專利名稱：平菇菌株kzh－2及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及平菇菌株KZH-2及制備方法。
背景技術(shù)：
平菇Pleurotus ostreatus是目前栽培量最大的食用菌品種，現(xiàn)有平菇品種隨著培養(yǎng)和使用時間的延長，個體的菌齡越來越大，新陳代謝機(jī)能逐漸減低，失去抗逆能力，漸漸失去原有的優(yōu)良性狀，商品性能降低，以至失去其使用價值。菌種遺傳性發(fā)生變化；菌種被病毒寄生；培養(yǎng)條件不適合，不能滿足它的生活要求，使其失去自我調(diào)節(jié)能力，失去正常的生理功能等因素是造成菌種退化的原因，是量變到質(zhì)變的漸變結(jié)果，也是一種病態(tài)和衰老的綜合表現(xiàn)。目前主要通過自然選育、雜交育種、誘變育種、菌種脫毒等方法來培育新的菌株和對原菌株性狀進(jìn)行復(fù)壯，確保菌種的優(yōu)良特性。自然選育不需要特殊的設(shè)備，但要靠收集大量的不同條件下生長的菌株進(jìn)行大量的對比試驗(yàn)，時間長，工作量大；雜交育種、誘變育種、菌種脫毒則需要特殊設(shè)備來完成，工藝復(fù)雜，受多種因素影響，結(jié)果不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了上述方法的不足，利用野生平菇資源，通過子實(shí)體分離、純化、出菇試驗(yàn)篩選、培育出生長強(qiáng)壯、適應(yīng)性強(qiáng)、商品性能具佳的優(yōu)良菌株。
本發(fā)明采用的真菌是平菇Pleurotus ostreatus KZH-2；保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址中國.北京.中關(guān)村；保藏日期2006年01月25日；保藏登記入冊的編號CGMCC NO.1601。
該平菇子實(shí)體中等至較大，菌蓋直徑5-18厘米，灰白色，扁半球形，平展后扇形，靠近柄部下凹有毛；菌肉白色，稍厚；菌褶白色，稍密；菌柄側(cè)生、短，內(nèi)實(shí)、白色，長1-3厘米，粗1-2厘米，基部具絨毛；孢子印白色，孢子近圓柱形，光滑無色。菌絲培養(yǎng)溫度22-26℃，出菇溫度5-28℃。該菌株適應(yīng)性強(qiáng)，高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)，性能穩(wěn)定，適合多種培養(yǎng)料栽培。
本發(fā)明的技術(shù)方案
①采集野生平菇子實(shí)體；②組織分離；③純化菌株及菌株鑒定；④出菇試驗(yàn)(生物學(xué)特性比較及生產(chǎn)性狀比較)；⑤確定優(yōu)良菌株；⑥菌種生產(chǎn)及菌種應(yīng)用；經(jīng)過反復(fù)篩選，獲得產(chǎn)量高、抗逆性強(qiáng)的平菇菌株KZH-1。
本發(fā)明真菌Pleurotus ostreatusKZH-2培養(yǎng)方法菌種分離純化培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂20克，兌水1000毫升。
平菇菌株分離及鑒定方法1、將平菇子實(shí)體組織塊接種到上述試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)5-7天，對分離培養(yǎng)的試管每天觀察記錄，及時剔除已污染的試管，挑選出無污染、長勢良好的菌株，獲得平菇分離試管種。
2、將分離試管種菌絲塊接種到上述瓊脂培養(yǎng)基的平板培養(yǎng)皿上進(jìn)行菌種純化，2天后取尖端菌絲塊接種在培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，獲得平菇純化試管種。
3、用平菇純化試管種，制作二級種，生產(chǎn)栽培種，進(jìn)行出菇試驗(yàn)，獲得子實(shí)體，確定分離得到的純菌種為平菇菌種。
本發(fā)明平菇菌種的制備方法分為固體菌種和液體菌種兩種。
固體菌種制備方法固體培養(yǎng)基配方為①麥?；蚴w粒83％，雜木屑15％，石膏粉或碳酸鈣2％。
②雜木屑78％、麩皮20％、蔗糖1％、石膏1％，含水量60％、PH自然。
③棉籽殼35％、木屑45％、麩皮18％、蔗糖1％、石膏1％，含水量60％、PH自然。
1、將平菇的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)基配方為PDA培養(yǎng)基，于25℃下培養(yǎng)7-8天，獲得試管菌種。
2、采用前述固體培養(yǎng)基配方。將培養(yǎng)料混合后，加水拌均勻后，裝入750ml的大口瓶中，壓緊封口后在121℃滅菌120分鐘，在無菌室冷卻，接入試管菌種，于25℃培養(yǎng)25-30天，直到菌絲長滿。
