專利名稱：小分子Toll樣受體(TLR)拮抗劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明一般地涉及免疫學領域。更具體而言，本發(fā)明涉及改變免疫功能的組合物和方法。更具體而言，本發(fā)明涉及影響由Toll樣受體(TLR)分子介導的免疫刺激的組合物和方法。
背景技術：
刺激免疫系統包括刺激先天性免疫和/或適應性免疫，是一種復雜現象，可能對宿主導致保護性或不利的生理后果。近年來，對先天性免疫機理的興趣增加，先天性免疫被認為啟動和支持適應性免疫。部分由于最近發(fā)現稱作Toll樣受體(TLR)的高度保守的模式識別受體蛋白家族被認為作為病原相關分子模式(PAMP)的受體參與先天性免疫，這種興趣因而更高。因此用于調節(jié)先天性免疫的組合物和方法很令人感興趣，因為它們可以影響用于以下疾病的治療方法，包括自身免疫、炎癥、變態(tài)反應、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主疾病(GvCD)、感染、癌癥和免疫缺陷。
最近有很多報告描述某些類型核酸分子的免疫刺激作用，這些核酸分子包括CpG核酸和雙鏈RNA。值得注意的是，最近報道Toll樣受體9(TLR9)識別細菌DNA和CpG DNA。Hemmi H et al.(2000)Nature 408740-5；Bauer S et al.(2001)Proc NatlAcad Sci USA 989237-42。近來也已經報道含IgG和核酸的免疫復合體可以刺激TLR9并參與某些自身免疫疾病中的B細胞激活。Leadbetter EA et al.(2002)Nature 416595-8。
氯喹被認為不僅可用作抗瘧劑而且可用作抗炎劑。盡管其作用機理還不太清楚，氯喹已被用于有效治療多種自身免疫病，包括類風濕性關節(jié)炎(RA)和系統性紅斑狼瘡(SLE)。綜述可見Wallace DJ(1996)Lupus 5 Suppl 1S59-64。最近Macfarlane和同事描述了據報道能抑制免疫系統刺激的多種氯喹(4-氨基喹啉)和阿的平(9-氨基吖啶)的小分子類似物和衍生物。美國專利No.6,221,882；美國專利No.6,479,504；美國專利No.6,521,637；PCT公開申請PCT/US00/16723(WO 00/76982)；和PCT公開申請PCT/US98/13820(WO 99/01154)。Macfarlane和同事報道免疫應答的這些小分子抑制劑甚至以納摩爾濃度使用時也能阻斷免疫刺激性DNA的作用。美國專利No.6,221,882 B1.Macfarlane和同事通過改變有限數量的與氯喹和阿的平相關的4-氨基喹啉和9-氨基吖啶核心結構上的取代基，研究了大量化合物。

發(fā)明內容
本發(fā)明部分基于申請人的下列發(fā)現，即多種小分子，有些已知但不同于Maclarlane等人和Tobe等人描述的那些，可以改變TLR介導的免疫刺激信號傳遞。很多這種化合物抑制TLR信號傳遞，并可用作免疫刺激抑制劑。此處所述組合物和方法可用于在體外和體內抑制免疫刺激。因此這些組合物和方法將可用于多種臨床應用，包括作為治療與不期望免疫活性相關疾病的藥物和方法，所述疾病包括炎癥和自身免疫病。本發(fā)明組合物也可用于制備藥物的方法，所述藥物用于治療與不期望免疫活性相關的疾病，包括多種炎癥和自身免疫病。
令人驚奇的發(fā)現，與Macfarlane等人描述的與氯喹和阿的平相關的那些相比較，具有相似取代基但不同核心結構的分子是強效的免疫調節(jié)性小分子。不受任何理論或機理約束，認為本發(fā)明描述的小分子通過與TLR相互作用而影響免疫刺激。更具體的，認為本發(fā)明所述很多小分子通過TLR拮抗作用而抑制免疫刺激。具體而言，認為本發(fā)明所述很多小分子通過TLR9拮抗作用而抑制免疫刺激。
本發(fā)明在某些方面提供用于改變TLR介導的信號傳遞的方法。每當希望改變TLR介導的、對合適TLR配體或TLR信號傳遞激動劑應答的信號傳遞時，本發(fā)明方法都是有用的。例如，所述方法可用于治療任何以下多種疾病，包括自身免疫、炎癥、變態(tài)反應、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主疾病(GvHD)、感染、膿毒癥、癌癥和免疫缺陷。通常，用于治療包括自身免疫、炎癥、變態(tài)反應、哮喘、移植排斥和GvHD的疾病的方法將利用抑制TLR介導的、對合適TLR配體或TLR信號傳遞激動劑應答的信號傳遞的小分子。通常，用于治療包括感染、癌癥和免疫缺陷的疾病的方法將利用增強TLR介導的、對合適TLR配體應答的信號傳遞的小分子。在某些情況下，所述方法可用于抑制或促進TLR介導的、對TLR配體或TLR信號傳遞激動劑應答的信號傳遞。在某些情況下，所述方法可用于抑制TLR介導的、對TLR配體或TLR信號傳遞激動劑應答的免疫刺激性信號傳遞。在某些情況下，所述方法可用于抑制或促進患者中TLR介導的免疫刺激。在某些情況下，所述方法可用于抑制患者中TLR介導的免疫刺激。在某些情況下，所述方法可用于抑制患者中免疫刺激性核酸相關的應答。
本發(fā)明在某些方面提供用于改變TLR介導的信號傳遞的新型小分子組合物。每當希望改變TLR介導的、對合適TLR配體或TLR信號傳遞激動劑應答的信號傳遞時，本發(fā)明組合物都是有用的。例如，所述小分子可用于治療任何以下多種疾病的方法，包括自身免疫、炎癥、變態(tài)反應、哮喘、移植排斥、GvHD、感染、膿毒癥、癌癥和免疫缺陷。通常，用于治療包括自身免疫、炎癥、變態(tài)反應、哮喘、移植排斥和GvHD的疾病的方法將利用抑制TLR介導的、對合適TLR配體或TLR信號傳遞激動劑應答的信號傳遞的小分子。通常，用于治療包括感染、癌癥和免疫缺陷的疾病的方法將利用增強TLR介導的、對合適TLR配體應答的信號傳遞的小分子。在某些情況下，所述分子可用于抑制或促進TLR介導的、對TLR配體或TLR信號傳遞激動劑應答的信號傳遞的方法。在某些情況下，所述小分子可用于抑制TLR介導的、對TLR配體或TLR信號傳遞激動劑應答的免疫刺激性信號傳遞的方法。在某些情況下，所述小分子可用于抑制或促進患者中TLR介導的免疫刺激的方法。在某些情況下，所述小分子可用于抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法。在某些情況下，所述小分子可用于抑制患者中免疫刺激性核酸相關的應答。
作為本發(fā)明的特征，本發(fā)明方法可與其它藥劑組合施用以獲得對TLR介導的免疫刺激的協同作用。更具體的，盡管此處所述藥劑已經被發(fā)現直接影響TLR并因而直接影響帶TLR的細胞如抗原提呈細胞(APC)，這些藥劑可與影響非APC免疫細胞如T淋巴細胞(T細胞)的其它藥劑聯合使用。這樣的方法有效的在兩種水平引入免疫調節(jié)干預先天性免疫和獲得性免疫。因為先天性免疫被認為啟動和支持獲得性免疫，組合干預是有協同性的。
在本發(fā)明的一個方面中，提供影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法。根據此方面的方法包括使表達TLR的細胞與有效量的式I化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的對TLR配體應答的信號傳遞， 式I其中2是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立選自碳原子(C)、氮原子(N)、氧原子(O)和硫原子(S)，其中B2任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中1和2任選的通過B3橋連形成五員到七員環(huán)(3)，其中B3任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中當A是碳時，(3)不是吡啶；其中2任選的包括不飽和鍵；其中(3)任選的包括不飽和鍵；其中當R2存在時，是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，任選的經N、O或S與Z連接；其中當R3、R4、R5、R6、R7和R8存在時，互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中A是選自C、N、O和S的原子；其中A’、A”和A互相獨立的是R9、-NR9R10、-OR9或-CR9R10，其中R9是氫原子、羥基、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，其中R10任選的不存在或是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
在本發(fā)明的一個方面中，提供抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的如上提供的式I化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞。
在本發(fā)明的一個方面中，提供影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式I化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式I化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向需要這種治療的患者施用有效量的如上提供的式I化合物，以抑制所述患者中的免疫刺激性核酸相關應答。
在一個實施方案中，所述患者沒有需要用式I化合物治療的癥狀。
在根據本發(fā)明前述任意方面的一個實施方案中，A是氮，(3)是五員環(huán)。在一個實施方案中，所述化合物是式II化合物， 式II其中A選自C和N；R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表5中列出的化合物455、470、564、568、593、607、612-614、619-621、636、685、875、878、890、904、918、939、944、1039、1050、1132、1241和1243中的任意一種。
在根據本發(fā)明前述任意方面的一個實施方案中，A是氮而(3)是六員環(huán)，B3是選自C、N、O和S的一個原子。在一個實施方案中，A是氮，3是六員環(huán)，B3是S。在一個實施方案中，所述化合物是式III化合物，
式III其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接，并且其中X選自N、O和S。在某些實施方案中X是S。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表6中列出的化合物53、64、125、149、313、399、529、576、693、797、840和842中的任意一種。
在根據本發(fā)明前述任意方面的一個實施方案中，A是碳，(3)是六員環(huán)，而B3是C或S。在一個實施方案中，所述化合物是式IV化合物， 式IV其中X是C或S，R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表7中列出的化合物43、294、340、346、348、413、491、917、1015、1042、1158、1287和1337中的任意一種。
在根據本發(fā)明前述任意方面的一個實施方案中，A是氮，(3)是七員環(huán)，而B3包括兩個碳原子。在一個實施方案中，所述化合物是式V化合物，
式V其中X和Y互相獨立的是C、N、O或S；R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表8中列出的化合物72、74、99、109、343、488、1013和1352中的任意一種。
在根據本發(fā)明前述任意方面的一個實施方案中，1和2不經B3橋連，A是碳而A’是-OR9。在一個實施方案中，所述化合物是式VI化合物， 式VI其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；R9是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。在一些實施方案中R9和R4連接形成內酯。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表9中列出的化合物65、229、239、306、386、707、793、957、970、974、1161和1308中的任意一種。
在根據本發(fā)明前述任意方面的一個實施方案中，1和2不經B3橋連，A是碳而A’是-NR9R10。在一個實施方案中，所述化合物是式VII化合物，
式VII其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表10中列出的化合物133、267、312、457和510中的任意一種。
在根據本發(fā)明前述任意方面的一個實施方案中，1和2不經B3橋連，A是碳而A’是-CR9R10。在一個實施方案中，所述化合物是式VIII， 式VIII其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表11中列出的化合物93、108、138、144、267、270、308、381、560、778、799、822、833、884、965和1187中的任意一種。
本發(fā)明的一個方面提供影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的式IX化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞，
式IX其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表12中列出的化合物751、858、2000和2001中的任意一種。
在本發(fā)明的一個方面中，提供抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的如上提供的式IX化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞。
在本發(fā)明的一個方面中，提供影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式IX化合物，以抑制或促進所述患者中的TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式IX化合物，以抑制所述患者中的TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一方面提供抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向需要這種治療的患者施用有效量的如上提供的式IX化合物，以抑制所述患者中的免疫刺激性核酸相關應答。
在一個實施方案中，所述患者沒有需要用式IX化合物治療的癥狀。
本發(fā)明的一個方面提供影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的式X化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式X其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表13中列出的化合物431、583、586、792和830中的任意一種。
在本發(fā)明的一個方面中，提供抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的如上提供的式X化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞。
在本發(fā)明的一個方面中，提供影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式X化合物，以抑制或促進所述患者中的TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式X化合物，以抑制所述患者中的TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一方面提供抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向需要這種治療的患者施用有效量的如上提供的式X化合物，以抑制所述患者中的免疫刺激性核酸相關應答。
在一個實施方案中，所述患者沒有需要用式X化合物治療的癥狀。
本發(fā)明的一個方面提供影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的式XI化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式XI其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、R11和R12中的每一個是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；X是C、N、O或S。在一些實施方案中，R2包括環(huán)烷基、苯甲基或苯基。在一些實施方案中X是N。在一些實施方案中R11和R12連接成五員或六員環(huán)的螺基團。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表14中列出的化合物891、926、1137、1213、1248、1320和1322中的任意一種。
在本發(fā)明的一個方面中，提供抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的如上提供的式XI化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞。
在本發(fā)明的一個方面中，提供影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式XI化合物，以抑制或促進所述患者中的TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式XI化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一方面提供抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向需要這種治療的患者施用有效量的如上提供的式XI化合物，以抑制所述患者中的免疫刺激性核酸相關應答。
在一個實施方案中，所述患者沒有需要用式XI化合物治療的癥狀。
本發(fā)明的一個方面提供影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的式XII化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式XII其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表15中列出的化合物101、600和609中的任意一種。
在本發(fā)明的一個方面中，提供抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的如上提供的式XII化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞。
