專(zhuān)利名稱(chēng)：生物、生化制劑及其配制方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及微生物發(fā)酵及微生物在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用兩方面，具體涉及的是一種芽孢桿菌和木霉孢子、菌絲的發(fā)酵培養(yǎng)，用于防治植物多種病害，促進(jìn)植物生長(zhǎng)的生物、生化農(nóng)藥制劑及其配制方法。
背景技術(shù)：
病蟲(chóng)害是降低農(nóng)作物產(chǎn)量的重要因素。為了控制病害的爆發(fā)和流行，基本上還是依賴(lài)于化學(xué)合成殺菌劑。這又導(dǎo)致了(1)環(huán)境污染，危害人畜安全；(2)高頻度大劑量使用農(nóng)藥，增加了生產(chǎn)成本；對(duì)作物造成傷害，降低了農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)；(3)農(nóng)用抗菌素的使用還導(dǎo)致了抗藥突變小種的出現(xiàn)，新的病害將更嚴(yán)重危害農(nóng)作物；因此，迫切需要發(fā)展環(huán)境友好的病蟲(chóng)害防治劑，開(kāi)發(fā)低殘留、無(wú)公害、高效的病蟲(chóng)害防治劑。
1985年，僅有少量生物防治因子注冊(cè)使用，占農(nóng)藥市場(chǎng)份額不足1％，如今已達(dá)30多個(gè)，占農(nóng)藥市場(chǎng)份額10％。如在柑橘表面噴施假單孢菌，競(jìng)爭(zhēng)病原菌的浸染位點(diǎn)，防治柑橘青霉??；利用熒光假單孢菌產(chǎn)生的抗菌素防治土傳性病害；利用沙雷氏桿菌分泌幾丁質(zhì)酶防解病原真菌胞壁，控制豌豆萎蔫病。利用木霉防治枯萎病。1989年，國(guó)內(nèi)申報(bào)了用柑橘皮的油保存柑橘抑制青霉菌的專(zhuān)利，銀杏黃酮類(lèi)似物防病劑，1996年，誘導(dǎo)抗性劑BTH在德國(guó)注冊(cè)使用，以色列Bar-Ilan大學(xué)以生產(chǎn)連霉素的菌絲防治瓜類(lèi)作物的病害，若干不同的寡糖作為抗病誘導(dǎo)物，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出多個(gè)產(chǎn)品。
近年，多靶標(biāo)的作物病蟲(chóng)害防制劑也有一定發(fā)展。若干植物促生長(zhǎng)制劑在田間均表現(xiàn)有一定的防病作用。專(zhuān)利01123508.x CN1328769A《一種含有水溶性殼聚糖的農(nóng)用組合物》、專(zhuān)利01124042.3 CN1180693C《一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)組合物》、專(zhuān)利03111946.8 CN1435406A《一種制備綠原酸的方法》、專(zhuān)利200410036582.5 CN1634640A《獼猴桃屬植物資源的殺蟲(chóng)應(yīng)用》，這些專(zhuān)利對(duì)病害防治的措施主要還是基于對(duì)病原單方面的控制，或僅是抗病誘導(dǎo)這一單一(寄主)的因素，效果有限。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種在現(xiàn)有生防農(nóng)作物病害基礎(chǔ)上針對(duì)不同靶位的制劑在最適濃度產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，選擇具有協(xié)同或疊加效應(yīng)的物質(zhì)，發(fā)出有誘抗、促生作用的物質(zhì)，該發(fā)酵微生物與保護(hù)細(xì)胞膜物質(zhì)，復(fù)合誘導(dǎo)子，天然抗菌物質(zhì)，微量元素和有益元素等共同組成的多靶位高效的生化-生物農(nóng)藥制劑及其配制方法。
本發(fā)明的目的是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
