專利名稱:氧雜雙環(huán)庚烷和氧雜雙環(huán)庚烯,它們的制備及用途的制作方法
在整個(gè)申請(qǐng)中,引用了一些公開(kāi)出版物。這些出版物的完整引述可以在說(shuō)明書(shū)的結(jié)尾找到。這些出版物的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用以其全文形式結(jié)合到本申請(qǐng)中,以更充分地描述本發(fā)明所涉及的現(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)。
背景技術(shù):
已經(jīng)檢驗(yàn)了類(lèi)視黃醇,維生素A的代謝物,對(duì)多種腫瘤包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療效果(Yung等,(1996))。核受體輔阻遏物(N-CoR)與類(lèi)視黃醇受體密切相關(guān),并且在配體結(jié)合到該受體上時(shí)被釋放(Bastien等,(2004))。通過(guò)阻止蛋白磷酸酶-1和蛋白磷酸酶-2A的作用,抗-磷酸酶增加了磷酸化形式的N-CoR并且促進(jìn)其隨后的胞質(zhì)易位(Hermanson等,(2002))。
磷酸酶抑制劑斑蝥素對(duì)人的肝部癌癥(肝癌)和上胃腸道癌癥具有抗-腫瘤活性,但是對(duì)泌尿道有毒性(Wang,1989)。
有關(guān)斑蝥素起蛋白磷酸酶抑制劑作用的報(bào)道的公開(kāi)引起了對(duì)具有這種化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物的更廣泛的興趣(Li和Casida,1992)。之前已經(jīng)發(fā)現(xiàn),更簡(jiǎn)單的同類(lèi)物及其水解產(chǎn)物(草多索(Endothall),可作為除草劑商購(gòu))是肝毒性的(Graziani和Casida,1997)。結(jié)合性研究顯示,某些斑蝥素同系物的作用對(duì)于蛋白磷酸酶-2A是直接的而對(duì)于蛋白磷酸酶-1是間接的(Honkanen等,1993;Li等,1993)。
在已知的這種類(lèi)型的化合物的同類(lèi)物中,只看到母體,即斑蝥素,及其雙(去甲基)-衍生物,即去甲斑蝥素,被用作抗癌藥物,并且只有去甲斑蝥素被用作抗瘤劑(Tsauer等,1997)。
盡管有了這些成功,但是這類(lèi)化合物很少用于篩選抗腫瘤或細(xì)胞毒性活性。目前,非常需要開(kāi)發(fā)具有更高的活性、較小的毒性并且在作用方面比上述的已知物質(zhì)更具特異性的蛋白磷酸酶抑制劑。
發(fā)明內(nèi)容
一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中 鍵α存在或不存在; R1和R2各自獨(dú)立地是H,O-或OR9, 其中R9是H,烷基,烯基,炔基或芳基, 或R1和R2一起是=O; R3和R4各自不同,并且分別是OH,O-,OR9,SH,S-,SR9,
其中X是O,S,NR10,或N+R10R10, 其中每個(gè)R10獨(dú)立地是烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中當(dāng)R1和R2是=O時(shí),取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R11,-CH2COR11,-NHR11或-NH+(R11)2,其中R11是烷基,烯基或炔基,其每一個(gè)是取代的或未取代的,或H; R5和R6各自獨(dú)立地是H,OH,或R5和R6一起是=O;并且 R7和R8各自獨(dú)立地是H,F(xiàn),Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3或SR12, 其中R12是H,芳基或取代或未取代的烷基、烯基或炔基,或者所述化合物的鹽、對(duì)映體或兩性離子。
一種化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
其中 鍵α存在或不存在; R9存在或不存在,并且在存在時(shí)是H,烷基,烯基,炔基或苯基;并且 X是O,NR10或NH+R10, 其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R12或-CH2COR12,其中R12是H或烷基,或所述化合物的鹽、兩性離子或?qū)τ丑w。
一種化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
其中 A和B各自獨(dú)立地是H,F(xiàn),Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3,CN,COR14,或SR14,其中R14是H或芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基; X是O,NH或S; Z是O,S,SR15,NH,NR15,CH2OH,CH2OR15, 其中R15是芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基;并且Y和W各自獨(dú)立地是CH2,CHOH,C=O或C=S,或所述化合物的鹽。
本發(fā)明還涉及控制不希望有的植被的方法,該方法包括使植被或其環(huán)境與除草有效量的本發(fā)明化合物接觸。
本發(fā)明還涉及抑制植物磷酸酶活性的方法,該方法包括使植物或其環(huán)境與除草有效量的本發(fā)明化合物接觸。
本發(fā)明還涉及預(yù)防或治療受治療者真菌感染的方法,該方法包括向受治療者施用有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還涉及治療受治療者的癌癥方法,該方法包括向受治療者施用有效量的本發(fā)明化合物。
圖1用草多索(End)、草多索硫代酸酐(ET)、去甲-斑蝥素(nor-Can)或化合物100處理的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373的對(duì)數(shù)曲線。提高的劑量顯示更大的生長(zhǎng)抑制作用。誤差棒表示SD。
圖2用草多索(End)或化合物100處理的或各自與和不與全-反式視黃酸(ATRA)一起的草多索(End)或化合物100處理的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373的7天的抑制作用。采用草多索和化合物100的單獨(dú)處理顯示出適度的生長(zhǎng)抑制作用。End或化合物100與ATRA的組合顯示出抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的協(xié)同效應(yīng)。誤差棒表示SD。
圖3草多索硫代酸酐(ET)、草多索(End)、全-反式視黃酸(ATRA)、制滴菌素A(TSA)和去甲斑蝥素(nor-Can)對(duì)腎癌細(xì)胞系UMRC生長(zhǎng)的7天抑制作用。誤差棒表示SD。
圖4草多索硫代酸酐(ET)、草多索(End)、全-反式視黃酸(ATRA)、制滴菌素A(TSA)和去甲斑蝥素(nor-Can)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的7天抑制作用。用草多索硫代酸酐單獨(dú)處理顯示出最大的生長(zhǎng)抑制作用。誤差棒表示SD。
圖5由草多索硫代酸酐(ET)、草多索(End)、全-反式視黃酸(ATRA)、制滴菌素A(TSA)和去甲斑蝥素(nor-Can),通過(guò)抑制UMRC,對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MCF-7生長(zhǎng)的7天抑制作用。采用草多索、ATRA和TSA單獨(dú)給藥的處理顯示出生長(zhǎng)抑制作用。誤差棒表示SD。
圖6用1-(3-外羧基(Exocarboxy)-7-氧雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-外羰基(exocarbonyl))-4-乙基哌嗪(化合物105)處理3天后神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373的對(duì)數(shù)曲線。提高的劑量顯示更大的生長(zhǎng)抑制作用。
圖7用1-(3-外羧基-7-氧雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-外羰基)-4-乙基哌嗪(化合物105)處理7天后的人GBM細(xì)胞系U373的對(duì)數(shù)曲線。提高的劑量顯示更大的生長(zhǎng)抑制作用。
圖8用化合物105處理7天對(duì)人GBM細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的抑制作用。該曲線圖顯示,以下劑量在7天內(nèi)對(duì)生長(zhǎng)有抑制作用1、2、5、10、50和100μM的化合物105,10μM的化合物100,以及對(duì)照劑量。
圖9化合物105對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的7天的抑制作用。
圖10化合物102對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的7天的抑制作用。
圖11化合物101對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的7天的抑制作用。
圖12化合物103對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的7天的抑制作用。
圖13化合物104對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的7天的抑制作用。
圖14化合物106對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的7天的抑制作用。
圖15化合物100對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373生長(zhǎng)的7天的抑制作用。
圖16化合物100對(duì)成神經(jīng)管細(xì)胞瘤細(xì)胞系DAOY生長(zhǎng)的7天的抑制作用。
圖17在26天內(nèi),化合物100對(duì)U87異種移植物瘤體積的影響。
圖18在23天內(nèi),化合物100和化合物102對(duì)DAOY異種移植物瘤體積的影響。
圖19A使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將MDA-MB-231細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19B使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將HT-29細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19C使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將NCI-H460細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19D使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將NCI-H522細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19E使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將NCI-H69細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19F使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將GXF-209細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19G使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將HepG2細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19H使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將OVCAR-3細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19I使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將PANC-1細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19J使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將DU-145細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19K使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將LNCAP細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19L使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將HL-60細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19M使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將K-562細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
圖19N使用CellTiter-Glo試驗(yàn),將MOLT-4細(xì)胞暴露于化合物100和化合物102后獲得的數(shù)據(jù)的曲線圖(I)以及與IC50值的曲線擬合(II)。I中還顯示了用作正對(duì)照的10μM阿霉素的效果。每個(gè)點(diǎn)表示至少一式三份樣品的平均值±SD。
具體實(shí)施例方式 一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中鍵α存在或不存在;R1和R2各自獨(dú)立地是H,O-或OR9,其中R9是H,烷基,烯基,炔基或芳基,或R1和R2一起是=O;R3和R4各自不同,并且分別是OH,O-,OR9,SH,S-,SR9,