在本發(fā)明的一個方面中，提供影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式XII化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式XII化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一方面提供抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向需要這種治療的患者施用有效量的如上提供的式XII化合物，以抑制所述患者中的免疫刺激性核酸相關應答。
在一個實施方案中，所述患者沒有需要用式XII化合物治療的癥狀。
本發(fā)明的一個方面提供影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的式XIII化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式XIII其中2’是五員到七員雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2’任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中2’任選的包括不飽和鍵；其中R4、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；其中A”是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表16中列出的化合物990、1003、1091、1142、1185、1212、1217、1224、1244和1334中的任意一種。
在本發(fā)明的一個方面中，提供抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的如上提供的式XIII化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞。
在本發(fā)明的一個方面中，提供影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式XIII化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式XIII化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一方面提供抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向需要這種治療的患者施用有效量的如上提供的式XIII化合物，以抑制所述患者中的免疫刺激性核酸相關應答。
在涉及式XIII化合物的前述每一個方面中，在一個實施方案中A”是選自環(huán)氨基、烷氨基、二烷基氨基、呋喃基、苯基、噻吩基、氮雜雙環(huán)辛基、氮雜雙環(huán)庚基及其任意組合的取代烷基。在一個實施方案中，所述環(huán)氨基是哌嗪基(piperazino)、哌啶基(piperidino)、吡咯烷基(pyrrolidino)、咪唑基、吡啶基或嗎啉基(morpholino)。
在一個實施方案中，所述患者沒有需要用式XIII化合物治療的癥狀。
本發(fā)明的一個方面提供影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的式XIV或式XV化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式XIV
式XV其中R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。在多種具體實施方案中，所述化合物是下表17中列出的化合物807、1163和1367中的任意一種。
在本發(fā)明的一個方面中，提供抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達TLR的細胞與有效量的如上提供的式XIV或式XV化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞。
在本發(fā)明的一個方面中，提供影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式XIV或式XV化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患者施用有效量的如上提供的式XIV或式XV化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激，所述患者具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激的風險。
本發(fā)明的一方面提供抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向需要這種治療的患者施用有效量的如上提供的式XIV或式XV化合物，以抑制所述患者中的免疫刺激性核酸相關應答。
在一個實施方案中，所述患者沒有需要用式XIV或式XV化合物治療的癥狀。
在本發(fā)明前述的每一個方面中，在一些實施方案中，R2是取代或未取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。在一些實施方案中，R2是由選自烷基、烷氧基、烷氧烷基、酯基、烷氨基、二烷基氨基、環(huán)氨基、鹵素原子及其任意組合的一個或多個取代基取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。在一些實施方案中，R2是由選自烷氨基、二烷基氨基和環(huán)氨基一個或多個取代基取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。在一些實施方案中，所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
在本發(fā)明前述的每一個方面中，在一些實施方案中，R9是選自環(huán)氨基、烷氨基、二烷基氨基、呋喃基、苯基、噻吩基、氮雜雙環(huán)辛基、氮雜雙環(huán)庚基及其任意組合的取代烷基。在一些實施方案中，所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
在本發(fā)明前述的每一個方面中，在一些實施方案中，R4和R5的每一個是氫原子。在一些實施方案中R5和R8的每一個是氫原子。在一些實施方案中R4、R5和R8的每一個是氫原子。在一些實施方案中R10是氫原子。
在本發(fā)明前述的每一個方面中，在一種實施方案中，所述TLR是TLR9。在一種實施方案中，所述TLR的配體是免疫刺激性核酸。在一種實施方案中，所述免疫刺激性核酸是CpG核酸。
在本發(fā)明前述的每一個方面中，在一種實施方案中，所述TLR是TLR8。在一種實施方案中，所述TLR的配體是TLR8的天然配體。在一種實施方案中，所述TLR的配體是resiquimod(R848)。
在本發(fā)明前述的每一個方面中，在一種實施方案中，所述TLR是TLR7。在一種實施方案中，所述TLR的配體是TLR7的天然配體。在一種實施方案中，所述TLR的配體是R848。
在本發(fā)明前述的每一個方面中，在一種實施方案中，所述TLR是TLR3。在一種實施方案中，所述TLR的配體是雙鏈RNA。在一種實施方案中，所述TLR的配體是poly(I:C)。
本發(fā)明部分基于申請人認識到氯喹的已知代謝物的抗瘧活性與相關小分子抑制TLR9的生物活性之間的潛在聯系。對于氯喹，主要的代謝物是單去乙基氯喹和雙去乙基氯喹。
氯喹單去乙基(1) 雙去乙基(11)單去乙基氯喹在人體內的半壽期比氯喹長1.5倍(649小時與432小時)。de Vries PJ etal.(1994)Drug Invest 8143-9。沒有獲得雙去乙基氯喹的數據。此外，羥基氯喹的主要代謝物是去乙基羥基氯喹、單去乙基氯喹和雙去乙基氯喹。在瘧疾治療中，氯喹和單去乙基氯喹抗鐮狀瘧原蟲的效能大致相等，而雙去乙基氯喹大約有一半的活性。Aderoumnu AF(1984)Ann Trop Med Parasitol.78(6)581-5。另外因為側鏈是手性的，R和S氯喹有不同活性，優(yōu)選生成(S)-(+)-單去乙基氯喹。Ansari AM et al.(1994)J PharmSci.83(7)1040-2。因此申請人提出假設氯喹和羥基氯喹從長壽的去乙基代謝物衍生其療效的實質性部分，并且這種關系可以延伸到與TLR9的結合。
Macfarlane已經驗證了氯喹、羥基氯喹、單去乙基氯喹和雙去乙基氯喹。在其測試中這些化合物的IC50是氯喹，1.1×10-7M；羥基氯喹，4.1×10-7M單去乙基氯喹，7.08×10-7M；和雙去乙基氯喹，18.6×10-7M。因此從這個數據從氯喹丟失一個乙基使效能降低約7倍，而丟失兩個乙基則使效能降低約18倍。
本發(fā)明在某些方面涉及與用于抑制TLR9信號傳遞和免疫激活的某些4-伯氨基喹啉化合物有關的組合物和方法。在某些方面本發(fā)明也涉及與某些喹畔啉化合物有關的組合物和方法，其中一些所述化合物與本發(fā)明的4-伯氨基喹啉化合物結構相關，它們也可用于抑制TLR9信號傳遞和免疫激活。
根據本發(fā)明驚人地發(fā)現，本發(fā)明的4-伯氨基喹啉化合物和喹唑啉化合物是高活性的TLR9信號傳遞活性抑制劑并且活性相似。根據本發(fā)明還驚人地發(fā)現，盡管它們具有高度的結構和生物學相似性，與所述喹啉化合物比較，所述喹唑啉分子表現出顯著改善的體內毒性譜。
本發(fā)明的一個方面提供具有結構式XVI的新的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽， 式XVI其中X不存在或是芳基、烷基、雜環(huán)基或苯乙烯基；R1和R2互相獨立的是氫原子或取代或未取代的烷基、烷烯基或芳基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)；R3是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R3任選地組合形成雜環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR8R9或NR10，其中R8、R9和R10互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；并且R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R4、R5、R6和R7的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
在一個實施方案中，R5和R6互相獨立的是鹵素原子或烷氧基。在一個實施方案中，R5和R6互相獨立的是氯原子或甲氧基。
在一個實施方案中X不存在或是芳基；NR1R2是雜環(huán)胺或是NR8(CH2)nNR9R10，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R8、R9和R10互相獨立的是氫原子或烷基；R3是氫原子；
Y是芳基或是NR11，其中R11是氫原子或芳基或烷基；L不存在或是C2-C6的烷基；并且R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X不存在或是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基或是NR8(CH2)nNR9R10，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R8是氫原子，R9和R10互相獨立的是烷基；R3是氫原子；Y是NH；L是C2-C6的烷基；并且R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X是苯基；NR1R2是連接到所述苯基X對位的 Y是NH；L是-(CH2)n-，其中n是2到6的整數，包括2和6在內；并且R3、R4、R5、R6和R7中的每一個是氫原子。
在前述的每一個實施方案中，所述組分任選的是藥學上可接受的水合物或鹽形式。
本發(fā)明的一個方面提供抑制經TLR的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性TLR的細胞與有效量的具有結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以抑制經TLR的信號傳遞，
式XVII其中X不存在或是氮、氧或硫原子或SO或SO2基團；R1是氫原子或取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基；R2是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR7R8或NR9，其中R7、R8和R9互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L不存在或是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；并且R3、R4、R5和R6互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R3、R4、R5和R6的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
本發(fā)明的一個方面提供抑制經TLR的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性TLR的免疫細胞(a)在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下和有效量的TLR信號激動劑接觸，以刺激經TLR的信號傳遞，并(b)和有效量的具有如上定義的結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分接觸，以與缺少取代4-伯氨基喹啉組分下TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞相比，抑制TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞。
在一個實施方案中，所述TLR是TLR9，所述TLR信號激動劑是TLR9信號激動劑。在一個實施方案中所述TLR信號激動劑是CpG DNA，它可以是寡聚脫氧核苷酸(ODN)。
在一個實施方案中，所述TLR信號激動劑是免疫復合體。在一個實施方案中，所述TLR信號激動劑是包括核酸的免疫復合體。在一個實施方案中，所述TLR信號激動劑是所包括核酸為自身DNA的免疫復合體。在一個實施方案中，所述TLR信號激動劑是所包括核酸為自身RNA的免疫復合體。
本發(fā)明的一個方面提供抑制對抗原性物質的免疫應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞(a)在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下和有效量的抗原性物質接觸，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答，并(b)和有效量的具有如上述結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分接觸，以與缺少取代4-伯氨基喹啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比，抑制對所述抗原性物質的免疫應答。
在一個實施方案中，所述免疫應答是先天性免疫應答。在一個實施方案中，所述免疫應答包括適應性免疫應答。
在本發(fā)明的一個方面中，提供治療患者自身免疫疾病的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患有自身免疫疾病的患者施用有效量的具有如上述結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分，以治療所述自身免疫病。在一個實施方案中，所述自身免疫病選自系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、斯耶格倫綜合征、多肌炎、脈管炎、韋格納肉芽腫、結節(jié)病、強直性脊柱炎、賴特綜合征、牛皮癬性關節(jié)炎和貝赫切特綜合征。在一個具體實施方案中，所述自身免疫病是系統性紅斑狼瘡。在一個具體實施方案中，所述自身免疫病是類風濕性關節(jié)炎。在一個實施方案中，所述患者是人。在一個實施方案中，所述自身免疫病是與免疫復合體相關的疾病。
本發(fā)明的一個方面提供本發(fā)明的具有結構式XVIII的新的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，
式XVIII其中X不存在或是芳基、烷基、雜環(huán)基或苯乙烯基，如果X是苯基，NR1R2是雜環(huán)的部分或是二胺；R1和R2互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)；Y是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成取代或未取代的雜環(huán)；L是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)。
在一個實施方案中，R6和R7互相獨立的是鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，R6和R7互相獨立的是氯原子或甲氧基。
在一個實施方案中X不存在或是芳基；NR1R2是雜環(huán)胺或是NR9(CH2)nNR10R11，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基；Y是芳基或是NR12，其中R12是氫原子或芳基或烷基；
L不存在或是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X不存在或是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基或是NR9(CH2)nNR10R11，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R9是氫原子，R10和R11互相獨立的是烷基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是甲基或乙基或R3和R4任選地組合形成嗎啉基；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X是苯基；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；并且R5、R6、R7和R8中的每一個是氫原子。
在一個實施方案中，X是苯基；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4組合形成嗎啉基；并且
R5、R6、R7和R8中的每一個是氫原子。
在一個實施方案中，X不存在；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是甲基或乙基，或R3和R4任選地組合形成嗎啉基；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X不存在；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；R6和R7都是甲氧基；并且R5和R8都是氫原子。
