專利名稱：利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法。
背景技術(shù)：
近年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，我國飼料業(yè)也取得了很大的發(fā)展，雖然飼料業(yè)發(fā)展前景誘人，但競爭十分激烈，飼料原料價格大幅上漲，蛋白資源緊缺已成為該行業(yè)發(fā)展面臨的重大挑戰(zhàn)之一。因此開發(fā)新的蛋白資源已成為我國飼料工業(yè)當(dāng)前迫切而艱巨的任務(wù)之我國每年玉米產(chǎn)量超過1. 3億噸，副產(chǎn)物玉米芯的量在4000萬噸左右。目前只有一少部分用于培養(yǎng)食用菌，生產(chǎn)木糖、糠醛等或直接作為營養(yǎng)價值極低的飼料，絕大部分未得到充分利用，或棄之于田間或焚燒，造成了環(huán)境污染。玉米芯的結(jié)晶性小，木質(zhì)素含量較低，主要由纖維素、半纖維素組成，其中半纖維素含量較高，其代表性的分析結(jié)果為半纖維素38-40 %、纖維素33-35 %、木質(zhì)素15-17 %、灰分2 %、膠質(zhì)4 %。黑曲霉是公認(rèn)的安全菌株，具有蛋白酶、液化型淀粉酶、糖化型淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、植酸酶等多種酶，酶系齊全，培養(yǎng)條件粗放，多數(shù)為胞外酶，水解酶系隨條件的改變而改變。目前，還未見有關(guān)利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法。本研究以玉米芯為主要原料固態(tài)法培養(yǎng)黑曲霉，黑曲霉所產(chǎn)生的半纖維素酶和纖維素酶可將玉米芯原料分解產(chǎn)生戊糖(主要是木糖)和六碳糖等還原糖，篩選并接種啤酒酵母，添加大豆粕，共同發(fā)酵， 產(chǎn)品粗蛋白質(zhì)增量明顯提高，同時黑曲霉豐富的酶系可將植物蛋白復(fù)雜的大分子物質(zhì)消化分解為小分子物質(zhì)，較大程度降低了大豆蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、血凝素等，有效消除了大豆蛋白的抗原性，增加寡肽、氨基酸，維生素、酶類等有用代謝產(chǎn)物， 使物料適口性改善，營養(yǎng)價值提高。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述存在的問題及玉米芯、黑曲酶、酵母菌的優(yōu)點，本發(fā)明提供一種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法，不但產(chǎn)品粗蛋白質(zhì)增量明顯提高，而且可將植物蛋白復(fù)雜的大分子物質(zhì)消化分解為小分子物質(zhì)，較大程度降低了大豆蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、血凝素等，有效消除了大豆蛋白的抗原性，增加寡肽、氨基酸，維生素、酶類等有用代謝產(chǎn)物，使物料適口性改善，營養(yǎng)價值提高。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是—種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法，所述的飼料是由玉米芯和麩皮以 70-80 20-30及營養(yǎng)鹽質(zhì)量比混合后，加水煮制得到的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，并在固體發(fā)酵培養(yǎng)基上接種黑曲酶，培養(yǎng)48-7 后接種啤酒酵母菌，24h后添加20 %的蒸煮豆粕，繼續(xù)發(fā)酵 36-4 ，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥、粉碎制得所述的生物蛋白飼料。優(yōu)選所述的生物蛋白飼料，其特征在于所述的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下方面制得接種黑曲霉培養(yǎng)基為玉米芯和麩皮以70-80 20-30及營養(yǎng)鹽((NH4)2S042%，MgSO4 · 7H20 0. 05%, KH2PO4 0.01% )混合后，加入一定質(zhì)量的水，使水分達到70-80%，于
高壓處理池，得到黑曲酶發(fā)酵固體培養(yǎng)基；含豆粕的黑曲霉與啤酒酵母的共發(fā)酵培養(yǎng)基為接種黑曲酶培養(yǎng)基培養(yǎng)72-%h 后(接種啤酒酵母Mh)添加20%的蒸煮豆粕，加水量90%-100%，得到含豆粕的共發(fā)酵培