其中X是O,S,NR10,N+R10R10,其中每個(gè)R10獨(dú)立地是烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中當(dāng)R1和R2是=O時(shí),取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R11,-CH2COR11,-NHR11,-NH+(R11)2,其中每個(gè)R11 獨(dú)立地是烷基,烯基或炔基,其每一個(gè)是取代的或未取代的,或H;R5和R6各自獨(dú)立地是H,OH,或R5和R6一起是=O;并且R7和R8各自獨(dú)立地是H,F(xiàn),Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3,CN,COR12或SR12,其中R12是H,芳基或取代或未取代的烷基、烯基或炔基, 或者所述化合物的鹽、對(duì)映體或兩性離子。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供以下結(jié)構(gòu)的化合物
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R1和R2一起是=O;R3是O-或OR9,其中R9是H,甲基,乙基或苯基;R4是
其中X是O,S,NR10或N+R10R10, 其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中當(dāng)R1和R2是=O時(shí),取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R11,-CH2COR11,-NHR11,-NH+(R11)2,其中R11是烷基,烯基或炔基,其每一個(gè)是取代的或未取代的,或H; R5和R6一起是=O;并且R7和R8各自獨(dú)立地是H,F(xiàn),Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3,CN,COR12或SR12,其中R12是H,或取代或未取代的烷基、烯基或炔基。
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R3是O-。
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R4是
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物104)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物104E)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物106)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物106E)
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R4是
其中X是O,NR10或N+R10R10,其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R4是
其中R10是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,取代的芳基,其中當(dāng)R1和R2是=O時(shí),取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R11,-CH2COR11,-NHR11或NH+(R11)2,其中R11是H或烷基。
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R4是
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R4是
其中R10是
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R4是
其中R10是
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R4是
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R4是
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R5和R6一起是=O。
本發(fā)明還提供這樣的組成,其中R7和R8各自是H。
本發(fā)明也提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中鍵α存在或不存在;R9存在或不存在,并且在存在時(shí)是H,C1-C10烷基,C2-C10烯基或苯基;并且X是O,S,NR10或N+R10R10,其中每個(gè)R10獨(dú)立地是烷基,C2-C12取代的烷基,烯基,C4-C12取代的烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CO2R11,-CH2COR11,-CH2CN或-CH2CH2R16,其中R11是H或烷基,并且其中R16是任何取代基,所述取代基是吖丙啶基中間體的前體,或所述化合物的鹽、對(duì)映體或兩性離子。
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供以下結(jié)構(gòu)
其中,鍵α存在或不存在,X是O,S,NR10或N+R10R10,其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CO2R11,-CH2COR11,-CH2CN或-CH2CH2R16,其中R11是H或烷基,并且其中R16是任何取代基,所述取代基是吖丙啶基中間體的前體, 或所述化合物的鹽、對(duì)映體或兩性離子。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中X是O或NH+R10,其中R10是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中X是O。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中X是-CH2CH2R16,其中R16是任何取代基,所述取代基是吖丙啶基中間體的前體。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中X是NH+R10,其中R10是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CO2R11,-CH2COR11,-CH2CN或-CH2CH2R16,其中R11是H或烷基,并且其中R16是任何取代基,所述取代基是吖丙啶基中間體的前體。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中R10是甲基。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中R10是
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中R10是
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中R10是乙基。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中R10不存在。
在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供以下結(jié)構(gòu)
其中R9存在或不存在,并且在存在時(shí)是H,烷基,烯基,炔基或苯基;并且X是O,NR10或N+R10R10,其中每個(gè)R10獨(dú)立地是烷基,C2-C12取代的烷基,烯基,C4-C12取代的烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CO2R11,-CH2COR11或-CH2CN,其中R11是H或烷基,或所述化合物的鹽、兩性離子或?qū)τ丑w。
在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中,R10是環(huán)丙基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供以下結(jié)構(gòu)
其中X是O或NH+R10,其中R10存在或不存在,并且在存在時(shí)是烷基,烯基或炔基,其每一個(gè)是取代的或未取代的,
-CH2CO2R11,-CH2COR11或-CH2CN,其中R11是H或烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物100)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物102)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物101)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物103)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物105)
在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供以下結(jié)構(gòu)
其中X是O,NR10或NH+R10, 其中R9是烷基,烯基,炔基或芳基,并且其中R10存在或不存在, 并且在存在時(shí)是烷基,烯基或炔基,其每一個(gè)是取代的或未取代的,
-CH2CO2R11,-CH2COR11,或-CH2CN,其中R11是H或烷基。
在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中,R10是環(huán)丙基。
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物111)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物104E)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物100E)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物102E)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物101E)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物103E)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物105E)
在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物111E)
本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物106)
本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物106E)
本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物108)
本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物107)
本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(化合物107E)
在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中A和B各自獨(dú)立地是H,F(xiàn),Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3,COR14,SR14,其中R14是H或芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基;X是O,NH或S;Z是O,S,SR15,NH,NR15,CH2OH,CH2OR15,其中R15是芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基;并且Y和W各自獨(dú)立地是CHOH CH2,C=S或C=O,或所述化合物的鹽。
在上述發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,Y和W各自獨(dú)立地是CH2或C=S。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中X是O;Z是S;并且Y和W各自是C=S。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中A和B各自是F。
本發(fā)明還提供一個(gè)實(shí)施方案,其中A是H;并且B是F。
在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中A是F或SR14,其中R14是芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基;并且B是F,Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3或SR14,其中R14是芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供以下結(jié)構(gòu)
本發(fā)明提供藥物組合物,其包含本發(fā)明的化合物和藥用載體。
本發(fā)明還提供用于制備化合物的方法,該方法包括將具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
與具有以下結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng),
形成具有以下結(jié)構(gòu)的化合物,
將具有上述結(jié)構(gòu)的化合物在催化劑存在下與氫反應(yīng),以形成
本發(fā)明還提供用于制備化合物的方法,該方法包括將具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
