專利名稱：復(fù)合微生物制劑及其在作物秸稈的微生物降解中的應(yīng)用的制作方法
復(fù)合微生物制劑及其在作物秸稈的微生物降解中的應(yīng)用方法領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生物制劑，具體涉及一種由纖維素分解菌和表面活性劑組 成的復(fù)合微生物菌劑，還涉及該復(fù)合微生物制劑在作物秸稈的微生物降解中的應(yīng)用。背景方法加強(qiáng)能源資源節(jié)約和生態(tài)環(huán)境保護(hù)，增強(qiáng)可持續(xù)發(fā)展能力，關(guān)系到人民群眾切身 利益和中華民族生存發(fā)展。隨著世界各國(guó)對(duì)全球氣候的變化的重視以及能源危機(jī)的出現(xiàn)， 各國(guó)聯(lián)合討論節(jié)污減排的需要，在這個(gè)背景下秸稈在能源化、肥料化、飼料化等方面都具有 較大前景。秸稈是一種生物質(zhì)能資源，是當(dāng)今世界上僅次于煤炭、石油和天然氣的第四大能 源，是唯一可再生的能源。但是我國(guó)秸稈資源45% 47%作為農(nóng)村燃料，15%以燒荒形式 燒掉，只有很少一部分過(guò)腹還田或直接還田。秸桿直接焚燒不僅污染環(huán)境，而且造成資源浪費(fèi)。利用微生物發(fā)酵降解秸稈是肥料化的優(yōu)良途徑，但是秸稈直接還田，存在很多具 體問(wèn)題，如秸桿利用率低，不易腐爛，影響下茬播種，容易浮出土面飄的到處都是等，還有報(bào) 道表明秸稈直接還田更容易引起作物爛根和病害。秸稈間接還田技術(shù)是將作物秸稈堆腐慪 制后還田，包括秸稈堆腐、高溫堆腐、秸稈腐熟劑堆腐等形式；秸稈作基料生產(chǎn)食用菌，再將 廢渣還田以及沼肥還田等。這些技術(shù)同樣存在各種具體問(wèn)題和不足，例如技術(shù)不成熟，效率不高，菌種不優(yōu)良 等。因此，為了修復(fù)退化的土壤，發(fā)展循環(huán)經(jīng)濟(jì)，實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展，必須研制一種高效優(yōu)良的 微生物菌劑。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于研制一種復(fù)合的微生物菌劑，提 高秸稈的降解效率，促進(jìn)秸稈還田，以圖修復(fù)退化的土壤。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案本發(fā)明提供一種復(fù)合的微生物制劑，是由纖維素分解菌和表面活性劑按1 2 21的體積比配制而成。其中，所述纖維素分解菌屬于木霉(Trichoderma sp.)屬絲狀真菌，該菌株于 2010年3月11日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 3662，是 通過(guò)如下方法制備得到的將秸稈用土壤或者堆肥浸漬至接近腐爛，用酒精對(duì)接近腐爛秸 稈進(jìn)行表面滅菌后，剪成1 3cm長(zhǎng)小片段，將半腐熟秸桿小片段用滅菌金屬鑷子轉(zhuǎn)入裝 有25mL 95%乙醇的平板中，浸90s后取出轉(zhuǎn)入新的滅菌平皿內(nèi)側(cè)，待表面酒精晾干(5 IOmin)后用滅菌金屬鑷子轉(zhuǎn)入PDA固體培養(yǎng)基(土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，成品32_34g、瓊 脂粉8-10g)平皿中，用塑料薄膜密封平皿，將平皿順置培養(yǎng)8d后倒置培養(yǎng)5 10d，在生長(zhǎng) 真菌菌落邊緣挑取小塊菌落，轉(zhuǎn)入PDA固體培養(yǎng)基平皿中培養(yǎng)，若發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)有雜菌，挑取菌 落邊緣轉(zhuǎn)入新的裝有PDA固體培養(yǎng)基的平皿中繼續(xù)純化，得到纖維素分解菌。
3
