專利名稱：復(fù)方黃連注射劑配方及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，具體涉及一種抗金黃色葡萄球菌感染和抑制耐藥金黃色葡萄球菌的注射劑及其制備工藝，特別涉及一種新型畜禽肌肉注射用復(fù)方黃連注射劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
黃連解毒湯是清熱解毒的經(jīng)典中藥方劑，其主要成分為黃連、黃柏、黃芩、桅子四味中藥。方中以大苦大寒之黃連為君，臣以黃芩，佐以黃柏和桅子，四藥合用，瀉火以解熱毒。黃連解毒湯除傳統(tǒng)湯劑外，尚有散劑、顆粒劑、膠囊劑等劑型。湯劑雖可根據(jù)病情靈活加減，則有煎煮麻煩、攜帶不便、味苦難咽、易于傷胃等缺陷；散劑、顆粒劑和膠囊劑有吸收慢、 味苦，對胃腸粘膜有刺激，服用時易引起惡心、嘔吐等缺陷。為克服這些劑型的缺陷，特進(jìn)行黃連解毒湯新劑型一注射劑的發(fā)明研究。中藥注射劑是“以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和方法，從中藥或復(fù)方中藥中提取有效物質(zhì)制成的注射劑。”中藥注射劑直接進(jìn)入機(jī)體分布到組織器官，繞過了肝臟的首過作用，具有生物利用度高，使用方便，療效快等優(yōu)點(diǎn)。 但由于中藥復(fù)方藥味多，化學(xué)成分復(fù)雜且性質(zhì)各異，提取方法和制備工藝的不完善可能會導(dǎo)致制成的復(fù)方注射劑存在澄明度欠佳、雜質(zhì)去除不完全，有效成分含量和療效不穩(wěn)定等問題，特別是鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)的存在，容易引起機(jī)體不良反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，采用現(xiàn)代研究手段和生產(chǎn)工藝，以體外抑菌和耐藥逆轉(zhuǎn)效果為依據(jù)，對清熱解毒的代表方劑一黃連解毒湯的活性成分進(jìn)行提取、純化和精制， 確定藥味最佳組方和提取與精制的方法，最大限度的去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、色素等雜質(zhì)，制成有效成分相對穩(wěn)定、質(zhì)量可控，可供肌肉注射的復(fù)方黃連注射液。本發(fā)明所采用的中藥配方為按重量比，一種畜禽用復(fù)方黃連注射劑，由黃連2 8份，黃柏2 8份，桅子2 8份，黃芩1 4份，以原料總重量5 30倍水分兩次(一次 5 20倍，一次5 10倍)回流提取、然后濃縮、精制而成。本發(fā)明所述的一種復(fù)方黃連注射劑的制備方法，采取下述方法，按不同料水比提取兩次、不同濃度乙醇沉淀三次、改良明膠沉淀一次、硅膠吸附脫色等組合成制備工藝，分為配料、浸提、回流提取、濃縮、純化、脫色、灌裝、滅菌消毒等步驟，具體按如下步驟進(jìn)行(1)配料按重量份數(shù)分別稱取經(jīng)烘干、粉碎并過40目篩的生藥黃連2 8份，黃柏2 8份，桅子2 8份，黃芩1 4份；(2)浸提將四味藥粉混合物料，加總重量5 20倍水常溫浸潤2 12小時；(3)回流提取回流提取2次。浸提后沸水浴回流提取1 3小時；抽濾，得濾液； 藥渣再用5 10倍量體積水回流提取1 3小時；抽濾，棄藥渣，合并兩次濾液；(4)濃縮將濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮為生藥成分1 2克/毫升的藥液，放冷至
室溫；
(5)純化慢慢添加95%冷乙醇至濃縮藥液中含醇量達(dá)50% 65%，邊加邊攪拌； 密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 48小時；抽濾，棄沉淀，得含醇溶液，再慢慢添加95%冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)65% 80%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 48小時；抽濾，棄沉淀，得含醇濾液；將含醇濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，放冷至室溫；加藥液體積3 5%的明膠，邊加邊攪拌均勻；在4°C條件下靜置12 M小時；慢慢添加95% 冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)75 85%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 48小時； 抽濾，棄沉淀，得濾液；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，放冷至室溫；(6)脫色加入上述藥液體積量25% 40%的硅膠，20°C 40°C脫色2 12小時；抽濾，得注射液原液，用注射用水調(diào)整濃度，可以配制成濃度相當(dāng)于生藥成分1克/毫升的注射液；(7)灌裝按照要求可灌封成不同規(guī)格的針劑，如5毫升/支、10毫升/支規(guī)格的安甌；(8)消毒滅菌流通蒸氣消毒30分鐘；即得澄清透明、淡黃色或者棕黃色復(fù)方黃連注射劑。對于上述步驟，可進(jìn)一步按以下方式進(jìn)行(1)配料按重量份數(shù)分別稱取經(jīng)烘干、粉碎并過40目篩的生藥黃連2 8份，黃柏2 8份，桅子2 8份，黃芩1 4份；(2)浸提將四味藥粉混合物料，加總重量10 20倍水常溫浸潤4 10小時；(3)回流提取回流提取2次，浸提后沸水浴回流提取2 3小時；抽濾，得濾液； 藥渣再用5 10倍量體積水回流提取1 3小時；抽濾，棄藥渣，合并兩次濾液；(4)濃縮將濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮為含生藥成分1 2克/毫升的藥液，放冷