與具有以下結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng),
形成具有以下結(jié)構(gòu)的化合物,
將具有上述結(jié)構(gòu)的化合物在催化劑存在下與氫反應(yīng),以形成
本發(fā)明還提供用于制備具有以下結(jié)構(gòu)的化合物的方法,
該方法包括 將具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
溶解在苯中,并且在室溫加入具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
以制備具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
并且將制得的所述化合物從熱的溶劑中重結(jié)晶。
本發(fā)明還提供用于制備化合物的方法,該方法包括 將具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
溶解在苯中,并且在室溫加入具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
以制備具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
將制得的所述化合物從熱的溶劑中重結(jié)晶。
在一個(gè)實(shí)施方案中,所述溶劑是二甲基甲酰胺(DMF)或乙醇。
本發(fā)明提供治療遭受腫瘤過(guò)表達(dá)N-CoR的患者的方法,該方法包括將一種或多種本發(fā)明化合物單獨(dú)地,或者,與一種或多種類(lèi)視黃醇受體配體組合或與一種或多種組蛋白脫乙酰酶配體組合或與兩類(lèi)配體一起組合,向患者施用,在每一種情況下,以有效治療治療患者的量施用。
在一個(gè)實(shí)施方案中,所述化合物選自化合物100和化合物105。
在本發(fā)明的方法中,組蛋白脫乙酰酶配體可以是抑制劑,例如HDAC-3(組蛋白脫乙酰酶-3)的組蛋白脫乙酰酶抑制劑。組蛋白脫乙酰酶配體還可以選自2-氨基-8-氧代-9,10-環(huán)氧-癸?;?-(4-芳?;?1H-吡咯-2-基)-N-羥基-2-丙烯酰胺,APHA化合物8,apicidin,精氨酸丁酸鹽,丁酸,酯肽,depudecin,HDAC-3,間-羧基肉桂酸雙-羥基酰胺,N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基甲氧基羰基)氨基甲基]苯甲酰胺,MS 275,oxamfiatin,丁酸苯酯,pyroxamide,scriptaid,sirtinol,丁酸鈉,辛二酸二異羥肟酸,辛二酰苯胺異羥肟酸,制滴菌素A,trapoxin A,trapoxin B和丙戊酸。
本發(fā)明的化合物可以與抑制酶,即組蛋白脫乙酰酶(HDAC)的化合物組合使用。這些HDAC酶翻譯后修飾組蛋白(美國(guó)專利公開(kāi)No.2004/0197888,Armour等)。組蛋白是在真核細(xì)胞中與DNA締合的蛋白質(zhì)組,以形成致密結(jié)構(gòu),即所謂的染色質(zhì)。這種壓縮作用允許巨大數(shù)量的DNA被定位在真核細(xì)胞的核中,但是染色質(zhì)的致密結(jié)構(gòu)限制了轉(zhuǎn)錄因子接近DNA。組蛋白的乙?;档土巳旧|(zhì)的壓縮度,從而允許轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上。由組蛋白脫乙酰酶(HDACs)催化的脫乙酰提高了染色質(zhì)的壓縮度,從而降低了轉(zhuǎn)錄因子至DNA的可達(dá)性。因此,組蛋白脫乙酰酶的抑制劑阻止了染色質(zhì)的壓縮,從而允許轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA并且提高基因的表達(dá)。
在本發(fā)明的方法中,在細(xì)胞質(zhì)中有N-CoR的細(xì)胞百分比相對(duì)于在細(xì)胞核中有N-CoR的細(xì)胞百分比的估計(jì)是以給定組織中更加分化的細(xì)胞的數(shù)量與較不分化的細(xì)胞的數(shù)量的比例為代表的。在本發(fā)明的方法中,過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤可以包括多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤,乳腺癌,結(jié)腸直腸癌,小細(xì)胞肺癌或卵巢癌。
本發(fā)明還提供抑制患者的過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤的生長(zhǎng)的方法,該方法包括向患者施用一種或多種本發(fā)明的化合物,以單獨(dú)的,或者與一種或多種類(lèi)視黃醇受體配體、一種或多種組蛋白脫乙酰酶配體或與這兩種配體一起組合的方式,在每種情況下,以有效影響N-CoR的量給藥,從而誘導(dǎo)過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤細(xì)胞的分化,并且抑制患者腫瘤的生長(zhǎng)。
在一個(gè)實(shí)施方案中,所述化合物選自化合物100和化合物102。
在本發(fā)明的方法中,在細(xì)胞質(zhì)中有N-CoR的細(xì)胞百分比相對(duì)于在細(xì)胞核中有N-CoR的細(xì)胞百分比的估計(jì)是以給定組織中更加分化的細(xì)胞的數(shù)量與較不分化的細(xì)胞的數(shù)量的比例為代表的。
在本發(fā)明的方法中,過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤可以包括多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤,乳腺癌,結(jié)腸直腸癌,小細(xì)胞肺癌或卵巢癌。
本發(fā)明還涉及用于控制不希望有的植被的方法,所述方法包括使植被或其環(huán)境與除草有效量的本發(fā)明化合物接觸。
本發(fā)明還涉及抑制植物磷酸酶活性的方法,該方法包括使植物或其環(huán)境與除草有效量的本發(fā)明化合物接觸。
本發(fā)明還涉及預(yù)防或治療受治療者真菌感染的方法,該方法包括向受治療者施用有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還涉及治療受治療者的癌癥的方法,該方法包括向受治療者施用有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還涉及治療遭受以下癌癥痛苦受治療者的方法乳腺癌,結(jié)腸癌,大細(xì)胞肺癌,肺的腺癌,小細(xì)胞肺癌,胃癌,肝癌,卵巢腺癌,胰腺癌,前列腺癌,前髓細(xì)胞白血病,慢性髓細(xì)胞白血病或急性淋巴細(xì)胞白血病,該方法包括向所述受治療者施用治療有效量的本發(fā)明化合物,從而治療所述受治療者。
本發(fā)明還涉及在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物的前藥(參見(jiàn),例如,R.B.Silverman,1992,″The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action″,Academic Press,第8章,其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在此)的用途。這種前藥可用于改變所述化合物的生物分布(例如,允許通常不進(jìn)入反應(yīng)性位置的化合物)或藥代動(dòng)力學(xué)。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
如本文中所使用的,″兩性離子″表示這樣的化合物,其是電中性的,但是在不同的原子上攜帶形式上的正電荷和負(fù)電荷。兩性離子是極性的,在水中具有高溶解度,并且在大多數(shù)有機(jī)溶劑中的溶解度差。
吖丙啶類(lèi)是帶有吖丙啶官能團(tuán)的有機(jī)化合物,吖丙啶官能團(tuán)是具有一個(gè)胺基和兩個(gè)亞甲基的三元雜環(huán)。吖丙啶基(aziridnyl)中間體的前體包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的在合適的條件下容易地提供吖丙啶基中間體的化合物。
本發(fā)明所述的化合物是外消旋形式或作為單獨(dú)的對(duì)映體。對(duì)映體可以采用已知的技術(shù)加以分離,如在例如Pure and Applied Chemistry 69,1469-1474,(1997)IUPAC中所述的那些。
如本文中所使用的,″過(guò)表達(dá)N-CoR″表示在測(cè)試組織的細(xì)胞中表達(dá)的核受體輔阻遏物(N-CoR)的水平與在類(lèi)似條件下在相同類(lèi)型組織的正常健康細(xì)胞中測(cè)量的N-CoR水平相比是升高的。本發(fā)明的核受體輔阻遏物(N-CoR)可以是結(jié)合到DNA-結(jié)合的甲狀腺激素受體(T3R)和視黃酸受體(RAR)的配體結(jié)合域上的任何分子(美國(guó)專利No.6,949,624,Liu等)。過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤的實(shí)例可以包括多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤,乳腺癌(Myers等),結(jié)腸直腸癌(Giannini和Cavallini),小細(xì)胞肺癌(Waters等)或卵巢癌(Havrilesky等)。
如本文中所使用的″溶劑″意在包括化合物如己烷,苯,甲苯,二乙醚,氯仿,二氯甲烷,乙酸乙酯,1,4-二噁烷,水,THF,丙酮,乙腈,DMF,DMSO,乙酸,正-丁醇,異丙醇,正-丙醇,乙醇,甲醇,甲酸,四氯化碳,苯硫酚,氯苯,環(huán)己硫醇,1-二乙基氨基乙醇,1,2-二氯乙烷,乙二醇,二甲苯,1,1,2,2-四氯乙烷,苯酚,乙酸,1-丁醇,2-丁醇,2-丁酮,二甘醇二甲醚,二甲醚,二噁烷,石油醚,(NMP)N-甲基-2-吡咯烷酮,庚烷,甘油,HMPA(六甲基磷三酰胺),MTBE(甲基叔丁基醚),硝基甲烷,吡啶,1-丙醇,2-丙醇和三乙胺。
所公開(kāi)的化合物的某些實(shí)施方案可以含有堿性官能團(tuán),如氨基或烷基氨基,并且因此能夠與藥用酸形成藥用鹽,或者含有酸性官能團(tuán),從而能夠與堿形成藥用鹽。因此,本發(fā)明的化合物可以采取鹽形式。如本文中所使用的,″鹽″是已經(jīng)通過(guò)形成化合物的酸或堿鹽而改性的本發(fā)明化合物的鹽。該鹽可以是藥用的。藥用鹽的實(shí)例包括,但不限于堿性殘基如胺的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸鹽;酸性殘基如酚的堿或有機(jī)鹽??梢允褂糜袡C(jī)或無(wú)機(jī)酸來(lái)形成鹽。這樣的酸鹽為氯化物鹽,溴化物鹽,硫酸鹽,硝酸鹽,磷酸鹽,磺酸鹽,甲酸鹽,酒石酸鹽,馬來(lái)酸鹽,蘋(píng)果酸鹽,檸檬酸鹽,苯甲酸鹽,水楊酸鹽,抗壞血酸鹽等。酚鹽為堿土金屬鹽,鈉,鉀或鋰。在這方面,術(shù)語(yǔ)″藥用鹽″是指本發(fā)明化合物的相對(duì)無(wú)毒的無(wú)機(jī)和有機(jī)酸或堿加成鹽。這些鹽可以在本發(fā)明化合物的最終分離和純化過(guò)程中原位制備,或者通過(guò)分別將其游離堿或游離酸形式的純化的本發(fā)明化合物與合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸或堿反應(yīng),并且分離形成的鹽而得到。代表性的鹽包括氫溴酸鹽,鹽酸鹽,硫酸鹽,硫酸氫鹽,磷酸鹽,硝酸鹽,乙酸鹽,戊酸鹽,油酸鹽,棕櫚酸鹽,硬脂酸鹽,月桂酸鹽,苯甲酸鹽,乳酸鹽,磷酸鹽,甲苯磺酸鹽,檸檬酸鹽,馬來(lái)酸鹽,富馬酸鹽,琥珀酸鹽,酒石酸鹽,萘甲酸鹽,甲磺酸鹽,葡庚糖酸鹽,乳二糖酸鹽和十二烷基磺酸鹽等??赡艿柠}的描述可參見(jiàn),例如,Berge等,(1977)″Pharmaceutical Salts″,J.Pharm.Sci.30661-19。
如本文中所使用的,″治療有效量″表示足以治療遭受疾病(例如過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤)痛苦的受治療者或減輕與該疾病有關(guān)的癥狀或并發(fā)癥的量。
如本文中所使用的,″除草有效量″表示足以不利地影響植物生長(zhǎng),特別是通過(guò)抑制植物磷酸酶2A活性而不利地影響植物生長(zhǎng)的量 如本文中所使用的,″治療″表示減緩、停止或逆轉(zhuǎn)疾病,特別是過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤的進(jìn)程。
如本文中所使用的,″烷基″意在包括支鏈和直鏈的具有規(guī)定數(shù)量的碳原子的飽和脂肪族烴基。因此,C1-Cn,如在″C1-Cn烷基″中,被定義為包括含1,2,....,n-1或n個(gè)以直線或分支方式排列的碳原子的基團(tuán),并且具體包括甲基,乙基,丙基,丁基,戊基,己基等。一個(gè)實(shí)施方案可以是C1-C12烷基?!逋檠趸灞硎就ㄟ^(guò)氧橋連接的如上所述的烷基。
術(shù)語(yǔ)″烯基″是指非-芳香族烴基,其是直鏈或支鏈的,含有至少1個(gè)碳碳雙鍵,并且可以存在至多為最大可能數(shù)量的非-芳香族碳-碳雙鍵。因此,C2-Cn烯基被定義為包括含1,2,....,n-1或n個(gè)碳原子的基團(tuán)。例如,″C2-C6烯基″表示分別含2,3,4,5或6個(gè)碳原子,和至少一個(gè)碳-碳雙鍵且至多,例如在C6烯基的情況下,3個(gè)碳-碳雙鍵的烯基。烯基包括乙烯基,丙烯基,丁烯基和環(huán)己烯基。如上對(duì)烷基所述的,烯基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可以含有雙鍵,并且在指示取代的烯基時(shí)可以被取代。一個(gè)實(shí)施方案可以是C2-C12烯基。
術(shù)語(yǔ)″炔基″是指這樣的烴基,其是直鏈或支鏈的,含有至少1個(gè)碳碳三鍵,并且可以存在至多為最大可能數(shù)量的非-芳香族碳-碳三鍵。因此,C2-Cn炔基被定義為包括含1,2,....,n-1或n個(gè)碳原子的基團(tuán)。例如,″C2-C6炔基″表示含2或3個(gè)碳原子和一個(gè)碳-碳三鍵的炔基,或含4或5個(gè)碳原子和至多2個(gè)碳-碳三鍵的炔基,或含6個(gè)碳原子和至多3個(gè)碳-碳三鍵的炔基。炔基包括乙炔基,丙炔基和丁炔基。如上對(duì)烷基所述的,炔基的直鏈或支鏈部分可以含有三鍵,并且在指示取代的炔基時(shí)可以被取代。一個(gè)實(shí)施方案可以是C2-Cn炔基。