其中所述PDA固體培養(yǎng)基為土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，成品32_34g、瓊脂粉8-10g。所述表面活性劑可以采用合成的表面活性劑或生物表面活性劑。所述合成的表 面活性劑包括十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基磺酸鈉、PEG6000、十二烷基苯磺酸鈉、吐溫 等。所述生物表面活性劑是指由微生物、植物或動(dòng)物產(chǎn)生的天然表面活性物質(zhì)，如糖脂、多 糖脂、脂肽或中性類脂衍生物等，例如銅綠假單孢菌產(chǎn)生含鼠李糖的糖脂。所述表面活性劑 起到的作用是提高了秸稈的可利用性。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例中，所用的生物表面活性劑是由微生物產(chǎn)生的具有一定表 面活性的兩性物質(zhì)，是從常年堆積的各種秸稈堆下面的土樣和牛場(chǎng)的堆肥中，在低溫培養(yǎng) 條件下(5 10°C )，經(jīng)過(guò)細(xì)菌富集培養(yǎng)、血平板劃線初篩、藍(lán)色凝膠平板法復(fù)篩而得到的銅 綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)產(chǎn)生的，屬于槐糖脂類。所述銅綠假單胞菌菌株于 2010年3月11日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 3661。本發(fā)明所述復(fù)合微生物制劑的制備方法，是將按所述方法分離得到的纖維素分解 菌和表面活性劑按適當(dāng)比例混合配制而成。所述比例是按1 2 2 1的體積比配制。本發(fā)明還提供所述復(fù)合微生物制劑用作秸稈降解的應(yīng)用，是將復(fù)合微生物菌劑均 勻地施在新鮮秸稈表面，復(fù)合微生物制劑的用量為新鮮秸稈重量的4 5%。該復(fù)合微生物 制劑增加了秸稈的降解效率，縮短秸稈降解時(shí)間，從而促進(jìn)秸稈快速還田，以利于修復(fù)退化 的土壤。復(fù)合微生物制劑及其在作物秸稈的微生物降解中的應(yīng)用為秸稈快速還田提供了 一種模式，提高了農(nóng)業(yè)廢棄物生產(chǎn)有機(jī)肥的轉(zhuǎn)化效率，利于退化土壤的修復(fù)，增加了土壤肥 力。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)測(cè)試，本發(fā)明的復(fù)合微生物制劑施于鮮秸稈上，與未加復(fù)合微生物制劑與秸稈 對(duì)照相比較，土壤含水率高出15 20 %，土壤細(xì)菌數(shù)量高出2 3倍，土壤溶磷菌的數(shù)量提 高40 44%，土壤硝化細(xì)菌的數(shù)量提高3 4倍，作物根部長(zhǎng)度提高25 30%，作物莖部 長(zhǎng)度提高30 34 %，作物重量提高32 37 %，苗期地上生物量提高45 55 %。


圖1為耐冷菌菌株產(chǎn)生的生物表面活性劑的紅外光譜鑒定圖。本發(fā)明所述纖維素分解菌屬于木霉(Trichoderma sp.)屬絲狀真菌，該菌株于 2010年3月11日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 3662。所 述銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)菌株于2010年3月11日在中國(guó)微生物菌種 保藏管理委員會(huì)保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 366具體實(shí)施例方式下面進(jìn)一步詳述本發(fā)明。本發(fā)明提供一種復(fù)合的微生物制劑，是由纖維素分解菌和表面活性劑按1 2 21的體積比配制而成。其中，所述纖維素分解菌屬于木霉屬絲狀真菌，該菌株于2010年3月11日在中 國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 3662，是通過(guò)如下方法制備得到 的將秸稈用土壤或者堆肥浸漬至接近腐爛，用酒精對(duì)接近腐爛秸稈進(jìn)行表面滅菌后，剪成 1 3cm長(zhǎng)小片段，將半腐熟秸桿小片段用滅菌金屬鑷子轉(zhuǎn)入裝有25mL 95%乙醇的平板中，浸90s后取出轉(zhuǎn)入新的滅菌平皿內(nèi)側(cè)，待表面酒精晾干(5 IOmin)后用滅菌金屬鑷子 轉(zhuǎn)入PDA固體培養(yǎng)基(土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，成品32-34g、瓊脂粉8-10g)平皿中，用塑料 薄膜密封平皿，將平皿順置培養(yǎng)8d后倒置培養(yǎng)5 10d，在生長(zhǎng)真菌菌落邊緣挑取小塊菌 落，轉(zhuǎn)入PDA固體培養(yǎng)基平皿中培養(yǎng)，若發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)有雜菌，挑取菌落邊緣轉(zhuǎn)入新的裝有PDA 固體培養(yǎng)基的平皿中繼續(xù)純化，得到纖維素分解菌。