在一個實施方案中，X不存在；NR1R2是N-苯基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；R6和R7都是甲氧基；并且R5和R8都是氫原子。
在一個實施方案中，X不存在；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4組合形成嗎啉基；R6和R7都是甲氧基；并且
R5和R8都是氫原子。
在前述的每一個實施方案中，所述組分任選的是藥學上可接受的水合物或鹽形式。
本發(fā)明的一個方面提供抑制經TLR的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性TLR的細胞與有效量的具有結構式XIX的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以抑制經TLR的信號傳遞， 式XIX其中X是取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基，任選的經氮、氧或硫原子或經SO或SO2基團與喹唑啉連接；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成雜環(huán)；L不存在或是氫原子、含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
本發(fā)明的一個方面提供抑制經TLR的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性TLR的免疫細胞
(a)在缺少喹唑啉組分下和有效量的TLR信號激動劑接觸，以刺激經TLR的信號傳遞，并(b)和有效量的具有如上定義的結構式XIX的喹唑啉組分接觸，以與缺少喹唑啉組分下TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞相比，抑制TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞。
在一個實施方案中，所述TLR是TLR9，所述TLR信號激動劑是TLR9信號激動劑。在一個實施方案中所述TLR信號激動劑是CpG DNA，它可以是寡聚脫氧核苷酸(ODN)。
在一個實施方案中，所述TLR信號激動劑是包括核酸的免疫復合體。
本發(fā)明的一個方面提供抑制對抗原性物質的免疫應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞(a)在缺少喹唑啉組分下和有效量的抗原性物質接觸，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答，并(b)和有效量的具有如上述結構式XIX的喹唑啉組分接觸，以與缺少喹唑啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比，抑制對所述抗原性物質的免疫應答。
在一個實施方案中，所述免疫應答是先天性免疫應答。在一個實施方案中，所述免疫應答包括適應性免疫應答。
在本發(fā)明的一個方面中，提供治療患者自身免疫疾病的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患有自身免疫疾病的患者施用有效量的具有如上述結構式XIX的喹唑啉組分，以治療自身免疫病。在一個實施方案中，所述自身免疫病選自系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、斯耶格倫綜合征、多肌炎、脈管炎、韋格納肉芽腫、結節(jié)病、強直性脊柱炎、賴特綜合征、牛皮癬性關節(jié)炎和貝赫切特綜合征。在一個具體實施方案中，所述自身免疫病是系統性紅斑狼瘡。在一個具體實施方案中，所述自身免疫病是類風濕性關節(jié)炎。在一個實施方案中，所述患者是人。在一個實施方案中，所述自身免疫病是如上述與免疫復合體相關的疾病。


圖1表示式II化合物的代表性分子化合物613(鹽酸去氫駱駝蓬堿)、878(3-羥甲基-β-咔啉)和470(norharman)對應答CpG ODN 2006(5′-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3′；SEQ ID NO1)的TLR9信號傳遞的濃度依賴性抑制作用。
圖2是表示特定喹啉和喹唑啉化合物在小鼠中的體內毒性測試結果的一對圖。圖2A表示平均體重的變化(克)，而圖2B表示用二甲基亞砜(DMSO)對照(閉合圓圈)、化合物CMZ 203-43(此處也稱為203-43)施用1mg和4mg(分別是開放和閉合的三角形)、化合物CMZ 203-34施用1mg和4mg(分別是開放和閉合的菱形)、和化合物CMZ 203-49施用1mg和4mg(分別是開放和閉合的倒三角形)處理小鼠5天的平均體重。每個處理組N＝3。接受4mg CMZ 203-43的組患病并在第3天處死。
圖3是柱狀圖，表示腹膜內施用單劑量特定喹啉和喹唑啉化合物5天后測量的小鼠的總體和分化白細胞計數。每個處理組N＝3。
圖4是柱狀圖，表示用PBS對照或喹啉化合物(203-43)或多種指明的喹唑啉化合物(203-34、203-49或203-51)預處理后對CpG ODN 2006誘導IP-10(pg/ml)的體內抑制作用。每組N＝5。
圖5是柱狀圖，表示用PBS對照或喹啉化合物(203-43)或多種指明的喹唑啉化合物(203-34、203-49或203-51)預處理后對CpG ODN 2006誘導TNF-α(pg/ml)的體內抑制作用。每組N＝5。
具體實施例方式
本發(fā)明提供抑制免疫應答的新的組合物和方法，所述免疫應答包括參與臨床疾病的免疫應答，所述臨床疾病特征在于自身免疫病和免疫復合體相關疾病。除了此處公開的新組分以外，還包括4-伯氨基喹啉和結構相似的喹唑啉，本發(fā)明也提供將這些和其它類化合物中的已知組分用于抑制免疫應答的方法，所述免疫應答包括參與臨床疾病的免疫應答，所述臨床疾病特征在于自身免疫病和免疫復合體相關疾病。
本發(fā)明部分基于申請人在TLR9信號傳遞的體外測試中篩選小分子化合物庫時的發(fā)現，所述TLR9信號傳遞是對免疫刺激性CpG寡聚脫氧核苷酸(ODN)的應答。已經觀察到，所述庫中的某些小分子可有效改變對CpG ODN應答的TLR9信號傳遞。基于初步篩選結果，選擇另外的化合物再進行篩選。重要的是，如此鑒定的小分子不同于Macfarlane和同事所述的那些。
根據本發(fā)明已經發(fā)現，具有某些最小特性的某些小分子能調節(jié)TLR信號傳遞，例如在存在PAMP或其它TLR配體或作為對它們的應答。一些所述小分子是TLR信號傳遞的強效抑制劑，因而可用于抑制TLR介導的免疫刺激。很多但非全部所述小分子的最小特性可以總結如下包括至少兩個環(huán)的核心結構，它們可以融合或不融合，其中至少一個環(huán)含有氮原子和/或具有含氮原子的側鏈。某些所述分子甚至在不存在氮原子時仍然有效。
已經觀察到，融合的三環(huán)結構如阿的平(quinacrine)作為TLR介導的免疫刺激抑制劑典型的比融合的兩環(huán)結構如氯喹效力強一個數量級。例如，據報道阿的平的EC50是約8nM，其中EC50是在存在抗表面IgM條件下CpG-ODN對WEHI231B細胞攝入胸腺嘧啶作用的半數最大抑制所需要的濃度。美國專利No.6,479,504 B1。根據本發(fā)明也已經發(fā)現，連接含氮環(huán)取代基的融合兩環(huán)核心結構可以與融合三環(huán)結構如阿的平有同樣強的效力。具體的，這些化合物可表現低納摩爾范圍的EC50。在某些實施方案中，所述含氮環(huán)取代基是叔胺封端的C2-C6烷基，如甲基乙基胺、二乙胺、二甲胺，或含至少一個氮的環(huán)。
不受任何具體理論或機制的限制，本發(fā)明人認為含環(huán)的核心結構和側鏈取代基都對親和性和療效有貢獻。發(fā)明人認為，具有高親和力核心結構和低親和力取代基的分子與具有低親和力核心結構和高親和力取代基的分子同樣有效。
很多年來已經觀察到用于影響免疫系統之外目的的某些常見類型藥物實際上具有包括免疫抑制的副作用。例如，已經報道吩噻嗪氯丙嗪(phenothiazinechlorpromazine)可抑制白介素2(IL-2)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)和干擾素γ(IFN-γ)的信使RNA表達。Schleuning MJ et al.(1989)Eur J Immunol 191491-6。在另外的研究中，報道氯丙嗪使豚鼠對二硝基氯苯的接觸超敏性降低。Descotes J et al.(1982)JNeuroimmunol 221-5。另一項研究中報道急性高劑量施用三環(huán)抗抑郁藥物丙咪嗪抑制脂多糖(LPS)誘導的TNF-α增加，但對LPS誘導的白介素1β(IL-1β)或白介素10(IL-10)影響很小或沒有影響。Dredge K et al.(1999)Int J Immunopharm 21663-73。
組胺是廣泛承認的立即超敏反應和炎癥的介質，它們主要是肥大細胞和嗜堿性細胞介導的免疫現象。組胺的多效作用通過三種類型膜相關組胺受體介導，它們是組胺H1受體(H1R)、組胺H2受體(H2R)和組胺H3受體(H3R)。這些受體的藥理抑制劑是已知的，包括吡拉明和曲吡那敏(H1R)；西咪替丁、法莫替丁和雷尼替丁(H2R)；和硫丙咪胺和clobenpropit(H3R)。最近報道經H1R的信號傳遞增強T細胞和B細胞抗原受體介導的應答。Banu Y et al.(1999)J Exp Med 189673-82。據報道來源于H1R缺失(H1R-/-)小鼠的T細胞和B細胞對LPS有正常應答。Banu等人還報道施用H2R特異性拮抗劑法莫替丁進一步抑制H1R-/-小鼠中T細胞和B細胞抗原受體介導的應答。Jutel和同事最近報道在他們的T細胞研究中，CD4+T細胞的Th1亞群優(yōu)先表達H1R，而Th2細胞優(yōu)先表達H2R。他們還報道組胺通過觸發(fā)H1R而增強Th1-型應答，H1R-/-小鼠中Th1細胞因子IFN-γ水平受抑制而Th2細胞因子IL-4和IL-13水平增加。Jutel M et al.(2001)Nature 413420-5。
相比較而言，對于樹突細胞(DC)，Mazzoni和其他人已經報道在LPS刺激的單核細胞來源的DC中組胺抑制IL-12產生并刺激IL-10分泌，導致從Th1向Th2極化的免疫應答的轉變。Mazzoni A et al.(2001)J Clin Invest 1081865；Caron G et al.(2001)J Immunol 1666000-6。最近Mazzoni等人也報道他們觀察到在對暴露于CpG ODN或活流感病毒的應答中，組胺通過作用于H2R而抑制IFN-α的主要生成者類漿細胞型DC(pDC)釋放I型IFN和TNF-α。Mazzoni A et al.(2003)J Immunol 1702269-73。最后，近來報道，組胺通過H2R作用于單核細胞/巨噬細胞而抑制NADPH氧化酶，氧自由基形成的關鍵酶，導致保護自然殺傷(NK)細胞和T細胞抵抗氧自由基誘導的功能異常和凋亡。Hellstrand K(2002)Semin Oncol 29(3 Suppl 7)35-40。
定義除非另外定義，此處所用的所有技術和科學術語與本發(fā)明所屬領域普通技術人員常規(guī)理解的具有相同意思。
如此處所用，術語“適應性免疫應答”表示任何類型的抗原特異性免疫應答。適應性免疫應答涉及淋巴細胞，在本領域也被稱為特異性免疫應答，其特征是免疫記憶，由此對第二次或之后暴露于抗原具有比初次暴露于所述抗原更強的應答。術語適應性免疫應答包括體液(抗體)免疫和細胞介導的(細胞)免疫。
如此處所用，“變態(tài)反應”表示對物質(變應原)的獲得性超敏反應。變態(tài)反應疾病包括濕疹、變應性鼻炎、花粉病(hay fever)、哮喘、風疹(蕁麻疹)和食物變態(tài)反應，以及其它特異性變態(tài)反應疾病。
如此處所用，術語“抗原性物質”表示誘導適應性(特異性)免疫應答的任何物質。抗原典型的是能被T細胞抗原受體、抗體或B細胞抗原受體特異性結合的任何物質?？乖晕镔|包括但不限于肽、蛋白質、碳水化合物、脂、磷脂、核酸、自體有效物質和激素?？乖晕镔|進一步具體包括歸類于變應原、癌癥抗原和微生物抗原的抗原。
如此處所用，“哮喘”表示一種呼吸系統疾病，其特征是炎癥、氣道變狹窄和氣道對吸入物的反應性增加。盡管并不限于此，哮喘經常與特應性或過敏性癥狀相關。例如通過暴露于變應原、暴露于冷空氣、呼吸道感染和勞累，哮喘可以突然發(fā)生。
如此處所用，術語“自身免疫病”和等價的“自身免疫癥”和“自身免疫”表示免疫學介導的對來源于宿主的組織或器官的急性或慢性損傷。該術語包括細胞和抗體介導的自身免疫現象，以及器官特異性和器官非特異性自身免疫。自身免疫病包括胰島素依賴性糖尿病、類風濕性關節(jié)炎、系統性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、動脈硬化癥和炎性腸病。自身免疫病也包括但不限于強直性脊柱炎、自身免疫性溶血性貧血、貝赫切特綜合征、古德帕斯徹綜合征、格雷夫斯病、急性感染性多神經炎、橋本甲狀腺炎、特發(fā)性血小板減少、重癥肌無力、惡性貧血、結節(jié)性多動脈炎、多肌炎/皮肌炎、原發(fā)性膽硬化、牛皮癬、結節(jié)病、硬化性膽管炎、斯耶格倫綜合征、系統性硬化(硬皮病和CREST綜合征)、高安動脈炎(takayasu′s arteritis)、顳動脈炎(temporal arteritis)和韋格納肉芽腫。自身免疫病也包括某些與免疫復合體相關的疾病。
如此處所用，術語“癌癥”和等價的“腫瘤”表示在患者中存在可檢測的宿主來源的異常復制細胞的疾病。癌癥可以是惡性或非惡性癌癥。癌癥或腫瘤包括但不限于膽管癌；腦癌、乳腺癌；宮頸癌；絨毛膜癌；結腸癌；子宮內膜癌；食管癌；胃癌；上皮內腫瘤、白血病；淋巴瘤；肝癌；肺癌(例如小細胞和非小細胞肺癌)；黑色素瘤；神經母細胞瘤；口腔癌；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；直腸癌；腎癌；肉瘤；皮膚癌；睪丸癌；甲狀腺癌；以及其它癌和肉瘤。癌可以是原發(fā)的或轉移性的。
如此處所用，術語“CpG DNA”表示含有胞嘧啶-鳥嘌呤(CG)二核苷酸的免疫刺激性核酸，其中的C殘基未甲基化。CpG核酸對免疫調節(jié)的作用已經在下列文獻中廣泛描述美國專利，如美國專利No.6,194,388；6,207,646；6,239,116和6,218,371；和公開的國際專利申請，如WO 98/37919，WO 98/40100，WO 98/52581和WO 99/56755。這些專利和公開專利申請的全部內容引入此處作為參考。整個免疫刺激性核酸可以是未甲基化的或部分是未甲基化的，但所述5’-CG-3’的至少C必須未甲基化。
CpG DNA包括天然存在的免疫刺激性核酸，如已經在細菌DNA和質粒中發(fā)現的，以及合成的寡聚脫氧核苷酸(ODN)。
在一個實施方案中，所述CpG DNA是CpG ODN，其堿基序列是5′-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3′(ODN 2006；SEQ ID NO1)。
CpG ODN已經進一步根據結構和功能分成至少以下三種類型，它們所有都包括在如此處所用的術語CpG DNA范圍內B-類CpG ODN，如ODN 2006，包括原始描述的免疫刺激性CpG ODN，特征性激活B細胞和NK細胞，但不誘導或僅弱誘導I型干擾素(如IFN-α)的表達。A-類CpG ODN，如公開PCT國際申請WO 01/22990中描述的，其中有CpG基序，包括嵌合型磷酸二酯/硫代磷酸酯骨架，并特征性的激活NK細胞，誘導類漿細胞型樹突細胞表達大量IFN-α，但不激活或僅弱激活B細胞。A-類CpG ODN的實例是5′-G*G*G_G_G_A_C_G_A_T_C_G_T_C_G*G*G*G*G*G-3′(ODN 2216，SEQ ID NO2)，其中“*”代表硫代磷酸酯，“_”代表磷酸二酯。C-類CpGODN中有CpG，包括整個硫代磷酸酯骨架，包括富含GC的回文或近回文區(qū)域，并能激活B細胞，誘導IFN-α表達。C-類CpG ODN已經描述于例如公開的美國專利申請2003/0148976。C-類CpG ODN的實例是5′-TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG-3′(ODN 2395；SEQ ID NO3)。至于所述多種CpG ODN的綜述，也見Vollmer J et al.(2004)Eur J Immunol 34251-62。
如此處所用，“細胞因子”表示通過特異性受體作用于免疫細胞而影響所述免疫細胞的激活狀態(tài)和功能的多種可溶性蛋白或糖蛋白中的任意一種。細胞因子包括干擾素、白介素、腫瘤壞死因子、轉化生長因子β、集落刺激因子(CSF)、趨化因子等。多種細胞因子影響先天性免疫、獲得性免疫或同時影響兩者。細胞因子具體包括但不限于IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、TNF-α、TNF-β、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)和粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)。趨化因子具體包括但不限于IL-8、IP-10、I-TAC、RANTES、MIP-1α、MIP-1β、Gro-α、Gro-β、Gro-γ、MCP-1、MCP-2和MCP-3。
多數成熟CD4+T輔助細胞可以歸類于兩種細胞因子相關的、交叉調節(jié)的亞群或表型中的一種Th1或Th2。Th1細胞與IL-2、IL-3、IFN、GM-CSF和高水平TNF-α相關。Th2細胞與IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、GM-CSF和低水平TNF-α相關。Th1亞群同時促進細胞介導的免疫和特征是在小鼠中免疫球蛋白類型轉換成IgG2a的體液免疫。Th1應答也可與遲發(fā)型超敏反應和自身免疫病相關。Th2亞群主要誘導體液免疫并在小鼠中誘導免疫球蛋白類型轉換成IgE和IgG1。與Th1應答相關的抗體同種型一般具有良好的中和與調理能力，而與Th2應答相關的抗體同種型更多與變態(tài)反應性應答相關。
已經表明有幾種因素影響Th1或Th2譜的定型。最佳表征的調節(jié)因子是細胞因子。IL-12和是正Th1調節(jié)因子和負Th2調節(jié)因子。IL-12促進IFN-γ生成，而IFN-γ向IL-12提供正反饋。在建立Th2細胞因子譜中顯示需要IL-4和IL-10，它們還下調Th1細胞因子產生；IL-4的作用在有些情況下超過IL-12。IL-13顯示可以與IL-4相似的方式抑制LPS誘導的單核細胞表達炎性細胞因子，包括IL-12和TNF-α。
如此處所用，“有效量”表示為達到或促進期望結果而必需或充分的任何量。有些情況下有效量是治療有效量。治療有效量是為在患者中促進或達到期望生物學效應必需或充分的任何量。對任何具體應用的有效量可根據這些因素而變化，這些因素如待治療疾病或病癥、施用的特定藥劑、個體大小或疾病或病癥的嚴重程度。本領域普通技術人員可經驗性確定特定藥劑的有效量而不必經過試驗。
如此處所用，“移植排斥”表示免疫介導的、對來源于宿主以外的組織或器官的超急性、急性或慢性損傷。術語因此包括細胞和抗體介導的排斥，以及同種異體移植物和異種移植物排斥。
如此處所用，術語“免疫細胞”表示屬于免疫系統的細胞。免疫細胞包括T淋巴細胞(T細胞)、B淋巴細胞(B細胞)、自然殺傷(NK)細胞、粒細胞、嗜中性細胞、巨噬細胞、單核細胞、樹突細胞和任意以上細胞的特化形式，如類漿細胞型樹突細胞、漿細胞、NKT、T輔助細胞和細胞毒性T淋巴細胞(CTL)。