如本文中所使用的,″芳基″意在表示任何合適的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán),每個(gè)環(huán)至多10個(gè)原子,其中至少一個(gè)環(huán)是芳香族的。這樣的芳基的實(shí)例包括苯基,萘基,四氫-萘基,茚滿基,聯(lián)苯基,菲基,蒽基或苊基。在其中芳基取代基是雙環(huán)并且一個(gè)環(huán)是非-芳香族環(huán)的情況下,應(yīng)理解,連接是經(jīng)由芳香族環(huán)進(jìn)行的。本發(fā)明中包含的取代的芳基包括用胺、取代的胺、烷基胺、羥基和烷基羥基在任何合適的位置取代,其中烷基胺和烷基羥基的″烷基″部分是如上定義的C2-Cn烷基。取代的胺可以被如上定義的烷基,烯基,炔基或芳基取代。
烷基,烯基,炔基和芳基取代基可以是取代或未取代的,除非另外具體指出。例如,(C1-C6)烷基可以被選自O(shè)H,氧代,鹵素,烷氧基,二烷基氨基或雜環(huán)基如嗎啉基、哌啶基等的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。
在本發(fā)明的化合物中,烷基,烯基和炔基還可以通過(guò)用本文所述的非氫基團(tuán)代替一個(gè)或多個(gè)氫原子至可能的程度而被進(jìn)一步取代。這些包括,但不限于鹵代,羥基,巰基,氨基,羧基,氰基和氨基甲?;?。
如本文中所使用的術(shù)語(yǔ)″取代的″表示給定的結(jié)構(gòu)具有取代基,所述取代基可以是如上定義的烷基,烯基或芳基。該術(shù)語(yǔ)應(yīng)當(dāng)視為包括所指取代基的多種取代程度。當(dāng)公開(kāi)或要求保護(hù)多個(gè)取代基部分時(shí),取代的化合物可以是被一個(gè)或多個(gè)所公開(kāi)或要求保護(hù)的取代基部分單次或多次獨(dú)立地取代。獨(dú)立地取代是指(兩個(gè)以上的)取代基可以相同或不同。
如本文中所使用的,″施用″試劑可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種方法或遞送系統(tǒng)中的任何一種進(jìn)行??梢赃@樣進(jìn)行施用,例如,經(jīng)口,腸胃外,腹膜內(nèi),靜脈內(nèi),動(dòng)脈內(nèi),經(jīng)皮,舌下,肌肉內(nèi),直腸,經(jīng)頰,鼻內(nèi),脂質(zhì)體形式,經(jīng)吸入,陰道,眼內(nèi),經(jīng)局部遞送,皮下,脂肪內(nèi),關(guān)節(jié)內(nèi),鞘內(nèi),到腦室中,心室內(nèi),腫瘤內(nèi),到腦實(shí)質(zhì)中或?qū)嵸|(zhì)內(nèi)施用。
以下的遞送系統(tǒng),其采用多種常規(guī)使用的藥物載體,是可以使用的,但是僅是考慮用于施用根據(jù)本發(fā)明的組合物的眾多可能系統(tǒng)中的代表。
可注射的藥物遞送系統(tǒng)包括溶液,混懸劑,凝膠,微球和聚合物可注射劑,并且可以包括賦形劑如改變?nèi)芙舛鹊脑噭?例如,乙醇,丙二醇和蔗糖)和聚合物(例如,聚己內(nèi)酯(polycaprylactone)和PLGA)。
可植入體系包括棒和盤(pán),并且可以含有賦形劑如PLGA和聚己內(nèi)酯。
口服遞送系統(tǒng)包括片劑和膠囊。它們可以含有賦形劑如粘合劑(例如,羥丙基甲基纖維素,聚乙烯吡咯烷酮,其他纖維素材料和淀粉),稀釋劑(例如,乳糖和其他糖類(lèi),淀粉,磷酸二鈣和纖維素材料),崩解劑(例如,淀粉聚合物和纖維素材料)和潤(rùn)滑劑(例如,硬脂酸鹽和滑石)。
穿黏膜遞送系統(tǒng)包括藥膏,片劑,栓劑,子宮托,凝膠和乳膏,并且可以含有賦形劑如增溶劑和促進(jìn)劑(例如,丙二醇,膽汁鹽和氨基酸),以及其他媒介物(例如,聚乙二醇,脂肪酸酯和衍生物,以及親水性聚合物如羥丙基甲基纖維素和透明質(zhì)酸)。
經(jīng)皮遞送系統(tǒng)包括,例如水性和非水性的凝膠,乳膏,復(fù)合乳劑,微乳劑,脂質(zhì)體,軟膏,水性和非水性的溶液,洗劑,氣霧劑,烴類(lèi)基質(zhì)和粉末,并且可以含有賦形劑如增溶劑,滲透促進(jìn)劑(例如,脂肪酸,脂肪酸酯,脂肪醇和氨基酸),和親水性聚合物(例如,聚卡波非和聚乙烯吡咯烷酮)。在一個(gè)實(shí)施方案中,藥用載體是脂質(zhì)體或透皮促進(jìn)劑。
可重構(gòu)遞送系統(tǒng)的溶液、混懸劑和粉末包括媒介物如懸浮劑(例如,樹(shù)膠,黃原膠,纖維素類(lèi)和糖類(lèi)),保濕劑(例如,山梨糖醇),增溶劑(例如,乙醇,水,PEG和丙二醇),表面活性劑(例如,十二烷基硫酸鈉,斯盤(pán),吐溫和鯨蠟基吡啶),防腐劑和抗氧化劑(例如,對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi),維生素E和C,和抗壞血酸),抗裂劑,涂布劑,以及螯合劑(例如,EDTA)。
應(yīng)理解,本發(fā)明化合物上的取代基和取代模式可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員選擇,以提供化學(xué)穩(wěn)定的并且能夠通過(guò)本領(lǐng)域已知技術(shù)以及以下所述的那些方法從易得原料容易合成的化合物。如果取代基本身是被超過(guò)一個(gè)的基團(tuán)取代的,則應(yīng)理解,只要得到穩(wěn)定的結(jié)構(gòu),這些的多個(gè)取代基可以在相同的碳原子上或在不同的碳原子上。
討論 我們發(fā)現(xiàn),一種發(fā)現(xiàn)與正常腦相比在多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(GBM)表達(dá)增加的蛋白質(zhì)是核受體輔阻遏物(N-CoR),一種正常神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞池的調(diào)節(jié)劑。N-CoR在GBM中的表達(dá)由免疫組織學(xué)和蛋白質(zhì)印跡法(Westernblotting)證實(shí)。
N-CoR在神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)的核中表達(dá)(Hermanson等,(2002))。在磷脂酰基-肌醇-3-OH激酶/Aktl激酶-依賴的磷酸化之后,N-CoR轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)中并且導(dǎo)致NSC的星形細(xì)胞分化。因此,N-CoR的核保留是將NSC保持在未分化狀態(tài)所必要的(Hermanson等)。與在發(fā)育的腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)的CD133+NSC類(lèi)似,已經(jīng)在GBM中識(shí)別出攜帶腦腫瘤干細(xì)胞(BTSC)的CD133(Uchida等,(2000);和Singh等,(2003))。BTSC能夠增殖,自我-更新和分化。BTSC,而不是CD133-分化的腫瘤細(xì)胞,能夠在異種移植移植術(shù)后重演(Singh等,(2004))。
已經(jīng)檢驗(yàn)了類(lèi)視黃醇,維生素A的代謝物,在多種腫瘤包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的治療效果(Yung等,(1996))。N-CoR與類(lèi)視黃醇受體密切相關(guān),并且在配體結(jié)合到該受體上時(shí)被釋放(Bastien等,(2004))。我們推測(cè),類(lèi)視黃醇對(duì)惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的一個(gè)效果可能是,通過(guò)類(lèi)視黃醇與類(lèi)視黃醇受體結(jié)合,隨后N-CoR/類(lèi)視黃醇受體復(fù)合物離解并且N-CoR易位到細(xì)胞質(zhì),而誘導(dǎo)分化。該觀念將解釋先前所觀察到的在用類(lèi)視黃醇處理的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(U343MG-A)中的增加的GFAP表達(dá)(Rudka等,(1988))。為了驗(yàn)證這點(diǎn),我們通過(guò)用50μM的視黃酸(RA)和/或10nM的大田軟海綿酸(OA)(一種蛋白磷酸酶-1和蛋白磷酸酶-2A抑制劑)處理GBM細(xì)胞系U343MG-A,在N-CoR路徑中單獨(dú)地或同時(shí)地靶定兩個(gè)不同的位點(diǎn)。通過(guò)阻止蛋白磷酸酶-1和蛋白磷酸酶-2A的作用,大田軟海綿酸增加了磷酸化形式的N-CoR并且促進(jìn)其隨后的細(xì)胞質(zhì)易位(Hermanson等,(2002))。
細(xì)胞系U343MG-A可由加利福尼亞大學(xué)(舊金山)(UCSF)的腦瘤研究中心組織銀行[Brain Tumor Research Center Tissue Bank(University ofCalifornia,San Francisco,Health Sciences West building,San Francisco,California 94143-0520)]獲得。另外,細(xì)胞系U343和U87可從德國(guó)的EPO-GmbH,Robert-
-Str.10,13092Berlin-Buch商購(gòu)。
幾種具有抗-PP2A活性的分子在過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)的體外抑制中與視黃酸起協(xié)同增效作用。已經(jīng)評(píng)價(jià)過(guò)的與視黃酸起協(xié)同增效作用最有效的一組磷酸酶抑制劑是老的治療劑mylabris的類(lèi)似物,mylabris源自斑蝥的粉碎體,其中主要活性劑是斑蝥素,一種已知的PP2A的強(qiáng)力抑制劑(Wang,1989;Peng等,2002)。
斑蝥素對(duì)人的肝癌(肝細(xì)胞瘤)和上胃腸道癌癥具有抗腫瘤活性,但是對(duì)泌尿道有毒性(Wang,1989)。去甲斑蝥素,一種去甲基化的斑蝥素,保持了斑蝥素的對(duì)肝癌及胃和食道癌的抗腫瘤活性,但是只有很小的或者沒(méi)有泌尿道毒性。去甲斑蝥素還刺激患者和小鼠中的白血球產(chǎn)生,該現(xiàn)象在機(jī)理上還沒(méi)有了解,但是有作為抗癌劑的潛在益處的藥理學(xué)效果(Wang等,1986;Wang,1989)。
有關(guān)斑蝥素起蛋白磷酸酶抑制劑作用的報(bào)道的公開(kāi)引起了對(duì)具有這種化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物的更廣泛的興趣(Li和Casida,1992)。之前已經(jīng)發(fā)現(xiàn),更簡(jiǎn)單的同類(lèi)物及其水解產(chǎn)物(可作為除草劑商購(gòu),草多索)是肝毒性的(Graziano和Casida,1997)。肝中的主要靶位點(diǎn)似乎是蛋白磷酸酶PP2A和PP1,這些化合物都顯示在微摩爾水平的ED50值。結(jié)合性研究顯示,某些斑蝥素同系物的作用對(duì)于PP2A是直接的而對(duì)于PP1是間接的(Honkanen等,1993;Li等,1993)。磷酸酶PP1B僅在這些化合物的毫摩爾水平時(shí)受到影響,而酶PP2C根本不受影響。
過(guò)去,已經(jīng)合成了幾種斑蝥素類(lèi)似物并且評(píng)價(jià)了抗-磷酸酶活性和它們的對(duì)培養(yǎng)癌癥細(xì)胞在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的抑制能力(Sakoff和McClusky,2004;Hart等,2004)。一些先前評(píng)價(jià)過(guò)的改性去甲斑蝥素分子抑制幾種人腫瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)。還沒(méi)有分析去甲斑蝥素類(lèi)似物對(duì)過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤細(xì)胞的活性或去甲斑蝥素與其他潛在抗腫瘤劑組合的活性。進(jìn)一步的研究包括16種″改性去甲斑蝥素″,評(píng)價(jià)對(duì)四種人腫瘤細(xì)胞系包括卵巢、腎、結(jié)腸直腸和肺以及小鼠白血病系的活性。沒(méi)有一個(gè)具有象斑蝥素或去甲斑蝥素那樣作為單一試劑的活性,并且沒(méi)有一個(gè)被評(píng)價(jià)過(guò)與另一抗腫瘤劑組合的活性(McCluskey等,美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)No.2006/0030616,2006)。
先前已經(jīng)合成了不同系列的斑蝥素類(lèi)似物,并且作為殺蟲(chóng)劑和對(duì)于癌細(xì)胞系的抗腫瘤活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。已經(jīng)開(kāi)發(fā)了四分之三的草多索和斑蝥素類(lèi)似物,并且對(duì)它們作為作為除草劑的活性和它們對(duì)小鼠的致死性進(jìn)行了評(píng)估(Matsuzawa等,1987)。草多索硫代酸酐顯示為是比草多索更有力的除草劑,但是對(duì)小鼠的肝臟有毒性(Matsuzawa等,1987;Kawamura等,1990)。
更近一些,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)草多索硫代酸酐在體內(nèi)是對(duì)抗PP2A和PP1的活性劑(Erdodi等,1995)。草多索和草多索硫代酸酐,象斑蝥素那樣,抑制PP2A的活性,并且在一定程度上抑制PP1的活性(Erdodi等,1995)。在肝臟,主要靶位點(diǎn)似乎是PP1。在成纖維細(xì)胞中,只有草多索硫代酸酐引起顯著的形態(tài)學(xué)變化,而斑蝥素和草多索不引起顯著的形態(tài)學(xué)變化(Erdodi等,1995)。據(jù)認(rèn)為,草多索硫代酸酐在體內(nèi)提高的活性與其提高的親脂性有關(guān),從而導(dǎo)致增加的跨質(zhì)膜擴(kuò)散(Essers等,2001)。更新的出版物描述了草多索的單-和二-氟類(lèi)似物以及相應(yīng)的酸酐的合成,但是沒(méi)有與這種合成工作相伴的藥理學(xué)數(shù)據(jù)(Essers等,2001)。