首先根據(jù)現(xiàn)有專(zhuān)利的技術(shù)和效果可以得出(1)寄主對(duì)病原生物本身具有抗性，此種抗性是可以誘導(dǎo)的；(2)寄主對(duì)病原物只有特定的敏感時(shí)期；(3)某些有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物和簡(jiǎn)單分子如氨基酸，葡萄糖，草酸等可以解除病原物對(duì)寄主的危害；(4)若干無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)可以提高植物抗病性；(5)有益微生物可競(jìng)爭(zhēng)病原物的生態(tài)位。只有針對(duì)不同靶位的制劑在最適濃度才會(huì)產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)；因此，改變片面防治策略，選擇具有協(xié)同或疊加效應(yīng)的物質(zhì)，能開(kāi)發(fā)出有誘抗、促生作用的高效的生化-生物制劑。
由以上結(jié)論，本發(fā)明者認(rèn)為，只有針對(duì)不同靶位的制劑在最適合的濃度才會(huì)產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，具體設(shè)汁方案為(1)以綜合措施進(jìn)行健身栽培，提高作物抗病的基礎(chǔ)，其關(guān)鍵是保護(hù)細(xì)胞膜系統(tǒng)；(2)以不同類(lèi)型的次生代謝物質(zhì)和抑制或殺滅病原物；(3)以綜合手段進(jìn)行抗病誘導(dǎo)等；(4)用有益微生物競(jìng)爭(zhēng)病原物生態(tài)位。
本發(fā)明采用一種含有一株擬康氏木霉(Trichoderma pseudokiningii)和一株芽孢桿菌(Bacillus spp)的混合微生物，與保護(hù)細(xì)胞膜物質(zhì)，復(fù)合誘導(dǎo)子，天然抗菌物質(zhì)，微量元素和有益元素共同組成的多靶位生物--生化制劑。用于防治植物多種病害，促進(jìn)植物生長(zhǎng)。
本發(fā)明生物、生化農(nóng)藥制劑是由以下按重量(份)比的原料配制而成的原料 有效范圍 較好范圍 最佳范圍擬康氏木霉發(fā)酵液 0-50 20-4025-40芽孢桿菌發(fā)酵液 0-50 30-5035-45成分A 0-52.5-5.2 3-5成分B 0-20 5-15 10-15成分C 0-25 10-1510-15成分D 0.5-25 15-2617-25其中擬康氏木霉發(fā)酵液每毫升擬康氏木霉發(fā)酵液中含木霉孢子及菌絲干重00.5克；芽孢桿菌發(fā)酵液每毫升芽孢桿菌發(fā)酵液中芽孢桿菌1×107-1×1010個(gè)；上述成分A中含有以下原料物質(zhì)按重量(份)組成(100克中含)?；撬?0-3020-35 20-30輕稀土 10-60 20-50 30-45維生素C0-105-115-10成分B中含有以下物質(zhì)組成(100克中含)牛蒡寡糖 0-4020-40 25-35殼寡糖 0-4015-25 17-25糊精 0-5025-40 30-40氨基酸 0-1010-20 11-18成分C中含有以下物質(zhì)組成(100克中含)綠原酸 30-70 40-70 45-60銀杏黃銅 20-60 35-55 40-50成分D中含有以下物質(zhì)組成(100克中含)鋅鹽 20-40 25-40 25-35硼酸 0-4015-40 25-35鐵鹽 0-5015-50 27-43上述多靶位高效的生化-生物農(nóng)藥制劑的配制方法為①擬康氏木霉發(fā)酵的制取方法加工中應(yīng)無(wú)菌操作；首先將木霉試管中的菌種加入真菌培養(yǎng)基中，滅菌后在搖床上培養(yǎng)，得種子液，再放進(jìn)種子罐中培養(yǎng)，不斷攪拌，再進(jìn)入二級(jí)種子罐攪拌，然后注入發(fā)酵罐中攪拌混勻，再進(jìn)入高速剪切機(jī)加工，再進(jìn)入雙效濃縮器在45℃的溫度下濃縮制得木霉培養(yǎng)物；②枯草芽孢桿菌發(fā)酵制取方法加工中應(yīng)無(wú)菌操作；將枯草芽孢桿菌試管菌種加入細(xì)菌培養(yǎng)基中，在搖床上培養(yǎng)，得種子液，再放進(jìn)種子罐中培養(yǎng)，不斷攪拌，再進(jìn)入二級(jí)種子罐攪拌，然后注入發(fā)酵罐中攪拌混勻，再進(jìn)入乳化罐中乳化，再進(jìn)入雙效濃縮器在45℃的溫度下濃縮制得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物；③分別將原料中的成分A、B、C在常溫下溶解，再調(diào)制成膏后備用；再將成分D溶解后熬合，然后將調(diào)制好的成分A、B、C、D混合備用；④最后將上述備用的擬康氏木霉培養(yǎng)物、枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物及成分A、B、C、D混合物在配料罐中合并、混勻、乳化，再經(jīng)檢測(cè)合格即為本發(fā)明的成品。