養(yǎng)基；一種生物蛋白飼料的制備方法，所述方法是將黑曲霉和啤酒酵母先后接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，于觀_301下發(fā)酵培養(yǎng)120-144h，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥，粉碎至60目即得到所述的生物蛋白飼料；各菌種的接種量可不受限制，通常選擇其常規(guī)接種量即可，優(yōu)選的，所述菌種的接種量以種液占固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基干重質(zhì)量百分比計，黑曲霉種子液為10%，啤酒酵母種子液為10%。所述的黑曲霉種子培養(yǎng)基為=NaNO32g, K2HPO4 lg, KCl 0. 5g, MgSO4O. 5g, FeSO4
0.Olg，蔗糖 30g，水 1000ml, pH 自然，121°C滅菌 20min。所述黑曲霉種子液的制備保存的黑曲霉轉(zhuǎn)接1-2次，用無菌移液管吸取5_8mL無菌水加至斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3-5mL的菌液， 轉(zhuǎn)接于裝有黑曲霉IOOmL種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、3(TC下培養(yǎng)黑曲霉72-%h，得到黑曲霉種子液。所述啤酒酵母種子液的制備保存的啤酒酵母轉(zhuǎn)接1-2次，用無菌移液管吸取 5-8mL無菌水加至斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3-5mL 的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有啤酒酵母IOOmL種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于30°C溫度下培養(yǎng)酵母 24-36h,搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min，得到啤酒酵母種子液。優(yōu)選的，所述黑曲霉篩選培養(yǎng)基為羧甲基纖維素納20g，Na2HPO4 2. 5g，KH2PO4
1.6g，蛋白胨2. 6g，酵母膏0. 8g，蒸餾水1000ml，瓊脂20g, pH呈中性。鹽城工學(xué)院生物中心保存的黑曲霉接種在適用于黑曲霉的固體培養(yǎng)基上，30°C下活化對-3他后，稀釋并涂布于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)72-%h，然后經(jīng)lg/Ι的剛果紅處理，挑取菌圈最大的菌株，作斜面保存。優(yōu)選的，所述的啤酒酵母固體培養(yǎng)基為木糖20g/l，酵母膏10g/l，蛋白胨IOg/ 1，ρΗ值5. 5，瓊脂2%，0. IMPa滅菌20min。鹽城工學(xué)院生物中心保存的啤酒酵母接種在啤酒酵母的固體培養(yǎng)基上，在30°C活化對-3他后，在固體培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，30°C培養(yǎng) 72-96h后，挑選生長旺盛的菌株作斜面保存。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在1、我國每年副產(chǎn)大量的玉米芯，但是卻沒有被廣泛利用，絕大部分作為農(nóng)家燃料被白白燒掉，既浪費資源又污染環(huán)境。但通過微生物發(fā)酵的方式生產(chǎn)生物蛋白飼料，研究成果對節(jié)約飼料用糧和減輕農(nóng)村環(huán)境污染有一定的作用；2、近年來，飼料工業(yè)隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展而迅速發(fā)展，飼料原料的價格大幅度上漲， 蛋白資源供應(yīng)緊張已成為該行業(yè)發(fā)展面臨的重大挑戰(zhàn)之一，利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料，既緩解飼料蛋白源緊張的問題，還能降低飼料成本和增加農(nóng)民收入；3、黑曲霉是公認(rèn)的安全菌株，具有蛋白酶、液化型淀粉酶、糖化型淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、植酸酶等多種酶。以玉米芯為主要原料固態(tài)法培養(yǎng)黑曲霉，黑曲霉所產(chǎn)生的半纖維素酶和纖維素酶可將玉米芯原料分解產(chǎn)生戊糖(主要是木糖)和六碳糖等還原糖，以10%的接種量將黑曲霉種子培養(yǎng)液接種到高溫處理的玉米芯原料進行淺盤固體培養(yǎng)，在溫度為30°C、pH 5. 5、時間4 下，每日翻拌一次，48-72h，培養(yǎng)基表面出現(xiàn)大量黑色孢子頭，還原糖含量達9. 5-10. 1 %。4、玉米芯原料淺盤培養(yǎng)黑曲霉48-7 后接種10 %啤酒酵母，在30°C下培養(yǎng)， 每日翻拌一次，發(fā)酵24h后添加20%豆粕，繼續(xù)淺盤發(fā)酵48h，產(chǎn)品中粗蛋白含量達 25. 3-27. 2%，粗蛋白凈增量達10. 8-12. 7%。黑曲霉中所具有的蛋白酶的發(fā)酵作用與豆粕多肽的酶解有機地結(jié)合，較大程度降低了大豆蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、血凝素等，有效消除了大豆蛋白的抗原性，增加寡肽、氨基酸，維生素、酶類等有用代謝產(chǎn)物，產(chǎn)品蛋白質(zhì)水解度達8. 8-9.4%，飼料無苦味，適口性好，營養(yǎng)價值提高。