在已知的這種類(lèi)型化合物的同類(lèi)物中,只看到母體,即斑蝥素,及其雙(去甲基)-衍生物,即去甲斑蝥素,被用作抗癌藥物,并且只有去甲斑蝥素被用作抗瘤劑(Tsauer等,1997)。
在該領(lǐng)域新的藥物開(kāi)發(fā)中,我們發(fā)現(xiàn)開(kāi)發(fā)這樣的抑制劑是必要的,其具有更大的特異性,尤其是對(duì)那些對(duì)癌細(xì)胞的復(fù)制過(guò)程顯示出高活性的酶具有更大的特異性。高特異性還提供了避開(kāi)對(duì)正常細(xì)胞功能重要的靶位點(diǎn)的可能性。出于任何新開(kāi)發(fā)的藥物的物理特性的觀點(diǎn),其必須卓越地具有好的膜滲透性(即,具有在2和4個(gè)單位之間的logP值)。
本文描述的化合物對(duì)磷酸酶-2A和磷酸酶1具有拮抗作用。我們證實(shí),至少化合物100,105和102在過(guò)表達(dá)N-CoR的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制中是有效的?;衔?00和105比其他斑蝥素同系物有利,因?yàn)樗鼈円詢尚噪x子形式存在,這使得它們是水溶性的并且在酸性pH是穩(wěn)定的,這些特征對(duì)于口服有效的藥物是適宜的?;衔?02是脂溶性的,其提供了比化合物100和105更大的穿過(guò)血-腦屏障的能力。這在治療如多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的腫瘤時(shí)是特別重要的。
如圖1中所示,評(píng)價(jià)了化合物100,去甲斑蝥素(nor-Can),草多索(End)和草多索硫代酸酐(ET)在體內(nèi)以劑量依賴的方式抑制GBM生長(zhǎng)的能力。
從多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤GBM細(xì)胞系U373(可獲自the NationalInstitute of Neurological Disorders and Stroke Molecular Pathogenesis Unit,Building 10,Room 5 D37,National Institutes of Health,900Rockville Pike,Bethesda,Maryland,20892)作為暴露于不同劑量的藥物7天的函數(shù)的曲線圖,估計(jì)每種化合物抑制腦腫瘤細(xì)胞增殖達(dá)50%(IC50)的濃度。以微-摩爾濃度(μM)表示的IC50,如圖1中所見(jiàn),對(duì)于草多索硫代酸酐,化合物100,去甲斑蝥素和草多索分別為2.5,3.0,12.0和15.0。如所示,以摩爾計(jì),化合物100是體外GBM的強(qiáng)力抑制劑。
與抗-磷酸酶組合時(shí),類(lèi)視黃醇協(xié)同抑制多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的增殖。兩種藥物組合時(shí)抑制活性的協(xié)同性(增效作用)是說(shuō),當(dāng)在兩種藥物存在下的百分比存活率大于兩種藥物以與組合中相同的劑量單獨(dú)使用的百分比存活率之和時(shí),存在協(xié)同作用。
以與類(lèi)視黃醇組合以及單獨(dú)的形式,進(jìn)一步評(píng)價(jià)化合物100的抑制活性。如圖2所示,化合物100與全-反式視黃酸(ATRA)的組合顯示出細(xì)胞生長(zhǎng)的協(xié)同減少。
暴露于ATRA和End組合的U373細(xì)胞的預(yù)期百分比存活率為50%(ATRA的77%x End的65%=50%),而觀察到的存活率為32%。在ATRA和化合物100的組合的存在下預(yù)期的百分比存活率為60%(ATRA的77%x化合物100的78%=60%),而觀察到的存活率為53%。
為了確定是否存在PP2A抑制劑,視黃酸和制滴菌素A的抑制性的腫瘤種類(lèi)特異性,我們測(cè)量了它們作為單個(gè)試劑對(duì)GBM系U373,乳腺癌系MCF-7(獲自ATCC)和腎癌細(xì)胞系UMRC(UMRC由Dr.Zhuang,NINDS,NIH從內(nèi)部研究支持項(xiàng)目(the Intramural Research Support Program),SAIC,國(guó)家癌癥研究所(National Cancer Institute),弗雷德里克癌癥研究和發(fā)展中心(Frederick Cancer Research and Development Center)獲得)的抑制效果。
對(duì)全-反式視黃酸,草多索硫代酸酐,去甲斑蝥素,草多索和制滴菌素A,腎癌細(xì)胞系UMRC(圖3)比腦腫瘤系U373(圖4)更不敏感,而乳腺癌系MCF-7(圖5)象U373一樣敏感。這些藥物對(duì)GBM具有一定的細(xì)胞類(lèi)型特異性。藥物對(duì)MCF-7細(xì)胞的活性顯示,為腦腫瘤治療開(kāi)發(fā)的治療方案很可能也可用于乳腺癌和過(guò)表達(dá)N-CoR的其他腫瘤。
我們已經(jīng)顯示了,由于化合物100與草多索的結(jié)構(gòu)類(lèi)似性以及它們?cè)诙嘈涡猿赡z質(zhì)細(xì)胞瘤治療中的類(lèi)似效果,化合物100將在乳腺癌和過(guò)表達(dá)N-CoR的其他腫瘤的治療中具有類(lèi)似的抑制效果。
還已知,草多索作為活性落葉劑和強(qiáng)力接觸除草劑被用于許多農(nóng)業(yè)場(chǎng)合中。其作為預(yù)-收獲干燥劑和作為選擇性預(yù)-芽前除草劑是相當(dāng)有效的(Crafts,1953)。
草多索,去甲斑蝥素和斑蝥素是熟知的哺乳動(dòng)物蛋白磷酸酶抑制劑以及強(qiáng)力除草劑(Matsuzawa等,1987)。草多索和其他同系物如何發(fā)揮其強(qiáng)力除草活性的機(jī)理還沒(méi)有被廣泛研究,盡管草多索在國(guó)際上廣泛用于農(nóng)業(yè)中。應(yīng)當(dāng)指出,草多索是水溶性,而斑蝥素和去甲斑蝥素不是。
據(jù)估計(jì),草多索作為接觸除草劑和落葉劑的活性與其母體化合物去甲斑蝥素的已知的刺激性毒性有關(guān)。然而,最近的研究表明,草多索的除草活性可以主要是其抗-植物蛋白磷酸酶(PP2A)活性的函數(shù)。Li等,(1993)顯示,斑蝥素和草多索抑制菠菜葉PP2A和PP1并且抑制完整菠菜葉中硝酸鹽還原酶被光的活化,該活化過(guò)程由PP2A介導(dǎo)。Smith等,(1994)證明,結(jié)構(gòu)不相關(guān)的蛋白磷酸酶抑制劑大田軟海綿酸和花萼海綿誘癌素-A是在納摩爾濃度對(duì)某些植物生長(zhǎng)的強(qiáng)力抑制劑。大田軟海綿酸和花萼海綿誘癌素-A的活性強(qiáng)烈表明,草多索作為除草劑的活性是由于其抗-磷酸酶活性。
Baskin和Wilson(1997)顯示,絲氨酸-蘇氨酸蛋白磷酸酶抑制劑包括斑蝥素,抑制植物微管的組織化。Ayaydin等,(2000)顯示,草多索在培養(yǎng)的苜蓿細(xì)胞中抑制造成細(xì)胞分裂變化的PP2A活性。他們指出草多索是可滲透細(xì)胞的。
類(lèi)似于草多索,化合物100和105是水溶性的。但是,與作為二酸的草多索不同的是,化合物100和105可以是兩性離子。本文公開(kāi)的化合物如化合物100對(duì)哺乳動(dòng)物癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制比草多索更有效,這一事實(shí)可能是由于兩性離子的細(xì)胞滲透性比二酸更大。以摩爾計(jì),化合物100和105由于更好的細(xì)胞穿透性而是更有力的除草劑?;衔?00和105,作為兩性離子,對(duì)于除草劑的經(jīng)銷(xiāo)商和使用者以及不經(jīng)意暴露于該除草劑的公眾具有較小的毒性?;衔?00和105不具有草多索的酸性特征。
因此,本文中的化合物,包括化合物100和105,是有用的,商業(yè)上可行的,并且對(duì)于所接觸的人和環(huán)境是更安全的除草劑。
實(shí)驗(yàn)詳述 方法和材料 制備草多索酐
方案1 如方案1中所示,我們通過(guò)以下方法制備了草多索酐將乙酸酐(0.5mL)(4)加入到草多索(186mg)(3)在苯(3mL)中的懸浮液中,然后將混合物攪拌直至固體溶入溶液中(2小時(shí))。將溶液在真空下加熱以除去苯,并且將殘余物在80℃加熱30min。然后加入石油醚(5mL),并且所需的酸酐自動(dòng)結(jié)晶。通過(guò)過(guò)濾濾出產(chǎn)物,用少量石油醚洗滌,得到純的產(chǎn)物(85mg),將其立即用于隨后的兩個(gè)制備過(guò)程中。
制備草多索4-甲基哌嗪一酰胺(EMPM)(化合物100)
方案2 將如上制備的草多索酐(85mg)(5)溶解在苯(2mL)中,并且在室溫將N-甲基哌嗪(60mg)(6)一次性加入。幾乎立即出現(xiàn)白色晶體。將混合物置于室溫過(guò)夜,然后通過(guò)過(guò)濾濾出產(chǎn)物,用少量苯洗滌然后干燥(145mg)。負(fù)離子質(zhì)譜顯示母離子在m/z 267(理論值267),從而證實(shí)分子量為268質(zhì)量單位。產(chǎn)物從熱DMF重結(jié)晶,得到95mg純的一酰胺,化合物100(1)m.p.226-227℃,其在224℃開(kāi)始有些分解?;衔?00的鈉鹽的1H NMR譜證實(shí)了該結(jié)構(gòu)。鈉鹽。1H NMR(D2O)1.41-1.70(m,4H),2.18(s,3H),2.21-2.55(m,4H),2.92(d,1H),3.17(d,1H),3.22-3.40(m,2H),3.45(m,2H),4.60(q,1H),4.78(q,1H)。測(cè)量化合物100質(zhì)荷比的質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示與帶負(fù)電的片段對(duì)應(yīng)的在141m/z,167m/z,254m/z,199m/z和185m/z的峰(表1)。
制備草多索4-乙基哌嗪一酰胺(EEPM)(化合物105) 將草多索酐(1.68g;10mmol)和N-乙基哌嗪(3.42g;30mmol)加入到10mL甲苯中并且在回流下加熱18h。然后在減壓下蒸發(fā)溶劑,并且將殘余物從甲基叔丁基醚結(jié)晶,得到粗產(chǎn)物(1.8g)。從相同的溶劑中重結(jié)晶,分兩批得到總量1.2g(42.5%收率),m.p.215-218℃(伴隨分解)。該鈉鹽在D2O中的1H NMR和MS負(fù)離子譜分別證實(shí)該結(jié)構(gòu)和分子量(m/z 282.2ams)。鈉鹽。1H NMR(D2O)0.95(t,3H),1.42-1.65(m,4H),2.20-2.42(m,4H),2.43-2.55(m,2H),2.93(d,1H),3.08(d,1H),3.20-3.33(m,2H),3.42-3.58(m,2H),4.45(q,1H),4.75(q,1H)。MS譜顯示存在m/z 563.3ams處的締合二聚體,其可以預(yù)期為兩性離子。另外,存在痕量的草多索(MS m/z 185ams),但是這在NMR譜中不明顯。負(fù)離子質(zhì)譜顯示母離子在282.2m/z(理論值282.2),從而證實(shí)分子量為282.2質(zhì)量單位。
制備4-(3-羧基-7氧雜-雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物102)
將草多索酐(1)(500mg,3mmole)和N-BOC哌嗪(2)(1.86g,10mmole)加熱到無(wú)水甲苯(8mL)中并且在100-110℃加熱8h。將溶劑在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去,并且向殘余物中加入10%檸檬酸水溶液(20mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物。將分離的固體(化合物102)(3)過(guò)濾,用己烷洗滌并且在真空下干燥。收率500mg(47%)。mp 206-208℃。質(zhì)譜和1H NMR數(shù)據(jù)證實(shí)化合物102的身份。測(cè)量化合物102質(zhì)荷比的質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示在141.1m/z,185m/z和354m/z的峰。1H NMR(DMSO-d6)1.42(s,9H),1.45-1.72(m,4H),3.02-3.15(d,1H),3.20-3.55(m,9H),4.65-4.70(m,2H)。
制備3-{1-[2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]哌啶-4-基氨基甲?;?-7-氧雜-雙環(huán)[2.2.1]-庚烷-2-羧酸(化合物104)
將草多索酐(1)(500mg,3mmole)和胺(4)(2.34g,10mmole)加入到無(wú)水甲苯(8mL)中并且在100℃加熱20h。然后在減壓下蒸發(fā)溶劑,將殘余物置于水中并且用稀HCl將溶液酸化到pH 5.5至6。將固體過(guò)濾并且從甲醇中重結(jié)晶,得到純的(5)(化合物104)。收率450mg(36%)。Mp140-142℃。質(zhì)譜和1H NMR數(shù)據(jù)證實(shí)化合物104的身份。測(cè)量化合物104質(zhì)荷比的質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示在385的峰。1HNMR(CDCl3)1.48-1.65(m,4H),1.78-1.95(m,2H),1.98-2.15(t,2H),2.40-2.60(m,4H),2.68-2.78(m,2H),2.80(s,2H),3.02-3.15(d,2H),3.78(s,3H),3.82-3.98(m,1H),4.82-4.88(m,2H),6.78-6.82(d,2H),7.09-7.12(d,2H)。
制備3-(4-芐基哌嗪-1-羰基)-7-氧雜-雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸(化合物103)如下面在方案-1中所示,該化合物由草多索酐(1)開(kāi)始,經(jīng)3步制備。