液體菌種制備方法液體培養(yǎng)基配方為馬鈴薯20％、葡萄糖2％、蛋白胨0.2％、磷酸二氫鉀0.05％、硫酸鎂0.05％，余下為水，PH自然。
1、將平菇的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)基配方為PDA培養(yǎng)基，于25℃下培養(yǎng)7-8天，獲得試管菌種。
2、將培養(yǎng)液裝入500ml三角瓶內(nèi)(每瓶裝100ml)，培養(yǎng)基配方為前述液體培養(yǎng)基配方，用棉塞和牛皮紙封口，在0.15兆帕壓力下滅菌30分鐘，取出，冷至30時接種。
3、將試管種接種到500ml三角瓶(每瓶裝100ml)液體培養(yǎng)基中，于25℃下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150r/min，培養(yǎng)時間5-7天。
4、將搖瓶菌種接種到25L自動發(fā)酵生產(chǎn)線的發(fā)酵罐中，通氣量為1∶0.8v/(v·min)；攪拌轉(zhuǎn)速為150r/min；接種量為5％；罐壓0.04Mpa；pH為6.0；溫度為25℃；通氣培養(yǎng)72小時，獲得平菇液體菌種。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一1、將野生平菇子實(shí)體組織塊接種到上述菌種分離純化培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，對分離培養(yǎng)的試管每天觀察記錄，及時剔除已污染的試管，挑選出無污染、長勢良好的菌株，獲得平菇分離試管種。
2、將分離試管種菌絲塊接種到上述瓊脂培養(yǎng)基的平板培養(yǎng)皿上進(jìn)行菌種純化，2天后取尖端菌絲塊接種在培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，獲得平菇純化試管種。
3、用平菇純化試管種，制作二級種，生產(chǎn)栽培種，進(jìn)行出菇試驗(yàn)，獲得子實(shí)體，確定分離得到的純菌種為平菇菌種。
4、將Pleurotus ostreatusKZH-2的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)基配方為PDA培養(yǎng)基，25℃下培養(yǎng)7天，獲得試管種。
5、采用固體培養(yǎng)基配方麥?；蚴w粒83％，雜木屑15％，石膏粉或碳酸鈣2％。先把麥?；蚴w粒用清水洗干凈，用2％石灰水浸泡15小時左右，濾出，煮15分鐘，倒出濾水，加入雜木屑，石膏粉或碳酸鈣拌勻，裝入750毫升的專用菌種瓶，封口，在121℃下滅菌120分鐘，在無菌室冷卻，接入試管菌種，于25℃培養(yǎng)30天，直到菌絲長滿，獲得菌種。
實(shí)施例二1、將野生平菇子實(shí)體組織塊接種到上述菌種分離純化培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，對分離培養(yǎng)的試管每天觀察記錄，及時剔除已污染的試管，挑選出無污染、長勢良好的菌株，獲得平菇分離試管種。
2、將分離試管種菌絲塊接種到上述瓊脂培養(yǎng)基的平板培養(yǎng)皿上進(jìn)行菌種純化，2天后取尖端菌絲塊接種在培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，獲得平菇純化試管種。
3、用平菇純化試管種，制作二級種，生產(chǎn)栽培種，進(jìn)行出菇試驗(yàn)，獲得子實(shí)體，確定分離得到的純菌種為平菇菌種。
4、將Pleurotus ostreatusKZH-2的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)基配方為PDA培養(yǎng)基，25℃下培養(yǎng)7天，獲得試管種。
5、采用前述固體培養(yǎng)基配方雜木屑78％、麩皮20％、蔗糖1％、石膏1％，含水量60％、PH自然。將培養(yǎng)料混合，加水拌均勻后，裝入750ml的大口瓶中，壓緊封口后在121℃滅菌120分鐘，在無菌室冷卻，接入試管菌種，于25℃培養(yǎng)30天，直到菌絲長滿，獲得平菇固體菌種。
實(shí)施例三1、將野生平菇子實(shí)體組織塊接種到上述菌種分離純化培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，對分離培養(yǎng)的試管每天觀察記錄，及時剔除已污染的試管，挑選出無污染、長勢良好的菌株，獲得平菇分離試管種。
2、將分離試管種菌絲塊接種到上述瓊脂培養(yǎng)基的平板培養(yǎng)皿上進(jìn)行菌種純化，2天后取尖端菌絲塊接種在培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，獲得平菇純化試管種。