至室溫；(5)純化慢慢添加95%冷乙醇(本發(fā)明所指冷乙醇為溫度4°C左右的乙醇，下同)至濃縮藥液中含醇量達(dá)50% 65%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 40 小時；抽濾，棄沉淀，得濾液，再慢慢添加95%冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)65% 80%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下，靜置M 40小時；抽濾，棄沉淀，得含醇濾液；將含醇濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，放冷至室溫；加藥液體積3 5%的明膠，邊加邊攪拌均勻；在4°C條件下靜置12 M小時；慢慢添加95%冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)75 85%， 邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下，靜置M 48小時；抽濾，棄沉淀，得含醇濾液；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇至無醇味，放冷至室溫；(6)脫色加入上述藥液體積量25 40%的硅膠20°C 40°C脫色2 10小時； 抽濾，得注射劑原液，用注射用水調(diào)整濃度，配制成濃度相當(dāng)于生藥1克/毫升的注射液；(7)灌裝按照要求可灌封成不同規(guī)格的針劑，如5毫升/支、10毫升/支規(guī)格的安甌；(8)消毒滅菌流通蒸氣消毒35分鐘；即得澄清透明、淡黃色或者棕黃色復(fù)方黃連注射劑。按下述方法，以復(fù)方黃連注射劑中含量最高的小檗堿為質(zhì)控指標(biāo)，采用反相高效液相色譜法測定小檗堿的含量。色譜條件為Lima-C18(2)柱6 X 250mm，5 μ m)，流動相為甲醇6%三乙胺水溶液08 72)。以磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.0，檢測波長為345nm，流速為lmL/min,進(jìn)樣量為20 μ L，柱溫30 °C。以水提醇沉淀法提取黃連解毒湯組方藥材黃連、黃柏、桅子、黃芩中的有效成分如生物堿、苷類、有機(jī)酸等，然后加入適當(dāng)濃度的乙醇沉淀去除雜質(zhì)。第一次添加95%的冷乙醇，使?jié)饪s藥液含醇量(乙醇濃度)達(dá)50% 65%，去除淀粉、無機(jī)鹽等，第二次添加95% 的冷乙醇，使?jié)饪s藥液含醇量達(dá)65% 80%，除去蛋白質(zhì)和多糖，同時也可除去一些鞣質(zhì)、 色素、樹脂等。再往藥液中加入藥液體積3 5%的明膠，去除鞣質(zhì)；第三次添加95%的冷乙醇使含醇量達(dá)75% 85%，進(jìn)一步除去鞣質(zhì)等雜質(zhì)?；厥找掖己笥霉枘z脫色以吸附除去色素得到澄清透明的淡黃色或者棕黃色的注射劑原料液。以組方中的君藥黃連中含量最高的化合物一小檗堿作為定性或定量控制的指標(biāo)，采用反相高效液相色譜法測定復(fù)方黃連注射劑中的小檗堿含量，并給出復(fù)方黃連注射劑的指紋圖譜。復(fù)方黃連注射劑不僅具有耐藥逆轉(zhuǎn)效果，而且抗金黃色葡萄球菌感染效果更佳， 制備工藝簡單，成本低，節(jié)約經(jīng)費(fèi)。以水提取、不同濃度乙醇沉淀三次、改良明膠法沉淀1 次、硅膠吸附脫色組合而成的制劑工藝，有效的去除了黃連解毒湯組方藥材提取液中淀粉、 無機(jī)鹽、蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)、色素、樹脂等雜質(zhì)，保留了生物堿及其鹽、苷類、有機(jī)酸類等有效成分。本發(fā)明研制的復(fù)方黃連制劑經(jīng)制劑檢驗分析，各項指標(biāo)符合《中國獸藥典》2005年版第1部中藥注射劑項下的要求。制劑性能穩(wěn)定，純天然、安全無毒，療效明顯，適用于金黃色葡萄球菌和耐藥性金黃色葡萄球菌引起的化膿性感染，具有很好的市場前景和相應(yīng)的社會效益、經(jīng)濟(jì)效益。
具體實施例方式實施例1以下結(jié)合較佳實施例，對依據(jù)本發(fā)明提供的具體實施方式