所述表面活性劑可以采用合成的表面活性劑或生物表面活性劑。所述合成的表 面活性劑包括十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基磺酸鈉、PEG6000、十二烷基苯磺酸鈉、吐溫 等。所述生物表面活性劑是指由微生物、植物或動(dòng)物產(chǎn)生的天然表面活性物質(zhì)。所述表面 活性劑起到的作用是提高了秸稈的可利用性。本發(fā)明提供一種生物表面活性劑，是從常年堆積的各種秸稈堆下面的土樣和牛場(chǎng) 的堆肥中，在低溫培養(yǎng)條件下(5 10°C )，經(jīng)過(guò)細(xì)菌富集培養(yǎng)、血平板劃線初篩、藍(lán)色凝膠 平板法復(fù)篩，篩選出具有表面活性的菌株產(chǎn)生的，屬于槐糖脂類。菌株的篩選①細(xì)菌富集培養(yǎng)分別取5ml 各種濃度(10_2、10_3、10_4、10_5、10_6、10_7、10_8、10_9g/ml)的土壤懸液，接 種于細(xì)菌富集培養(yǎng)基，24°C震蕩培養(yǎng)1 2d，轉(zhuǎn)速200r/min得到富集液。所述細(xì)菌富集培養(yǎng)基(XF)為植物油4g，(NH4)2SO4 10g, KCl 1. lg, FeSO4 · 7H20 2· 5X10、，KH2PO4 3. 4g，K2HPO4 · 3H20 5g，MgSO4 0. 5g，EDTAlg，酵母浸膏 0. 5g，用蒸餾水定 容至lL，pH值為7.0。②血平板培養(yǎng)基初篩將上述富集液在血平板培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，挑選產(chǎn)生溶血圈較大的菌株進(jìn)行分離 純化，分離純化的單菌落接于斜面培養(yǎng)基上，30°C培養(yǎng)1 2d。所述血平板培養(yǎng)基(g/L)為羊血8 10%，牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，酵母粉 0. 01%, NaCl 0. 5%，瓊脂粉 1. 7%, pH 6 7，115°C滅菌 15min。所述斜面培養(yǎng)基葡萄糖16g，蛋白胨4g，酵母浸膏0. 2g，瓊脂20g，用蒸餾水定容 至lL，pH值為6.5。③藍(lán)色凝膠培養(yǎng)基復(fù)篩分別取5ml 各種濃度(10—2、10_3、10_4、10_5、10_6、10_7、10_8、10_9g/ml)的土壤懸液， 接種于前述富集培養(yǎng)基(XF)，24°C震蕩培養(yǎng)1 2d，轉(zhuǎn)速200r/min。將富集液稀釋涂布于 藍(lán)色凝膠平板培養(yǎng)基，挑選菌落周圍產(chǎn)生藍(lán)圈的菌株進(jìn)行分離純化，分離純化的單菌落接 于前述斜面培養(yǎng)基上，30°C培養(yǎng)1 2d，將斜面培養(yǎng)的菌種轉(zhuǎn)接于種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)16h 后，接種于搖瓶培養(yǎng)液中，30°C振蕩培養(yǎng)2 3d，轉(zhuǎn)速200r/min，從而得到所述銅綠假單胞 菌。所述藍(lán)色凝膠平板培養(yǎng)基(g/L)為牛肉膏1，葡萄糖20，蛋白胨5，酵母膏0.2，瓊 脂18，十六烷基三甲基溴化0. 2，亞甲基藍(lán)0. 005。所述種子培養(yǎng)基為蛋白胨10g、牛肉膏3g、NaCl 5g、用蒸餾水定容至lL，pH值為 7. 2。④排油性的測(cè)定將上述分離出的單菌株進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)(發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖20g/L，酵母膏