所述的4種成分A、B、C、D，均為生物活性物質(zhì)或生物必須的微量元索，微量元素可以補(bǔ)充作物自身的元素缺乏，在一定程度上，能保護(hù)其細(xì)胞膜，改善作物品質(zhì)，提高作物抗性；生物活性物質(zhì)能有效的抑制或殺滅病原微生物，并且通過(guò)誘導(dǎo)作物產(chǎn)生植保素，提高自身抗性，促進(jìn)作物健康生長(zhǎng)。
本發(fā)明效果非常明顯，由于本發(fā)明是采用一株擬康氏木霉(Trichodermapseudokiningii)和一株芽孢桿菌(Bacillus spp)的混合微生物，并添加了保護(hù)細(xì)胞膜物質(zhì)，復(fù)合誘導(dǎo)子，天然抗菌物質(zhì)，微量元素和有益元素的成分A、B、C、D共同組成的多靶位生物--生化制劑；經(jīng)生產(chǎn)試驗(yàn)，對(duì)防治黃瓜、番茄、茄子、棉花、大豆、甘薯病害具有良好預(yù)防和治療作用，對(duì)枯萎病、黃萎病、霜霉病、白粉病、灰霉病、線(xiàn)蟲(chóng)病和生理性病害和紅蜘蛛和蚜蟲(chóng)有效；可以控制上述病害的發(fā)生，防治效果好于常規(guī)農(nóng)藥；在河北徐水的示范證明，交替使用該藥，每個(gè)大棚殺菌劑投入由400元降為40元，效益非常顯著。
圖1為本發(fā)明原料擬康氏木霉發(fā)酵工藝流程2為本發(fā)明原料枯草芽孢桿菌發(fā)酵工藝流程3為本發(fā)明制劑生產(chǎn)工藝流程圖具體實(shí)施方式
由圖1可知，擬康氏木霉發(fā)酵的制取方法加工中應(yīng)無(wú)菌操作；首先將擬康氏木霉菌種經(jīng)過(guò)PDA平板活化24h，后接到PD液體培養(yǎng)基三角瓶中，28℃，100r/min培養(yǎng)36h，制得種子液，按3％的接種量接到種子罐中，培養(yǎng)攪拌通氣培養(yǎng)36h，進(jìn)入二級(jí)種子罐攪拌通氣培養(yǎng)36h，然后注入發(fā)酵罐中攪拌通氣培養(yǎng)96h，進(jìn)入高速減切機(jī)混勻、包埋，再進(jìn)入雙效農(nóng)縮器在45℃的溫度下濃縮制得擬康氏木霉培養(yǎng)物。
由圖2可看出枯草芽孢桿菌發(fā)酵制取方法加工中應(yīng)無(wú)菌操作；將枯草芽孢桿菌試管菌種經(jīng)過(guò)NA培養(yǎng)基平板活化，接到NA液體培養(yǎng)基中在搖床上培養(yǎng)24h，按3％的接種量進(jìn)行種子罐中攪拌通氣培養(yǎng)24h，再進(jìn)入二級(jí)種子罐攪拌通氣培養(yǎng)24h，然后注入發(fā)酵罐中攪拌通氣培養(yǎng)48h，再進(jìn)入乳化罐中乳化包埋，再進(jìn)入雙效濃縮器在45℃的溫度下濃縮制得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物。
圖3為本發(fā)明生物、生化農(nóng)藥制劑的生產(chǎn)工藝流程圖，先將已制得的枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物與擬康氏木霉培養(yǎng)物合并加入配料罐中混勻；再將成分A、B、C分別溶解、調(diào)膏后加入配料罐中；再將成分D溶解、熬合后加入配料罐中；然后在配料罐中將加進(jìn)的原料混合，再經(jīng)乳化，經(jīng)檢測(cè)合格后進(jìn)行成品分裝入庫(kù)備用。
前面所述的4種成分A、B、C、D，均為生物活性物質(zhì)或生物必須的微量元索，微量元素可以補(bǔ)充作物自身的元素缺乏，在一定程度上，能保護(hù)細(xì)胞膜，改善作物品質(zhì)，提高作物抗性；生物活性物質(zhì)能有效的抑制或殺滅病原微生物，并且通過(guò)誘導(dǎo)作物產(chǎn)生植保素，提高自身抗性，促進(jìn)作物健康生長(zhǎng)。
