專利名稱：一種復方苦參制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領域。本發(fā)明涉及一種復方苦參制劑及其用 途。本發(fā)明產(chǎn)品對D31 (鰻弧菌V. anuguillarum)、D32 (哈維氏弧菌V. harveyi)、D61 (溶藻 膠弧菌V. alginolyticus)、D230 (嗜鹽弧菌Vibrio vulnificus)具有抑菌作用，可開發(fā)相 應制劑用于防治水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中發(fā)生的弧菌病，本發(fā)明產(chǎn)品適合工業(yè)化生產(chǎn)。
背景技術(shù)：
近年來我國大力發(fā)展海水養(yǎng)殖業(yè)，但因養(yǎng)殖面積過速擴展、養(yǎng)殖密度過高 和管理不當，養(yǎng)殖魚類疾病繁生，造成了巨大的經(jīng)濟損失。這其中由D31(鰻弧菌 V. anugui llarum)、D32 (哈維氏弧菌 V. harveyi)、D61(溶藻膠弧菌 V. alginolyticus)、 D230 (Vibrio vulnificus)引起的弧菌病是被公認的魚類養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的最為嚴重的病 害之一，也是限制該產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要性因素，此外弧菌還可以通過食物鏈引起食物中毒，危 害食用者的身體健康。然而，目前我國對于水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的疾病防治主要以抗生素等化學 藥物為主，但由于長期濫用已經(jīng)造成了嚴重的環(huán)境污染、病菌抗藥、人畜安全受到威脅等一 系列問題。相比較化學藥物，植物源抑菌藥物具有殺菌功效較強，毒性較低，不易產(chǎn)生抗藥 性，以及成本低廉等優(yōu)點，因此從植物中尋找抑菌活性物質(zhì)是保障魚類養(yǎng)殖業(yè)穩(wěn)步發(fā)展的 一條有效途徑。但是令人遺憾的是近年來從事致魚病菌抑菌活性植物篩選工作卻與其優(yōu)點 相背離，一味的追求強效殺菌活性，使得被篩選植物聚集到高毒高成本的一類植物中，這使 得植物源殺菌劑的開發(fā)普及停滯不前，因此探討開發(fā)高效、低毒、價廉的植物源殺菌劑刻不 容緩?？鄥槎箍浦参锟鄥ophora fIavescens的根。體外試驗證明，1 %苦參堿對痢疾 桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、乙型鏈球菌及金黃色葡萄球菌均有明顯抑制作用.醇浸膏在體 外尚有抗滴蟲作用，強度弱于黃連，而與蛇床子相近.在試管中，苦參煎劑高濃度(1 100) 對結(jié)核桿菌有抑制作用.煎劑(8%)、水浸劑(1 3)在體外對某些常見的皮膚真菌有不 同程度的抑制作用.苦楝葉為楝科落葉喬木植物苦楝Melia azedarach Linn.的干燥葉。苦楝葉具有 清熱燥濕，殺蟲止癢，行氣止痛作用。柳葉為楊柳科植物垂柳&ilix babylonica L的干燥葉。柳葉具有清熱，透疹，利 尿，解毒的功效，內(nèi)服用于治療上呼吸道感染、氣管炎、肺炎、膀胱炎、咽喉炎等各種炎癥感 染，外敷用于癤腫、化膿性腮腺炎、乳腺炎等癥。大蒜精油為蒜Allium sativum L. (Garlic)的鱗莖經(jīng)水蒸氣蒸餾獲得的揮發(fā)油。 大蒜含揮發(fā)油約0.2%，油中主要成分為大蒜辣素，具有殺菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸 受大蒜酶的作用水解產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容
1、一種復方苦參制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑苦參提取物2g_3g、苦楝葉提取物lg_2g、柳葉提取物lg_2g、大蒜精油 0.OOlg-O. 002go2、權(quán)利要求1所述的一種復方苦參制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取苦參、苦楝葉和柳葉各30g-40g，分別加入600mL-800mL乙醇， 用搖床震蕩浸提Mh，用離心機離心得上清液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣分別加入400mL-600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離 心機離心得上清液和殘渣；步驟(三)將(二)中殘渣分別加入200mL-400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機離 心得上清液和殘渣，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干， 得到苦參、苦楝葉和柳葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g_20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸 餾時間1. 5h-2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權(quán)利要求1所述的重量配比制成復方苦參制劑。