如此處所用，術語“免疫復合體”表示包括抗體和與抗體特異性結合的抗原的任何偶聯物。在一個實施方案中，所述抗原是自身抗原。
如此處所用，術語“含核酸的免疫復合體”表示包括抗體和與抗體特異性結合的含核酸抗原的任何偶聯物。所述含核酸的免疫復合體可以包括染色質、核糖體、小核蛋白、組蛋白、核小體、DNA、RNA或其任意組合。所述抗體可以但不必然需要特異性結合到所述含核酸抗原的核酸成分。
如此處所用，術語“與免疫復合體相關的疾病”表示特征是免疫復合體產生和/或組織沉積的任何疾病，包括但不限于系統性紅斑狼瘡(SLE)和相關結締組織疾病、類風濕性關節(jié)炎、丙型肝炎和乙型肝炎相關的免疫復合體疾病(如冷球蛋白血癥)、貝赫切特綜合征、自身免疫性腎小球性腎炎，以及與存在LDL/抗LDL免疫復合體相關的血管病。
如此處所用，“免疫缺陷”表示患者的免疫系統不能正常發(fā)揮功能、或增強患者的免疫應答例如將有利于消除患者的腫瘤或癌癥(如腦、肺(如小細胞和非小細胞)、卵巢、乳房、前列腺、結腸腫瘤，以及其它癌癥和肉瘤)或感染的疾病或病癥。所述免疫缺陷可以是獲得性的或是先天性的。
如此處所用，“患者中的免疫刺激性核酸相關應答”表示患者中與向患者施用免疫刺激性核酸相關的可測量的應答。這些應答包括但不限于產生細胞因子、趨化因子、生長因子或免疫球蛋白；表達免疫細胞表面激活標志物；Th1/Th2偏斜(skewing)；和臨床疾病活性。
如此處所用，術語“感染”和等價的“傳染病”表示傳染性生物體或物質以可檢測量存在于患者的血液或正常無菌組織或正常無菌部位中的疾病狀況。傳染性生物體和物質包括病毒、細菌、真菌和寄生蟲。術語包括急性和慢性感染，以及膿毒癥。
如此處所用，術語“先天性免疫應答”表示對某些病原體相關的分子模式(PAMP)的任何類型的免疫應答。先天性免疫，在本領域也稱為自然或天然免疫，主要涉及嗜中性細胞、粒細胞、單核吞噬細胞、樹突細胞、NKT細胞和NK細胞。先天性免疫應答可以包括但不限于I型干擾素產生(如IFN-α)、嗜中性細胞激活、巨噬細胞激活、胞吞作用、調理作用、補體激活及其任意組合。
如此處所用，術語“自身DNA”表示來源于宿主患者的基因組的任何DNA。在一個實施方案中，自身DNA包括來源于宿主患者的互補DNA(cDNA)。自身DNA包括完整和降解的DNA。
如此處所用，術語“自身RNA”表示來源于宿主患者的基因組的任何RNA。在一個實施方案中，自身RNA包括來源于宿主患者的信使RNA(mRNA)。在一個實施方案中，自身RNA包括來源于宿主患者的核糖體RNA(rRNA)。自身RNA包括完整和降解的DNA。
如此處所用，術語“患者”表示脊椎動物。在一個實施方案中，患者是哺乳動物。在一個實施方案中，患者是人。在另外的實施方案中，患者是非人類脊椎動物，包括但不限于非人靈長類、實驗動物、牲畜、家養(yǎng)動物和非家養(yǎng)動物。
如此處所用，“具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生TLR介導免疫刺激風險的患者”表示暴露于或有風險暴露于PAMP或其它TLR配體的患者。
如此處所用，術語“Toll樣受體”和等價的“TLR”表示識別病原體相關分子模式(PAMP)并作為先天性免疫中關鍵信號傳遞元件的至少十種高度保守的哺乳動物模式識別受體家族的任何成員。TLR多肽共有特征性結構，其中包括具有富含亮氨酸重復的細胞外(胞漿外)結構域、跨膜結構域和參與TLR信號傳遞的細胞內(胞漿)結構域。TLR包括但不限于人TLR。
當前已知的所有十種人TLR的核酸和氨基酸序列可以從公共數據庫如GenBank中獲得。相似的，很多非人物種的多種TLR的核酸和氨基酸序列也可以從包括GenBank的公共數據庫中獲得。例如，人TLR9(hTLR9)的核酸和氨基酸序列可以發(fā)現分別為GenBank登記號AF245704(編碼區(qū)核苷酸145-3243)和AAF78037。小鼠TLR9(mTLR9)的核酸和氨基酸序列可以發(fā)現分別為GenBank登記號AF348140(編碼區(qū)核苷酸40-3138)和AAK29625。推斷出的人TLR9蛋白含1032個氨基酸并與小鼠TLR9具有75.5％整體氨基酸一致性。正如其它TLR蛋白，人TLR9含有細胞外富含亮氨酸的重復(LRR)和細胞漿內Toll/白介素1R(TIR)結構域。它還有信號肽(殘基1-25)和跨膜結構域(殘基819-836)。
人TLR8(hTLR8)的核酸和氨基酸序列可以發(fā)現分別為GenBank登記號AF245703(編碼區(qū)核苷酸49-3174)和AAF78036。小鼠TLR8(mTLR8)的核酸和氨基酸序列可以發(fā)現分別為GenBank登記號AY035890(編碼區(qū)核苷酸59-3157)和AAK62677。
人TLR7(hTLR7)的核酸和氨基酸序列可以發(fā)現分別為GenBank登記號AF240467(編碼區(qū)核苷酸135-3285)和AAF60188。小鼠TLR7(mTLR7)的核酸和氨基酸序列可以發(fā)現分別為GenBank登記號AY035889(編碼區(qū)核苷酸49-3201)和AAK62676。
人TLR3(hTLR3)的核酸和氨基酸序列可以發(fā)現分別為GenBank登記號NM_003265(編碼區(qū)核苷酸102-2816)和NP_003256。小鼠TLR3(mTLR3)的核酸和氨基酸序列可以發(fā)現分別為GenBank登記號AF355152(編碼區(qū)核苷酸44-2761)和AAK26117。
hTLR1是廣泛表達的，hTLR2、hTLR4和hTLR5存在于單核細胞、多形核細胞和樹突細胞中。Muzio M et al.(2000)J Leukoc Biol 67450-6。最近的出版物報道hTLR1、hTLR6、hTLR7、hTLR9和hTLR10存在于人B細胞中。人TLR7和hTLR9存在于類漿細胞型樹突細胞(pDC)中，而髓樣樹突細胞表達hTLR7和hTLR8，但不表達hTLR9。然而人TLR8顯示不在pDC中表達。
作為促炎性白介素-1受體(IL-1R)家族的成員，TLR在其稱為Toll/IL-1R同源(TIR)結構域的胞內結構域中具有同源性。PCT公開申請PCT/US98/08979和PCT/US01/16766。由TLR介導的細胞內信號傳遞機制一般顯示與具有關鍵作用的MyD88和腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)相似。Wesche H et al.(1997)Immunity7837-47；Medzhitov R et al.(1998)Mol Cell 2253-8；Adachi O et al.(1998)Immunity9143-50；Kawai T et al.(1999)Immunity 11115-22)；Cao Z et al.(1996)Nature383443-6；Lomaga MA et al.(1999)Genes Dev 131015-24。已知MyD88和TRAF6之間的信號轉導涉及絲氨酸-蘇氨酸激酶IL-1受體相關激酶(IRAK)家族的成員，包括至少IRAK-1和IRAK-2。Muzio M et al.(1997)Science 2781612-5。
簡單的說，MyD88被認為在TLR或IL-1R的TIR結構域和IRAK(包括IRAK-1、IRAK-2、IRAK-4和IRAK-M中至少任意一個)之間起接頭分子作用。MyD88包括C端Toll同源結構域和N端死亡結構域。MyD88的Toll同源結構域結合TLR或IL-1R的TIR結構域，而MyD88的死亡結構域結合絲氨酸激酶IRAK的死亡結構域。IRAK與TRAF6相互作用，所述TRAF6用作進入至少兩條途徑的入口，一條導致激活轉錄因子NF-κB，而另一條導致激活激活因子蛋白-1(AP-1)轉錄因子家族成員Jun和Fos。激活NF-κB涉及激活MAP3激酶(MAPK)家族成員TAK-1，以及IκB激酶。IκB激酶磷酸化IκB，導致其降解和NF-κB轉位到核中。激活Jun和Fos被認為涉及MAP激酶激酶(MAPKK)和MAP激酶ERK、p38和JNK/SAPK。NF-κB和AP-1都參與調控多種關鍵免疫應答基因的轉錄，包括調節(jié)多種細胞因子和共刺激分子基因的轉錄。見Aderem A et al.(2000)Nature 406782-7；Hcker H et al.(1999)EMBO J 186973-82。
如此處所用，術語“TLR配體”和等價的“TLR的配體”和“TLR信號傳遞激動劑”表示根據此處描述的式I-XIX或根據本發(fā)明的4-伯氨基喹啉或喹唑啉分子之外的分子以外的、通過TIR結構域之外的TLR結構域而直接或間接與TLR相互作用并誘導TLR介導的信號傳遞的分子。在一個實施方案中，TLR配體是天然配體，即自然界中發(fā)現的TLR配體。在一個實施方案中，TLR配體表示TLR天然配體之外的分子，如由人類活動制備的分子。在一個實施方案中，所述TLR是TLR9，TLR信號激動劑是CpG核酸。
已經描述了很多但非全部的TLR配體。例如，已經報道對肽聚糖和脂肽應答的TLR2信號。Yoshimura A et al.(1999)J Immunol 1631-5；Brightbill HD et al.(1999)Science 285732-6；Alipramis AO et al.(1999)Science 285736-9；Takeuchi O et al.(1999)Immunity 11443-51；Underhill DM et al.(1999)Nature 401811-5。已經報道TLR4傳遞對脂多糖(LPS)應答的信號。Hoshino K et al.(1999)Immunol 1623749-52；Poltorak Aet al.(1998)Science 2822085-8；Medzhitov R et al.(1997)Nature 388394-7。已經報道細菌鞭毛蛋白是TLR5的天然配體。Hayashi F et al.(2001)Nature 4101099-1103。TLR6與TLR2一起，已經報道傳遞對蛋白聚糖應答的信號。Ozinsky A et al.(2000)Proc NatlAcad Sci USA 9713766-71；Takeuchi O et al.(2001)Int Immunol 13933-40。
最近已經報道TLR9是CpG DNA的受體。Hemmi H et al.(2000)Nature 408740-5；Bauer S et al.(2001)Proc Natl Acad Sci USA 989237-42。CpG DNA，包括具有胞嘧啶未被甲基化的CG二核苷酸的細菌DNA和合成DNA，在此處其它地方更詳細描述。Marshak-Rothstein和同事最近也報道他們發(fā)現TLR9信號傳遞可以作為對含IgG和染色質的免疫復合體的應答在某些自身免疫病中發(fā)生。Leadbetter EA et al.(2002)Nature416595-8。因此在更廣泛意義上，當所述核酸存在于適當環(huán)境如作為免疫復合體的一部分中時，TLR9顯示可以傳遞對自身或非自身核酸(DNA或RNA)應答的信號。
最近報道，具有抗病毒活性的某些咪唑并喹啉化合物是TLR7和TLR8的配體。Hemmi H et al.(2002)Nat Immunol 3196-200；Jurk M et al.(2002)Nat Immunol 3499。咪唑并喹啉是具有抗病毒和抗腫瘤特性的免疫細胞強效合成激活劑。用來自野生型和MyD88缺失型小鼠的巨噬細胞，Hemmi等人最近報道兩種咪唑并喹啉，即imiquimod和resiquimod(R848)只在野生型細胞中誘導腫瘤壞死因子(TNF)和白介素-12(IL-12)并激活NF-κB，這與經TLR激活相一致。Hemmi H et al.(2002)Nat Immunol 3196-200。來自缺失TLR7而非其它TLR的小鼠的巨噬細胞對這些咪唑并喹啉應答而不產生可檢測的細胞因子。此外，所述咪唑并喹啉誘導脾B細胞劑量依賴的增殖和來自野生型而非TLR7-/-小鼠的細胞中細胞內信號級聯的激活。熒光素酶分析確認在人胚腎細胞中表達人TLR7而非TLR2或TLR4導致對resiquimod應答而激活NF-κB。Hemmi等人的發(fā)現因此提示這些咪唑并喹啉化合物是TLR7的非天然配體，能誘導經TLR的7信號傳遞。
最近報道R848也是人TLR8的配體。Jurk M et al.(2002)Nat Immunol 3499。
最近報道TLR3的配體包括poly(I:C)和雙鏈RNA(dsRNA)。對于本發(fā)明目的，poly(I:C)和雙鏈RNA(dsRNA)歸類于寡核苷酸分子。通過用poly(I:C)刺激表達多種TLR之一的腎細胞，Alexopoulou等人報道只有表達TLR3的細胞通過激活NF-κB而作出應答。Alexopoulou L et al.(2001)Nature 413732-8。Alexopoulou等人還報道用poly(I:C)刺激的野生型細胞激活NF-κB并產生炎性細胞因子IL-6、IL-12和TNF-α，而TLR3-/-細胞的相應應答受到顯著抑制。與之相比較，TLR3-/-細胞與野生型細胞等價的對脂多糖、肽聚糖和CpG二核苷酸作出應答。MyD88-/-細胞分析顯示這種接頭蛋白參與dsRNA誘導的細胞因子產生和增殖性應答，盡管NF-κB和MAP激酶的激活不受影響，這表明這些細胞內應答有不同途徑。Alexopoulou等人建議TLR3可能在宿主抗病毒防御中起作用。
如此處所用，“表達TLR的細胞”表示表達天然或人工的功能性TLR的任何細胞。功能性TLR是全長TLR蛋白或其能誘導應答與其配體相互作用的信號的片段。通常，功能性TLR將至少包括全長TLR的細胞外結構域的TLR配體結合片段和至少能與另一種含Toll同源結構域的多肽如MyD88相互作用的TIR結構域片段。在多種實施方案中，所述功能性TLR是選自TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9和TLR10的全長TLR。
在某些實施方案中，所述功能性TLR是細胞天然表達的。
在一個實施方案中，所述細胞天然表達功能性TLR并是從人多發(fā)性骨髓瘤細胞系RPMI 8226(ATCC CCL-155)中分離的細胞。這種細胞系是在61歲老人診斷出多發(fā)性骨髓瘤(IgGλ型)時從外周血建立的。Matsuoka Y et al.(1967)Proc Soc Exp BiolMed 1251246-50。以前報道RPMI 8226可對CpG核酸產生應答，這通過誘導IL-6蛋白和IL-12p40 mRNA作為支持證據。Takeshita F et al.(2000)Eur J Immunol 30108-16；Takeshita F et al.(2000)Eur J Immunol 301967-76。Takeshita等人使用單獨的所述細胞系研究啟動子結構以鑒定對CpG核酸信號傳遞重要的轉錄因子結合位點。現已知RPMI 8226細胞對免疫刺激性核酸作出應答而分泌多種其它趨化因子和細胞因子，包括IL-8、IL-10和IP-10。因為該細胞系表達TLR9，通過TLR9免疫刺激性核酸如CpG核酸介導它們的作用，它是適合用于本發(fā)明有關CpG核酸作為參考和測試化合物、以及有關其它TLR9配體的方法的細胞系。
與外周血單核細胞(PBMC)相似，已經觀察到作為對CpG核酸暴露的應答RPMI8226細胞系上調標志物如CD71、CD86和HLA-DR的細胞表面表達。這也通過對所述細胞系的流式細胞分析而觀察到。因此，此處提供的方法可以組織成使用適當選擇的細胞表面標志物表達作為讀出信號，以補充或代替趨化因子或細胞因子產生或本文其它地方描述的其它讀出信號。
也已經發(fā)現RPMI 8226細胞系可對包括咪唑并喹啉化合物的某些小分子產生應答。例如，RPMI 8226細胞與咪唑并喹啉化合物R848(resiquimod)一起培養(yǎng)誘導IL-8、IL-10和IP-10產生。最近已經報道R848通過TLR7和TLR8介導其免疫刺激作用。RPMI 8226應答R848的能力提示RPMI 8226細胞系也表達TLR7，正如以前對正常人B細胞的報道。
所述RPMI細胞系可使用未修飾形式或修飾形式。在一個實施方案中，RPMI 8226細胞用報告構建體轉染。優(yōu)選的，所述細胞用所述報告構建體穩(wěn)定轉染。所述報告構建體一般包括啟動子、編碼序列和多聚腺苷酸化信號。所述編碼序列可以包括選自下組的報告序列酶(如熒光素酶、堿性磷酸酶、B-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰轉移酶(CAT)、分泌型堿性磷酸酶等)、生物發(fā)光標志物(如綠色熒光蛋白(GFP，美國專利No.5,491,084)等)、表面表達分子(如CD25)、分泌分子(如IL-8、IL-12 p40、TNF-α等)和本領域技術人員已知的其它可檢測蛋白產物。優(yōu)選的，所述編碼序列編碼具有可定量水平或活性的蛋白。
在某些實施方案中，所述功能性TLR由細胞人工表達(包括過表達)，例如通過向細胞中引入攜帶功能性TLR編碼序列的表達載體，其中所述編碼序列可操作的連接到基因表達序列上。如此處所用，當編碼序列和基因表達序列以將所述編碼序列的表達或轉錄和/或翻譯置于所述基因表達序列的影響或控制之下的方式而共價連接時，就可以說它們是可操作的連接。如果誘導5’基因表達序列中的啟動子導致所述編碼序列轉錄并且兩個DNA序列間的連接性質不(1)導致引入移碼突變、(2)干擾所述啟動子區(qū)指導所述編碼序列轉錄的能力或(3)干擾相應RNA轉錄本翻譯成蛋白質的能力，則說兩個DNA序列是可操作的連接。因此，如果基因表達序列能影響編碼序列的轉錄并使所得轉錄本翻譯成期望蛋白或多肽，則所述基因表達序列將是可操作的連接到所述編碼序列上。
在一些實施方案中，編碼序列表示編碼功能性TLR的核酸序列。在一些實施方案中，編碼序列表示編碼報告基因的核酸序列。
人工表達功能性TLR的細胞可以是不表達所述功能性TLR而是用于TLR表達載體的細胞。例如，人293成纖維細胞(ATCC CRL-1573)不表達TLR3、TLR7、TLR8或TLR9。如下實施例所述，這些細胞可以瞬時或穩(wěn)定轉染合適的表達載體(或載體)，以產生表達TLR3、TLR7、TLR8、TLR9或其任意組合的細胞。作為替代方案，人工表達功能性TLR的細胞可以是與沒有所述TLR表達載體相比，使用所述TLR表達載體時以顯著更高水平表達所述功能性TLR的細胞。
對于本發(fā)明方法的用途，人工表達功能性TLR的細胞優(yōu)選是表達所述功能性TLR的穩(wěn)定轉染細胞。這種細胞也可以穩(wěn)定轉染合適的報告構建體。
如此處所用，“TLR介導的信號傳遞”表示參與TLR與適當TLR配體相互作用的細胞內信號轉導通路的任意部分，并由MyD88連接所述TLR或由MyD88連接任何下游方面，在上面關于TLR的TIR結構域的結構和功能中已經描述。
如此處所用，“TLR介導的免疫刺激性信號傳遞”表示TLR介導的導致可測量的免疫刺激應答的信號傳遞。這個術語應用于體內和體外的這種信號傳遞。
如此處所用，“患者中TLR介導的免疫刺激”表示當應用于體內時TLR介導的免疫刺激性信號傳遞。
如此處所用，術語“治療”針對病癥、疾病或病時指干預這些病癥、疾病或病，以防止或減緩其進程，以防止、減緩或終止其加重，或消除所述病癥、疾病或病。
免疫剌激性核酸如此處所用，“免疫刺激性核酸”表示與免疫系統細胞接觸時誘導免疫系統細胞被激活的核酸分子。免疫細胞激活可用本領域技術人員已知的任何合適方法確定，包括但不限于測量受刺激后的生長、增殖、分化、遷移、與免疫激活相關被表達或分泌基因產物的轉錄或表達、細胞內信號傳遞通路的活性等。免疫細胞激活的標志的實例包括但不限于分泌細胞因子(如IL-6)、分泌免疫球蛋白(如IgG)、表達細胞表面抗原(如CD86)、誘導細胞裂解活性和誘導轉錄因子及其核轉位(如NF-κB)。
