專利名稱：：轉(zhuǎn)基因香石竹環(huán)境安全評價(jià)中間試驗(yàn)的田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)及栽培管理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬轉(zhuǎn)基因植物環(huán)境安全評價(jià)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種采用試驗(yàn)小區(qū)排列方式、農(nóng)藝性狀為主要指標(biāo)的田間試驗(yàn)測定方法，特別是涉及一種轉(zhuǎn)基因香石竹環(huán)境安全評價(jià)中間試驗(yàn)的田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)及栽培管理方法。
背景技術(shù)：
：香石竹(DianthuscaryophyllusL.)，又名康乃馨，為石竹科石竹屬多年生草本植物，是當(dāng)代世界最主要的切花品種之一。其生產(chǎn)面積和銷售量居切花品種之首，全球生產(chǎn)總面積已達(dá)8700多公頃。盡管傳統(tǒng)育種技術(shù)在香石竹遺傳改良方面取得了顯著成就，但仍不能滿足當(dāng)前生產(chǎn)優(yōu)良香石竹品種的需求。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，以基因工程技術(shù)為核心的現(xiàn)代分子育種技術(shù)已經(jīng)成為香石竹育種的重要研究方向。但研究表明轉(zhuǎn)基因植物有可能存在一定的安全隱患，許多國家在批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因植物投放市場之前，都要對其食用安全性和環(huán)境安全性進(jìn)行評價(jià)。由于香石竹為非食用植物，因此對轉(zhuǎn)基因香石竹的安全評價(jià)可以重點(diǎn)集中到環(huán)境安全性評價(jià)上來。澳大利亞Florigene公司和日本Suntory公司從雜交矮牽牛中克隆到二氫黃酮醇-4-還原酶基因(Dihydroflavonol-4-Reductase，DFR)基因和類黃酮-3'，5'-羥基化酶基因(Flavonoid-3'，5'-Hydroxylase,F3，5，H)基因，構(gòu)建載體pCGP1470并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化白色的香石竹品種FE123，經(jīng)篩選獲得了花色呈藍(lán)紫色的轉(zhuǎn)基因香石竹。月之霓裳(Moonshade)、月之伊人(Moonlite)是其中的兩個(gè)品系。按照國務(wù)院頒布的《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例》的規(guī)定，轉(zhuǎn)基因植物品種在進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)之前必須要經(jīng)過中間試驗(yàn)這一環(huán)節(jié)。通過中間試驗(yàn)，可以觀察轉(zhuǎn)基因植物的基本生長情況、檢測目標(biāo)性狀的表達(dá)，從而初步評價(jià)轉(zhuǎn)基因植物的環(huán)境安全性。迄今為止，中國對轉(zhuǎn)基因花卉的環(huán)境安全性評價(jià)還沒有形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，對于花卉環(huán)境安全評價(jià)的指標(biāo)和具體做法，還沒有統(tǒng)一的要求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種轉(zhuǎn)基因香石竹環(huán)境安全評價(jià)中間試驗(yàn)的田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)及栽培管理方法。其中，轉(zhuǎn)基因香石竹環(huán)境安全性評價(jià)中間試驗(yàn)的田間試驗(yàn)通過隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)、測定主要農(nóng)藝性狀指標(biāo)及合理的栽培管理方法，為轉(zhuǎn)基因香石竹的環(huán)境安全評價(jià)提供技術(shù)支持。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因香石竹環(huán)境安全評價(jià)中間試驗(yàn)是在中國進(jìn)行的第一例轉(zhuǎn)基因花卉中間試驗(yàn)，因此本發(fā)明可以作為案例，為建立轉(zhuǎn)基因花卉的環(huán)境安全評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因香石竹環(huán)境安全評價(jià)中間試驗(yàn)的田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)及栽培管理方法，首先將轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種非轉(zhuǎn)基因香石竹插條扦插于生根基質(zhì)中生根，然后將生根幼苗移栽于雙層塑料大棚中，通過合理的田間栽培管理措施，為轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的生長提供合適的環(huán)境條件，并采用隨機(jī)區(qū)組方式種植轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種，測定其主要農(nóng)藝性狀，比較轉(zhuǎn)基因香石竹與對照品種是否存在差異。