5lg/L，NH4NO3 2. 5g/L，KH2PO4 lg/L，Na2HPO4 lg/L，MgSO4 · 7H20 0. 02g/L，無(wú)機(jī)鹽溶液 3mL/ L,正十六烷2mL/L，pH7. 0，其中無(wú)機(jī)鹽溶液為硫酸鋅0. 029g/L,氯化鈣0. 024g/L,硫酸銅 0. 025g/L，硫酸鎂0. 017g/L)，將其發(fā)酵液分別在常溫(25°C )和低溫環(huán)境下(0 10°C )做 排油性測(cè)定。即在一個(gè)玻璃平皿(D = 9cm)中加入60mL的蒸餾水，然后加入SmL的正十二 烷，待正十二烷均勻分布于水面上后，在其表面加入ImL的發(fā)酵液，如果產(chǎn)生排油圈，則證 明發(fā)酵液中存在生物表面活性劑，反之，則證明該發(fā)酵液中無(wú)生物表面活性劑。排油圈越 大，說(shuō)明排油性越好。選取排油性好(即其發(fā)酵液排油直徑大于3cm)的菌株保留，繼續(xù)進(jìn) 行下一步的發(fā)酵液表面張力的測(cè)定試驗(yàn)。⑤發(fā)酵液表面張力的測(cè)定將排油性好的菌株在前述發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)4 5天，對(duì)其發(fā)酵液的表面張力進(jìn) 行測(cè)定，用FD-NST-I液體表面張力系數(shù)測(cè)定儀測(cè)量其表面張力值，將發(fā)酵液表面張力值低 于40mN/m的菌株保存，做細(xì)菌生理生化鑒定。經(jīng)過(guò)菌落形態(tài)觀察和細(xì)菌生理生化鑒定，分別從九個(gè)指標(biāo)進(jìn)行鑒定菌落形態(tài)觀 察、革蘭氏染色試驗(yàn)、氧化/發(fā)酵型、甲基紅(MR)試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)、吲哚 (靛基質(zhì))、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)(常量法)、試驗(yàn)接觸酶試驗(yàn)，最終確定所篩選出的菌株屬于 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，該菌株于2010年3月11日在中國(guó)微生物菌種 保藏管理委員會(huì)保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 3661，同時(shí)也是耐冷菌，其發(fā)酵液在低溫環(huán)境 下(0 10°C )仍具有較低的表面張力(均小于35mN/m)。結(jié)果表明，通過(guò)測(cè)定其發(fā)酵液表面張力值，得到優(yōu)化后培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件，培 養(yǎng)基成分為蔗糖 30-31g/L，酵母膏 1-1. lg/L, NH4NO3 1-1. lg/L, Na2HPO4I-L lg/L，液體石 蠟5-6ml，無(wú)機(jī)鹽溶液體積比濃度(ν/ν)為3-3. 2%，接種量為5 7%，ρΗ控制在6. 8 7. 2，溫度35 37°C，培養(yǎng)時(shí)間為l-4d。分離提取從上述銅綠假單胞菌的發(fā)酵培養(yǎng)液中經(jīng)一些適當(dāng)?shù)姆椒ň湍芊蛛x提取制得槐糖 脂類，這些方法是常使用于提取代謝物的方法，例如可利用槐糖脂類與雜質(zhì)在溶解度、離子 結(jié)合力、吸附親和力及分子量等方面的差別進(jìn)行提取。例如將35 37°C培養(yǎng)24h的發(fā)酵 液，離心，收集絮狀沉淀，得到粗品，再用二氯甲烷重新懸浮，過(guò)濾，抽提，離心，收集沉淀，即 為純化后的表面活性劑。對(duì)耐冷菌菌株產(chǎn)生的生物表面活性劑進(jìn)行紅外光譜鑒定(如圖1所示)，鑒定結(jié)果 為耐冷菌菌株的代謝產(chǎn)物是槐糖脂類。該生物表面活性劑可以將前述發(fā)酵液直接應(yīng)用，或者將發(fā)酵液經(jīng)分離純化后應(yīng)用。下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于例證 的目的，決不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1將秸稈用土壤或者堆肥浸漬至接近腐爛，用酒精對(duì)接近腐爛秸稈進(jìn)行表面滅菌 后，剪成1 3cm長(zhǎng)小片段，將半腐熟秸桿小片段用滅菌金屬鑷子轉(zhuǎn)入裝有25mL 95%乙醇 的平板中，浸90s后取出轉(zhuǎn)入新的滅菌平皿內(nèi)側(cè)，待表面酒精晾干(5 IOmin)后用滅菌金 屬鑷子轉(zhuǎn)入PDA固體培養(yǎng)基(土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，成品32-34g、瓊脂粉8-10g)平皿中，用塑料薄膜密封平皿，將平皿順置培養(yǎng)8d后倒置培養(yǎng)5 10d，在生長(zhǎng)真菌菌落邊緣挑取小 塊菌落，轉(zhuǎn)入PDA固體培養(yǎng)基平皿中培養(yǎng)，若發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)有雜菌，挑取菌落邊緣轉(zhuǎn)入新的裝有 PDA固體培養(yǎng)基的平皿中繼續(xù)純化，得到纖維素分解菌。