如此處關于本發(fā)明方法所用，“核酸”表示兩個或更多獨立核苷或核苷酸單元的任意聚合物。核酸可以是單或雙鏈。典型的獨立核苷或核苷酸單元包括脫氧核糖核苷、核糖核苷、脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸中的任意一種或任意組合。所述核酸的獨立核苷酸或核苷單元可以是天然存在或非天然存在的。例如獨立核苷酸單元可包括脫氧腺嘌呤、脫氧胞嘧啶、脫氧鳥嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶。除了天然存在的2’-脫氧和2’-羥基形式以外，獨立核苷也包括具有修飾堿基部分和/或修飾糖部分的合成核苷，如描述于下文中的Uhlmann E et al.(1990)Chem Rev 90543-84。獨立核苷酸或核苷單元之間的連接鍵可以是天然存在或不是天然存在的。例如所述連接鍵可以是磷酸二酯鍵、硫代磷酸酯鍵、二硫代磷酸酯鍵(phosphorodithiolate)、氨基磷酸酯鍵(phosphoramidate)，以及肽鍵和本領域已知的適于連接相鄰核苷或核苷酸單元的其它共價鍵。免疫刺激性核酸典型大小范圍是3-4個單元到幾十個單元，如18-40個單元，盡管更長的核酸也包括在本發(fā)明范圍內。
在一些實施方案中，所述核酸是由2到約100個核苷酸、更典型4到約40個核苷酸組成的寡核苷酸。全部由脫氧核糖核苷酸組成的寡核苷酸稱為寡聚脫氧核糖核苷酸或等價的寡聚脫氧核苷酸(ODN)。
免疫刺激性核酸包括多種不同類型免疫刺激性核酸的任意成員，具體包括免疫刺激性CpG核酸(CpG核酸)，包括但不限于A、B和C型；和免疫刺激性非CpG核酸，包括但不限于甲基化CpG核酸、富含T的核酸和聚-G核酸。這些多種類型免疫刺激性核酸的某些可在給定的核酸分子中共存。
如此處所用，術語“CpG核酸”和等價的“CpG ODN”表示含有胞嘧啶-鳥嘌呤(CG)二核苷酸且其中C殘基未被甲基化的免疫刺激性核酸。CpG核酸對免疫調節(jié)的作用已經廣泛描述于下列文獻美國專利，如美國專利No.6,194,388；6,207,646；6,218,371和6,239,116；和公開的國際專利申請，如WO 98/37919，WO 98/40100，WO 98/52581和WO 99/56755。這些專利和公開專利申請的全部內容引入此處作為參考。整個免疫刺激性核酸可以是未甲基化的或部分是未甲基化的，但所述5’-CG-3’的至少C必須未甲基化。本發(fā)明的CpG核酸序列包括以上廣泛描述的那些以及美國專利No.6,207,646 B1和6,239,116 B1中披露的那些。
在一個實施方案中，所述CpG核酸有這樣的堿基序列5′-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3′(ODN 2006；SEQ ID NO1)。
CpG核酸已根據結構和功能進一步分類為至少以下三種類型，它們所有都被包括在本發(fā)明方法的范圍內B-類CpG核酸，如ODN 2006，包括最早描述的CpG核酸，特征性激活B細胞，但不誘導或僅弱誘導IFN-α的表達。A-類CpG核酸，如已公開國際申請PCT/US00/26527(WO01/22990)中描述的，其中有CpG基序，包括雜合的磷酸二酯/硫代磷酸酯骨架，并特征性的誘導類漿細胞型樹突細胞表達大量IFN-α，但不激活或僅弱激活B細胞。C-類寡核苷酸中有CpG，包括嵌合型骨架，包括富含GC的回文或近回文區(qū)域，并能激活B細胞，誘導IFN-α表達。這些已經描述于例如已公開的美國專利申請2003/0148976。
在本發(fā)明的其它實施方案中，使用非CpG核酸。非CpG核酸是序列中沒有CpG基序或者具有含甲基化C殘基的CpG基序的免疫刺激性核酸。在有些情況下，所述非CpG核酸仍可以是免疫刺激性的，因為它具有其它免疫刺激性基序，如此處所述和本領域已知的那些。在一個實施方案中，所述非CpG核酸是甲基化CpG核酸。在有些情況下，所述非CpG核酸仍是免疫刺激性的，盡管CpG基序的C甲基化，甚至不具有此處所述和本領域已知的另一種非CpG免疫刺激性基序時也是如此。
在一個實施方案中，所述非CpG核酸是具有如下堿基序列的甲基化CpG核酸5′-TZGTZGTTTTGTZGTTTTGTZGTT-3′(ODN 2117；SEQ ID NO4，其中Z代表5-甲基胞嘧啶)。
非CpG核酸包括富含T的免疫刺激性核酸。所述富含T的免疫刺激性核酸包括已公開PCT專利申請PCT/US00/26383中披露的那些，其全部內容引入此處作為參考。在一些實施方案中，使用24個堿基長的富含T的核酸。富含T的核酸是包括至少一個多聚T序列和/或核苷酸組成中T核苷酸殘基超過25％的核酸。具有poly-T序列的核酸包括連續(xù)至少4個T，如5’-TTTT-3’。在一些實施方案中，所述富含T的核酸包括一個以上polyT序列。在重要的實施方案中，所述富含T的核酸可以有2、3、4或更多polyT序列，如ODN 2006。
非CpG核酸也包括poly-G免疫刺激性核酸。多篇參考文獻中描述poly-G核酸的免疫刺激特性。Pisetsky DS et al.(1993)Mol Biol Reports 18217-221；Krieger M et al.(1994)Ann Rev Biochem 63601-637；Macaya RF et al.(1993)Proc Natl Acad Sci USA903745-3749；Wyatt JR et al.(1994)Proc Natl Acad Sci USA 911356-1360；Rando andHogan，1998，In Applied Antisense Oligonucleotide Technology，Krieg and Stein，eds.，pp.335-352；Kimura Y et al.(1994)J Biochem(Tokyo)116991-994。
本發(fā)明的免疫刺激性核酸也可以是不具有CpG、甲基化CpG、富含T或poly-G基序的那些。
示例性免疫刺激性核酸序列進一步包括但不限于在已公開PCT專利申請WO01/22972中描述并列出的那些免疫刺激性序列。
本發(fā)明的一個方面提供落在此處披露的式VI和式VII范圍內的新化合物。這些化合物包括多種；芳基甲烷TLR9拮抗劑，此處表示為CMZ 203-84、CMZ 203-85、CMZ 203-88、CMZ 203-88-1、CMZ 203-89和CMZ 203-91。這些化合物中的每一個的合成分別提供于實施例12-17。
與式VI和式VII的其它化合物相似，這些特異性化合物進行體外測試并發(fā)現抑制TLR9信號傳遞。見實施例18。因此化合物CMZ 203-84、CMZ 203-85、CMZ 203-88、CMZ 203-88-1、CMZ 203-89和CMZ 203-91被認為可用于本發(fā)明方法。更具體的，本發(fā)明的一個方面提供影響TLR介導的對TLR配體應答的信號傳遞的方法。所述方法包括將表達TLR的細胞與有效量的以下任一種化合物或其組合接觸的步驟CMZ203-84、CMZ 203-85、CMZ 203-88、CMZ 203-88-1、CMZ 203-89和CMZ 203-91，以抑制或促進TLR介導的對TLR配體應答的信號傳遞。本發(fā)明的一個方面提供抑制對TLR配體應答的TLR介導的信號傳遞的方法。所述方法包括將表達TLR的細胞與有效量的以下任一種化合物或其組合接觸的步驟CMZ 203-84、CMZ 203-85、CMZ203-88、CMZ 203-88-1、CMZ 203-89和CMZ 203-91，以抑制TLR介導的對TLR配體應答的信號傳遞。本發(fā)明的一個方面提供影響患者中TLR介導免疫刺激的方法。所述方法包括向具有TLR介導免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的以下任一種化合物或其組合的步驟CMZ 203-84、CMZ 203-85、CMZ 203-88、CMZ203-88-1、CMZ 203-89和CMZ 203-91，以抑制或促進患者中TLR介導的免疫刺激。本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中TLR介導免疫刺激的方法。所述方法包括向具有TLR介導免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的以下任一種化合物或其組合的步驟CMZ 203-84、CMZ 203-85、CMZ 203-88、CMZ 203-88-1、CMZ 203-89和CMZ 203-91，以抑制患者中TLR介導的免疫刺激。本發(fā)明的一個方面提供抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法。根據此方面的方法包括向需要這種治療的患者施用有效量的以下任一種化合物或其組合的步驟CMZ 203-84、CMZ 203-85、CMZ203-88、CMZ 203-88-1、CMZ 203-89和CMZ 203-91，以抑制患者中免疫刺激性核酸相關的應答。
本發(fā)明的一個方面提供新的取代4-伯氨基喹啉組分。如下將述，這些組分和其它4-伯氨基喹啉組分已經被發(fā)現可用于體內和體外抑制免疫應答的方法，包括治療與免疫復合體相關的疾病和自身免疫病的方法。由于它們與某些已知抗瘧劑的相似性，還認為本發(fā)明的新的取代4-伯氨基喹啉組分也將可用于預防和治療瘧疾，以及治療已被描述可應答氯喹治療的其它疾病。
本發(fā)明的新的取代4-伯氨基喹啉組分為結構式XVI化合物及其藥學上可接受的水合物和鹽， 式XVI其中X不存在或是芳基、烷基、雜環(huán)基或苯乙烯基；R1和R2互相獨立的是氫原子或取代或未取代的烷基、烷烯基或芳基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)；R3是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R3任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR8R9或NR10，其中R8、R9和R10互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；和R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R4、R5、R6和R7的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
在一個實施方案中，R5和R6互相獨立的是鹵素原子或烷氧基。在一個實施方案中，R5和R6互相獨立的是氯原子或甲氧基。
在一個實施方案中X不存在或是芳基；NR1R2是雜環(huán)胺或是NR8(CH2)nNR9R10，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R8、R9和R10互相獨立的是氫原子或烷基；R3是氫原子；Y是芳基或是NR11，其中R11是氫原子或芳基或烷基；L不存在或是C2-C6的烷基；并且R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X不存在或是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基或是NR8(CH2)nNR9R10，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R8是氫原子，R9和R10互相獨立的是烷基；R3是氫原子；Y是NH；L是C2-C6的烷基；和R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X是苯基；
NR1R2是連接到所述苯基X對位的 Y是NH；L是-(CH2)n-，其中n是2到6的整數，包括2和6在內；并且R3、R4、R5、R6和R7中的每一個是氫原子。
在前述的每一個實施方案中，所述組分任選的是藥學上可接受的水合物或鹽形式。
本發(fā)明式XVI取代4-伯氨基喹啉組分的代表性的、非限制性的實例是表示于表1的化合物101-104、106-109、111、113-116和118-119。
表1本發(fā)明的取代4-伯氨基喹啉組分
根據本發(fā)明已經發(fā)現，與4-仲和4-叔氨基喹啉化合物相似，4-伯氨基喹啉組分可用于抑制TLR9信號傳遞。
本發(fā)明的一個方面提供抑制經TLR的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性TLR的細胞與有效量的具有結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以抑制經TLR的信號傳遞，
式XVII其中X不存在或是氮、氧或硫原子或SO或SO2基團；R1是氫原子或取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基；R2是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR7R8或NR9，其中R7、R8和R9互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L不存在或是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；和R3、R4、R5和R6互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R3、R4、R5和R6的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
本發(fā)明涉及取代4-伯氨基喹啉組分用途的此方面和所有其它方面中的取代4-伯氨基喹啉組分可以是水合物或藥學上可接受的鹽形式。根據本發(fā)明此方面的方法可以在體外或在體內實施。此外，表達所述功能性TLR的細胞可以但不必須是免疫細胞。對于指導所述細胞表達所述TLR的載體。在一個實施方案中，所述TLR是TLR9，因而所述方法是抑制經TLR9的細胞內信號傳遞的方法。
除了表示于表1的化合物101-104、106-109、111、113-116和118-119之外，以下其他代表性和非限制性的取代4-伯氨基喹啉化合物，參考式XVII表示于表2的化合物105、110、117和120-123，可用于根據本發(fā)明此方面和所有其它方面的方法，這些方法涉及使用取代4-伯氨基喹啉化合物的方法。另外的實例表示于下面的實施例中。
表2.用于本發(fā)明方法的其他取代4-伯氨基喹啉組分


本發(fā)明的一個方面提供抑制經TLR的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性TLR的免疫細胞
(a)在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下和有效量的TLR信號激動劑接觸，以刺激經TLR的信號傳遞，并(b)和有效量的具有如上定義的結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分接觸，以與缺少取代4-伯氨基喹啉組分下TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞相比，抑制TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞。本發(fā)明此方面的取代4-伯氨基喹啉組分可以是水合物或藥學上可接受的鹽形式。根據本發(fā)明此方面的方法可以在體外或體內實施。
也根據本發(fā)明的此方面，在一個實施方案中所述TLR是TLR9，所述TLR信號激動劑是TLR9信號激動劑，因此在一個實施方案中的方法是抑制TLR9應答TLR9信號激動劑的細胞內信號傳遞的方法。在一個實施方案中所述TLR信號激動劑是CpGDNA，例如CpG ODN，如ODN 2006。所述CpG ODN可屬于任意類的CpG ODN，包括A類(如ODN 2216)、B類(如ODN 2006)或C類(如ODN 2395)。
在一個實施方案中，所述TLR信號激動劑是包括核酸的免疫復合體。本領域一般技術人員已知包括核酸的免疫復合體包括與核酸結合的免疫球蛋白，所述核酸或者是裸露的，或更常見的與蛋白質或其它非核酸成分結合。與蛋白質或其它非核酸成分結合的核酸例如可以包括染色質、核糖體、小核蛋白、核糖核蛋白(RNP)、組蛋白、核小體蛋白-DNA復合體和核小體。特異性抗核酸和含核酸物質的臨床重要的抗體的實例包括抗核抗體(ANA)、anti-dsDNA、anti-ssDNA、anti-Sm、anti-RNP、anti-Ro(SS-A)、anti-La(SS-B)和抗組蛋白抗體。包括核酸的免疫復合體包括但不限于與具體包括雙鏈DNA的DNA結合的免疫球蛋白和與核小體物質結合的免疫球蛋白，這是系統性紅斑狼瘡的兩個特征，以及與RNA結合的免疫球蛋白。
本發(fā)明的一個方面提供抑制對抗原性物質的免疫應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞(a)在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下和有效量的抗原性物質接觸，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答，并(b)和有效量的具有如上定義的結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分接觸，以與缺少取代4-伯氨基喹啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比，抑制對所述抗原性物質的免疫應答。本發(fā)明此方面的取代4-伯氨基喹啉組分可以是水合物或藥學上可接受的鹽形式。根據本發(fā)明此方面的方法可以在體外或體內實施。在一個實施方案中所述免疫應答是先天性免疫應答。在一個實施方案中所述免疫應答包括適應性免疫應答。
在一個實施方案中本發(fā)明涉及在患者中將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞(a)在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下和有效量的抗原性物質接觸，以刺激所述患者對所述抗原性物質的免疫應答，并(b)和有效量的具有如上定義的結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分接觸，以與缺少取代4-伯氨基喹啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比，抑制所述患者對所述抗原性物質的免疫應答。
在一個實施方案中，在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞與有效量的抗原性物質接觸、以刺激對所述抗原性物質的免疫應答的步驟涉及在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下主動施用有效量的抗原性物質以刺激對所述抗原性物質的免疫應答的步驟?？墒褂檬┯盟隹乖晕镔|以使有效接觸的任意有效途徑或方式施用所述抗原性物質。以實例的方式，可通過局部或系統性注射、吸入、經口攝入、表面給藥、粘膜給藥或其任意組合進行給藥。
