專利名稱：淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法
淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬循環(huán)農(nóng)業(yè)中的農(nóng)副產(chǎn)品再利用技術(shù)，涉及以玉米粉為原料通過液體高密 度培養(yǎng)手段來獲取菌體蛋白的方法。
背景技術(shù)：
經(jīng)有關(guān)學(xué)者的大量研究表明空間誘變微生物育種具有變異效率高、幅度大、易穩(wěn) 定、良性變異多等優(yōu)點(diǎn)；空間特殊環(huán)境能顯著地提高微生物中某些基因的突變頻率，空間處 理可成為獲得微生物優(yōu)良菌種的有效途徑。利用太空搭載選育農(nóng)作物新品種，在農(nóng)業(yè)方面 已較為廣泛地應(yīng)用，但利用航天技術(shù)培育新的菌株，并用于菌體蛋白的合成，特別是在液體 條件下通過液體高密度培養(yǎng)提高蛋白質(zhì)合成率的技術(shù)尚未見報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法，它是 利用以蘋果渣為基本原料的培養(yǎng)基，能夠獲得蛋白質(zhì)含量達(dá)30%以上的菌體蛋白飼料。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用技術(shù)方案的基本構(gòu)思是它包括下列步驟
(1)制備復(fù)合菌劑
首先將太空育種得到的保藏號為CCTC NO :M209125的黑曲霉ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)菌株和生產(chǎn)中常見的熱帶假絲酵母和啤酒酵母分別用蒸餾水制成 1. OX IO11 5. OX IO11個(gè)孢子或細(xì)胞/L的液體菌種，所述黑曲霉CCTC NO :M209125按50 100mL/kg的接種量接種于麩皮培養(yǎng)基上，于20°C 35°C恒溫培養(yǎng)2天 5天后，風(fēng)干培養(yǎng) 物；熱帶假絲酵母和啤酒酵母均按50 100mL/kg的接種量接種于玉米粉培養(yǎng)基上，20°C 35°C恒溫混合培養(yǎng)2 5天后，風(fēng)干培養(yǎng)物，最后把二者培養(yǎng)物按質(zhì)量比為2 5 1混合 成為復(fù)合菌劑；其中，黑曲霉ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)菌株，已按專利法實(shí)施細(xì)則第 二十五條的規(guī)定在國家知識產(chǎn)權(quán)局認(rèn)可的保藏單位保藏，保藏日期2009年6月10日；保 藏單位名稱及簡稱中國典型培養(yǎng)物保藏中心，CCTCC ；保藏編號CCTCCN0 :M209125。
其中，所述麩皮培養(yǎng)基按質(zhì)量kg/體積L的百分比，為麩皮4% 8%，蘋果渣 2% 6%，磷酸銨0. 5% 2%，硫酸鎂0. 01% 0. 05%，磷酸二氫鉀0. 002 0. 012%，用 自來水配制，pH值為4. 0 7. 0。
其中，所述玉米粉培養(yǎng)基按質(zhì)量kg/體積L的百分比，為玉米淀粉3% 7%，磷 酸二氫鉀0. 05% 0. 2%，用自來水配制，pH值為4. 0 7. 0。
其中，所述麩皮培養(yǎng)基或玉米粉培養(yǎng)基在溫度121°C下滅菌15分鐘 30分鐘。
(2)原料配制
按質(zhì)量kg/體積L的百分比，玉米粉5% 川^，硫酸銨！1^ 5%，白糖 5 %，赤霉素2ppm 8ppm，磷酸二氫鉀0. 5 % 1. 0 %，用自來水配制成液體培養(yǎng)基，pH值為 4. 0 7. 0，在121°C滅菌15分鐘 30分鐘。
(3)接種
在品溫20 35°C的條件下，按質(zhì)量kg/體積L的百分比加入0. 5% 的所述 復(fù)合菌劑到液體培養(yǎng)基中，攪勻。
(4)裝料
將加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基分裝到淺盤中。
其中，將加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基分裝到6L IOL的淺盤中，每盤 裝5kg 8kg培養(yǎng)液，用保鮮膜覆蓋。
(5)培養(yǎng)
將淺盤中的加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基置20°C 40°C條件下培養(yǎng)，2 天 7天后菌膜的厚度可達(dá)2cm，其中培養(yǎng)淺盤深度為3cm，期間應(yīng)注意倒盤。
所述培養(yǎng)步驟后還包括下列步驟