將非離子型表面活性劑PEG6000與纖維素分解菌按1 1比例配成復(fù)合微生物菌 劑，將復(fù)合微生物菌劑施于鮮秸稈上，復(fù)合微生物制劑的用量為新鮮秸稈重量的4%。秋季 收獲時(shí)將混有復(fù)合微生物菌劑的鮮秸稈施于地里，以不施菌劑和秸稈為對(duì)照。第二年春天 種上作物，按常規(guī)進(jìn)行田間作業(yè)。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)測(cè)試，本發(fā)明的復(fù)合微生物制劑施于鮮秸稈上，與未加復(fù)合微生物制劑 與秸稈對(duì)照相比較，土壤含水率高出15%，土壤細(xì)菌數(shù)量高出2倍，土壤溶磷菌的數(shù)量提高 40%，土壤硝化細(xì)菌的數(shù)量提高3倍，作物根部長(zhǎng)度提高25%，作物莖部長(zhǎng)度提高30%，作 物重量提高32 %，苗期地上生物量提高45 %。實(shí)施例2按照實(shí)施例1的方法得到纖維素分解菌。將銅綠假單孢菌產(chǎn)生含鼠李糖的糖脂與纖維素分解菌按2 1比例配成復(fù)合微 生物菌劑，將復(fù)合微生物菌劑施于鮮秸稈上，復(fù)合微生物制劑的用量為新鮮秸稈重量的 4. 5%。秋季收獲時(shí)將混有復(fù)合微生物菌劑的鮮秸稈施于地里，以不施菌劑和秸稈為對(duì)照。 第二年春天種上作物，按常規(guī)進(jìn)行田間作業(yè)。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)測(cè)試，本發(fā)明的復(fù)合微生物制劑施于鮮秸稈上，與未加復(fù)合微生物制劑 與秸稈對(duì)照相比較，土壤含水率高出18%，土壤細(xì)菌數(shù)量高出2. 5倍，土壤溶磷菌的數(shù)量 提高42%，土壤硝化細(xì)菌的數(shù)量提高3. 5倍，作物根部長(zhǎng)度提高27%，作物莖部長(zhǎng)度提高 32 %，作物重量提高34 %，苗期地上生物量提高50 %。實(shí)施例3按照實(shí)施例1的方法得到纖維素分解菌。將按照前述方法篩選出的銅綠假單胞菌(保藏編號(hào)為CGMCC No. 3661)進(jìn)行發(fā)酵 培養(yǎng)，培養(yǎng)基成分為蔗糖 30-31g/L，酵母膏 1-1. lg/L，NH4NO3 1-1. lg/L，Na2HPO4 1-1. lg/ L，液體石蠟5-6ml，無(wú)機(jī)鹽溶液體積比濃度(ν/ν)為3-3.2%，接種量為5_7%，ρΗ控制在 6. 8-7. 2，溫度35 37°C，培養(yǎng)時(shí)間為l_4d，得到所述生物表面活性劑發(fā)酵液。將上述生物表面活性劑發(fā)酵液與纖維素分解菌按1 2體積比例配成復(fù)合微生物 菌劑，將復(fù)合微生物菌劑施于鮮秸稈上，復(fù)合微生物制劑的用量為新鮮秸稈重量的5%。秋 季收獲時(shí)將混有復(fù)合微生物菌劑的鮮秸稈施于地里，以不施菌劑和秸稈為對(duì)照。第二年春 天種上作物，按常規(guī)進(jìn)行田間作業(yè)。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)測(cè)試，本發(fā)明的復(fù)合微生物制劑施于鮮秸稈上，與未加復(fù)合微生物制劑 與秸稈對(duì)照相比較，土壤含水率高出20%，土壤細(xì)菌數(shù)量高出3倍，土壤溶磷菌的數(shù)量提高 44%, 土壤硝化細(xì)菌的數(shù)量提高4倍，作物根部長(zhǎng)度提高30%，作物莖部長(zhǎng)度提高34%，作 物重量提高37 %，苗期地上生物量提高55 %。
權(quán)利要求
一種復(fù)合微生物制劑，是由纖維素分解菌和表面活性劑按1∶2～2∶1的體積比配制而成，所述纖維素分解菌屬于木霉屬絲狀真菌(保藏編號(hào)為CGMCC No.3662)，是通過(guò)如下方法制備得到的首先將秸稈用土壤或者堆肥浸漬至接近腐爛，用酒精對(duì)接近腐爛秸稈進(jìn)行表面滅菌后，剪成1～3cm長(zhǎng)小片段，將半腐熟秸桿小片段用滅菌金屬鑷子轉(zhuǎn)入裝有25mL 