本發(fā)明中的木霉菌株為擬康氏木霉(Trichoderma pseudokiningii)菌株，是從濟(jì)南市歷城區(qū)玉米秸稈上分離篩選得到的，命名為T(mén)RIP1，已經(jīng)保存在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)；用馬鈴薯固體培養(yǎng)基活化菌株，土豆麩皮培養(yǎng)基(麩皮40g/L，馬鈴薯50g/L，蔗糖20g/L，KH2PO40.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，CaCl20.25g/L，pH5-7，培養(yǎng)溫度28。C、轉(zhuǎn)速20-50RPM、接種量3-7％)，擬康氏木霉在36小時(shí)培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)能達(dá)到100mL發(fā)酵液中含有木霉菌絲干重0.1-1g；擬康氏木霉菌液體培養(yǎng)基為土豆、麩皮培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基含PDA，液體培養(yǎng)活化的菌種36小時(shí)，得擬康氏木霉孢子及菌絲發(fā)酵液。
本發(fā)明的擬康氏木霉也可以以固體培養(yǎng)基進(jìn)行固體發(fā)酵，培養(yǎng)基為7∶3的秸稈粉和麥麩，另添加4％硫酸銨、0.4％磷酸二氫鉀、0.1％硫酸鎂為最佳培養(yǎng)基，28-32℃為適宜培養(yǎng)溫度，30℃為最佳溫度，4％為最佳接種量，96h到達(dá)發(fā)酵高峰。產(chǎn)生孢子作為原料。
本發(fā)明從山東壽光菜園土壤中分離得到一株芽孢桿菌(Bacillus spp)，命名為BAC1，菌種保存在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)；進(jìn)行液體發(fā)酵，培養(yǎng)基為胰蛋白胨、酵母提取物、NaCl，液體培養(yǎng)48小時(shí)達(dá)到30億/ML，也可直接使用配制液體混合菌。
本發(fā)明使用的一組保護(hù)細(xì)胞膜的物質(zhì)是?；撬帷⑤p稀土、維生素C的組合物或任何一種成分--A本發(fā)明使用的抗病誘導(dǎo)子是牛蒡寡糖，殼寡糖，糊精，氨基酸及其組合物，成分--B本發(fā)明使用的天然抗菌物質(zhì)是綠原酸，銀杏黃酮及其組合物，成分--C本發(fā)明使用的植物生長(zhǎng)的微量元素和有益元素是鋅，硼，鐵，成分--D本發(fā)明將TRIP1與BAC1按比例(1∶3-3∶1)混合，制備的固體產(chǎn)品I或液體產(chǎn)品II，然后按照一定比例加入成分A，B，C，D，制備液體和固體產(chǎn)品；同樣本制劑中微生物滅活后也起到良好的防治作用。
本發(fā)明生物、生化制劑具體實(shí)施例如下例1、本發(fā)明生物、生化制劑是由以下按重量(份)比的原料配制而成的擬康氏木霉發(fā)酵液35、芽孢桿菌發(fā)酵液40、成分A4、成分B9、成分C12、成分D20；其中成分A由下列按重量(份)比的原料配制而成的牛磺酸30、輕稀土35、維生素C8；成分B是由下列按重量(份)比的原料配制而成的牛蒡寡糖30、殼寡糖20、糊精32、氨基酸15；成分C是由下列按重量(份)比的原料配制而成的綠原酸55、銀杏黃銅45；成分D是由下列按重量(份)比的原料配制而成的鋅鹽30、硼酸27、鐵鹽35。
例2、本發(fā)明生物、生化制劑是由以下按重量(份)比的原料配制而成的擬康氏木霉發(fā)酵液30、芽孢桿菌發(fā)酵液35、成分A3、成分B7、成分C10、成分D15；其中成分A由下列按重量(份)比的原料配制而成的牛磺酸25、輕稀土25、維生素C 5；成分B是由下列按重量(份)比的原料配制而成的牛蒡寡糖23、殼寡糖17、糊精27、氨基酸12；成分C是由下列按重量(份)比的原料配制而成的綠原酸42、銀杏黃銅35；成分D是由下列按重量(份)比的原料配制而成的鋅鹽27、硼酸18、鐵鹽20。