具體包括以下步驟(1)將轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種插條扦插于生根基質(zhì)中生根，生根基質(zhì)中珍珠巖與泥炭土的體積比為11。生根基質(zhì)放于培養(yǎng)箱中，溫度設(shè)置為白天16h，20°C士2°C;夜間8h，15°C士2°C。待轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種生根后，移栽于試驗(yàn)基地的雙層大棚中。栽培土壤中礱糠灰、珍珠巖、復(fù)合肥、骨粉、泥炭土的體積比為44114，土壤經(jīng)翻耕、甲醛消毒。田間試驗(yàn)采取隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，共9個(gè)小區(qū)。每小區(qū)長1.2米、寬1米，行列間距均為0.2米。田間種植方式參見圖1。所述的雙層大棚位于上海市農(nóng)科院白鶴基地(農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因植物環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)基地)封閉圍墻內(nèi)。圍墻高2.5米，寬0.2米。大棚北面一側(cè)是水渠。試驗(yàn)大棚外設(shè)有防蟲網(wǎng)以防止昆蟲進(jìn)入。塑料大棚使用雙層薄膜，將大棚與其他試驗(yàn)田隔離，既可以保溫又可以達(dá)到物理隔離的目的。大棚周圍500米內(nèi)清除香石竹近緣種屬，以達(dá)到生物隔離的目的。(2)將轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種移栽到苗床中。每個(gè)苗床內(nèi)部按隨機(jī)排列方式對各個(gè)品種進(jìn)行移栽定植。移栽以淺栽不倒為宜，澆足定根水。待株高到達(dá)20厘米時(shí)，架設(shè)支撐網(wǎng)，使每株幼苗固定在一個(gè)網(wǎng)格之內(nèi)，防止莖稈倒伏、影響開花。第一層網(wǎng)離畦面約15厘米，其它各層網(wǎng)之間相距約20厘米。張網(wǎng)后要經(jīng)常不斷地將長高的枝條，按生長垂直方向引扶到網(wǎng)格中，以保持莖枝挺直生長。引扶工作在中午或下午溫度升高后進(jìn)行，此時(shí)枝條發(fā)軟，不易折斷。統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種在扦插生根和移栽生長過程中的存活率。(3)摘心是栽培的基本技術(shù)措施之一。在定植后進(jìn)行1-2次摘心處理，摘心后從留下的節(jié)處生長側(cè)枝。第一次摘心在定植后3-4周、植株長到6-7節(jié)以上時(shí)進(jìn)行?；康?-7節(jié)處摘去莖尖；第二次摘心在第一次摘心而生長的側(cè)枝上，摘心位置在第2-3節(jié)處，選擇晴天出太陽時(shí)摘心。將摘下來的莖、葉、側(cè)枝集中保存，并對銷毀處理過程拍照記錄。統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的主要農(nóng)藝性狀，包括植株高度、植株莖粗、葉片長度、葉片寬度、葉片厚度，并比較其是否存在差異。統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的分蘗側(cè)枝數(shù)，比較其是否存在差異。(4)將主莖的花苞摘掉，利于生長更多的側(cè)枝。盡可能選擇晴天出太陽時(shí)摘花苞。將摘下來的花苞集中保存，并對銷毀處理過程拍照記錄。統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的主要農(nóng)藝性狀，包括花的直徑、花瓣數(shù)目、花瓣長度、花萼數(shù)目、花柱數(shù)目、雄蕊數(shù)目、花柱長度、花冠高度、花期、花粉活力等，并比較其是否存在差異。在冬季、夏季，不采收植株，比較轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的越冬能力和越夏能力。(5)栽培管理方法①定植時(shí)澆足定根水，以后見干澆水。植株花芽分化后適當(dāng)增加澆水量。澆水在上午進(jìn)行，利于植株上的水分盡快蒸發(fā)。澆水用量不宜過多，以能濕潤到土層以下30厘米為宜。記錄每次澆水時(shí)間和澆水量。②基肥以磷肥和鈣肥為主，施入后與土壤充分混合。