具體實施例方式實施例11、種子液的制備(1)黑曲霉，鹽城工學(xué)院生物中心保存。斜面培養(yǎng)基為(查氏培養(yǎng)基)=NaNO32g, K2HPO4 lg, KCl 0. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g, FeSO4 O.Olg，蔗糖30g，瓊脂20g，蒸餾水定容至1000mL，pH值自然，121°C滅菌20分鐘。接種黑曲霉，30°C培養(yǎng)72h，得到斜面菌種。篩選培養(yǎng)基為羧甲基纖維素納20g, Na2HPO4 2. 5g，KH2PO4 1. 6g，蛋白胨2. 6g，酵母膏0. 8g，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，pH呈中性，121°C滅菌20分鐘。接種黑曲霉斜面菌種， 30°C培養(yǎng)7 后，經(jīng)lg/Ι的剛果紅處理，挑取菌圈最大的菌株，得到篩選的黑曲霉。種子培養(yǎng)基=NaNO32g，K2HPO4 lg, KCl 0. 5g，MgSO4 0. 5g，F(xiàn)eSO4 0. Olg，蔗糖 30g， 蒸餾水1000ml，pH自然，121°C滅菌20min。用無菌移液管吸取5mL無菌水加至篩選的黑曲霉斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭颍脽o菌移液管吸取3mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、3(TC下培養(yǎng)黑曲霉72h，得到黑曲霉種子液。(2)啤酒酵母，鹽城工學(xué)院生物中心保存。固體培養(yǎng)基為木糖20g，酵母膏10g，蛋白胨10g，pH 5. 5，瓊脂20g，0. IM 1 滅菌 20min。將啤酒酵母原貯菌種，在30°C活化24h后，在固體培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，30°C培養(yǎng) 7 后，挑選生長旺盛的菌株，得到篩選的啤酒酵母。種子培養(yǎng)基木糖50g/l，尿素 3g/l，硫銨 1. 5g/l，KH2PO4 lg/IjMgSO4 · 7Η200· 5g/ 1，酵母膏 lg/l，0. IMPa 滅菌 20min。用無菌移液管吸取5mL無菌水加至篩選的啤酒酵母斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中， 于搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、30°C下培養(yǎng)啤酒酵母72h，得到啤酒酵母種子液。2、發(fā)酵原料處理稱取粉碎后的玉米芯粉800g，添加營養(yǎng)鹽溶液(MM)2SO4 20g, MgSO4 · 7H200. 5g， KH2PO4 0. Ig和200g的麩皮，調(diào)pH 5. 5，加水量為800ml，在下高壓處理2h，處理時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)的溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降到“0”時，打開排氣閥，打開蓋子，取出培養(yǎng)基，得到固態(tài)發(fā)酵初始培養(yǎng)基。發(fā)酵培養(yǎng)基接種黑曲霉72h(接種黑曲霉24h)后，添加200g的豆粕，繼續(xù)進行共發(fā)酵。3、接種上述經(jīng)預(yù)處理和固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，通風(fēng)冷卻至35°C以下時，先接種黑曲酶種子液 100ml，30°C下進行淺盤固體培養(yǎng)，每日翻拌一次，時間48h。玉米芯固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基淺盤培養(yǎng)黑曲霉4 后，接種IOOml啤酒酵母，30°C下繼續(xù)培養(yǎng)72h。4、干燥發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)物采用低溫干燥，粉碎至60目即得到所述的生物蛋白飼料， 產(chǎn)品中粗蛋白含量達沈.1%，粗蛋白凈增量達11.6%，蛋白水解度可達9.4%，飼料無苦味，適口性好，營養(yǎng)價值提高。