3、用平菇純化試管種，制作二級種，生產(chǎn)栽培種，進(jìn)行出菇試驗(yàn)，獲得子實(shí)體，確定分離得到的純菌種為平菇菌種。
4、將Pleurotus ostreatusKZH-2的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)基配方為PDA培養(yǎng)基，25℃下培養(yǎng)7天，獲得試管種。
5、采用前述固體培養(yǎng)基配方棉籽殼35％、木屑45％、麩皮18％、蔗糖1％、石膏1％，含水量60％、PH自然。將培養(yǎng)料混合，加水拌均勻后，裝入750ml的大口瓶中，壓緊封口后在121℃滅菌120分鐘，在無菌室冷卻，接入試管菌種，于25℃培養(yǎng)30天，直到菌絲長滿，獲得平菇固體菌種。
實(shí)施例四1、將野生平菇子實(shí)體組織塊接種到上述菌種分離純化培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，對分離培養(yǎng)的試管每天觀察記錄，及時剔除已污染的試管，挑選出無污染、長勢良好的菌株，獲得平菇分離試管種。
2、將分離試管種菌絲塊接種到上述瓊脂培養(yǎng)基的平板培養(yǎng)皿上進(jìn)行菌種純化，2天后取尖端菌絲塊接種在培養(yǎng)基斜面上，于25℃下培養(yǎng)7天，獲得平菇純化試管種。
3、用平菇純化試管種，制作二級種，生產(chǎn)栽培種，進(jìn)行出菇試驗(yàn)，獲得子實(shí)體，確定分離得到的純菌種為平菇菌種。
4、將Pleurotus ostreatusKZH-2的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)基配方為PDA培養(yǎng)基，25℃下培養(yǎng)7天，獲得試管種。
5、將試管種接種到500ml三角瓶中(每瓶裝100ml)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方為馬鈴薯20％、葡萄糖2％、蛋白胨0.2％、磷酸二氫鉀0.05％、硫酸鎂0.05％，余下為水，PH自然。于25℃下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150rpm，培養(yǎng)時間7天，獲得一級液體菌種。
將一級液體菌種接種到25L自動發(fā)酵生產(chǎn)線的發(fā)酵罐中，通氣量為1∶0.8v/(v·min)；攪拌轉(zhuǎn)速為150r/min；接種量為5％；罐壓0.04Mpa；pH為6.0；溫度為25℃；通氣培養(yǎng)72小時，獲得平菇液體菌種。
權(quán)利要求
1.一種平菇菌株KZH-2及制備方法，其特征在于所述菌株為(Pleurotus ostreatus)KZH-2，該菌株的保藏號為CGMCC NO.1601。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的平菇菌株KZH-2及制備方法，所述菌株是經(jīng)過常規(guī)固體培養(yǎng)獲得的，其特征在于所述固體培養(yǎng)基配方和液體培養(yǎng)基配方如下固體培養(yǎng)基配方為(1)麥?；蚴w粒83％，雜木屑15％，石膏粉或碳酸鈣2％；或(2)雜木屑78％、麩皮20％、蔗糖1％、石膏1％、含水量60％、PH自然；或(3)棉籽殼35％、木屑45％、麩皮18％、蔗糖1％、石膏1％，含水量60％、PH自然；液體培養(yǎng)基配方為馬鈴薯20％、葡萄糖2％、蛋白胨0.2％、磷酸二氫鉀0.05％、硫酸鎂0.05％，余下為水，PH自然。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種平菇菌株KZH－2及制備方法，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的菌株P(guān)leurotus osteatusKZH－1已于2006年01月25日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO.1601。利用該菌株制備的固體優(yōu)良菌種，應(yīng)用于平菇栽培生產(chǎn)，有著顯著的社會、經(jīng)濟(jì)效益和廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號A01G1/04GK1844351SQ20061001084
公開日2006年10月11日 申請日期2006年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月25日
發(fā)明者張?zhí)? 桂明英, 弓力偉, 羅孝坤 申請人:中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所