在一個實施方案中，在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞與有效量的抗原性物質接觸、以刺激對所述抗原性物質的免疫應答的步驟是被動的。例如在一個實施方案中，在將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞與有效量的具有如上定義的結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分接觸、以與缺少所述取代4-伯氨基喹啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比抑制對所述抗原性物質的免疫應答之時或之前，所述免疫細胞已經正在接觸或已經接觸過有效量的抗原性物質，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答。
所述抗原性物質可以是變應原。變應原是能在敏感患者中誘導變應性或哮喘性應答的物質。變應原的列表是龐大的，可以包括花粉、昆蟲毒液、動物皮屑、塵、真菌孢子和藥物(如青霉素)。天然動物和植物變應原的實例包括特異于以下屬的蛋白質犬(家犬)；塵螨(如粉塵螨)；貓(家貓)；豕草(美洲豕草)；黑麥草(如多年生黑麥草或一年生黑麥草)；柳杉(日本柳杉)；鏈格孢(鏈格孢菌)；赤楊；榿木(Alnusgultinosa)；樺(疣皮樺)；櫟(白櫟)；木犀欖(油橄欖)；蒿(蔞蒿)；車前草(如長葉車前)；墻草(如歐蓍草或猶大墻草)；小蠊(如德國小蠊)；蜜蜂(如Apis multiforum)；柏木(如地中海柏木、干柏和大果柏木)；刺柏(如Junipers sabinoides，北美圓柏、歐洲刺柏和Juniperus asheo；Thuya(如Thuya orientalis)；扁柏(如同本扁柏)；蜚蠊(如美洲蜚蠊)；鵝觀草屬(如匍匐冰草)；Secale(如黑麥)；Triticum(如小麥)；鴨茅屬(如鴨茅)；狐茅屬(如草地羊茅)；早熟禾(如草地早熟禾或加拿大早熟禾)；燕麥屬(如燕麥)；絨毛草屬(如絨草)；黃花茅屬(如香黃花茅)；燕麥草屬(如燕麥草)；翦股穎屬((如小糠草)；貓尾草屬(如梯牧草)；虉草屬(如草蘆)；雀稗屬(如Paspalum notatum)；高粱(如Sorghumhalepensis)；和雀麥屬(如無芒雀麥)。術語“變態(tài)反應性”表示對物質(變應原)的獲得性超敏感性。“變態(tài)反應”是對變應原是變態(tài)反應性的患者的免疫系統對所述變應原的應答。變應性疾病包括濕疹、變應性鼻炎、花粉病、支氣管哮喘、風疹(蕁麻疹)和食物變應性、和其它特應性疾病。
所述抗原性物質可以是來源于或就是傳染性微生物劑的抗原，包括細菌、病毒、真菌或寄生蟲的抗原。傳染性細菌的實例包括幽門螺桿菌、伯氏疏螺旋體菌、嗜肺軍團菌、分歧桿菌物種(如結核分歧桿菌、禽分歧桿菌、細胞內分歧桿菌、堪薩斯分歧桿菌和戈登分歧桿菌)、金黃色葡萄球菌、淋病奈瑟球菌、腦膜炎奈瑟球菌、單核細胞增生利斯特菌、化膿性鏈球菌(A群鏈球菌)、無乳鏈球菌(B群鏈球菌)、鏈球菌(草綠色群)、Streptococcus faecalis、Streptococcus bovis、鏈球菌(anaerobic sps.)，Streptococcus pneumoniae、病原性彎曲菌屬物種、腸球菌屬物種、流感嗜血桿菌、炭疽芽孢桿菌、白喉棒狀桿菌、棒狀桿菌屬物種、紅斑丹毒絲菌、產氣莢膜梭菌、破傷風梭菌、產氣腸桿菌、肺炎克魯伯氏菌、Pasturella multocida、擬桿菌屬物種、具核梭桿菌、念珠狀鏈桿菌、梅毒螺旋體、雅司螺旋體、鉤端螺旋體和衣氏放線菌。傳染性病毒的實例包括逆病毒科(包括但不限于人免疫缺陷病毒(HIV))；小RNA病毒科(例如脊髓灰質炎病毒、甲肝病毒、腸病毒、人柯薩奇病毒、鼻病毒、伊科病毒)；Calciviridae(如引起腸胃炎的病毒株)；披膜病毒科(例如馬腦炎病毒、風疹病毒)；黃病毒科(例如登革病毒、腦炎病毒、黃熱病毒)；冠狀病毒科(例如冠狀病毒)；彈狀病毒科(例如水皰性口炎病毒、狂犬病毒)；絲狀病毒科(例如埃博拉病毒)；副粘病毒科Paramyxoviridae(例如副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞體病毒)；正粘病毒科(例如流感病毒)；布尼亞病毒科(例如漢坦病毒、布尼亞病毒、白蛉熱病毒和Nairo viruses)；沙粒病毒科(出血熱病毒)；呼腸孤病毒科(如呼腸孤病毒、環(huán)狀病毒和輪狀病毒)；雙RNA病毒科；嗜肝DNA病毒科(乙肝病毒)；細小病毒科(細小病毒)；乳多空病毒科(乳頭瘤病毒、多瘤病毒)；腺病毒科(多數腺病毒)；皰疹病毒科(單純皰疹病毒(HSV)1和HSV-2、水痘-帶狀皰疹病毒、巨細胞病毒(CMV)、皰疹病毒)；痘病毒科(天花病毒、痘苗病毒、痘病毒)；和虹彩病毒科(如非洲豬熱病毒)；和未分類病毒(例如海綿樣腦病的病原、丁型肝炎病毒的病原(被認為是乙型肝炎病毒的缺陷型衛(wèi)星病毒)、非甲非乙型肝炎的病原(1類＝腸道傳播；2類＝腸道外傳播(即丙型肝炎)；諾沃克因子和相關病毒，以及星形病毒)。傳染性真菌的實例包括但不限于新生隱球菌、莢膜組織胞漿菌、粗球孢子菌、皮炎芽生菌、沙眼衣原體和白色念珠菌。
所述抗原性物質可以是癌抗原。此處所用的癌抗原是一種化合物，如肽或蛋白，與腫瘤或癌細胞表面結合，并且在主要組織相容性復合體(MHC)分子的環(huán)境中當表達于抗原提呈細胞表面時能喚起免疫應答。舉例來說，癌抗原或者通過如Cohen PA et al.(1994)Cancer Res 541055-8所述制備癌細胞粗提物、部分純化所述抗原而從癌細胞制備，或者通過重組技術或從頭合成已知抗原。癌抗原包括但不限于重組表達的抗原、其免疫原性部分或整個腫瘤或癌細胞。經重組或通過本領域已知的任何其它方法，這些抗原可以被分離或制備。
術語“癌抗原”和“腫瘤抗原”可互換使用，表示由癌細胞差異表達并因此可被利用于靶向癌細胞的抗原。癌抗原是潛在的能明顯刺激腫瘤特異性免疫應答的抗原。這些抗原中的一些由正常細胞編碼，盡管并不一定表達。這些抗原可表征為在正常細胞中正常沉默(即不表達)的抗原、僅在某些分化階段表達的抗原和短暫表達的抗原，如胚和胎抗原。另一些癌抗原由細胞突變基因編碼，如癌基因(如活化的ras癌基因)、抑癌基因(如p53突變體)、來自內部缺失或染色體轉位的融合蛋白。還有另一些癌抗原可由病毒基因如RNA和DNA腫瘤病毒攜帶的基因編碼。腫瘤抗原的實例包括MAGE、MART-1/Melan-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脫氨酶結合蛋白(ADAbp)、親環(huán)素b(cyclophilin b)、結腸直腸相關抗原(CRC)--C017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、amll、前列腺特異性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3，前列腺特異性膜抗原(PSMA)、T細胞受體/CD3-zeta鏈、MAGE家族的腫瘤抗原(如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、GAGE家族的腫瘤抗原(如GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)、BAGE、RAG、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS、α-胎蛋白、E-鈣粘蛋白、α-catenin、β-catenin和γ-catenin、pl20ctn、gp100Pmelll7、PRAME、NY-ESO-1、cdc27、腺瘤性息肉病蛋白(adenomatous polyposis coli protein，APC)、fodrin、Connexin 37，Ig獨特型(Ig-idiotype)、p15、gp75、GM2和GD2神經節(jié)苷脂、病毒產物如人乳頭瘤病毒蛋白、Smad家族腫瘤抗原、1mp-1、P1A、EBV編碼的核抗原(EBNA)-1、腦糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1和CT-7，與c-erbB-2.。
癌或腫瘤以及與這些腫瘤相關的腫瘤抗原(但非排他性地)包括急性淋巴母細胞性白血病(etv6；amll；親環(huán)素b)、B細胞淋巴瘤(Ig獨特型)、膠質細胞瘤(E-鈣粘蛋白；α-catenin；β-catenin；γ-catenin；p120ctn)、膀胱癌(p21ras)、膽囊癌(p21ras)、乳腺癌(MUC家族；HER2/neu；c-erbB-2)、宮頸癌(p53；p21ras)、結腸癌(p21ras；HER2/neu；c-erbB-2；MUC家族)、結腸直腸癌(結腸直腸相關抗原(CRC)--C017-1A/GA733；APC)、絨毛膜癌(CEA)、上皮細胞癌(親環(huán)素b)、胃癌(HER2/neu；c-erbB-2；ga733糖蛋白)、肝細胞癌(α-胎蛋白)、何杰金淋巴瘤(1mp-1；EBNA-1)、肺癌(CEA；MAGE-3；NY-ESO-1)、淋巴樣細胞源白血病(親環(huán)素b)、黑色素瘤(p15蛋白、gp75、瘤胎抗原(oncofetal antigen)、GM2和GD2神經節(jié)苷脂)、骨髓瘤(MUC家族；p21ras)、非小細胞肺癌(HER2/neu、c-erbB-2)、鼻咽癌(lmp-1；EBNA-1)、卵巢癌(MUC家族；HER2/neu；c-erbB-2)、前列腺癌(前列腺特異性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3；前列腺特異性膜抗原(PSMA)；HER2/neu；c-erbB-2、胰腺癌(p21ras；MUC家族；HER2/neu；c-erbB-2；ga733糖蛋白)、腎癌(HER2/neu；c-erbB-2)、宮頸和食管的鱗狀細胞癌(病毒產物如人乳頭瘤病毒蛋白)、睪丸癌(NY-ESO-1)、T細胞白血病(HTLV-1表位)和黑色素瘤(Melan-A/MART-1；cdc27；MAGE-3；p21ras；gp100Pmelll7)。
在本發(fā)明的一個方面中，提供治療患者中自身免疫病的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患有自身免疫疾病的患者施用有效量的具有如上述結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分，以治療自身免疫病。本發(fā)明此方面中的取代4-伯氨基喹啉組分可以是水合物或藥學上可接受的鹽形式。在一個實施方案中，所述自身免疫病選自系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、斯耶格倫綜合征、多肌炎、脈管炎、韋格納肉芽腫、結節(jié)病、強直性脊柱炎、賴特綜合征、牛皮癬性關節(jié)炎和貝赫切特綜合征。在一個具體實施方案中，所述自身免疫病是系統性紅斑狼瘡。在一個具體實施方案中，所述自身免疫病是類風濕性關節(jié)炎。在一個實施方案中，所述患者是人。所述方法也可應用于以上列出的任意自身免疫病的動物模型。
在一個實施方案中，所述自身免疫病是與免疫復合體相關的疾病。與免疫復合體相關的疾病具體包括但不限于系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、結節(jié)性多動脈炎、鏈球菌感染后腎小球腎炎、冷球蛋白血癥，和急性與慢性血清病。
所述取代4-伯氨基喹啉組分可以任意合適給藥途徑施用于患者，包括但不限于經口和胃腸道外途徑。胃腸道外給藥途徑包括但不限于靜脈內、肌肉內、腹膜內、皮下、鼻內、肺內、透皮、局部外用和粘膜。胃腸道外給藥途徑還包括直接注射入具體組織或其它注射位點，包括例如淋巴組織和炎癥部位。
根據本發(fā)明已經發(fā)現與本發(fā)明喹啉結構相似的喹唑啉化合物意外的可用于體外和體內抑制免疫應答的方法，包括治療與免疫復合體相關的疾病和自身免疫病的方法。意外發(fā)現根據本發(fā)明的所述喹唑啉化合物及其使用方法保留相應喹啉化合物及其使用方法的很多或全部免疫抑制性特性，但具有另外的降低毒性的特性，至少在體內如此。
本發(fā)明的一個方面提供新型喹唑啉組分。如下將述，這些組分和其它喹唑啉組分已經被發(fā)現可用于體外和體內抑制免疫應答的方法，包括治療與免疫復合體相關的疾病和自身免疫病的方法。由于它們與某些已知抗瘧劑的相似性，也被認為本發(fā)明的新型喹唑啉組分也將可用于預防和治療瘧疾，治療已經描述可對氯喹治療作出應答的其它疾病。
本發(fā)明的新型喹唑啉組分具有結構式XVIII及其藥學上可接受的水合物和鹽， 式XVIII其中X不存在或是芳基、烷基、雜環(huán)基或苯乙烯基，如果X是苯基，NR1R2是雜環(huán)的部分或是二胺；R1和R2互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)；Y是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成取代或未取代的雜環(huán)；L是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
在一個實施方案中，R6和R7互相獨立的是鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，R6和R7互相獨立的是氯原子或甲氧基。
在一個實施方案中X不存在或是芳基；NR1R2是雜環(huán)胺或是NR9(CH2)nNR10R11，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基；Y是芳基或是NR12，其中R12是氫原子或芳基或烷基；L不存在或是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X不存在或是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基或是NR9(CH2)nNR10R11，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R9是氫原子，R10和R11互相獨立的是烷基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是甲基或乙基，或R3和R4任選地組合形成嗎啉基；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X是苯基；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；并且
R5、R6、R7和R8中的每一個是氫原子。
在一個實施方案中，X是苯基；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4組合形成嗎啉基；并且R5、R6、R7和R8中的每一個是氫原子。
在一個實施方案中，X不存在；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是甲基或乙基，或R3和R4任選地組合形成嗎啉基；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
在一個實施方案中，X不存在；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；R6和R7都是甲氧基；并且R5和R8都是氫原子。
在一個實施方案中，X不存在；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；R6和R7都是甲氧基；并且R5和R8都是氫原子。
在一個實施方案中，X不存在；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4組合形成嗎啉基；R6和R7都是甲氧基；并且R5和R8都是氫原子。
在前述的每一個實施方案中，所述組分任選的是藥學上可接受的水合物或鹽形式。
本發(fā)明式XVIII的喹唑啉組分的代表性、非限制性實例是列于表3的化合物201-214。
表3.本發(fā)明的喹唑啉組分
根據本發(fā)明已經發(fā)現某些喹唑啉化合物可用于抑制TLR9信號傳遞。
本發(fā)明的一個方面提供可用于本發(fā)明方法的其他新型喹唑啉化合物。這些化合物此處表示為CMZ 203-34、CMZ 203-44、CMZ 203-45、CMZ 203-49、CMZ 203-51、CMZ 203-76、CMZ 203-78、CMZ 203-87、CMZ 203-93和CMZ 203-95。這些新型化合物中每一個的合成分別提供于實施例19-28。
這些具體化合物中的某些已經進行體外測試并發(fā)現抑制TLR9信號傳遞。見實施例29。因此化合物CMZ 203-34、CMZ 203-44、CMZ 203-45、CMZ 203-49、CMZ 203-51、CMZ 203-76、CMZ 203-78、CMZ 203-87、CMZ 203-93和CMZ 203-95被認為可用于本發(fā)明的方法。
本發(fā)明的一個方面提供抑制經TLR的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性TLR的細胞與有效量的具有結構式XIX的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以抑制經TLR的信號傳遞， 式XIX其中X是取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基，任選的經氮、氧或硫原子或經SO或SO2基團與喹唑啉連接；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成取代或未取代的雜環(huán)；L不存在或是氫原子、含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。根據本發(fā)明此方面的方法可以在體外或體內實施。此外，表達所述功能性TLR的細胞可以但不必須是免疫細胞。例如，表達所述功能性TLR的細胞可以是用表達載體轉染的細胞，其中所述表達載體指導所述細胞表達所述TLR。在一個實施方案中，所述TLR是TLR9，因而所述方法是抑制經TLR9的信號傳遞的方法。
除了表3中列出的化合物201-214以外，以下另外的代表性和非限制性喹唑啉化合物，參考式XIX列于表4的化合物215-229，可用于根據本發(fā)明此方面和所有其它方面中涉及使用取代4-伯氨基喹啉化合物的方法。另外的實例表示于下面的實施例中。
表4.用于本發(fā)明方法的其他喹啉組分

本發(fā)明的一個方面提供抑制經TLR的信號傳遞的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性TLR的免疫細胞
(a)在缺少喹唑啉組分下和有效量的TLR信號激動劑接觸，以刺激經TLR的信號傳遞，并(b)和有效量的具有如上定義的結構式XIX的喹唑啉組分接觸，以與缺少所述喹唑啉組分下TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞相比，抑制TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞。本發(fā)明此方面的喹唑啉組分可以是水合物或藥學上可接受的鹽形式。根據本發(fā)明此方面的方法可以在體外或體內實施。
也根據本發(fā)明的此方面，在一個實施方案中所述TLR是TLR9，所述TLR信號激動劑是TLR9信號激動劑，在一個實施方案中的方法因此是抑制TLR9應答TLR9信號激動劑的細胞內信號傳遞的方法。在一個實施方案中所述TLR信號激動劑是CpGDNA，例如CpG ODN，如ODN 2006。所述CpG ODN可屬于任意類的CpG ODN，包括A類(如ODN 2216)、B類(如ODN 2006)或C類(如ODN 2395)。
在一個實施方案中，所述TLR信號激動劑是如上述包括核酸的免疫復合體。