5、應(yīng)用效果試驗研究了飼料中不同含量的玉米芯生物蛋白飼料對異育銀鯽生長性能、 魚體品質(zhì)的影響。將240尾健康的異育銀鯽魚種，平均體重(18.06士2.13化，飼養(yǎng)于 IOOcmX80cmX60cm的水族箱內(nèi)，玉米芯生物蛋白飼料分別以5%、10%、15%和20% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的比例添加到基礎(chǔ)飼料中，連續(xù)飼養(yǎng)60d。試驗結(jié)果表明在異育銀鯽飼料中添加10%玉米芯生物蛋白飼料，其增重率、總消化率、蛋白質(zhì)消化率和魚體粗灰分、鈣含量與對照組比較沒有顯著性差異(P > 0.05)，但隨著玉米芯生物蛋白飼料添加量的上升，以上指標(biāo)都逐漸降低。表明在異育銀鯽魚種配合飼料中，玉米芯生物蛋白飼料的最適添加量為 10%，對魚體的生產(chǎn)性能、魚體品質(zhì)不會產(chǎn)生顯著影響(P > 0. 05)。實施例21、種子液的制備(1)黑曲霉，鹽城工學(xué)院生物中心保存。斜面培養(yǎng)基為(查氏培養(yǎng)基)=NaNO32g, K2HPO4 lg, KCl 0. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g, FeSO4 O.Olg，蔗糖30g，瓊脂20g，蒸餾水定容至1000mL，pH值自然，121°C滅菌20分鐘。接種黑曲霉，30°C培養(yǎng)72h，得到斜面菌種。篩選培養(yǎng)基為羧甲基纖維素納20g, Na2HPO4 2. 5g，KH2PO4 1. 6g，蛋白胨2. 6g，酵母膏0. 8g，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，pH呈中性，121°C滅菌20分鐘。接種黑曲霉斜面菌種， 30°C培養(yǎng)7 后，經(jīng)lg/Ι的剛果紅處理，挑取菌圈最大的菌株，得到篩選的黑曲霉。種子培養(yǎng)基=NaNO32g，K2HPO4 lg, KCl 0. 5g, MgSO4 0. 5g, FeSO4 0. Olg，蔗糖 30g, 蒸餾水1000ml，pH自然，121°C滅菌20min。用無菌移液管吸取5mL無菌水加至篩選的黑曲霉斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、3(TC下培養(yǎng)黑曲霉72h，得到黑曲霉種子液。(2)啤酒酵母，鹽城工學(xué)院生物中心保存。固體培養(yǎng)基為木糖20g，酵母膏10g，蛋白胨10g，pH 5. 5，瓊脂20g，0. IM 1 滅菌 20min。將啤酒酵母原貯菌種，在30°C活化24h后，在固體培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，30°C培養(yǎng) 7 后，挑選生長旺盛的菌株，得到篩選的啤酒酵母。種子培養(yǎng)基木糖50g/l，尿素 3g/l，硫銨 1. 5g/l，KH2PO4 lg/IjMgSO4 · 7Η200· 5g/ 1，酵母膏 lg/l，0. IMPa 滅菌 20min。用無菌移液管吸取5mL無菌水加至篩選的啤酒酵母斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中， 于搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、30°C下培養(yǎng)啤酒酵母72h，得到啤酒酵母種子液。2、發(fā)酵原料處理稱取粉碎后的玉米芯粉700g，添加營養(yǎng)鹽溶液(MM)2SO4 20g, MgSO4 · 7H200. 5g， KH2PO4 0. Ig和300g的麩皮，調(diào)pH 5. 5，加水量為800ml，在下高壓處理2h，處理時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)的溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降到“0”時，打開排氣閥，打開蓋子，取出培養(yǎng)基，得到固態(tài)發(fā)酵初始培養(yǎng)基。發(fā)酵培養(yǎng)基接種黑曲霉72h(接種黑曲霉 24h)后，添加200g的豆粕，繼續(xù)進行共發(fā)酵。3、接種上述經(jīng)預(yù)處理和固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，通風(fēng)冷卻至35°C以下時，先接種黑曲酶種子液 100ml，30°C下進行淺盤固體培養(yǎng)，每日翻拌一次，時間48h。玉米芯固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基淺盤培養(yǎng)黑曲霉7 后，接種IOOml啤酒酵母，30°C下繼續(xù)培養(yǎng)60h。