(1)過濾
將發(fā)酵好的菌膜復(fù)合物在過濾機(jī)中過濾，得到濕菌體。
(2)烘干
濕菌體在120°C烘干機(jī)中烘2小時(shí)后，降溫，粉碎，質(zhì)檢，直接依比例加入到飼料中。
本發(fā)明的有益效果是，利用太空誘變獲得的纖維素降解優(yōu)良菌株黑曲霉CCTC NO M209125和生產(chǎn)中常用的啤酒酵母、熱帶假絲酵母混合復(fù)配制成菌劑，并通過液體高密度培 養(yǎng)菌體蛋白，菌體蛋白中核酸的含量較細(xì)菌低，對家畜的生長有利；以廣泛的無機(jī)氮素—— 硫銨為主要氮素，可大幅度降低生產(chǎn)成本；真菌菌體蛋白中的維生素含量較高；每IL液體 培養(yǎng)基可以獲得濕菌體400g，烘干后，可得50g干菌體，粗蛋白含量達(dá)49% ；操作簡單，設(shè) 備投入??；按日產(chǎn)IOOOkg的干真菌菌體蛋白的生產(chǎn)規(guī)模計(jì)算，設(shè)備投資約30萬元，包括 攪拌機(jī)、蒸煮鍋、發(fā)酵間、培養(yǎng)盤、烘干箱和粉碎機(jī)等，但不包括廠房投資；生產(chǎn)成本低，每 IOOOkg干菌體的原料成本約1000元。
黑曲霉ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)菌株，已按專利法實(shí)施細(xì)則第二十五條的 規(guī)定在國家知識產(chǎn)權(quán)局認(rèn)可的保藏單位保藏，保藏日期2009年6月10日；保藏單位名稱 及簡稱中國典型培養(yǎng)物保藏中心，CCTCC ；保藏編號CCTCCN0 :M209125。
具體實(shí)施方式
它包括下列步驟
(1)制備復(fù)合菌劑
首先將太空育種得到的黑曲霉CCTCC NO :M209125菌株和生產(chǎn)中常見的熱帶假絲 酵母和啤酒酵母分別用蒸餾水制成1. OX IO11 5. OX IO11個(gè)孢子或細(xì)胞/L的液體菌種，黑 曲霉CCTCC NO :M209125按50 100mL/kg的接種量接種于麩皮培養(yǎng)基上，于20°C 恒溫培養(yǎng)2 5天后，風(fēng)干培養(yǎng)物；熱帶假絲酵母和啤酒酵母均按50 100mL/kg的接種量 接種于玉米粉培養(yǎng)基上，20°C 35°C恒溫混合培養(yǎng)2 5天后，風(fēng)干培養(yǎng)物，最后把二者培 養(yǎng)物按質(zhì)量比為2 51混合成為復(fù)合菌劑。
其中，所述麩皮培養(yǎng)基按質(zhì)量kg/體積L的百分比，為麩皮4% 8%，蘋果渣 2% 6%，磷酸銨0. 5% 2%，硫酸鎂0. 01% 0. 05%，磷酸二氫鉀0. 002% 0. 012%, 用自來水配制，pH值為4. 0 7. 0。
其中，所述玉米粉培養(yǎng)基按質(zhì)量kg/體積L的百分比，為玉米淀粉3% 7%，磷 酸二氫鉀0. 05% 0. 2%，用自來水配制，pH值為4. 0 7. 0。
其中，所述玉米粉培養(yǎng)基或麩皮培養(yǎng)基在溫度121°C下滅菌15分鐘 30分鐘。
(2)原料配制
按質(zhì)量kg/體積L的百分比，玉米粉5 % 10 %，硫酸銨1 % 5 %，白糖1 % 5 %，赤霉素2ppm 8ppm，磷酸二氫鉀0. 5 % 1. 0 %，用自來水配制成液體培養(yǎng)基，pH值為 4. 0 7. 0，在121°C滅菌15分鐘 30分鐘。
(3)接種
在品溫20°C 35°C的條件下，按質(zhì)量kg/體積L的百分比加入0. 5% 的所 述復(fù)合菌劑到液體培養(yǎng)基中，攪勻。
(4)裝料
將加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基分裝到淺盤中。
其中，將加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基分裝到6L IOL的淺盤中，每盤 裝5kg 8kg培養(yǎng)液，用保鮮膜覆蓋。
(5)培養(yǎng)
將淺盤中的加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基置20°C 40°C條件下培養(yǎng)，2 天 7天后菌膜的厚度可達(dá)2cm，其中培養(yǎng)淺盤深度為3cm，期間應(yīng)注意倒盤。
所述培養(yǎng)步驟后還包括下列步驟
(1)過濾
將發(fā)酵好的菌膜復(fù)合物在過濾機(jī)中過濾，得到濕菌體。
(2)烘干
濕菌體在120°C烘干機(jī)中烘2小時(shí)后，降溫，粉碎，質(zhì)檢，直接依比例加入到飼料中。
權(quán)利要求