本發(fā)明中采用液肥追肥，施肥方式是定植后使用腐熟后的豆餅水與無機(jī)肥(KNO3KH2PO3H3BO3MgSO4Ca(NO3)2=1:1:1:3:3，體積比)混施，薄肥勤施，一般7-10天施肥一次。每次施肥前應(yīng)停止灌溉，讓土壤略干些，以利于肥料的吸收。盛花期適當(dāng)增加施肥量。記錄每次施肥的時(shí)間和用里。③通過搭蓋遮蔭網(wǎng)、開空調(diào)等措施調(diào)節(jié)大棚內(nèi)溫度、濕度，使之滿足生長發(fā)育需求。每天記錄大棚內(nèi)的溫度、濕度。④常見病蟲害防治常見病害有葉斑病、灰霉病、細(xì)菌性萎蔫病、細(xì)菌性立枯病等；主要蟲害是蚜蟲、紅蜘蛛、薊馬、夜蛾等。防治措施注意室內(nèi)通風(fēng)透光，降低濕度；發(fā)現(xiàn)病株及時(shí)清除；每隔15天左右噴一次75%的百菌清可濕性粉劑500倍液，連噴2至3次。(6)試驗(yàn)數(shù)據(jù)測定、統(tǒng)計(jì)與分析①花粉活力測定將采集的花粉采用醋酸洋紅(購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)染色，測定花粉活力。通過醋酸洋紅染色對花粉的活力進(jìn)行鑒定。有代謝活動(dòng)的細(xì)胞會(huì)積聚洋紅色素并染上暗紅色。上午采摘各品種盛花期的花朵，在室內(nèi)用鑷子摘下花藥，放入小瓶內(nèi)，在載玻片上將花藥搗爛，用解剖針把花粉粒擠出，加一滴0.5%或1%醋酸洋紅，室溫20°C，避光染色10分鐘，有代謝活動(dòng)的細(xì)胞會(huì)染上暗紅色，放大100倍計(jì)算染色的細(xì)胞。每次觀察取3個(gè)視野，每個(gè)視野不少于30?；ǚ?。根據(jù)著色情況判斷花粉的生活力。染成紅色的花粉，其生活力強(qiáng)，淡紅色的次之，無色的為不具活力的花粉或不育花粉。每個(gè)花藥的生活力是染色花粉粒數(shù)除以全部花粉粒數(shù)。②花色的確定因花色受日光變化影響較大，故采用英國皇家園藝協(xié)會(huì)比色卡(R.H.SColourcharts)在沒有陽光直射的室內(nèi)進(jìn)行比色，記錄花色的編號。③數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用最小顯著差數(shù)法(LSD法)分析兩個(gè)轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人與對照品種在主要農(nóng)藝性狀方面的差異。本發(fā)明是國內(nèi)首例轉(zhuǎn)基因花卉-轉(zhuǎn)基因香石竹中間試驗(yàn)的田間實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和田間栽培管理方法。本發(fā)明將實(shí)驗(yàn)室扦插培養(yǎng)和田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)及栽培管理結(jié)合起來，為轉(zhuǎn)基因香石竹的生長提供合適的環(huán)境條件并確保材料安全，可以準(zhǔn)確測定轉(zhuǎn)基因香石竹與對照品種之間的主要農(nóng)藝性狀，比較其差異性，為轉(zhuǎn)基因香石竹的環(huán)境安全評價(jià)提供研究依據(jù)，對未來轉(zhuǎn)基因香石竹或其他轉(zhuǎn)基因花卉在國內(nèi)的大規(guī)模商業(yè)化種植具有一定意義。本發(fā)明實(shí)用性強(qiáng)，易于操作，成本費(fèi)用低。圖1為本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的田間種植示意圖，其中，1-9處代表第1-9試驗(yàn)小區(qū)。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍包括但不限于下述的實(shí)施例。本發(fā)明采用的轉(zhuǎn)基因香石竹是月之霓裳和月之伊人兩個(gè)品系，對照品種是非轉(zhuǎn)基因香石竹。其中，月之霓裳、月之伊人、對照品種分別為44株、43株、92株。月之霓裳、月之伊人和對照品種均購于日本Suntory公司。實(shí)施例1轉(zhuǎn)基因香石竹(月之霓裳，月之伊人)中間試驗(yàn)的田間試驗(yàn)澳大利亞Florigene公司和日本Suntory公司從雜交矮牽牛中克隆到二氫黃酮醇-4-還原酶基因(Dihydroflavonol-4-Reductase，DFR)和類黃酮-3'，5'-羥基化酶基因(Flavonoid-3'，5'-Hydroxylase，F(xiàn)3，5，H)，構(gòu)建載體pCGP1470并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化白色的香石竹品種FE123，經(jīng)篩選獲得了花色呈藍(lán)紫色的轉(zhuǎn)基因香石竹，其中，月之霓裳、月之伊人是其中的兩個(gè)品系。(1)扦插生根階段2008年1月30日將轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種進(jìn)行扦插試驗(yàn)。生根基質(zhì)中珍珠巖與泥炭土的體積比為11。培養(yǎng)箱溫度設(shè)置為白天16h，18°c;夜晚8h，15°C。