4、干燥發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)物采用低溫干燥，粉碎至60目即得到所述的生物蛋白飼料， 產(chǎn)品中粗蛋白含量達27.2%，粗蛋白凈增量達12.7%，蛋白水解度可達9.8%，飼料無苦味，適口性好，營養(yǎng)價值提高。5、應(yīng)用效果試驗研究了飼料中不同含量的玉米芯生物蛋白飼料對異育銀鯽生長性能、 魚體品質(zhì)的影響。將240尾健康的異育銀鯽魚種，平均體重(15.78士1.96化，飼養(yǎng)于 IOOcmX80cmX60cm的水族箱內(nèi)，玉米芯生物蛋白飼料分別以5%、10%、15%和20% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的比例添加到基礎(chǔ)飼料中，連續(xù)飼養(yǎng)30d。試驗結(jié)果表明在異育銀鯽飼料中添加 10%玉米芯生物蛋白飼料，其增重率、總消化率、蛋白質(zhì)消化率和魚體粗灰分、鈣含量與對照組比較沒有顯著性差異(P > 0. 05)，以后隨著玉米芯生物蛋白飼料添加量的上升，以上指標(biāo)都逐漸降低。表明在異育銀鯽魚種配合飼料中，玉米芯生物蛋白飼料的最適添加量為 10%，對魚體的生產(chǎn)性能、魚體品質(zhì)不會產(chǎn)生顯著影響(P > 0. 05)。
權(quán)利要求
1.一種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法，所述的飼料是由玉米芯和麩皮以 70-80 20-30及營養(yǎng)鹽質(zhì)量比混合后，加水煮制的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，并在固體發(fā)酵培養(yǎng)基上接種黑曲酶，培養(yǎng)48-7 后，接種啤酒酵母菌，再24h后添加20 %的蒸煮豆粕，繼續(xù)發(fā)酵 36-48h，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥、粉碎制得所述的蛋白飼料。
2.如權(quán)利要求1所述的生物蛋白飼料，其特征在于所述的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下方面制得接種黑曲霉培養(yǎng)基為玉米芯和麩皮以70-80 20-30及營養(yǎng)鹽((NH4) 2S042 %， MgSO4 · 7H20 0. 05%, KH2PO4O. 01% )混合后，加入一定質(zhì)量的水，使水分達到70-80%，于高壓處理池，得到黑曲酶發(fā)酵固體培養(yǎng)基； 含豆粕的黑曲霉與啤酒酵母的共發(fā)酵培養(yǎng)基為接種黑曲酶培養(yǎng)基的培養(yǎng)72-96小時后(接種啤酒酵母Mh)添加20%的蒸煮豆粕，加水量90%-100%，得到含豆粕的共發(fā)酵培養(yǎng)基；
3.一種發(fā)酵蛋白飼料的制備方法，所述方法是將黑曲霉和啤酒酵母先后接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，于下發(fā)酵培養(yǎng)120-144h，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥，粉碎至60目即得到所述的生物蛋白飼料；
4.所權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述菌種接種量以種液占固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基干重質(zhì)量百分比計，黑曲霉種子液為10%，啤酒酵母種子液為10% ；所述的黑曲霉篩選培養(yǎng)基為羧甲基纖維素納20g，Na2HP042. 5g，KH2PO4L 6g，蛋白胨 2. 6g，酵母膏0. 8g，蒸餾水1000ml，瓊脂20g, pH呈中性，121°C滅菌20min ；所述的黑曲霉種子培養(yǎng)基為:NaN032g, K2HPO4Ig, KCl 0. 5g，MgSO4O. 5g，F(xiàn)eSO4O. Olg，蔗糖 30g，水 1000ml, pH 自然，121°C滅菌 20min。所述黑曲霉的篩選與種子液的制備黑曲霉在30°C活化對-3他后，稀釋并涂布于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)72-%h，經(jīng)lg/Ι的剛果紅處理，挑取菌圈最大的菌株，作斜面保存。篩選的黑曲霉轉(zhuǎn)接1-2次，用無菌移液管吸取5-8mL無菌水加至斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔， 并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3-5mL的菌液，分別轉(zhuǎn)接于裝有黑曲霉IOOmL種子培養(yǎng)基的 250mL錐形瓶中，于搖瓶150r/min、30°C下培養(yǎng)72-%h，得到黑曲霉種子液。