例3、本發(fā)明生物、生化制劑是由以下按重量(份)比的原料配制而成的擬康氏木霉發(fā)酵液40、芽孢桿菌發(fā)酵液45、成分A5、成分B13、成分C15、成分D25；其中成分A由下列按重量(份)比的原料配制而成的?；撬?5、輕稀土45、維生素C11；成分B是由下列按重量(份)比的原料配制而成的牛蒡寡糖40、殼寡糖25、糊精37、氨基酸19；成分C是由下列按重量(份)比的原料配制而成的綠原酸66、銀杏黃銅53；成分D是由下列按重量(份)比的原料配制而成的鋅鹽38、硼酸36、鐵鹽46。
具體使用方法可以噴施和灌根，間隔時(shí)間7-10天，可以與常規(guī)農(nóng)藥交替使用。
下面用具體實(shí)驗(yàn)實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的明顯效果實(shí)例1接種黃瓜霜霉病，本發(fā)明對(duì)保護(hù)地黃瓜霜霉病的盆栽試驗(yàn)結(jié)果(新疆)
實(shí)例2本發(fā)明對(duì)大棚黃瓜霜霉病的防治效果(青島市既墨)
實(shí)例3本發(fā)明對(duì)保護(hù)地黃瓜白粉病的防治效果
實(shí)例4本發(fā)明對(duì)番茄黃萎+灰霉并發(fā)的防治效果；黃萎病發(fā)病后，其它農(nóng)藥無(wú)效，II灌根一次，12月18日調(diào)查病指，黃萎病和灰霉病分別為對(duì)照76，43處理減為28和14。
實(shí)例5本發(fā)明對(duì)辣椒霜霉病，白粉病并發(fā)的防治效果，I 50倍，II 50，100倍相對(duì)防效分別達(dá)到68，80，59％。
實(shí)例6本發(fā)明對(duì)細(xì)胞膜的保護(hù)作用。將各處理的小麥第1葉位的葉片剪成1cm長(zhǎng)的片段，用清水漂洗，再用蒸餾水沖洗3次，用干凈紗布吸干水分，充分混勻，分別稱(chēng)取各處理的葉片0.5g，置于15ml具塞刻度試管中，緩慢加入10ml蒸餾水，使葉片完全浸沒(méi)在水中，振蕩，并用真空泵抽氣5min，在25℃恒溫水浴中靜置30min，用DDS-11A型電導(dǎo)儀(上海雷磁儀器廠)測(cè)定組織外滲液的電導(dǎo)率。再將此溶液置于沸水浴中煮沸15min，冷卻后測(cè)定其電導(dǎo)率。計(jì)算其相對(duì)電導(dǎo)率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
表本發(fā)明制劑對(duì)黃瓜子葉細(xì)胞膜的保護(hù)作用
實(shí)例7本發(fā)明對(duì)植物光化學(xué)效率的提高作用。光合機(jī)構(gòu)吸收的光能有三個(gè)可能的去向一是用于推動(dòng)光化學(xué)反應(yīng)，引起反應(yīng)中心的電荷分離及后來(lái)的電子傳遞和光合磷酸化，形成用于固定、還原二氧化碳的同化力(ATP和NADPH)；二是轉(zhuǎn)變成熱散失；三是以熒光的形式發(fā)射出來(lái)。由于這三者之間存在此消彼長(zhǎng)的相互競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，所以可以通過(guò)熒光的變化探測(cè)光合作用的變化。由于可以測(cè)定完整葉片的熒光，葉綠素a熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)可以成為原位檢測(cè)光合作用PSII反應(yīng)中心重要步驟的極好的探針。調(diào)制式熒光是測(cè)定PSII光化學(xué)效率(Fv/Fm)的一個(gè)重要工具。Fv/Fm-沒(méi)有遭受環(huán)境脅迫并經(jīng)過(guò)充分暗適應(yīng)的植物葉片PSII最大的或潛在的量子效率指標(biāo)，有時(shí)Fv/Fm也被稱(chēng)為開(kāi)放的PSII反應(yīng)中心的能量捕捉效率，即潛在的PSII的光化學(xué)效率。光受到抑制，光合作用差，總是導(dǎo)致Fv/Fm的降低，反之亦然。因此Fv/Fm的變化可以用作光合作用強(qiáng)弱的診斷指標(biāo)。噴施后一周用植物效率儀測(cè)定光化學(xué)效率。下述數(shù)據(jù)表明本發(fā)明對(duì)幾種植物光化學(xué)效率有明顯促進(jìn)作用。
P＜0.05，顯著性差異
P＜0.1，顯著性差異
P＜0.1，顯著性差異