培養(yǎng)箱放置于實(shí)驗(yàn)室中，雙人雙鎖確保材料安全。及時(shí)觀察并記錄材料的生長情況。及時(shí)噴水，保證基質(zhì)的濕度。(2)移栽生長階段待轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種生根后，移栽于中間試驗(yàn)的雙層大棚中。生根的幼苗移栽到雙層塑料大棚內(nèi)，栽培土壤中礱糠灰、珍珠巖、復(fù)合肥、骨粉、泥炭土的體積比為4:4:1:1:4，土壤經(jīng)翻耕、甲醛消毒。大棚周圍500米內(nèi)清除轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種近緣種屬，以達(dá)到生物隔離的目的。試驗(yàn)小區(qū)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，共設(shè)計(jì)9個(gè)試驗(yàn)小區(qū)。每個(gè)小區(qū)長1.2米、寬1米，道路寬1米，小區(qū)之間間距為0.5米。1-8號小區(qū)中每個(gè)小區(qū)包括兩個(gè)轉(zhuǎn)基因品系各5株、對照品種10株，相同品系每5株為1組，組與組之間隨機(jī)種植。將剩余材料種植于第9小區(qū)。田間種植方式參見圖1。2008年3月11日，將生根的幼苗移栽到上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院白鶴基地的雙層塑料大棚內(nèi)。每個(gè)苗床內(nèi)部按隨機(jī)排列方式對各個(gè)品種進(jìn)行移栽定植。移栽以淺栽不倒為宜，澆足定根水。待株高到達(dá)20厘米時(shí)，架設(shè)支撐網(wǎng)，使每株幼苗固定在一個(gè)網(wǎng)格之內(nèi)，防止莖稈倒伏，影響開花。第一層網(wǎng)離畦面約15厘米，其它各層網(wǎng)之間相距約20厘米。張網(wǎng)后要經(jīng)常不斷地將長高的枝條，按生長垂直方向引扶到網(wǎng)格中，以保持莖枝挺直生長。統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的移栽成活率、分蘗側(cè)枝數(shù)、植株高度、葉片寬度、葉片厚度、植株莖粗和葉片長度等農(nóng)藝性狀并比較是否存在顯著差異。(3)開花生長階段自2008年6月10日月之霓裳開出第一朵花起，進(jìn)入開花階段，月之霓裳和對照品種開花的數(shù)目都較多。因花色受日光變化影響較大，故采用英國皇家園藝協(xié)會(huì)比色卡在沒有陽光直射的室內(nèi)進(jìn)行比色，記錄花色的編號。統(tǒng)計(jì)各供試材料的花的直徑、花瓣數(shù)目、花冠高度、花柱數(shù)目、花期、花柱長度、花萼數(shù)目、雄蕊數(shù)目、花粉活力等，統(tǒng)計(jì)分析是否存在顯者差升。(4)栽培管理方法2008年6月，轉(zhuǎn)基因香石竹植株受夜蛾侵襲，其中在一株轉(zhuǎn)基因香石竹的莖中發(fā)現(xiàn)了夜蛾。夜蛾，又名貪夜蛾、白菜褐夜蛾，屬鱗翅目夜蛾科，為一種間歇性暴發(fā)的雜食性害蟲，主要為害香石竹葉片、近心葉處莖，有些在未結(jié)蕾前就鉆入心葉取食，使植株不能正常結(jié)蕾開花，從而失去商品價(jià)值。向香石竹的莖部噴灑70%的“蟲卵快殺”殺蟲劑(購于河南盛豐化工有限公司)，殺蟲效果良好。2008年7月，轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種進(jìn)入花期后，適逢上海雨季，大棚內(nèi)部濕度較大，光照不足，部分植株的花瓣上出現(xiàn)薊馬危害。薊馬主要危害香石竹的花朵，其蟲體細(xì)小，活動(dòng)隱蔽，危害初期不易被發(fā)現(xiàn)。植株受害后在花瓣上出現(xiàn)橫條或點(diǎn)狀斑紋，致使花朵變形、萎蔫、干枯，降低觀賞價(jià)值。據(jù)觀察，轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人植株的花朵上薊馬較多，而對照品種花朵上薊馬較少，噴灑30%乙酰甲胺磷(購于南通維立科化工有限公司)，連噴2至3次，具有較好的防治效果。(5)結(jié)果分析①供試材料環(huán)境適應(yīng)能力的比較供試材料環(huán)境適應(yīng)能力的比較參見表1，從表1可以看出，與對照品種相比，轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳的移栽成活率較高、品系月之伊人移栽成活率較低；在越夏試驗(yàn)中，所有植株沒有出現(xiàn)死亡，均可順利完成整個(gè)生育期；在越冬性試驗(yàn)過程中，大棚內(nèi)日最低溫度低于5°C的天數(shù)共有10天，1株月之伊人和1株對照品種出現(xiàn)死亡，月之霓裳沒有出現(xiàn)死亡。三種材料的越夏、越冬能力較強(qiáng)，基本上均可順利完成整個(gè)生育期。兩個(gè)轉(zhuǎn)基因品系產(chǎn)生的側(cè)枝數(shù)均少于對照品種，但不存在顯著差異。