化合物103方案-1 步驟1制備7-氧雜-雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2,3-二羧酸一甲酯 將草多索酐(1)(4g,24mmole)在無(wú)水甲醇(20mL)中在回流下加熱3h。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫,將分離的固體(6)過(guò)濾并且從甲醇中結(jié)晶。收率4.6g(96%)。Mp 114-146℃。
步驟2制備3-(4-芐基-哌嗪-1-羰基)-7-氧雜-雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸甲酯(8) 向酸衍生物(6)(2.6g,13mmole)在二氯甲烷(40mL)中的混合物中加入EDC·HCL(2.75g,15mmole),接著加入HOBt(150mg)。將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘,然后加入N-芐基哌嗪(7)(1.76g.),接著加入DIPEA(3.5mL,20mmole)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。向反應(yīng)混合物中加入水,將二氯甲烷層分離,用NaHCO3水溶液洗滌一次,然后用NaSO4干燥,過(guò)濾并且濃縮。將粗殘余物通過(guò)使用在二氯甲烷中的1-2%甲醇作為洗脫劑的柱色譜法純化,得到所需的純物質(zhì)(8)。收率2.7g(58%)。
步驟3制備3-(4-芐基-哌嗪-1-羰基)-7-氧雜-雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸(化合物103) 向酯(8)(2.50g,7mmole)的甲醇(20mL)溶液中加入NaOH水溶液(360mg溶解在5mL水中)并且在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。然后將溶劑蒸發(fā)至干,加入水(20mL),使用6N HCL將溶液的pH調(diào)節(jié)到pH 5。然后將其蒸發(fā)至干,并且加入二氯甲烷(30mL)。通過(guò)過(guò)濾除去殘余的固體NaCl并且濃縮濾液。將得到的固體用異丙醚研磨,得到純的酸(9)(化合物103)。收率1.8g(75%)。mp>190℃(分解)。質(zhì)譜和1H NMR數(shù)據(jù)證實(shí)化合物103的身份。1H NMR(CDCl3)1.45-1.84(m,4H),2.45-2.68(m,2H),2.75-2.95(m,2H),3.12-3.35(m,2H),3.38-3.55(m,2H),3.60-3.80(m,2H),3.95-4.20(m,2H),4.75-4.85(m,2H),7.40(s,5H)。測(cè)量化合物103質(zhì)荷比的質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示在177.2m/z,345m/z和711m/z的峰。
制備3-(哌嗪-1-羰基)-7-氧雜-雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸(化合物101)
使用氫氣球,將在甲醇中的N-芐基保護(hù)的酸衍生物(9)(500mg,1.45mmole)在Pd/C(5%,50mg)催化劑上在室溫氫化過(guò)夜。將反應(yīng)混合物從催化劑中過(guò)濾出來(lái),并且濃縮至干。將粗殘余物從2-丙醇(2-proponal)中結(jié)晶,得到純的白色固體形式的胺(10)(化合物101)。收率215mg(58%)mp>240℃(分解)。質(zhì)譜和1H NMR數(shù)據(jù)證實(shí)化合物101的身份。1H NMR(CDCl3-CD3OD)1.42-1.78(m,4H),2.92-3.15(m,8H),3.52-3.82(m,2H),4.58(q,1H),4.78(q,1H)。測(cè)量化合物101質(zhì)荷比的質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示在177.2m/z,255.2m/z,277.2m/z和318.2m/z的峰。
制備N(xiāo)-甲基哌嗪的3-(哌嗪-1-羰基)-7-氧雜-雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-硫代羥酸鹽(化合物108)
將草多索硫代酸酐(11)(552mg,3mmole)和N-甲基哌嗪(12)(1g,10mmole)加入到無(wú)水甲苯(10mL)中并且在回流下加熱2.5h。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫,并且將分離的固體過(guò)濾并從二氯甲烷/乙酸乙酯中結(jié)晶,得到純的所需產(chǎn)物(13)(化合物108)。收率585mg(51%)mp>180℃(分解)。質(zhì)譜和1H NMR數(shù)據(jù)證實(shí)化合物108的身份。1H NMR(CDCl3)1.52-1.56(m,2H),1.82-1.85(m,2H),2.27(s,3H),2.28-2.42(m,11H),3.01(s,3H),3.28-3.36(m,2H),3.42-3.49(m,4H),3.60-3.78(m,2H),4.89-4.91(m,2H)。測(cè)量化合物108質(zhì)荷比的質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示在217m/z,251 m/z和351 m/z的峰。
制備3-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-7-氧雜-雙環(huán)[2.2.1]2-羧酸甲酯(化合物107)
向酸衍生物(14)(536mg,2mmole)在二氯甲烷中的懸浮液中加入亞硫酰二氯(0.5mL),接著加入2滴DMF。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。其是酰氯鹽酸鹽的懸浮液。加入無(wú)水甲醇(10mL),并且攪拌30分鐘并使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)至干。向殘余物中加入水(20mL)并且用乙酸乙酯(20mL)萃取。使用NaHCO3水溶液(10%)將水層pH調(diào)節(jié)到4.5并且蒸發(fā)至干。將殘余物與乙腈共沸。將其再次溶解在乙腈中,并且將分離的NaCl通過(guò)過(guò)濾除去。將濾液蒸發(fā)至干并且用乙酸乙酯研磨,得到粘性固體,將該固體在真空爐中干燥,得到所需的化合物,為無(wú)色固體(15)(化合物107)。收率140mg(25%,mp 105-107℃)。1H NMR數(shù)據(jù)與預(yù)期的化合物107的光譜一致。1H NMR(D2O)1.49-1.53(m,2H),1.60-1.64(m,2H),2.8(s,3H),2.96-3.36(m,10H),3.52(s,3H),4.84-4.86(m,2H)。化合物107質(zhì)荷比的質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示在123m/z,183m/z,251m/z和283m/z的峰。
制備1-{N-(3-外羧基-7-氧雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-外羰基)氨基-2-(N,N-二甲基)氨基乙烷(化合物106) 將草多索酐(1.68g;10mmole)和不對(duì)稱-N,N-二甲基乙二胺(2.64g;30mmole)加入到甲苯(10mL)中并且在回流下加熱2h。然后通過(guò)在減壓下蒸發(fā)除去溶劑,并且用少量二異丙醚研磨殘余物使其結(jié)晶。然后將產(chǎn)物通過(guò)冷卻到-20℃從己烷中重結(jié)晶兩次。純的產(chǎn)物(1.9g;74%收率)在48-50℃熔化。1H NMR譜與兩性離子性的并且在用D2O處理時(shí)經(jīng)歷兩個(gè)質(zhì)子的交換的結(jié)構(gòu)完全一致。質(zhì)譜也證實(shí)了化合物106的身份。1H NMR(CDCl3)1.62-1.75(m,2H),1.85-1.95(m,2H),2.2(s,6H),2.45(t,2H),2.92(s,2H),3.60(t,2H),4.85-4.95(m,2H)。測(cè)量化合物106質(zhì)荷比的質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示在239.2m/z,257m/z和513m/z的峰。
質(zhì)譜 表1示出了離子的質(zhì)荷比與相應(yīng)結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系。將化合物100的樣品在質(zhì)譜儀中離子化。分離具有不同質(zhì)量的離子,并且測(cè)量它們的相對(duì)豐度。表1離子的質(zhì)荷比
表2示出了離子的質(zhì)荷比與相應(yīng)結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系。將化合物105的樣品在質(zhì)譜儀中離子化。分離具有不同質(zhì)量的離子,并且測(cè)量它們的相對(duì)豐度。
表2離子的質(zhì)荷比
實(shí)施例1化合物100和相關(guān)類(lèi)似物對(duì)GBM細(xì)胞的作用 為了識(shí)別用于治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(GBM)的新的治療靶位點(diǎn),評(píng)價(jià)了斑蝥素類(lèi)似物抑制多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。具體地,在評(píng)價(jià)中使用GBM細(xì)胞系U373。
用于評(píng)價(jià)的斑蝥素同系物是去甲斑蝥素(nor-Can),其是雙(去甲基)斑蝥素;草多索(End),其是去甲斑蝥素的二羧酸衍生物;草多索硫代酸酐(ET);和如上所述制備的化合物100和105。
在第一天將含或不含不同量的每種藥物的細(xì)胞以一式三份植入平板中,所述藥物溶解在培養(yǎng)基中(化合物100,化合物105和草多索)或二甲亞砜中(草多索硫代酸酐和去甲斑蝥素)。在7天后,將在每個(gè)劑量的一式三份培養(yǎng)物中的細(xì)胞和在對(duì)照中的細(xì)胞計(jì)總數(shù),并且確定細(xì)胞的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)偏差。
GBM細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制量表示為在實(shí)驗(yàn)皿中的細(xì)胞數(shù)量相比于在只含藥物媒介物和培養(yǎng)基的對(duì)照皿中的細(xì)胞數(shù)量的比例。將對(duì)照的平均百分比作圖并且標(biāo)上由一式三份測(cè)量值計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
結(jié)果 如圖1所示,每種去甲斑蝥素類(lèi)似物在體內(nèi)以劑量依賴的方式抑制GBM的生長(zhǎng)。
從GBM細(xì)胞系U373作為暴露于不同劑量的藥物7天的函數(shù)的曲線圖,估算每種化合物抑制腦腫瘤細(xì)胞增殖達(dá)50%時(shí)的濃度(IC50)。如圖1中所示,對(duì)于草多索硫代酸酐,化合物100,去甲斑蝥素和草多索,以微-摩爾濃度(uM)表示的IC50分別為2.5,3.0,12.0和15.0。
另外,用不同劑量的化合物105處理3天(圖6)和7天(圖7)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373的對(duì)數(shù)曲線顯示,提高的劑量顯示更大的生長(zhǎng)抑制作用。此外,圖8是在不同化合物105濃度下,化合物105對(duì)人GBM細(xì)胞7天的生長(zhǎng)的劑量-響應(yīng)曲線。應(yīng)當(dāng)指出,化合物100是以10μM的單個(gè)濃度包含的,并且在此濃度,兩種化合物具有相同的抑制值。
實(shí)施例2與視黃酸組合的化合物100的效果 為了識(shí)別PP2A抗-磷酸酶和影響核復(fù)合物的類(lèi)視黃醇的組合的效果,我們集中研究了在體外已經(jīng)顯示出對(duì)人GBM的活性的水溶性的斑蝥素衍生物,草多索和化合物100。
為了觀察與視黃酸組合的化合物100的效果,將化合物100與全-反式視黃酸組合。在第一天將含或不含不同量的每種藥物的細(xì)胞以一式三份植入平板中,所述藥物溶解在培養(yǎng)基中(化合物100和草多索)。在7天后,將在每個(gè)劑量的一式三份培養(yǎng)物中的細(xì)胞和在對(duì)照中的細(xì)胞計(jì)總數(shù),并且確定細(xì)胞的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)偏差。
GBM細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制量表示為在實(shí)驗(yàn)皿中的細(xì)胞數(shù)量相比于在只含藥物媒介物和培養(yǎng)基的對(duì)照皿中的細(xì)胞數(shù)量的比例。將對(duì)照的平均百分比作圖并且標(biāo)上由一式三份測(cè)量值計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
結(jié)果 圖2顯示,化合物100以及草多索,它們每個(gè)均與ATRA組合,協(xié)同地抑制GBM細(xì)胞系U373的增殖。相組合的兩種藥物的抑制活性的協(xié)同性(增效作用)是說(shuō),當(dāng)在兩種藥物存在下的百分比存活率小于兩種藥物以與該組合中相同的劑量單獨(dú)使用的百分比存活率的乘積時(shí),存在該協(xié)同作用。與ATRA組合的化合物100和草多索(end)的協(xié)同程度定量表示于下面的表3中。
表3.草多索和化合物100+/-ATRA對(duì)U373細(xì)胞的抑制作用
暴露于ATRA和化合物1組合的U373細(xì)胞的預(yù)期的百分比存活率是60%(ATRA的77%x化合物100的78%=60%),而觀察到的百分比存活率是53%。在ATRA和End的組合存在下的預(yù)期百分比存活率是50%(ATRA的77%x End的65%=50%),而觀察到的存活率是32%。