本發(fā)明“生物、生化制劑及其配制方法和用途”所涉及到的需要微生物菌種保藏的擬康氏木霉菌株和枯草芽孢桿菌，已于2005年8月22日申請(qǐng)并被“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”收藏，收藏地址為北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。該中心建議的分類(lèi)命名分別為擬康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)菌株，保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCCNo.1443；枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌株，保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCCNo.1442。
權(quán)利要求
1.一種生物、生化制劑，其特征在于它是含有一株擬康氏木霉(Trichodermapseudokiningii)和一株芽孢桿菌(Bacillus spp)的混合微生物，以及與保護(hù)細(xì)胞膜物質(zhì)，復(fù)合誘導(dǎo)子，天然抗菌物質(zhì)，微量元素和有益元素共同組成的多靶位生物--生化制劑；擬康氏木霉是從秸稈上分離篩選到的菌株，命名為T(mén)RIPl；芽孢桿菌是從土壤中分離到的一株一株芽孢桿菌，命名為BACl；擬康氏木霉是用馬鈴薯固體培養(yǎng)基活化菌株，土豆麩皮培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)活化的菌株36小時(shí)，得擬康氏木霉孢子及菌絲發(fā)酵液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1生物、生化制劑，其特征在于它是由以下原料按重量份組成的擬康氏木霉發(fā)酵液0-50、芽孢桿菌發(fā)酵液0-50、成分A0-5、成分B0-20、成分C0-25、成分D0.5-25。
3.根據(jù)權(quán)利要求2生物、生化制劑，其特征在于成分A是由以下原料按重量份組成的?；撬?-30、輕稀土10-60、維生素C0-10；成分B是由以下原料按重量份組成的牛蒡寡糖0-40、殼寡糖0-40、糊精0-50、氨基酸0-10；成分C是由以下原料按重量份組成的綠原酸30-70、銀杏黃銅20-60；成分D是由以下原料按重量份組成的鋅鹽20-40、硼酸0-40、鐵鹽0-50。
4.根據(jù)權(quán)利要求1生物、生化制劑，其特征在于它是由以下原料按重量份組成的擬康氏木霉發(fā)酵液20-40、芽孢桿菌發(fā)酵液30-50、成分A2.5-5.2、成分B5-15、成分C10-15、成分D15-26。
5.根據(jù)權(quán)利要求4生物、生化制劑，其特征在于成分A是由以下原料按重量份組成的?；撬?0-35、輕稀土20-50、維生素C5-11；成分B是由以下原料按重量份組成的牛蒡寡糖20-40、殼寡糖15-25、糊精25-40、氨基酸10-20；成分C是由以下原料按重量份組成的綠原酸40-70、銀杏黃銅35-55；成分D是由以下原料按重量份組成的鋅鹽25-40、硼酸15-40、鐵鹽15-50。
6.根據(jù)權(quán)利要求1生物、生化制劑，其特征在于它是由以下原料按重量份組成的擬康氏木霉發(fā)酵液25-40、芽孢桿菌發(fā)酵液35-45、成分A3-5、成分B10-15、成分C10-15、成分D17-25。
7.根據(jù)權(quán)利要求6生物、生化制劑，其特征在于成分A是由以下原料按重量份組成的?；撬?0-30、輕稀土30-45、維生素C5-10；成分B是由以下原料按重量份組成的牛蒡寡糖25-35、殼寡糖17-25、糊精30-40、氨基酸11-18；成分C是由以下原料按重量份組成的綠原酸45-60、銀杏黃銅40-50；成分D是由以下原料按重量份組成的鋅鹽25-35、硼酸25-35、鐵鹽27-43。