1.一種淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法，其特征在于，它包括下列步驟(1)制備復(fù)合菌劑首先將太空育種得到的黑曲霉ZM-8菌種和生產(chǎn)中常見的熱帶假絲酵母和啤酒酵母分 別用蒸餾水制成1. 0 X IO11 5. 0 X IO11個(gè)孢子或細(xì)胞/L的液體菌種，黑曲霉ZM-8按50 100mL/kg的接種量接種于麩皮培養(yǎng)基上，于20°C 35°C恒溫培養(yǎng)2天 5天后，風(fēng)干培養(yǎng) 物；熱帶假絲酵母和啤酒酵母均按50 100mL/kg的接種量接種于玉米粉培養(yǎng)基上，20°C 35°C恒溫混合培養(yǎng)2天 5天后，風(fēng)干培養(yǎng)物，最后把二者培養(yǎng)物按質(zhì)量比為2 5 1混 合成為復(fù)合菌劑。(2)原料配制按質(zhì)量kg/體積L的百分比，為玉米粉5% 10%，硫酸銨 5%，白糖 5 %，赤霉素2ppm 8ppm，磷酸二氫鉀0. 5 % 1. 0 %，用自來水配制成液體培養(yǎng)基，pH值為 4. 0 7. 0，在121°C滅菌15分鐘 30分鐘。(3)接種在品溫20°C 35°C的條件下，按質(zhì)量kg/體積L的百分比加入0. 5% 的所述復(fù) 合菌劑到液體培養(yǎng)基中，攪勻。(4)裝料將加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基分裝到淺盤中。(5)培養(yǎng)將淺盤中的加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基置20°C 40°C條件下培養(yǎng)，2天 7天后菌膜的厚度可達(dá)2cm，其中培養(yǎng)淺盤深度為3cm，期間應(yīng)注意倒盤。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法，其特征在于，所述麩皮 培養(yǎng)基按質(zhì)量kg/體積L的百分比，為麩皮4% 8%，蘋果渣2% 6%，磷酸銨0. 5% 2 %，硫酸鎂0. 01 % 0. 05 %，磷酸二氫鉀0. 002 % 0. 012 %，用自來水配制，pH值為 4. 0 7. 0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法，其特征在于，所述玉米 粉培養(yǎng)基按質(zhì)量kg/體積L的百分比，為玉米淀粉3% 7%,磷酸二氫鉀0.05^-0.2%, 用自來水配制，pH值為4. 0 7. 0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法，其特征在于，所 述玉米粉培養(yǎng)基或麩皮培養(yǎng)基在溫度121°C下滅菌15分鐘 30分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法，其特征在于，所述裝 料步驟中，將加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基分裝到6L IOL的淺盤中，每盤裝 5kg 8kg培養(yǎng)液，用保鮮膜覆蓋。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法，其特征在于，它還包括 下列步驟(1)過濾將發(fā)酵好的菌膜復(fù)合物在過濾機(jī)中過濾，得到濕菌體。(2)烘干濕菌體在120°C烘干機(jī)中烘2小時(shí)后，降溫，粉碎，質(zhì)檢，直接依比例加入到飼料中。全文摘要
本發(fā)明公開了一種淺盤液體高密度菌體蛋白生產(chǎn)方法，它利用以蘋果渣為基本原料的培養(yǎng)基，能夠獲得蛋白質(zhì)含量為30％以上的菌體蛋白飼料。它包括下列步驟(1)制備復(fù)合菌劑黑曲霉CCTCC NOM209125按50～100mL/kg的接種量接種于麩皮培養(yǎng)基上，培養(yǎng)2天～5天后風(fēng)干培養(yǎng)物；熱帶假絲酵母和啤酒酵母接種于玉米粉培養(yǎng)基上，恒溫混合培養(yǎng)2天～5天后風(fēng)干培養(yǎng)物，最后把二者培養(yǎng)物混合成為復(fù)合菌劑。(2)原料配制玉米粉5％～10％，用自來水配制成液體培養(yǎng)基。(3)接種。(4)裝料。(5)培養(yǎng)將淺盤中的加入所述復(fù)合菌劑后的所述液體培養(yǎng)基置20℃～40℃條件下培養(yǎng)，2天～7天后菌膜的厚度可達(dá)2cm。
文檔編號A23K1/00GK102028096SQ200910179620
公開日2011年4月27日 申請日期2009年10月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月6日
發(fā)明者鞏曉芳, 張宗舟, 張永科, 曹莉, 楊子娟, 王淑娟, 陳志梅 申請人:鞏曉芳, 張宗舟, 陳志梅