化合物100在與制滴菌素A組合時(shí)或在與13-順式視黃酸組合時(shí)協(xié)同地抑制GBM細(xì)胞系U373的生長(zhǎng),如下面的表4所示。
表4.化合物100+/-13-順式視黃酸(CIS-RA)和化合物1+/-制滴菌素A(TSA)對(duì)GBM細(xì)胞系U373的抑制作用
兩種藥物在對(duì)U373細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制中有協(xié)同性。暴露于兩種藥物的組合后細(xì)胞的百分比存活率小于根據(jù)暴露于與該組合中相同的劑量下的兩種藥物中每一種時(shí)細(xì)胞的百分比存活率而預(yù)期的百分比存活率。
實(shí)施例3確定腫瘤類(lèi)型特異性 為了確定是否存在化合物100的類(lèi)似物,視黃酸和制滴菌素A抑制性能的腫瘤類(lèi)型特異性,我們測(cè)量了它們作為單獨(dú)試劑對(duì)GBM系U373,乳腺癌系MCF-7(獲自ATCC)和腎癌細(xì)胞系UMRC(UMRC由Dr.Zhuang,NINDS,NIH從the Intramural Research Support Program,SAIC,NationalCancer Institute,F(xiàn)rederick Cancer Research and Development Center獲得)的抑制作用。
結(jié)果 對(duì)全-反式視黃酸,草多索硫代酸酐,去甲斑蝥素,草多索和制滴菌素A,腎癌細(xì)胞系UMRC(圖3)比腦腫瘤系U373(圖4)更不敏感,而乳腺癌系MCF-7(圖5)象U373一樣敏感。這些藥物對(duì)GBM具有一定的細(xì)胞類(lèi)型特異性。藥物對(duì)MCF-7細(xì)胞的活性顯示,為腦腫瘤治療開(kāi)發(fā)的治療方案很可能也可用于對(duì)抗乳腺癌和過(guò)表達(dá)N-CoR的其他腫瘤。
實(shí)施例4 除了化合物100的在低的微摩爾濃度的抑制活性外,化合物105,與化合物100一樣,也是兩性離子,并且也是高度活性的,如圖9所示。脂溶性的化合物102在抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373方面也是高度有效的(圖10)。去甲斑蝥素的其他衍生物,化合物101,103,104和106活性較小(圖11-14)。
對(duì)于所有的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),使細(xì)胞在存在或不存在不同濃度的藥物的情況下或在用于溶解藥物的媒介物(對(duì)于化合物100為PBS并且對(duì)于化合物102為DMSO)存在下生長(zhǎng)。在第3天和第7天一式三份進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),并且將生長(zhǎng)抑制率表示為在實(shí)驗(yàn)孔中存在的細(xì)胞數(shù)量除以在對(duì)照孔中的細(xì)胞數(shù)量而得到的百分比。
化合物100對(duì)GBM細(xì)胞系U373的抑制作用有劑量依賴性(圖15)并且對(duì)成神經(jīng)管細(xì)胞瘤細(xì)胞系DAOY的抑制作用有劑量依賴性(圖16)。
對(duì)于體內(nèi)實(shí)驗(yàn),使皮下植入的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)7天至5-7mm的大小。在第7天,開(kāi)始每天ip給藥,給藥20天。每2-5天測(cè)量一次腫瘤物的最大垂直直徑。在開(kāi)始治療后的第21天,處死動(dòng)物,解剖皮下組織并且進(jìn)行測(cè)量。
實(shí)驗(yàn)顯示,化合物100抑制在SCID小鼠皮下生長(zhǎng)的GBM細(xì)胞系U87的生長(zhǎng)(圖17)。實(shí)驗(yàn)還證明,化合物100和化合物102都抑制在SCID小鼠皮下植入的DAOY細(xì)胞的增殖(圖18)。
實(shí)施例5對(duì)除成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和成神經(jīng)管細(xì)胞瘤外的人癌細(xì)胞系的藥物活性. 材料和方法 MDA-MB-231,HT-29,NCI-H460,NCI-H522,NCI-H69,GXF-209,HepG2,OVAR-3,PANC-1,DU-145,LNCAP,HL-60,K-562和MOLT-4細(xì)胞系或者從the American Type Culture Collection(ATCC;Manassas,VA)獲得,或者從the National Cancer Institute(NCI;Frederick,MD)獲得。RPMI-1640培養(yǎng)基,L-谷氨酰胺二肽(HyQ SG-200)和HEPES獲自Hyclone(Logan,UT)。
胎牛血清(FBS)獲自Sigma-Aldrich,(St.Louis,MO)。DMSO購(gòu)自FisherChemicals(Fair Lawn,NJ)。CellTiter-Glo發(fā)光細(xì)胞生存性試驗(yàn)試劑獲自Promega Corporation(Madison,WI)。所有組織培養(yǎng)塑料器具獲自CorningIncorporated(New York,NY)?;衔?00和化合物102是由LixteBiotechnology Holdings,Inc.(East Setauket,NY)提供的。
所有細(xì)胞系都在補(bǔ)充了2mM L-谷氨酰胺二肽,10mM HEPES和10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基中常規(guī)地一周培養(yǎng)兩次。
附著的細(xì)胞系MDA-MB-231,HT-29,NCI-H460,NCI-H522,GXF-209,HepG2,OVAR-3,PANC-1,DU-145和LNCAP細(xì)胞每次均以2,500細(xì)胞/孔、總體積50uL接種到2個(gè)96孔板中并且在37℃、增濕的5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中溫育過(guò)夜。懸浮細(xì)胞系NCI-H69,HL-60,K-562和MOLT-4每次以10,000細(xì)胞/孔、總體積50uL接種到2個(gè)96孔板中并且在37℃、增濕的5%CO2培養(yǎng)箱中溫育過(guò)夜。
在滅菌水中制備水溶性藥物化合物100的20mM儲(chǔ)液,并且在DMSO中制備化合物102的20mM儲(chǔ)液。接著,在RPMI-1640培養(yǎng)基中使2X儲(chǔ)液達(dá)到所需的最終濃度。將50uL的2X儲(chǔ)液加入到合適的孔中,其含有50uL的細(xì)胞和培養(yǎng)基以給出附錄中列出的最終濃度。將化合物100的最高濃度在使用前過(guò)濾滅菌。將50uL培養(yǎng)基加入到培養(yǎng)基和細(xì)胞對(duì)照孔中,并且將50uL的模擬2X DMSO儲(chǔ)液加入到媒介物對(duì)照孔中。在將藥物加入到細(xì)胞中的同時(shí),將每一細(xì)胞系的培養(yǎng)板中的一個(gè)用于如下所述的CellTiter-Glo試驗(yàn),以對(duì)于每一細(xì)胞系獲得第0天的值。在72hr溫育期后,對(duì)剩余的板進(jìn)行CellTiter-Glo試驗(yàn)。
CellTiter-Glo試驗(yàn) 按照制造商的用法說(shuō)明書(shū)進(jìn)行試驗(yàn)。簡(jiǎn)言之,將培養(yǎng)板從溫育器中取出,放置在處于室溫的工作臺(tái)上30分鐘。不將培養(yǎng)板堆疊。在室溫溫育30min后,向板上的每個(gè)孔中加入100uL的CellTiter-Glo試劑并且混合2分鐘,接著再在室溫溫育10分鐘。然后使用PerkinElmer Microbeta閃爍和發(fā)光計(jì)數(shù)器(Trilux)記錄發(fā)光。
結(jié)果和討論 這些研究是如在“材料和方法”中所述進(jìn)行的,其中原始數(shù)據(jù)和板布置列出在附錄中。每個(gè)細(xì)胞系中對(duì)于每種藥物獲得的IC50值列于表5中。圖示化合物對(duì)每個(gè)細(xì)胞系的作用連同相關(guān)的曲線擬合一起示于圖19A-N中。
所測(cè)試的大多數(shù)細(xì)胞系對(duì)處于低uM范圍的所有藥物都敏感(表5)。化合物100和化合物102都具有顯著的活性(對(duì)于所有細(xì)胞系,與陽(yáng)性比較物,臨床使用的抗癌藥阿霉素,大致相等)。所述藥物對(duì)以下癌癥的細(xì)胞系有活性乳腺癌;結(jié)腸癌;三種主要類(lèi)型的肺癌大細(xì)胞、腺癌和小細(xì)胞;胃癌;肝癌(肝細(xì)胞瘤);卵巢腺癌;胰腺癌,兩種類(lèi)型的前列腺癌;和三種類(lèi)型的白血病前髓細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病(表5)。
表5由曲線擬合和十四種人癌細(xì)胞系(圖19A-N)獲得的導(dǎo)致增殖的50%抑制率的化合物100和102的濃度(IC50)
實(shí)施例6抗真菌活性 由移植、HIV/AIDS和癌癥,主要是白血病引起的不斷增長(zhǎng)的免疫缺失患者群體已經(jīng)導(dǎo)致嚴(yán)重真菌感染的增加。最常從這些患者感染中恢復(fù)的真菌是曲霉屬(Aspergillus spp.)和念珠菌屬(Candida spp.)。對(duì)于念珠菌屬的治療有有效的療法,但是仍存在由曲霉屬造成的感染的治療的擔(dān)心,由曲霉屬造成的感染與免疫缺失寄主的高死亡率有關(guān)。這樣的感染在這組患者中難以清除,因此對(duì)于對(duì)這些真菌具有良好活性的試劑的需求正在增加。另外,手足的指甲和皮膚的較不嚴(yán)重但是慢性棘手的真菌感染,即皮膚真菌病,影響了世界上的數(shù)百萬(wàn)人口。作為改變真菌感染的現(xiàn)狀和缺乏對(duì)這些感染的全面治愈的結(jié)果,對(duì)化合物100和102進(jìn)行了測(cè)試以用于將來(lái)可能的開(kāi)發(fā)。
材料和方法 抗真菌測(cè)試是采用普通批次的化合物100和102完成的。
稱出10mg的每種粉末,將化合物100加入到1ml滅菌的蒸餾水中并且將化合物102加入到DMSO中。對(duì)于每種化合物,將得到的10μg/ml濃度稀釋到640μg/ml的工作濃度。所有隨后的稀釋也是使用相應(yīng)的稀釋劑進(jìn)行的。最終的測(cè)試濃度在0.125-64μg/ml范圍內(nèi)。
結(jié)果 共測(cè)試了23種隔離群,包括3種白色念珠菌(Candida albicans),3種光滑念珠菌(Candida glabrata),3種新型隱球菌(Cryptococcus neoformans),3種煙曲霉(Aspergillus fumigatus),3種稻根霉菌(Rhizopus oryzae),3種腐皮鐮孢霉菌(Fusarium solani),3種波氏假阿什利霉(Pseudallescheria boydii)和2種紅色絲孢酵母(Trichosporon rubrum)。所有隔離群都是提交到真菌測(cè)試實(shí)驗(yàn)室(the Fungus Testing Laboratory)進(jìn)行評(píng)價(jià)的臨床隔離群??拐婢舾行詼y(cè)試是按照國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(the National Committee forClinical Laboratory Standards)列出的方法完成的M-27A2,酵母的肉湯稀釋抗真菌敏感性測(cè)試的參考方法;核準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn),和M38-A″分生孢子-形成性絲狀真菌的肉湯稀釋抗真菌敏感性測(cè)試的參考方法;核準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)″。這包括在含谷氨酰胺且不含碳酸氫鹽的RPMI-1640中進(jìn)行測(cè)試,接種量對(duì)于酵母為0.5-2.5x103或?qū)τ诿咕鸀?-5x104,并且在35℃溫育24和48小時(shí)。最小抑制濃度(MIC)被定義為與不含藥物的對(duì)照管相比,導(dǎo)致酵母的濁度的50%降低的最低濃度,以及導(dǎo)致霉菌的80%抑制的最低濃度。
盡管對(duì)化合物100在測(cè)試的水平上沒(méi)有觀察到活性,但是卻發(fā)現(xiàn)化合物102對(duì)紅色絲孢酵母(T.rubrum)具有顯著的活性(表6)。
結(jié)論 根據(jù)這種化合物在人受治療者體內(nèi)可達(dá)到的水平,安全曲線(safetyprofile)和其他有關(guān)因素,該化合物可以成為用于由紅色絲孢酵母造成的皮膚真菌感染的可行的競(jìng)爭(zhēng)者。
表6
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權(quán)利要求
1.一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中
鍵α存在或不存在;
R1和R2各自獨(dú)立地是H,O-或OR9,
其中R9是H,烷基,烯基,炔基或芳基,
或R1和R2一起是=O;
R3和R4各自不同,并且各自是OH,O-,OR9,SH,S-,SR9,
其中X是O,S,NR10,或N+R10R10,
其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代 的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中當(dāng)R1
和R2是=O時(shí),取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R11,-CH2COR11,-NHR11或-NH+(R11)2,其中每個(gè)R11獨(dú)立地是烷基,烯基或炔基,其每一個(gè)是取代的或未取代的,或H;
R5和R6各自獨(dú)立地是H,OH,或R5和R6一起是=O;并且
R7和R8各自獨(dú)立地是H,F(xiàn),Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3或SR12,
其中R12是H,芳基或取代或未取代的烷基、烯基或炔基,或者所述化合物的鹽、對(duì)映體或兩性離子。