8.根據(jù)權(quán)利要求2或4或6生物、生化制劑，其特征在于生物、生化農(nóng)藥制劑是由以下按重量(份)比的原料配制而成的擬康氏木霉發(fā)酵液35、芽孢桿菌發(fā)酵液40、成分A4、成分B9、成分C12、成分D20；其中成分A由下列按重量(份)比的原料配制而成的?；撬?0、輕稀土35、維生素C8；成分B是由下列按重量(份)比的原料配制而成的牛蒡寡糖30、殼寡糖20、糊精32、氨基酸15；成分C是由下列按重量(份)比的原料配制而成的綠原酸55、銀杏黃銅45；成分D是由下列按重量(份)比的原料配制而成的鋅鹽30、硼酸27、鐵鹽35。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2或4或6或8生物、生化制劑的配制方法如下按照原料配比①擬康氏木霉發(fā)酵的制取方法加工中應(yīng)無(wú)菌操作；首先將擬康氏木霉菌種經(jīng)過(guò)PDA平板活化24h，后接到PD液體培養(yǎng)基三角瓶中，28℃，100r/min培養(yǎng)36h，制得種子液，按3％的接種量接到種子罐中，培養(yǎng)攪拌通氣培養(yǎng)36h，進(jìn)入二級(jí)種子罐攪拌通氣培養(yǎng)36h，然后注入發(fā)酵罐中攪拌通氣培養(yǎng)96h，進(jìn)入高速減切機(jī)混勻、包埋，再進(jìn)入雙效濃縮器在45℃的溫度下濃縮制得擬康氏木霉培養(yǎng)物，備用；②枯草芽孢桿菌發(fā)酵制取方法加工中應(yīng)無(wú)菌操作；將枯草芽孢桿菌試管菌種經(jīng)過(guò)NA培養(yǎng)基平板活化，接到NA液體培養(yǎng)基中在搖床上培養(yǎng)24h，得種子液，按3％的接種量進(jìn)入種子罐中攪拌通氣培養(yǎng)24h，再進(jìn)入二級(jí)種子罐攪拌通氣培養(yǎng)24h，然后注入發(fā)酵罐中攪拌通氣培養(yǎng)48h，再進(jìn)入乳化罐中乳化包埋，再進(jìn)入雙效濃縮器在45℃的溫度下濃縮制得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物，備用；③分別將成分A、B、C在常溫下溶解，再調(diào)制成膏后備用；再將成分D溶解后熬合，然后將調(diào)制好的成分A、B、C、D混合備用；④最后將備用的擬康氏木霉培養(yǎng)物、枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物及成分A、B、C、D混合物在配料罐中混勻、乳化，再終檢測(cè)合格即為本發(fā)明的成品。
10.一種權(quán)利要求1或8生物、生化制劑的用途，其特征在于對(duì)黃瓜、辣椒、番茄、棉花、大豆、甘薯病害具有良好預(yù)防和治療作用，對(duì)防治枯萎病、黃萎病、霜霉病、疫病、立枯病、角斑病、白粉病、灰霉病、線(xiàn)蟲(chóng)病，生理性病害和紅蜘蛛和蚜蟲(chóng)有效。
全文摘要
本發(fā)明生物、生化制劑它是含有一株擬康氏木霉(Trichoderma pseudokiningii)和一株芽孢桿菌(Bacillus spp)的混合微生物，以及與保護(hù)細(xì)胞膜物質(zhì)，復(fù)合誘導(dǎo)子，天然抗菌物質(zhì)，如微量元素和有益元素如?；撬帷⑤p稀土、維生素C；牛蒡寡糖、殼寡糖、糊精、氨基酸；綠原酸、銀杏黃銅，鋅鹽、硼酸、鐵鹽等共同組成的多靶位生物－生化制劑；擬康氏木霉從秸稈上分離篩選到的菌株，命名為T(mén)RIP1；芽孢桿菌是從土壤中分離到的，命名為BAC1，均保存在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)；經(jīng)生產(chǎn)試驗(yàn)，用于防治植物多種病害，促進(jìn)植物生長(zhǎng)，保護(hù)細(xì)胞膜和提高植物的光化學(xué)效率；尤其對(duì)黃瓜、番茄、茄子、棉花、大豆、甘薯的枯萎病、黃萎病、霜霉病、白粉病、灰霉病、線(xiàn)蟲(chóng)病和生理性病害和紅蜘蛛和蚜蟲(chóng)有效；好于常規(guī)農(nóng)藥；在河北徐水的示范證明，交替使用I，II，每個(gè)大棚殺菌劑投入由400元降為40元，效益非常顯著。
文檔編號(hào)A01N63/02GK1748511SQ20051004452
公開(kāi)日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2005年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月31日
發(fā)明者陳靠山, 劉景和, 王立華, 耿小青, 王 琦, 張瑞 申請(qǐng)人:山東靠山生物科技有限公司