗移植到經(jīng)消毒處理的基質(zhì)中，基質(zhì)配比為壤土 花卉土 蛭石=1 1 1，覆上遮陰網(wǎng)，保濕保溫，經(jīng)IOd后，去掉遮陰網(wǎng)，幼苗便可成活。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黃花苜蓿組培快速繁殖方法，包括種子的處理、無菌苗的獲得、愈傷誘導(dǎo)、增殖、分化、再生植株的獲得及煉苗移栽等技術(shù)。本試驗以黃花苜蓿無菌苗的子葉和下胚軸為外植體，接種到不同激素配比的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷形成，然后接種到分化培養(yǎng)基中分化成苗。將完整的分化苗進行煉苗，將煉好的苗從瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基后，將小苗移植到經(jīng)消毒處理的基質(zhì)中，覆上遮陰網(wǎng)，保濕保溫，經(jīng)10d后，去掉遮陰網(wǎng)，幼苗便可成活。本方法能得到較高的種子發(fā)芽率及組培苗分化率。
文檔編號A01H4/00GK102388802SQ20111022165
公開日2012年3月28日 申請日期2011年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月18日
發(fā)明者烏云塔娜, 井樂, 伊風艷, 姜圓圓, 展春芳, 張宇, 李慧, 石鳳翎, 高霞 申請人:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學