本發(fā)明的一個方面提供抑制對抗原性物質的免疫應答的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞(a)在缺少喹唑啉組分下和有效量的抗原性物質接觸，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答，并(b)和有效量的具有如上定義的結構式XIX的喹唑啉組分接觸，以與缺少所述喹唑啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比，抑制對所述抗原性物質的免疫應答。本發(fā)明此方面的喹唑啉組分可以是水合物或藥學上可接受的鹽形式。根據本發(fā)明此方面的方法可以在體外或體內實施。在一個實施方案中所述免疫應答是先天性免疫應答。在一個實施方案中所述免疫應答包括適應性免疫應答。
在一個實施方案中，在缺少喹唑啉組分下將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞與有效量的抗原性物質接觸、以刺激對所述抗原性物質的免疫應答的步驟涉及在缺少喹唑啉組分下主動施用有效量的抗原性物質、以刺激對所述抗原性物質的免疫應答的步驟?？墒褂檬┯盟隹乖晕镔|以使有效接觸的任意有效途徑或方式施用所述抗原性物質。以實例的方式，可通過局部或系統性注射、吸入、經口攝入、局部給藥、粘膜給藥或其任意組合進行給藥。
在一個實施方案中所述方法涉及將患者中表達功能性Toll樣受體的免疫細胞(a)在缺少喹唑啉組分下和有效量的抗原性物質接觸，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答，并(b)和有效量的具有如上定義的結構式XVII的喹唑啉組分接觸，以與缺少所述喹唑啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比，抑制所述患者對所述抗原性物質的免疫應答。
在一個實施方案中，在缺少喹唑啉組分下將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞與有效量的抗原性物質接觸、以刺激對所述抗原性物質的免疫應答的步驟是被動的。例如在一個實施方案中，在將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞與有效量的具有如上定義的結構式XVII的喹唑啉組分接觸、以與缺少所述喹啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比抑制對所述抗原性物質的免疫應答的步驟之時或之前，所述免疫細胞已經正在接觸或已經接觸過有效量的抗原性物質，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答。
所述抗原性物質可以是變應原，如上所述。
所述抗原性物質可以是來源于或就是傳染性微生物劑的抗原，包括如上所述的細菌、病毒、真菌或寄生蟲的抗原。
所述抗原性物質可以是癌抗原，如上所述。
在本發(fā)明的一個方面中，提供治療患者中自身免疫病的方法。根據本發(fā)明此方面的方法涉及向患有自身免疫疾病的患者施用有效量的具有如上述結構式XIX的喹唑啉組分，以治療自身免疫病。本發(fā)明此方面中的喹唑啉組分可以是水合物或藥學上可接受的鹽形式。在一個實施方案中，所述自身免疫病選自系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、斯耶格倫綜合征、多肌炎、脈管炎、韋格納肉芽腫、結節(jié)病、強直性脊柱炎、賴特綜合征、牛皮癬性關節(jié)炎和貝赫切特綜合征。在一個具體實施方案中，所述自身免疫病是系統性紅斑狼瘡。在一個具體實施方案中，所述自身免疫病是類風濕性關節(jié)炎。在一個實施方案中，所述患者是人。所述方法也可應用于以上列出的任意自身免疫病的動物模型。
在一個實施方案中，所述自身免疫病是如上所述的與免疫復合體相關的疾病。
所述喹唑啉組分可以任意合適的途徑施用所述患者，包括但不限于經口和胃腸道外。胃腸道外給藥途徑是如以上關于取代4-伯氨基喹啉中所描述的那些。
功效測試本發(fā)明的方法可用基于TLR/IL-1R信號轉導途徑的任意的多種可能讀出系統來評價。在一些實施方案中，所述方法的讀出是基于使用天然基因，或作為替代方案使用轉染的或通過其它方式人工引入的報告基因構建體，它們能對涉及MyD88、TRAF、p38和/或ERK的TLR/IL-1R信號轉導途徑作出應答。Hcker H et al.(1999)EMBO J186973-82。這些途徑激活激酶，包括κB激酶復合體和c-Jun N端激酶。因此具體可用于所述測試的報告基因和報告基因構建體例如包括可操作連接到NF-κB敏感啟動子的報告基因。這些啟動子的實例包括但不限于NF-κB、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12 p40、IP-10、CD80、CD86和TNF-α的啟動子。可操作連接到TLR敏感啟動子的報告基因可以包括但不限于酶(如熒光素酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰轉移酶(CAT)等)、生物發(fā)光標志物(如綠色熒光蛋白(GFP，如美國專利No.5,491,084)、藍色熒光蛋白(BFP，如美國專利No.6,486,382)等)、表面表達分子(如CD25、CD80、CD86)和分泌分子(如IL-1、IL-6、IL-8、IL-12 p40、TNF-α)。在某些實施方案中，所述報告物選自IL-8、TNF-α、NF-κB-熒光素酶(NF-κB-luc；Hcker H et al.(1999)EMBO J 186973-82)、IL-12 p40-luc(Murphy TL et al.(1995)Mol Cell Biol 155258-67)和TNF-luc(Hcker H et al.(1999)EMBO J 186973-82)。在依賴酶活性讀出的測試中，可以提供底物作為所述測試的部分，檢測可以涉及測量化學發(fā)光、熒光、顯色、引入放射性標記、藥物抗性或酶活性的其它標記物。對于依賴表面表達分子的測試，可以用流式細胞術(FACS)分析或功能性測試完成檢測。分泌分子可用酶聯免疫吸附測試(ELISA)或生物測試進行測試。很多這些和其它合適的讀出系統在本領域公知并有商業(yè)供應。
報告構建體在一些實施方案中，表達功能性TLR并用于本發(fā)明方法的細胞具有表達載體，其包括編碼用于檢測TLR信號傳遞的報告構建體的分離核酸。包括編碼用于檢測TLR信號傳遞的報告構建體之分離核酸的表達載體可以包括位于啟動子應答元件(增強子元件)控制下的報告基因。在一些實施方案中，所述啟動子應答元件與應答轉錄因子的最小啟動子連接，所述轉錄因子在本申請人認為是作為TLR信號傳遞的結果而被激活。這些最小啟動子的實例包括但不限于以下基因的啟動子AP-1、NF-κB、ATF2、IRF3和IRF7。這些最小啟動子分別含有對AP-1、NF-κB、ATF2、IRF3和IRF7敏感的相應啟動子應答元件。在另一些實施方案中，包括編碼用于檢測TLR信號傳遞的報告構建體之分離核酸的表達載體可以包括位于啟動子應答元件控制下的報告基因，所述啟動子應答元件選自對以下敏感的應答元件IL-6、IL-8、IL-12 p40亞基、I型IFN、RANTES、TNF、IP-10、I-TAC和干擾素刺激的應答元件(ISRE)。所述啟動子應答元件一般存在多個拷貝，如串聯重復。例如在一個報告構建體中，熒光素酶的編碼序列位于上游6個串聯重復的NF-κB應答元件的控制下。在另一個實例中，用于本發(fā)明的ISRE-熒光素酶報告構建體可以從Stratagene(目錄號219012)獲得，包括連接到熒光素酶報告基因上游TATA盒的5個串聯重復。如本文其它地方進一步討論，所述報告物自身可以是適于用本領域已知方法檢測的任意基因產物。這些檢測方法例如可以包括測量自發(fā)或受激發(fā)光、酶活性、可溶性分子的表達、細胞表面分子的表達等。
典型的讀出涉及常用的Toll/IL-1R信號傳遞元件，如MyD88、TRAF和IRAK分子，盡管對于TLR3來說MyD88的作用沒有對其它TLR家族成員清楚。如此處表明，這些應答包括誘導位于特異性啟動子如NF-κB啟動子控制下的基因、增加特定細胞因子水平、增加特定趨化因子水平等。NF-κB啟動子控制下的基因可以是天然包括NF-κB啟動子的基因，或者是在構建體中插入NF-κB啟動子的基因。包括NF-κB啟動子的基因和構建體包括但不限于IL-8、IL-12 p40、NF-κB-luc、IL-12 p40-luc和TNF-luc。
細胞因子水平增加的原因可以是應答TLR介導的信號傳遞所致的細胞因子生成增加、穩(wěn)定性增加、分泌增加或前述的任意組合。細胞因子一般包括但不限于IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF、G-CSF、M-CSF。Th1細胞因子包括但不限于IL-2、IFN-γ和IL-12。Th2細胞因子包括但不限于IL-4、IL-5和IL-10。
趨化因子水平增加的原因可以是應答TLR介導的信號傳遞所致的趨化因子生成增加、穩(wěn)定性增加、分泌增加或前述的任意組合。本發(fā)明尤其顯著的趨化因子包括但不限于CCL5(RANTES)、CXCL9(Mig)、CXCL10(IP-10)和CXCL11(I-TAC)、IL-8和MCP-1。
向患者給藥本發(fā)明的一些方面涉及向患者施用有效量的組分以得到特異性結果。因此根據本發(fā)明方法使用的小分子組分可以適于制藥用途的任何方式配制。
本發(fā)明配方可以藥學上可接受的溶液形式施用，其常規(guī)可以含有藥學上可接受濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、兼容性遞體、佐劑和任選的其它治療成分。
對于治療用途，有效量的所述化合物可以使適當靶細胞吸收所述化合物的任意方式向患者施用?！笆┯谩北景l(fā)明的藥物組合物可通過本領域技術人員已知的任意方式完成。具體施用途徑包括但不限于口腔、透皮(如經劑)、胃腸外注射(皮下、皮內、肌內、靜脈內、腹膜內、胸內等)或粘膜(鼻內、氣管內、吸入、直腸內、陰道內等)。注射可以是推注或連續(xù)灌輸形式。
例如施用根據本發(fā)明的藥物組合物經常是通過靜脈內、肌內、或其它胃腸外方式施用，或通過生物彈道型(biolistic)“基因槍”施用到表皮。施用它們也可以通過鼻內應用、吸入、表面、口腔，或可以作為植入物和甚至直腸或陰道應用。適合的液體或固體藥物制劑形式例如是用于注射或吸入的水或鹽溶液、微包封、encochleated、包被到顯微金顆粒上、含于脂質體中、噴霧劑、氣溶膠、植入到皮膚中的小丸(pellet)、或干燥到用于劃破皮膚的尖銳物上。所述藥物組合物也包括顆粒、粉末、片劑、包衣片劑、(微)膠囊、栓劑、糖漿、乳劑、懸液、霜、滴劑、或延遲釋放活性化合物的制劑，在這些制劑中賦形劑和添加劑和/或助劑如崩解劑、粘合劑、包衣劑、溶脹劑、潤滑劑、呈味劑、甜味劑或助溶劑如上描述常規(guī)使用。所述藥物組合物適用于多種藥物遞送系統。關于現有藥物遞送方法的簡述參見Langer R(1990)Science 2491527-33，該文獻引入此處作為參考。
包括在用于本發(fā)明方法的組合物中的化合物濃度可以是約1nM到約100μM。認為有效劑量是約10皮摩爾/kg到約100微摩爾/kg。
所述藥物組合物優(yōu)選以劑量單位制備和施用。液體劑量單位是用于注射或其它非胃腸道給藥的管或安瓿。固體劑量單位是片劑、膠囊、粉末和栓劑。為治療患者，根據所述化合物活性、給藥方式、給藥目的(即預防或治療)、疾病性質和嚴重程度、患者年齡和體重，不同的劑量可能是必要的?？梢酝ㄟ^以獨立劑量單位或幾個更小劑量單位的形式單次施用，以進行給定劑量的給藥。分別在特定日、周或月間隔重復和多次給藥也包括在本發(fā)明內。
所述組分可以本身(純粹)或藥學上可接受的鹽形式施用。當用于藥品時，所述鹽應是藥學上可接受的，但非藥學上可接受的鹽可以方便的用于制備相應的藥學上可接受的鹽。這些鹽包括但不限于從以下酸制備的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、乙酸、水楊酸、對甲苯磺酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。另外，這些鹽可以制備成堿金屬或堿土金屬鹽，如所述羧酸基團的鈉、鉀或鈣鹽。
合適的緩沖劑包括乙酸和鹽(1-2％w/v)；檸檬酸和鹽(1-3％w/v)；硼酸和鹽(0.5-2.5％w/v)與磷酸和鹽(0.8-2％w/v)。合適的防腐劑包括苯扎氯銨(0.003-0.03％w/v)；氯丁醇(0.3-0.9％w/v)；對羥基苯甲酸酯(0.01-0.25％w/v)；和硫柳汞(0.004-0.02％w/v)。
本發(fā)明的藥物組合物任選的包括活性成分和任選的藥學上可接受的遞體。術語“藥學上可接受的遞體”表示一種或多種兼容的固體或液體填充劑、稀釋劑或成膠囊物質，它們適合施用于人或其它脊椎動物。術語“遞體”表示天然或合成的有機或無機成分，所述活性成分與之組合以輔助應用。所述藥物組合物的成分也能與本發(fā)明的化合物共混和互相共混，其共混方式使得沒有能實質上阻礙預期藥物療效的相互作用。
適于胃腸道外給藥的組合物包括可以與受者血液等滲的無菌水性制劑?？山邮艿馁x形劑和溶劑有水、Ringer’s溶液、磷酸鹽緩沖液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌固化油通常也用作溶劑或懸浮介質。為此目的，任何品牌固化礦物油或非礦物油可以使用，包括合成單-或二甘油酯。另外發(fā)現脂肪酸如油酸可用于制備注射劑。適于皮下、肌內、腹膜內、靜脈內等的遞體制劑可在Remington′s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Company，Easton，PA中查到。
用于本發(fā)明的化合物可以超過兩種這些化合物的混合物形式遞送。除了所述化合物組合以外，混合物還可以包括一種或多種佐劑。
可用多種給藥途徑。當然，選擇特定方式將依賴于所選特定化合物、所述患者的年齡和一般健康狀態(tài)、待治療具體疾病和療效需要的劑量。一般說來，本發(fā)明的方法可用醫(yī)學允許的任何給藥方式實施，即以產生有效水平應答而不引起臨床上不可接受副作用的任何方式實施。優(yōu)選的給藥方式在以上討論。
所述組合物可方便的以單位劑量形式提供，并可以用制藥領域公知的任何方法制備。所有方法包括將所述化合物與組成一種或多種輔助成分的遞體結合的步驟。一般來說，通過均勻和緊密的將所述化合物與液體遞體、精細分開的固體遞體或兩種一起結合，如果必要，再做成產品形狀，從而制備所述組合物。
其它遞送系統可以包括定時釋放、延遲釋放或持續(xù)釋放遞送系統。這些系統可以避免重復施用所述化合物，從而增加所述患者和醫(yī)師的方便性。很多類型的釋放遞送系統可以使用并對本領域普通技術人員已知。它們包括聚合物基系統，如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯、聚己內酯、聚酰胺酯、聚原酸酯、聚羥基丁酸和聚酐。含有藥物的前述聚合物的微膠囊描述于，例如美國專利No.5,075,109。遞送系統也包括非聚合物系統，它們是脂，包括固醇如膽固醇、膽固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如單、二和三甘油酯；水凝膠釋放系統；硅橡膠系統；肽基系統；蠟包衣；使用常規(guī)粘合劑和賦形劑的壓縮片；部分融合的植入物等。具體實例包括但不限于(a)溶蝕系統，其中本發(fā)明成分以基質內的形式被包含，如描述于美國專利No.4,452,775、4,675,189和5,736,152中的那些；和(b)擴散系統，其中活性成分以受控制的速率從聚合物中滲出，如在美國專利No.3,854,480、5,133,974和5,407,686中描述的那些。此外，可以使用基于泵的硬件遞送系統，其中一些適于植入。
本發(fā)明將進一步在以下實施例中描述，這些實施例不限制權利要求書描述的發(fā)明范圍。
實施例實施例1從小分子庫中體外篩選人TLR9的抑制劑用于初步篩選的候選小分子從880個非專利小分子的商品庫中獲得(PrestwickChemical Library)，所述小分子根據結構多樣性和對人的已驗證生物利用度而選擇。穩(wěn)定轉染人TLR9(hTLR9)表達載體的人胚腎HEK293細胞在存在50nM CpG ODN2006(即ODN 2006的EC50濃度)和從5×10-7到5×10-5M范圍的不同濃度選定小分子候選化合物下培養(yǎng)過夜。根據對共轉染到細胞中的6×NF-κB-熒光素酶報告構建體的誘導來測試TLR9活性。測量結果表示為對缺乏ODN 2006下測量的基線熒光素酶活性的誘導倍數，并與單獨存在EC50濃度ODN 2006下對基線的誘導倍數比較。根據該初步篩選，多種小分子被鑒定為先導化合物，并根據結構和活性分類。使用從另外庫中選擇或專門為此目的制備的另外的小分子以相似方式進行另外的篩選。這些測試的一些結果表示于圖1和表5-16中。
所述方法在下面更詳細描述。對每個獨立細胞克隆(hTLR3-NFκB-293，hTLR7-NFκB-293，hTLR8-NFκB-293和hTLR9-NFκB-293)的細胞進行計數，并在刺激前一天以1.5×104細胞/孔接種于96孔細胞培養(yǎng)板中。為了貼壁，所述細胞在接種后在37℃、5％CO2的濕空氣中培養(yǎng)過夜。
同時篩選每種化合物針對所有受體TLR3、TLR7、TLR8和TLR9的作用。每種化合物測試三種不同終濃度(0.5μg/ml，5μg/ml和50μg/ml)且每個濃度進行重復測試，在單個多孔培養(yǎng)板上可使用高達15種測試化合物進行16小時細胞刺激。創(chuàng)建4×終濃度的母板以準備不同測試化合物，加到細胞中。
對于細胞培養(yǎng)板上的每個獨立細胞克隆，加入重復對照。陽性對照按如下使用(終濃度)50μg/ml poly(I:C)用于hTLR3-NFκB-293；8μM resiquimod(R848)用于hTLR7-NFκB-293；30μM R848用于hTLR8-NFκB-293；2.5μM CpG-ODN 2006用于hTLR9-NFκB-293。單獨培養(yǎng)基用作陰性對照。加入對照和小分子以后，所述細胞克隆另外用EC50濃度的適當受體特異性配體進行刺激。
為計算對EC50濃度的適當受體特異性配體的基線應答，孔H3和H6不接受受體特異性配體。孔H2和H5(每孔有細胞和EC50濃度的適當受體特異性配體)的平均值除以孔H3和H6(每孔只有細胞)的平均值得到對EC50濃度的適當受體特異性配體的基線應答(即熒光素酶活性的誘導倍數)。
16小時刺激后，去除上清，用裂解緩沖液處理細胞并在測量前保存于-80℃。
激動劑篩選與前面剛描述過的拈抗劑平行進行。除了不加EC50濃度的受體特異性配體以外，所述方法類似于所述拮抗劑篩選。此篩選的結果反映激動性和毒性作用。
圖形評價系統對于每個篩選結果進行圖形記錄。對每種化合物確定描述圖形結果的數字評分。對于用作拮抗劑或激動劑或增效劑的陽性化合物，至少已經重復篩選兩次。
拮抗劑如上述測量每個細胞培養(yǎng)板的基線結果(通過加入EC50濃度的受體特異性配體測量)。通過與基線比較下調來測量拮抗作用。拮抗劑評分如下13在0.5μg/ml、5μg/ml和50μg/ml有明確下調的化合物；12在5μg/ml和50μg/ml有明確下調的化合物；11僅在50μg/ml有明確下調的化合物；--甚至在50μg/ml也沒有明確下調的化合物；激動劑為檢測激動劑活性，所述細胞用上述方式處理，但用小分子處理后不加EC50濃度的受體特異性配體。通常激動劑篩選的基線被當作是1，因為這些細胞不用EC50濃度的受體特異性配體另外刺激。當有高于基線的活性時存在激動劑活性。激動劑評分如下對于在0.5μg/ml具有最高激動劑活性的化合物，