詳述如下一種畜禽用復(fù)方黃連注射劑，由黃連42. 86克，黃柏14. 29克，桅子28. 57克，黃芩 14. 29克，超純水1500克，分兩次提取、沉淀、分離、精制而成。一種畜禽用復(fù)方黃連注射劑的制備方法，按如下步驟進(jìn)行(1)按重量份數(shù)分別稱取經(jīng)烘干、粉碎并過40目篩的生藥黃連42. 86克，黃柏 14. 29克，桅子28. 57克，黃芩14. 29克。(2)將四味藥粉混合物料，加總重量10倍(1000克)超純水常溫浸泡2小時；(3)在沸水浴回流提取2小時；(4)抽濾，得濾液；(5)藥渣再用5倍量體積(500克)沸水浴回流提取2小時；(6)抽濾，棄藥渣，合并兩次濾液；(7)濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮濾液，到含生藥成分濃度為1 2克/毫升，放冷至室(8)慢慢添加95%冷乙醇至濃縮藥液中含醇量達(dá)60%，邊加邊攪拌；(9)密封蓋嚴(yán)，4 °C冰箱靜置M小時；(10)抽濾，棄沉淀，再慢慢添加95%冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)80%，邊加邊攪拌；(11)密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置48小時；(12)抽濾，棄沉淀，得濾液；(13)濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，放冷至室溫；
(14)加藥液體積3%的明膠，邊加邊攪拌均勻；(15) 4 °C條件下靜置M小時；(16)慢慢添加95%冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)80%，邊加邊攪拌；(17)密封蓋嚴(yán)，4 °C條件下靜置48小時；(18)抽濾，棄沉淀，得濾液；(19)將濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，放冷至室溫；(20)在上述溶液中加入藥液體積量35%的硅膠30°C脫色3小時；(21)抽濾，用注射用水調(diào)整原液濃度，配制成濃度相當(dāng)于生藥成分1 2克/毫升的注射液；(22)灌封成5毫升/支、10毫升/支規(guī)格安甌；(23)流通蒸氣消毒30分鐘；(24)即得澄清透明、淡黃色或者棕黃色復(fù)方黃連注射劑；(25)以黃連小檗堿為質(zhì)控指標(biāo)，采用反相高效液相色譜法測得每批次復(fù)方黃連注射劑中小檗堿含量為20毫克/毫升左右。實施例2復(fù)方黃連注射劑的體外抑菌試驗(1)最低抑菌濃度(MIC)的測定方法采用試管稀釋法。將復(fù)方黃連注射劑作二倍遞減濃度稀釋，1 9號試管內(nèi)藥物濃度為 0. 5,0. 25,0. 125,0. 0625,0. 0313,0. 0156,0. 0078,0. 0039,0. 00195 克 / 毫升。按通用的試驗方法配好5株耐藥性金黃色葡萄菌液，每管均加入菌液0. lmL，第10號試管加藥液不加菌液，作為陰性對照，第11號試管加菌液不加藥液，作為陽性對照。將各管置35°C振蕩培養(yǎng)18小時，觀察并判定藥物的最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果復(fù)方黃連注射劑的MIC測定結(jié)果見表1。結(jié)果表明復(fù)方黃連注射劑對Sal Sa5的最低抑菌濃度均為0. 0078克/毫升。表1復(fù)方黃連注射劑對耐藥性金黃色葡萄菌的MIC測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方黃連注射劑配方，其特征在于按重量比，由黃連2 8份，黃柏2 8份， 桅子2 8份，黃芩1 4份，以原料總重量10 30倍水分兩次，回流提取、然后濃縮、精制而成。
2.一種復(fù)方黃連注射劑的制備方法，其特征在于采取下述方法，按不同料水比提取2 次、乙醇沉淀3次、改良明膠沉淀1次、硅膠吸附脫色組合成制備工藝，分為配料、浸提、回流提取、濃縮、純化、脫色、灌裝、滅菌消毒步驟，具體按如下步驟進(jìn)行(1)配料按重量份數(shù)分別稱取經(jīng)烘干、粉碎并過40目篩的生藥黃連2 8份，黃柏 2 8份，桅子2 8份，黃芩1 4份；(2)浸提將四味藥粉混合物料，加總重量5 20倍水常溫浸潤2 12小時；(3)回流提取回流提取2次，浸提后沸水浴回流提取1 3小時；抽濾，得濾液；藥渣再用5 10倍量體積水回流提取1 3小時；抽濾，棄藥渣，合并兩次濾液；(4)濃縮將濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮濾液到含生藥成分1 2克/毫升的藥液，放冷至室溫；(5)純化慢慢添加95%冷乙醇至濃縮藥液中含醇量達(dá)50% 65%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 48小時；抽濾，棄沉淀，得含醇藥液，再慢慢添加95%冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)65% 80%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，移至4°C條件下靜置M 48小時； 抽濾，棄沉淀，得含醇濾液；將含醇濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，放冷至室溫；加藥液體積3% 