2.權(quán)利要求1所述的化合物,其中所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
3.權(quán)利要求2所述的化合物,其中所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
4.權(quán)利要求2所述的化合物,其中所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
5.權(quán)利要求1或2所述的化合物,其中鍵α存在。
6.權(quán)利要求1或2所述的化合物,其中鍵α不存在。
7.權(quán)利要求5或6所述的化合物,其中
R1和R2一起是=O;
R3是O-或OR9,
其中R9是H,甲基,乙基或苯基;
R4是
其中X是O,S,NR10或N+R10R10,
其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R11,-CH2COR11,-NHR11或-NH+(R11)2,其中R11是烷基,烯基或炔基,其每一個(gè)是取代的或未取代的,或H;
R5和R6一起是=O;并且
R7和R8各自獨(dú)立地是H,F(xiàn),Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3或SR12,其中R12是取代或未取代的烷基,烯基或炔基。
8.權(quán)利要求1-7中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R3是O-。
9.權(quán)利要求1-8中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R4是
其中X是O,NR10,N+R10R10
其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中當(dāng)R1和R2是=O時(shí),取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R11,-CH2COR11,-NHR11或-NH+(R11)2,其中R11是H或烷基。
10.權(quán)利要求9所述的化合物,其具有結(jié)構(gòu)
11.權(quán)利要求1-9中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R4是
其中R10是R10H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中當(dāng)R1和R2是=O時(shí),取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R11,-CH2COR11,-NHR11或-NH+(R11)2,其中R11是H或烷基。
12.權(quán)利要求1-9或11中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R4是
13.權(quán)利要求1-9或11中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R4是
其中R10是
14.權(quán)利要求1-9或11中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R4是
其中R10是
15.權(quán)利要求1-9或11中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R4是
16.權(quán)利要求1-9或11中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R4是
17.權(quán)利要求1-9或11-16中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R5和R6一起是=O。
18.權(quán)利要求1-9或11-17中任何一項(xiàng)所述的化合物,其中R7和R8各自是H。
19.權(quán)利要求1所述的化合物,
其中鍵α存在或不存在;R9存在或不存在,并且在存在時(shí)是H,C1-C10烷基,C2-C10烯基或苯基;并且X是O,S,NR10或N+R10R10,
其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CO2R11,-CH2COR11,-CH2CN或-CH2CH2R16,其中R11是H或烷基,
并且其中R16是任何取代基,所述取代基是吖丙啶基中間體的前體,或所述化合物的鹽、兩性離子或?qū)τ丑w。
20.權(quán)利要求19所述的化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
其中,
鍵α存在或不存在;
X是O,S,NR10或N+R10R10,
其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CO2R11,-CH2COR11,-CH2CN或-CH2CH2R16,其中R11是H或烷基,
并且其中R16是任何取代基,所述取代基是吖丙啶基中間體,或化合物的鹽、兩性離子或?qū)τ丑w。
21.權(quán)利要求20所述的化合物,其中
X是O或NH+R10,
其中R10是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
22.權(quán)利要求20所述的化合物,其中X是-CH2CH2R16,其中R16是任何取代基,所述取代基是吖丙啶基中間體的前體。
23.權(quán)利要求20或21所述的化合物,其中X是O。
24.權(quán)利要求20或21所述的化合物,其中
X是NH+R10,
其中R10是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
25.權(quán)利要求20,21或24所述的化合物,其中R10是甲基。
26.權(quán)利要求20,21或24所述的化合物,其中R10是
27.權(quán)利要求20,21或24所述的化合物,其中R10是
28.權(quán)利要求20,21或24所述的化合物,其中R10是乙基。
29.權(quán)利要求20,21或24所述的化合物,其中R10不存在。
30.一種化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
其中
鍵α存在或不存在;
R9存在或不存在,并且在存在時(shí)是H,烷基,烯基,炔基或苯基;并且X是O,NR10或N+R10R10,
其中每個(gè)R10獨(dú)立地是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R12或-CH2COR12,其中R12是H或烷基,或所述化合物的鹽、兩性離子或?qū)τ丑w。
31.權(quán)利要求30所述的化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
其中
鍵α存在或不存在;
X是O或NH+R10,
其中R10是H,烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,炔基,取代的炔基,芳基,取代的芳基,其中取代基不是氯,
-CH2CN,-CH2CO2R12或-CH2COR12,其中R12是H或烷基。
32.權(quán)利要求30所述的化合物,其中鍵α存在。
33.權(quán)利要求30所述的化合物,其中鍵α不存在。
34.權(quán)利要求33所述的化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
35.權(quán)利要求32所述的化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
36.權(quán)利要求30所述的化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
其中
鍵α存在或不存在;X是NH+R10,
其中R10存在或不存在,并且在存在時(shí)R10是烷基,取代的C2-C12烷基,烯基,取代的C4-C12烯基,
-CH2CN,-CH2CO2R12或-CH2COR12,其中R12是H或烷基。
37.權(quán)利要求1所述的化合物,其中所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
38.一種化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
其中A和B各自獨(dú)立地是H,F(xiàn),Cl,Br,SO2Ph,COR14,CO2CH3,SR14,
其中R14是H或芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基;
X是O,NH或S;
Z是O,S,SR15,NH,NR15,CH2OH,CH2OR15,
其中R15是芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基;并且Y和W各自獨(dú)立地是CHOH,CH2,C=S或C=O,
或所述化合物的鹽。
39.權(quán)利要求38所述的化合物,其中,
A和B各自獨(dú)立地是H或F;
X是O;
Z是S;并且
Y和W各自是C=S。
40.權(quán)利要求38或39所述的化合物,其中,
A和B各自是F。
41.權(quán)利要求38或39所述的化合物,其中,
A是H;并且
B是F。
42.權(quán)利要求38的化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
其中
A是F或SR14,
其中R14是芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基;并且B是F,Cl,Br,SO2Ph,CO2CH3,COR14或SR14,
其中R14是芳基或取代或未取代的烷基,烯基或炔基。
43.權(quán)利要求42所述的化合物,其具有以下結(jié)構(gòu)
44.一種藥物組合物,其包含權(quán)利要求1-37中任何一項(xiàng)的化合物和藥用載體。
45.一種制備具有權(quán)利要求1或2的結(jié)構(gòu)的化合物的方法,該方法包括
a)將具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
與具有以下結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng),
形成具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
b)將具有上述結(jié)構(gòu)的化合物在催化劑存在下與氫反應(yīng)以形成
46.一種制備具有權(quán)利要求38的結(jié)構(gòu)的化合物的方法,該方法包括
a)將具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
與具有以下結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng),
形成具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
b)以及將具有上述結(jié)構(gòu)的化合物在催化劑存在下與氫反應(yīng)以形成
47.一種制備具有以下結(jié)構(gòu)的化合物的方法,
該方法包括
a)將具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
溶解在苯中,并且加入具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
以制備具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
b)將步驟a)獲得的化合物重結(jié)晶以制備所述化合物。
48.權(quán)利要求43或44中任何一項(xiàng)所述的方法,其中所述溶劑是二甲基甲酰胺。
49.一種用于控制不希望有的植被的方法,所述方法包括使植被或其環(huán)境與除草有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-37中任何一項(xiàng)所述的化合物接觸。
50.一種用于抑制植物磷酸酶活性的方法,該方法包括使植物或其環(huán)境與除草有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-37中任何一項(xiàng)所述的化合物接觸。
51.權(quán)利要求49或50所述的方法,其中所述化合物是化合物100,100E,101,101E,102,102E,103,103E,104,104E,105,105E,106,106E,107,107E,108或111。
52.一種預(yù)防或治療受治療者真菌感染的方法,該方法包括向受治療者施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-37中任何一項(xiàng)所述的化合物以治療真菌感染,從而治療真菌感染。
53.權(quán)利要求52所述的方法,其中所述化合物是化合物100,100E,101,101E,102,102E,103,103E,104,104E,105,105E,106,106E,107,107E,108或111。
54.一種治療遭受以下癌癥痛苦的受治療者的方法乳腺癌,結(jié)腸癌,大細(xì)胞肺癌,肺的腺癌,小細(xì)胞肺癌,胃癌,肝癌,卵巢腺癌,胰腺癌,前列腺癌,前髓細(xì)胞白血病,慢性髓細(xì)胞白血病或急性淋巴細(xì)胞白血病,所述方法包括向所述受治療者施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-37中任何一項(xiàng)所述的化合物,從而治療所述受治療者。
55.權(quán)利要求54的方法,其中所述化合物是100,100E,101,101E,102,102E,103,103E,104,104E,105,105E,106,106E,107,107E,108或111。
全文摘要
本發(fā)明提供具有式(I)或(II)結(jié)構(gòu)的化合物,這些化合物可用于治療腫瘤。
文檔編號(hào)A01N43/00GK101662939SQ200880004292
公開(kāi)日2010年3月3日 申請(qǐng)日期2008年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月6日
發(fā)明者約翰·S·科瓦奇, 弗朗西斯·約翰遜 申請(qǐng)人:利克斯特生物技術(shù)控股公司