表1轉(zhuǎn)基因香石竹和非轉(zhuǎn)基因香石竹的的環(huán)境適應(yīng)能力比較表供試材料移栽株數(shù)~成活株數(shù)~ill~~WWlISiWWl活率|側(cè)枝數(shù)___{%)_(%)_/%__~月之霓裳~W44438642347395.579.1~100~~100~~100~97.05.36±0.41之伊人對照品84.998.64.68±0.73______5.66±0.48②供試材料植株形態(tài)的比較供試材料植株形態(tài)的比較參見表2，從表2可以看出，兩個(gè)轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人與對照品種之間在植株高度、葉片寬度、葉片厚度等農(nóng)藝性狀上不存在顯著差異；但其在植株莖粗和葉片長度上均小于對照品種，存在極顯著差異。表2轉(zhuǎn)基因香石竹和非轉(zhuǎn)基因香石竹的植株形態(tài)差異比較表供試材料植株高度(cm)植株蓮粗(cm)葉片長度(cm)葉片寬度(cm)葉片厚度月之霓裳月之伊66.06±2.860.42±0.02"11.29±0.56**0.81±0.040.85±0.03人對照品種63.33±2.900.38±0.01**9.99±0.66**0.78±0.030.80±0.01_61.79±1.16_0.48±0.01_14.01±0.22_0.74±0.03_0.77±0.05_③供試材料花形態(tài)的比較比對園藝植物標(biāo)準(zhǔn)比色卡，兩個(gè)轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人、對照品種的花色編號分別是81C，76B，White155C。分別統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳39朵、月之伊人23朵、對照品種78朵，同一品系花色具有一致性，且月之霓裳比月之伊人花色深。供試材料花形態(tài)的比較參見表3，從表3可以看出，兩個(gè)轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人與對照品種之間在花的直徑、花冠高度、花柱數(shù)目、花萼數(shù)目、雄蕊數(shù)目等農(nóng)藝性狀上不存在顯著差異。但兩個(gè)轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人在花瓣數(shù)目上均少于對照品種，差異極顯著。轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳在花柱長度上與對照品種不存在顯著差異。轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之伊人在花柱長度上小于對照品種，差異極顯著。表3轉(zhuǎn)基因香石竹和非轉(zhuǎn)基因香石竹的花形態(tài)差異比較表供試材料~~~~花的直徑I花瓣數(shù)目~~~花冠高度I花柱數(shù)目~~~花柱長度I花萼數(shù)目~雄蕊數(shù)目~(mm)(cm)(cm)月之霓裳~63.〇〇±1.193.41±〇.06~3.55±0.19~1.96±〇.18~5.22±〇.10~4.94±〇.06月之伊人對62.17±1.6435.22±2.80**3.41±0.052.88±0.511.34±0.13"5.13±0.134.76±0.97照品種64.71±〇.〇731.19±4.〇3#3.49±0.093.47±〇.091.91±〇.115.2±〇.045.95±〇.09__48.66±1.80______④供試材料花粉活力的比較轉(zhuǎn)基因香石竹和非轉(zhuǎn)基因香石竹的花藥數(shù)目差異比較參見表4，從表4可以看出，轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的雄蕊只有部分具有花藥，部分雄蕊只有花絲無花藥。兩個(gè)轉(zhuǎn)基因品系每朵花的平均雄蕊數(shù)、花藥數(shù)和有活力花藥數(shù)均少于對照品種，其中月之霓裳的各項(xiàng)數(shù)據(jù)均比月之伊人稍高。轉(zhuǎn)基因香石竹和非轉(zhuǎn)基因香石竹的花粉活力差異比較參見表5，從表5可以看出，月之霓裳與對照品種相比無顯著差異，月之伊人與對照品種相比差異顯著。盡管有花粉粒被染成紅色，但是在花藥培養(yǎng)基上，沒有發(fā)現(xiàn)花藥萌發(fā)，說明轉(zhuǎn)基因香石竹的繁殖能力很低。轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人除了花色被改變外，其生長發(fā)育能力和主要農(nóng)藝性狀基本保持相當(dāng)或稍遜于對照品種，因此轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人演變?yōu)殡s草的可能性較小。轉(zhuǎn)基因香石竹為溫室栽培植物且為無性繁殖，生產(chǎn)切花供商業(yè)使用。在轉(zhuǎn)基因香石竹的全生長期中花粉量少、生活力低，并且花粉不能通過風(fēng)傳播，與常夏石竹和須苞石竹是雜交不親和的，因此轉(zhuǎn)基因香石竹品系月之霓裳、月之伊人存在基因擴(kuò)散的可能性較小。