95％乙醇的平板中，浸90s后取出轉(zhuǎn)入新的滅菌平皿內(nèi)側(cè)，待表面酒精晾干(5～10min)后用滅菌金屬鑷子轉(zhuǎn)入PDA固體培養(yǎng)基平皿中，用塑料薄膜密封平皿，將平皿順置培養(yǎng)8d后倒置培養(yǎng)5～10d，在生長(zhǎng)真菌菌落邊緣挑取小塊菌落，轉(zhuǎn)入PDA固體培養(yǎng)基平皿中培養(yǎng)，若發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)有雜菌，挑取菌落邊緣轉(zhuǎn)入新的裝有PDA固體培養(yǎng)基的平皿中繼續(xù)純化，得到纖維素分解菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于所述PDA固體培養(yǎng)基為土豆 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，成品32-34g、瓊脂粉8-10g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于所述表面活性劑為合成的表面 活性劑或生物表面活性劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于合成的表面活性劑包括十六烷 基三甲基溴化銨、十二烷基磺酸鈉、PEG6000、十二烷基苯磺酸鈉、吐溫等。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于所述生物表面活性劑是指由微 生物、植物或動(dòng)物產(chǎn)生的天然表面活性物質(zhì)，如糖脂、多糖脂、脂肽或中性類脂衍生物等，例 如銅綠假單孢菌產(chǎn)生含鼠李糖的糖脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的復(fù)合微生物制劑，其中所述生物表面活性劑是從常年堆 積的各種秸稈堆下面的土樣和牛場(chǎng)的堆肥中，在低溫培養(yǎng)條件下(5 10°C )，經(jīng)過(guò)細(xì)菌 富集培養(yǎng)、血平板劃線初篩、藍(lán)色凝膠平板法復(fù)篩而得到的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)產(chǎn)生的，屬于槐糖脂類，所述銅綠假單胞菌菌株于2010年3月11日在中國(guó)微 生物菌種保藏管理委員會(huì)保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 3661，在低溫條件下，其發(fā)酵液排油 直徑均大于3cm，發(fā)酵液表面張力低于40mN/m。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于所述生物表面活性劑是所述銅 綠假單胞菌的發(fā)酵液，其發(fā)酵培養(yǎng)是在溫度35 37°C，pH值6. 8 7. 2的條件下進(jìn)行，接種 量為 5 7%，培養(yǎng)基為蔗糖 30-31g/L，酵母膏 1-1. lg/L，NH4NO3I-L lg/L，Na2HPO4I-L lg/ L，液體石蠟5-6ml，無(wú)機(jī)鹽溶液體積比濃度(ν/ν)為3-3. 2%。
8.一種制備權(quán)利要求1-7所述的復(fù)合微生物制劑的方法，是將按所述纖維素分解菌和 表面活性劑按適當(dāng)比例混合配制而成。所述比例是按1 2 2 1的體積比配制。
9.一種如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物制劑的應(yīng)用，其特征在于將所述復(fù)合微生物菌 劑均勻地施在新鮮秸稈表面。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述復(fù)合微生物制劑的用量為新鮮秸稈 重量的4 5%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生物制劑及其應(yīng)用。本發(fā)明所述的復(fù)合微生物制劑是纖維素分解菌和表面活性劑配制而成，所述纖維素分解菌屬于木霉屬。將所述復(fù)合微生物制劑加入到鮮秸稈中，通過(guò)降解秸稈中的纖維素、木質(zhì)素和半纖維素，增加秸稈的降解效率，從而縮短秸稈降解時(shí)間，促進(jìn)秸稈還田，修復(fù)退化的土壤。
文檔編號(hào)C05F11/08GK101898907SQ20101014639
公開日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2010年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月13日
發(fā)明者劉志華, 李傳寶, 李濤, 王宏燕, 趙偉 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)