3、權(quán)利要求1所述的一種復方苦參制劑的用途，其特征在于對鰻弧菌、哈維氏弧 菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實施例方式本發(fā)明所述的涉及一種復方苦參制劑及其用途包括以下實施例，下面的實施例可 進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1 1、一種復方苦參制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑苦參提取物2g、苦楝葉提取物lg、柳葉提取物lg、大蒜精油0. OOlg。2、權(quán)利要求1所述的一種復方苦參制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取苦參、苦楝葉和柳葉各30g，分別加入600mL乙醇，用搖床震蕩 浸提Mh，用離心機離心得上清液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣分別加入400mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機離 心得上清液和殘渣；步驟(三)將(二)中殘渣分別加入200mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機離心得上 清液和殘渣，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到苦 參、苦楝葉和柳葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時 間1.5h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權(quán)利要求1所述的重量配比制成復方苦參制劑。3、權(quán)利要求1所述的一種復方苦參制劑的用途，其特征在于對鰻弧菌、哈維氏弧 菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。實施例2
1、一種復方苦參制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑苦參提取物3g、苦楝葉提取物2g、柳葉提取物2g、大蒜精油0. 002g。2、權(quán)利要求1所述的一種復方苦參制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取苦參、苦楝葉和柳葉各40g，分別加入SOOmL乙醇，用搖床震蕩 浸提Mh，用離心機離心得上清液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣分別加入600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機離 心得上清液和殘渣；步驟(三)將(二)中殘渣分別加入400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機離心得上 清液和殘渣，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到苦 參、苦楝葉和柳葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時 間2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權(quán)利要求1所述的重量配比制成復方苦參制劑。3、權(quán)利要求1所述的一種復方苦參制劑的用途，其特征在于對鰻弧菌、哈維氏弧 菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。藥理實驗復方苦參制劑的抑菌作用實驗1材料及方法1. 1供試材料1. 1. 1供試菌株本實驗所使用的四致魚病菌均來自山東大學威海分校微生物實驗室，分別 是D31 (鰻弧菌V. anugui llarum)、D32 (哈維氏弧菌V. harveyi)、D61 (溶藻膠弧菌 V. alginolyticus)、D230 (嗜鹽弧菌Vibriovulnif icus)。試驗中病菌用2216E固體和液體
培養(yǎng)基培養(yǎng)。2216E培養(yǎng)基蛋白胨5g，酵母膏l(xiāng)g，磷酸高鐵0. Olg，陳海水IOOOmL,煮沸的5% 氫氧化納溶液調(diào)PH值7. 6-7. 8，瓊脂15-20g (液體培養(yǎng)基不加)。1. 1.2試驗儀器超凈工作臺、光照培養(yǎng)箱、電子游標卡尺、離心機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、烘箱、中藥粉碎機、 高壓滅菌鍋等。1.1. 3供試植物樣品本實驗選取植物為苦參、苦楝葉、柳葉、大蒜。1. 2實驗方法1. 2. 1植物提取物的制備及復方苦參制劑的配制分別取苦參、苦楝葉、柳葉各40g，分別加入SOOmL mL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh， 用離心機離心得上清液(1)和殘渣(1)；將殘渣(1)分別加入600mL乙醇，用搖床震蕩浸提 18h，離心機離心得上清液(2)和殘渣O)；將殘渣(2)分別加入400mL乙醇，震蕩浸提12h， 離心機離心得上清液(3)和殘渣(3)，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進 行減壓濃縮，烘干，得到苦參、苦楝葉、柳葉提取物；取搗碎的大蒜20g，加入IOOOmL圓底燒 瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時間2. 0h，靜置，得大蒜精油；