所述的啤酒酵母固體培養(yǎng)基為木糖20g/l，酵母膏1(^/1，蛋白胨1(^/1，？!1值5.5，瓊月旨 2%，0. IMPa 滅菌 20min。所述的啤酒酵母種子培養(yǎng)基為木糖50g/l，尿素3g/l，硫銨1.5g/l，KH2P04lg/l， MgSO4 · 7H20 0. 5g/l，酵母膏 lg/1,0. IMPa 滅菌 20min。所述啤酒酵母的篩選與種子液的制備將啤酒酵母原貯菌種，在30°C活化對-3他后， 在固體培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，30°C培養(yǎng)3-4天后，挑選生長旺盛的菌株作斜面保存。篩選的啤酒酵母轉(zhuǎn)接1-2次，用無菌移液管吸取5-8mL無菌水加至斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3-5mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有啤酒酵母IOOmL種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于30°C溫度下培養(yǎng)M_3Mi，搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min，得到啤酒酵母種子液。
5.如權(quán)利3或4所述的方法，其特征在于所述初始固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基由玉米芯和麩皮以 70-80 20-30及營養(yǎng)鹽質(zhì)量比混合后，加入一定質(zhì)量的水，使水分達到70-80%，于， 高壓處理池，得到黑曲霉發(fā)酵固體培養(yǎng)基；接種啤酒酵母時的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，為上述固體發(fā)酵培養(yǎng)基上接種黑曲酶培養(yǎng)48-7 后的培養(yǎng)基，最后共培養(yǎng)培養(yǎng)基是由初始固態(tài)培養(yǎng)基接種黑曲霉72-%h(接種啤酒酵母Mh)的培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加20%的蒸煮豆粕，加水量為90% -100%，得到含豆粕的共發(fā)酵培養(yǎng)基。
6.如權(quán)利3或4所述的方法，其特征在于以10%的接種量將黑曲霉種子培養(yǎng)液接種到經(jīng)處理的玉米芯上進行淺盤固體培養(yǎng)，在溫度為30°C、pH 5. 5、時間48h下，每日翻拌一次， 48-72h后，培養(yǎng)基表面出現(xiàn)大量黑色孢子頭，還原糖含量達9. 5-10. 1 %。
7.如權(quán)利3或4所述的方法，玉米芯原料淺盤培養(yǎng)黑曲霉48-7 后接種10%啤酒酵母，按溫度30°C培養(yǎng)，每日翻拌一次，發(fā)酵24h后添加20 %豆粕，繼續(xù)淺盤發(fā)酵48h， 產(chǎn)品中粗蛋白含量達25. 3-27. 2%，粗蛋白凈增量達10. 8-12. 7 %，產(chǎn)品蛋白質(zhì)水解度達 8. 6-9. 8 %，飼料無苦味，適口性好，營養(yǎng)價值提高，可大幅度降低同類飼料產(chǎn)品的生產(chǎn)成本。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法，其固態(tài)發(fā)酵過程為玉米芯自然干燥后粉碎，過60目，然后添加麩皮和營養(yǎng)鹽溶液，在126℃下高壓處理2h，黑曲培養(yǎng)48-72h后接種酵母，黑曲霉培養(yǎng)72-96h后添加20％的豆粕，再發(fā)酵時間48h，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物烘干，粉碎得到玉米芯蛋白飼料。本發(fā)明的生物蛋白飼料產(chǎn)品粗蛋白含量達25.3％以上，凈蛋白增量為10.8％以上。另外，黑曲霉豐富的酶系較大程度降低了大豆蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、血凝素等，有效消除了大豆蛋白的抗原性，增加寡肽、氨基酸，維生素、酶類等有用代謝產(chǎn)物，使物料適口性改善，營養(yǎng)價值提高。本發(fā)明通過微生物發(fā)酵的方式生產(chǎn)生物蛋白飼料，對減輕農(nóng)村環(huán)境污染、節(jié)約飼料用糧、緩解蛋白資源供應(yīng)緊張、降低飼料成本和增加農(nóng)民收入有一定的作用，可以做飼料的原料。
文檔編號A23K1/14GK102246890SQ201010176929
公開日2011年11月23日 申請日期2010年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月20日
發(fā)明者封功能, 徐艷春, 殷玉崗, 王愛民, 邵榮 申請人:鹽城工學(xué)院