5%的明膠，邊加邊攪拌均勻；在4°C下靜置12 M小時；慢慢添加95% 冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)75% 85%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 48小時；抽濾，棄沉淀，得濾液；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇至無醇味，放冷至室溫；(6)脫色加入上述藥液體積量25% 40%的硅膠20°C 40°C脫色2 12小時；抽濾，得注射液原液，用注射用水調(diào)整濃度，配制成濃度相當(dāng)于生藥成分1克/毫升的注射液；(7)灌裝按照要求灌封成不同規(guī)格的針劑；(8)消毒滅菌流通蒸氣消毒30分鐘，即得澄清透明、淡黃色或者棕黃色復(fù)方黃連注射劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方黃連注射劑的制備方法，其特征在于采取下述方法，按不同料水比提取兩次、不同濃度乙醇沉淀三次、改良明膠沉淀一次、硅膠吸附脫色組合成制備工藝，分為配料、浸提、回流提取、濃縮、純化、脫色、灌裝、滅菌消毒步驟，具體按如下步驟進(jìn)行(1)配料按重量份數(shù)分別稱取經(jīng)烘干、粉碎并過40目篩的生藥黃連2 8份，黃柏 2 8份，桅子2 8份，黃芩1 4份；(2)浸提將四味藥粉混合物料，加總重量10 20倍水常溫浸潤4 10小時；(3)回流提取回流提取2次，浸提后沸水浴回流提取2 3小時；抽濾，得濾液；藥渣再用5 10倍量體積水回流提取1 3小時；抽濾，棄藥渣，合并兩次濾液；(4)濃縮將濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮濾液到含生藥成分1 2克/毫升的藥液，放冷至室溫；(5)純化慢慢添加95%冷乙醇至濃縮藥液中含醇量達(dá)50% 65%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 40小時；抽濾，棄沉淀，得含醇濾液，再慢慢添加95%冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)65% 80%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 40小時；抽濾，棄沉淀，得含醇濾液；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，放冷至室溫；加藥液體積3 5%的明膠，邊加邊攪拌均勻；4°C條件下靜置12 M小時；慢慢添加95%冷乙醇至濾液中含醇量達(dá)75% 85%，邊加邊攪拌；密封蓋嚴(yán)，4°C條件下靜置M 48小時；抽濾，棄沉淀， 得含醇濾液；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，至無醇味，放冷至室溫；(6)脫色在上述溶液中加入藥液體積量25 40%的硅膠，20°C 40°C脫色2 10小時；抽濾，得注射劑原液，用注射用水調(diào)整藥液濃度，配制成濃度相當(dāng)于生藥成分1克/毫升的注射液；(7)灌裝按照要求灌封成不同規(guī)格的針劑，如5毫升/支、10毫升/支規(guī)格的安甌；(8)消毒滅菌流通蒸氣消毒35分鐘，即得澄清透明、淡黃色或者棕黃色復(fù)方黃連注射劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方黃連注射劑的制備方法，其特征在于按下述方法進(jìn)行檢測含量，以復(fù)方黃連注射劑中含量最高的小檗堿為質(zhì)控指標(biāo)，采用反相高效液相色譜法測定小檗堿的含量；色譜條件為=Lima-ClSO)柱，流動相為甲醇6%三乙胺水溶液為28 72，以磷酸調(diào)節(jié)pH值為3. 0，檢測波長為345nm，流速為lmL/min，進(jìn)樣量為20 μ L， 柱溫30°C。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，涉及一種抗金黃色葡萄球菌感染和抑制耐藥金黃色葡萄球菌的復(fù)方黃連注射劑及其制備工藝，將黃連、梔子、黃柏、黃芩等四種中藥材按照一定的配比組方；經(jīng)水提取、不同濃度乙醇沉淀、改良明膠沉淀、硅膠吸附脫色等注射劑制備工藝。所制備的復(fù)方黃連注射劑性能穩(wěn)定，純天然、安全無毒，抗感染效果明顯，有較顯著的耐藥逆轉(zhuǎn)作用。適用于金黃色葡萄球菌和耐藥性金黃色葡萄球菌引起的化膿性感染，具有很好的市場前景和相應(yīng)的社會效益、經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號G01N30/89GK102309591SQ20111027976
公開日2012年1月11日 申請日期2011年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月20日
發(fā)明者劉湘新, 李偉奇, 游思湘, 譚榀新, 賀建華 申請人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)