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取苦參提取物3g、苦楝葉提取物2g、柳葉提取物2g和大蒜精油0. 002g配制復方 辣蓼制劑。以旋蒸回收乙醇做為溶劑溶解復方苦參制劑，使生藥含量為lg/mL，密封后0 4°C冰箱保存待用。1. 2. 2復方苦參制劑對致魚病弧菌抑菌活性的測定1. 2. 2. 1菌懸液的制備菌株經(jīng)活化后轉(zhuǎn)接于固體平板于培養(yǎng)24h后，挑起適量菌苔接種于液體培 養(yǎng)基，而后再于振蕩培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)Mh，各錐形瓶均渾濁后涂布平板計數(shù)并稀釋至 4X108CFU/mL 備用。1. 2. 2. 2復方苦參制劑對致魚病弧菌抑菌活性試驗采用平板擴散法，制備直徑為IOcm的2216E固體培養(yǎng)基平板，要求每個平板厚度 4mm，加100 μ 1各菌懸液涂布均勻后放置30min，平板底部畫線分三區(qū)，于每個區(qū)中央打孔 器各打一孔，打孔器直徑為5mm;試驗以多菌靈為陽性對照，多菌靈濃度為lmg/mL，以旋蒸 回收乙醇做為溶劑對照，每種菌做三個平行，于各個孔滴加復方苦參制劑30 μ L，結(jié)束后放 置30min。放置完畢后將平板置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)Mh，游標卡尺測量抑菌圈直徑。抑菌效果的判定參照參考文獻，抑菌圈直徑> 20mm為極敏，以“***”表示； 15-19mm為高敏，以“**”表示；10-14為中敏，以“*”表示；10以下為低敏，以“_”表示。2 結(jié)果2. 1復方苦參制劑對致魚病弧菌的抑制作用見表1。表1復方苦參制劑對致魚病弧菌的抑制活性
權(quán)利要求
1.一種復方苦參制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑苦參提取物2g-3g、苦楝葉提取物lg-2g、柳葉提取物lg_2g、大蒜精油0. OOlg-O. 002g。
2.權(quán)利要求1所述的一種復方苦參制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟 步驟(一)分別取苦參、苦楝葉和柳葉各30g-40g，分別加入600mL-800mL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機離心得上清液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣分別加入400mL-600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機 離心得上清液和殘渣；步驟(三)將(二)中殘渣分別加入200mL-400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機離心得 上清液和殘渣，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到 苦參、苦楝葉和柳葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g_20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時 間1. 5h-2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權(quán)利要求1所述的重量配比制成復方苦參制劑。
3.權(quán)利要求1所述的一種復方苦參制劑的用途，其特征在于對鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶 藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領域。本發(fā)明涉及一種復方苦參制劑及其用途。分別取苦參、苦楝葉和柳葉，分別加入乙醇，用搖床震蕩浸提，用離心機離心得上清液；重復提取2次，合并三次上清液，過濾，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到苦參、苦楝葉和柳葉提取物；取搗碎的大蒜，加入圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，得大蒜精油；取苦參提取物、苦楝葉提取物、柳葉提取物和大蒜精油制成復方苦參制劑。本發(fā)明產(chǎn)品對鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌和嗜鹽弧菌具有抑菌作用，可開發(fā)相應制劑用于防治水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中發(fā)生的弧菌病，本發(fā)明產(chǎn)品適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A01N65/26GK102125062SQ201110082028
公開日2011年7月20日 申請日期2011年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月28日
發(fā)明者張崇禧, 潘漫, 盛園園, 程傲星, 邢翔, 鄭友蘭 申請人:山東大學威海分校