這與Florigene在2001年文獻(xiàn)(ApplicationtoimportcarnationvarietyFlorigeneMoonlite(123.2.38),FlorigeneLimited,2001.)報(bào)道的相一致。說明了本發(fā)明中所提供的方法能夠在中間試驗(yàn)條件下，可以真實(shí)地反映轉(zhuǎn)基因香石竹與對照品種的農(nóng)藝性狀差異，為轉(zhuǎn)基因香石竹未來在中國的商業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。(6)材料銷毀2009年5月26日，結(jié)束實(shí)驗(yàn)，對轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種進(jìn)行焚燒處理并拍照記錄。表4轉(zhuǎn)基因香石竹和非轉(zhuǎn)基因香石竹的花藥數(shù)目差異比較表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表5轉(zhuǎn)基因香石竹和非轉(zhuǎn)基因香石竹的花粉活力差異比較表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>最后應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。權(quán)利要求一種轉(zhuǎn)基因香石竹環(huán)境安全評價(jià)中間試驗(yàn)的田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)及栽培管理方法，其特征在于，首先將轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種插條扦插于生根基質(zhì)中生根，然后將生根幼苗移栽于雙層塑料大棚中，通過合理的田間栽培管理措施，為轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的生長提供合適的環(huán)境條件，測定其主要農(nóng)藝性狀，最后比較轉(zhuǎn)基因香石竹與對照品種是否存在差異。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述對照品種為非轉(zhuǎn)基因香石竹。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根基質(zhì)中珍珠巖與泥炭土的體積比為11。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述雙層塑料大棚中的栽培土壤中礱糠灰、珍珠巖、復(fù)合肥、骨粉、泥炭土的體積比為44114，所述栽培土壤經(jīng)翻耕、甲醛消毒。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過生根、移栽、摘心、摘花苞、水肥管理、溫濕度控制、病蟲害防治，為轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的生長提供合適的環(huán)境條件并確保材料安全。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述農(nóng)藝性狀指標(biāo)包括越夏能力、越冬能力、側(cè)枝數(shù)目、植株高度、植株莖粗、葉片長度、葉片寬度、葉片厚度、花的直徑、花冠高度、花柱數(shù)目、花萼數(shù)目、雄蕊數(shù)目、植株莖粗、花瓣數(shù)、花柱長度和花粉活力。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)基因香石竹是月之霓裳和月之伊人兩個(gè)品系。全文摘要本發(fā)明公開了一種轉(zhuǎn)基因香石竹環(huán)境安全評價(jià)中間試驗(yàn)的田間實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及栽培管理方法，首先將轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種非轉(zhuǎn)基因香石竹插條扦插于生根基質(zhì)中生根，然后將生根幼苗移栽于雙層塑料大棚中，通過合理的田間栽培管理措施，為轉(zhuǎn)基因香石竹和對照品種的生長提供合適的環(huán)境條件，測定其主要農(nóng)藝性狀，最后比較所述轉(zhuǎn)基因香石竹與對照品種是否存在差異。本發(fā)明是國內(nèi)首例提出的轉(zhuǎn)基因花卉-轉(zhuǎn)基因香石竹中間試驗(yàn)的田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)和栽培管理方法，該方法為研究轉(zhuǎn)基因香石竹的環(huán)境安全評價(jià)提供了重要研究依據(jù)。文檔編號A01G7/00GK101822175SQ20101014591公開日2010年9月8日申請日期2010年4月13日優(yōu)先權(quán)日2010年4月13日發(fā)明者唐雪明,朱宏,李鵬,潘愛虎,王慧,白藍(lán),賈軍偉,趙凱申請人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院