-1與基線比較誘導超過5倍的化合物；-2與基線比較誘導2-5倍的化合物；-3與基線比較誘導少于2倍的化合物。
對于在5μg/ml具有最高激動劑活性的化合物，0.25與基線比較誘導超過5倍的化合物；0.5與基線比較誘導2-5倍的化合物；0.75與基線比較誘導少于2倍的化合物。
對于在50μg/ml具有最高激動劑活性的化合物，1與基線比較誘導超過5倍的化合物；2與基線比較誘導2-5倍的化合物；3與基線比較誘導少于2倍的化合物。
毒性在激動劑篩選內通過分析基線下活性測量所述小分子的“毒性”?！岸拘浴笨梢杂胁煌忉尅蛘呒毎寺￠g的差異，所述化合物正在影響所述細胞克隆內的經TLR信號轉導途徑，或者所述化合物對所述細胞實際上有毒性作用。
篩選每種化合物對所述四種細胞系中每一種的“毒性”。通常激動劑篩選的基線被當作是1，因為這些細胞不用EC50濃度的受體特異性配體另外刺激。表觀毒性評分如下T3在0.5μg/ml、5μg/ml和50μg/ml有明確下調的化合物；T2在5μg/ml和50μg/ml有明確下調的化合物；T1僅在50μg/ml有明確下調的化合物；實施例2從小分子庫中體外篩選人TLR8的抑制劑用于初步篩選的候選小分子以與實施例1中相似的方式鑒定，除了HEK293細胞穩(wěn)定轉染人TLR8(hTLR8)表達載體，并在500nM R848(R848對TLR8的EC50)和5×10-7-5×10-5M的不同濃度選定小分子候選化合物存在下培養(yǎng)過夜。根據對共轉染到細胞中的6×NF-κB-熒光素酶報告構建體的誘導來測試TLR8活性。測量結果表示為對缺乏R848下測量的基線熒光素酶活性的誘導倍數。根據該初步篩選，多種小分子被鑒定為先導化合物，并根據結構和活性分類。使用從另外庫中選擇或專門為此目的制備的另外的小分子以相似方式進行另外的篩選。這些測試的一些結果表示于表5-16中。評分如上報告但應用到TLR8。
實施例3從小分子庫中體外篩選人TLR7的抑制劑用于初步篩選的候選小分子以與實施例1中相似的方式鑒定，除了HEK293細胞穩(wěn)定轉染人TLR7(hTLR7)表達載體，并在2μM R848(R848對TLR7的EC50)和5×10-7-5×10-5M的不同濃度選定小分子候選化合物存在下培養(yǎng)過夜。根據對共轉染到細胞中的6×NF-κB-熒光素酶報告構建體的誘導來測試TLR7活性。測量結果表示為對缺乏R848下測量的基線熒光素酶活性的誘導倍數。根據這個初步篩選，多種小分子被鑒定為先導化合物，并根據結構和活性分類。使用從另外庫中選擇或專門為此目的制備的另外的小分子以相似方式進行另外的篩選。這些測試的一些結果表示于表5-16中。評分如上報告但應用到TLR7。
實施例4從小分子庫中體外篩選人TLR3的抑制劑用于初步篩選的候選小分子以與實施例1中相似的方式鑒定，除了HEK293細胞穩(wěn)定轉染人TLR3(hTLR3)表達載體，并在2.5μg/ml poly(I:C)(poly(I:C)對TLR3的EC50)和5×10-7-5×10-5M的不同濃度選定小分子候選化合物存在下培養(yǎng)過夜。根據對共轉染到細胞中的6×NF-κB-熒光素酶報告構建體的誘導來測試TLR3活性。測量結果表示為對缺乏poly(I:C)下測量的基線熒光素酶活性的誘導倍數。根據這個初步篩選，多種小分子被鑒定為先導化合物，并根據結構和活性分類。使用從另外庫中選擇或專門為此目的制備的另外的小分子以相似方式進行另外的篩選。這些測試的一些結果表示于表5-16中。評分如上報告但應用到TLR3。
在下表5-17中提供的數據中，應該認識到至少某些化合物可以符合不止一種化學式。
表5.式II化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用


表6.式III化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用
表7.式IV化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用
表8.式V化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用
表9.式VI化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用

表10.式VII化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用 表11.式VIII化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用

表12.式IX化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用
表14.式XI化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用
表15.式XII化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用 表16.式XIII化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用

表17.式XIV化合物的實例及其對選定TLR的抑制作用 實施例5體內篩選選定的小分子施用實驗小鼠已知量的候選小分子和PAMP或其它合適TLR配體如CpG核酸的來源。陰性對照小鼠只接受單獨的PAMP或其它合適TLR配體如CpG核酸的來源。適當時間后，從對照和實驗小鼠獲取血樣，并用合適方法如酶聯免疫吸附測試(ELISA)評價細胞因子血清濃度。替代性的或另外，從兩組動物分離外周血單核細胞(PBMC)，并用合適技術如熒光激活細胞分選術(FACS)檢驗激活標志物的表達。成對方式比較對照和實驗組結果。與陰性對照動物比較，實驗組動物中激活標志物表達降低或細胞因子濃度降低表明所述小分子抑制TLR介導的、對所述TLR配體應答的信號傳遞。與陰性對照動物比較，實驗組動物中激活標志物表達增加或細胞因子濃度增加表明所述小分子促進TLR介導的、對所述TLR配體應答的信號傳遞。
實施例6體內篩選選定的小分子施用實驗小鼠候選小分子。陰性對照小鼠施用單獨的遞體。施用小分子或施用單獨的遞體后，分離PBMC，然后在缺少小分子下刺激所述PBMC使之表達激活標志物如CD86或分泌產物如細胞因子(如IFN-α、IL-6、TNF-α)或趨化因子(如IP-10)的條件下，將PBMC體外暴露于CpG核酸。用FACS、ELISA或其它合適方法定量所述激活標志物的表達或所述產物的分泌，并比較施用或不施用所述小分子下獲得的結果。與陰性對照動物比較，實驗組動物中激活標志物表達降低或細胞因子濃度降低表明所述小分子抑制TLR介導的、對所述TLR配體應答的信號傳遞。與陰性對照動物比較，實驗組動物中激活標志物表達增加或細胞因子濃度增加表明所述小分子促進TLR介導的、對所述TLR配體應答的信號傳遞。
實施例74-伯氨基哇啉對人TLR9的拮抗用人TLR9受體(hTLR9)和NF-κB啟動子驅動的熒光素酶基因穩(wěn)定共轉染HEK293細胞，產生hTLR9-NF-κB-293細胞系。計數hTLR9-NF-κB-293細胞，并以1.5×104細胞/孔在測試前一天接種于96孔細胞培養(yǎng)板上，于37℃/5％CO2培養(yǎng)。測試當日，分別加入50μM、5.0μM或0.5μM的拮抗劑。然后用EC50劑量的所述TLR9激動劑CpG-ODN 2006刺激細胞，并在加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)16小時。去除上清，用裂解緩沖液處理細胞，并在測量熒光素酶活性前保存于-80℃。用Promega，USA的熒光素酶測試系統根據制造商說明測量熒光素酶讀出值。結果總結于表18。表18中列出的拮抗劑劑量是阻斷所述TLR9激動劑的最小有效劑量(μM)。根據表18中結果顯而易見，經這種三點測試法測量，對于所有測試化合物，阻斷所述TLR9激動劑的最小有效劑量(μM)是0.5μM或5μM。
表18.4-氨基喹啉對人TLR9的拈抗
實施例8喹唑啉對人TLR9的拮抗如實施例7所述計數hTLR9-NF-κB-293細胞，并以1.5×104細胞/孔在測試前一天接種于96孔細胞培養(yǎng)板上，并于37℃/5％CO2培養(yǎng)。測試當日，加入從50μM起始經7步1/5到1/6稀釋的各種濃度的拮抗劑。然后用EC50劑量的所述TLR9激動劑CpG-ODN 2006刺激細胞，并在加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)16小時。按實施例7去除上清，用裂解緩沖液處理細胞，并在所述測量熒光素酶活性前保存于-80℃。得到∑形拮抗曲線，計算阻斷50％激動劑應答的抑制劑濃度(IC50)。表19中標題欄為hTLR9的結果是阻斷hTLR9-NF-κB-293細胞中CpG ODN產生信號的IC50劑量(μM)。
另外，監(jiān)測人外周血單核細胞(PBMC)中的TLR9配體拮抗。從杜塞爾多夫大學血庫(Blood Bank of the University of Dusseldorf)(德國)獲得來自健康男性和女性的外周血淡黃色層(buffy coat)制備物，并從這些經Ficoll-Hypaque(Sigma)離心純化PBMC。純化的PBMC重懸于添加5％(v/v)熱滅活人AB血清(BioWhittaker，Belgium)或10％(v/v)熱滅活胎牛血清(FCS)、1.5ml L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素(全部來自Sigma)的RPMI 1640培養(yǎng)基中。濃度3×106/ml到5×106/ml的新鮮PBMC加入96孔圓底板(150μl/孔)中。細胞鋪板后分別加入從50μM起始經7步1/5到1/6稀釋的各種濃度的拮抗劑。然后用所述TLR9激動劑CpG-ODN 2006刺激細胞，并在加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)16小時。收集培養(yǎng)上清，如果不立即使用，凍在-20℃直至需要時。用商品ELISA試劑盒(IL-6，Diaclone，USA)定量評價上清中的白介素6(IL-6)。得到∑形拮抗曲線并計算IC50。表19中標題欄為IL-6的結果是阻斷PBMC細胞中CpG ODN產生的IL-6生產的IC50劑量(μM)。


ND無數據實施例9與結構相似的喹啉比較，喹唑啉化合物的體內毒性降低向雌性BALB/c小鼠(n＝3/組)腹膜內快速推注(bolus injection)0.2ml體積的CMZ 203-43(1.0或4.0mg)、CMZ 203-34(1.0或4.0mg)或CMZ 203-49(1.0或4.0mg)?；衔顲MZ203-43具有結構式 其它小鼠以相同方式接受10％二甲基亞砜(DMSO)。從注射前(第1天)直到第5天每天稱重動物。第5天心臟穿刺采血并分析血液學和生化參數。每天監(jiān)測動物發(fā)病率和死亡率。結果表示于圖2和圖3。
圖2A表示不同組的體重變化(相對于第一次注射前的體重)±平均值標準誤差。圖2B表示不同組的平均體重±平均值標準誤差。接受1.0mg CMZ 203-43的小鼠體重顯著降低，而接受兩種劑量喹唑啉的小鼠不是這樣。所有接受4.0mg CMZ 203-43的小鼠在第4天死亡。4.0mg CMZ 203-43的小鼠尸檢顯示有腸梗阻。
圖3用不同組的總白細胞平均百分率±平均值標準誤差表示白血細胞(WBC)分化。用1.0mg CMZ 203-43處理的小鼠具有大量的嗜中性細胞，而接受兩種劑量喹唑啉的小鼠沒有。因為所有小鼠在第5天前死亡，所以沒有用4.0mg CMZ 203-43處理的小鼠的數據。
實施例104-伯氨基喹啉和喹唑啉對IP-10的體內抑制腹膜內注射40μg喹啉203-43、喹唑啉203-34、203-49或203-51，或注射100μl無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)對照，對BALB/c小鼠(n＝5)進行預處理。注射后1小時，向小鼠皮下注射100μg CpG ODN 2006。注射CpG ODN 2006后3小時對動物取血，并用IP-10特異性酶聯免疫吸附測試(ELISA)測量血漿中IP-10水平。結果表示于圖4。用203-43(與PBS對照相比p＝0.00013)或203-34(與PBS對照相比p＝0.00044)預處理的小鼠中血清IP-10濃度顯著降低。
實施例114-伯氨基喹啉和喹唑啉對TNF-α的體內抑制對于如實施例10處理的BLAB/c小鼠組也對TNF-α進行分析。注射CpG ODN2006后1小時對動物取血，并用TNF-α特異性ELISA測量血漿中TNF-α水平。結果表示于圖5。用203-43(與PBS對照相比p＝0.0023)或203-34(與PBS對照相比p＝0.0012)預處理的小鼠中血清TNF-α濃度顯著降低。而用203-49處理的小鼠具有血清TNF-α濃度降低的趨勢。
實施例12合成CMZ 203-84 4-氟二苯甲酮(4-flurobenzophenone)(16g，0.08mol)和N-甲基哌嗪(14g，0.14mol)的混合物在含碳酸鈉(12.7g，0.12mol)的水中攪拌并回流20小時。冷卻后用乙酸乙酯(200mL)萃取混合物。用水(100mL)洗滌有機相然后再用10％鹽酸溶液(3×50mL)萃取。用乙酸乙酯(100mL)洗滌合并的酸萃取液，然后加入40％氫氧化鈉溶液使之變堿。固體氨基二苯甲酮被萃取到乙酸乙酯(200mL)中，并用鹽水洗滌萃取物。真空蒸發(fā)乙酸乙酯相得到白色固體產物，產率7.0g，33％。
實施例13合成CMZ 203-85所述二苯甲酮(15g，0.056mol)和粉末狀氫氧化鈉(15g)在乙醇(150mL)中的混合物攪拌并加熱回流。停止加熱并以保持混合物回流的速率分多次加入鋅粉(15g)。加完后加熱混合物使之回流1小時。冷卻反應混合物并過濾除鋅。用乙醇(20mL)洗滌鋅并將合并濾液加入水中(500mL)。經過濾、用水洗滌并燥分離到白色結晶產物。獲得所述原醇12.1g，產率80％。
所得原醇(1.13g，4.18×10-3mol)的NMP溶液(10mL)在氮氣氛下攪拌并隨著加入氫化鈉分散體(0.336g，60％，8.36×10-3mol)。在65℃攪拌該混合物直至氫氣產生停止。然后加入鹽酸2-(二甲氨基)乙基氯化物(0.602g，4.18×10-3mol)，并繼續(xù)在65℃攪拌該混合物1小時。以一小時間隔再加兩次等比例的氫化鈉分散體和鹽酸2-(二甲氨基)乙基氯化物。最后一次加入后，攪拌混合物并加熱兩小時，然后冷卻?；旌衔锏谷?0％氫氧化鈉溶液(200mL)中，并用二氯甲烷(2×100mL)萃取此懸液。用10％氫氧化鈉溶液(100mL)洗滌合并萃取液，然后真空汽提，得到有一些NMP污染以及少量起始物的粗產物。在硅膠色譜上用含20％甲醇的二氯甲烷洗脫雜質，從而純化產物。然后用含1％二乙基胺的含20％甲醇的二氯甲烷洗脫產物。得到0.540g淺棕色油狀的CMZ 203-85，產率37％。
實施例14合成CMZ 203-88 所述二苯甲酮(4.65g，0.0173mol)和鹽酸羥胺(1.89g，0.027mol)合并于乙醇(25mL)中。向此混合物中加入40％氫氧化鈉溶液(8.7g，0.087mol)。攪拌回流所得混合物，直至TLC(硅膠，含10％甲醇的二氯甲烷)顯示反應已完成(約30分鐘)。冷卻后，加入碳酸氫鈉(20g)水溶液(300mL)，并過濾分離沉淀的固體。用水洗滌并干燥后，得到4.85g(95％)CMZ 203-88白色固體。
實施例15合成CMZ 203-88-1
所述肟(1.0g，3.39×10-3mol)的乙醇溶液(20mL)在存在10％碳載鈀(200mg)下攪拌回流。向此混合物中逐滴加入90％甲酸(0.35g，6.77×10-3mol)。完全加入甲酸后，加熱回流反應混合物30分鐘。冷卻混合物并過濾分離催化劑，濾液在真空下汽提。殘留油迅速固化定量得到CMZ 203-88-1。
實施例16合成CMZ 203-89 攪拌所述原醇(1.4g，5.0×10-3mol)的DMF(10mL)和二氯甲烷(20mL)溶液的同時緩慢加入亞硫酰氯(0.6g，5.0×10-3mol)。室溫攪拌30分鐘后，逐滴加入N，N-二甲基乙二胺(0.88g，1.0×10-3mol)到渾濁溶液中。室溫攪拌混合物30分鐘，然后倒入5％氫氧化鈉溶液(400mL)中。用二氯甲烷(2×100mL)萃取此混合物，合并萃取液用5％氫氧化鈉(200mL)洗滌。經硫酸鎂干燥后萃取液過濾，并在真空下汽提得到油狀物。用含20％甲醇的二氯甲烷經硅膠色譜洗脫雜質從而純化產物。然后用含1％二乙胺的含20％甲醇的二氯甲烷洗脫產物。得到淺棕色油狀CMZ 203-89，產率0.588g，33.4％。
實施例17合成CMZ 203-91 攪拌所述原醇(0.6g，2.03×10-3mol)的DMF(5mL)溶液的同時緩慢加入亞硫酰氯(0.242g，2.03×10-3mol)。室溫攪拌30分鐘后，逐滴加入N-甲基哌嗪(0.400g，4.0×10-3mol)到溶液中。室溫攪拌混合物30分鐘，然后倒入5％氫氧化鈉溶液(200mL)中。用二氯甲烷(2×100mL)萃取此懸液，合并萃取液用水(100mL)洗滌。萃取液在真空下汽提得到油狀物。用含20％甲醇的二氯甲烷經硅膠色譜洗脫雜質從而純化產物。然后用含1％二乙胺的含20％甲醇的二氯甲烷洗脫產物。得到油狀CMZ203-91，經放置而結晶，產率0.58g，77％。
實施例18本發(fā)明的新型二芳基甲烷化合物對人TLR9的拮抗如實施例7所述計數hTLR9-NF-κB-293細胞并以1.5×104細胞/孔在測試前一天接種于96孔細胞培養(yǎng)板上，并培養(yǎng)于37℃/5％CO2。測試當日，加入從50μM起始經7步1/5到1/6稀釋的各種濃度的拮抗劑。然后用EC50劑量的TLR9激動劑CpG-ODN 2006刺激細胞，并在加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)16小時。按實施例7去除上清，用裂解緩沖液處理細胞并在所述測量熒光素酶活性前保存于-80℃。得到∑形拮抗曲線并計算阻斷50％激動劑應答的抑制劑濃度(IC50)。表20中標題欄為hTLR9的結果是阻斷hTLR9-NF-κB-293細胞中CpG ODN產生信號的IC50劑量(μM)。
表20.本發(fā)明新型二芳基甲烷化合物對人TLR9的拮抗
實施例19合成CMZ 203-34步驟一 在含碳酸鈉(12.7g，0.12mol)的水(80mL)中的4-氟苯甲醛(10g，0.08mol)和N-甲基哌嗪(14g，0.14mol)的混合物攪拌并回流21小時。冷卻后將混合物倒入含水(200mL)的分液漏斗中，油狀產物萃取到二氯甲烷(3×50mL)中。合并萃取液用水洗滌，然后在真空下汽提。分離的油狀產物經冷卻固化成棕褐色固體。固體產物在己烷中粉碎并經過濾分離。干燥后得到14.9g(91％)幾乎白色的固體N-(4-甲?；交?-N’-甲基哌嗪。
步驟二 鄰氨基苯甲酰胺(9.94g，0.073mol)和N-(4-甲?；交?-N’-甲基哌嗪(14.9g，0.073mol)合并于NMP(100mL)中。攪拌該混合物并保溫直至完全溶解。向溫溶液中加入對甲苯磺酸單水合物(2.0g)，然后在100℃加熱溶液30分鐘。加入乙酸(50mL)，繼續(xù)在100℃攪拌并加熱混合物30分鐘。在約2分鐘期間加入氯醌(17.9g，0.073mol)。在100℃加熱黑色溶液10分鐘。溶液冷卻到室溫并用水(500mL)和叔丁基甲基醚(TBME，500mL)稀釋。攪拌混合物并加入固體碳酸鈉堿化。攪拌15分鐘后過濾分離沉淀產物。粗產物重懸于溫水中，攪拌5分鐘，然后過濾收集。依次用水、TBME洗滌后，空氣干燥所得固體。干燥的喹唑啉在正丁醇中重結晶，得到無色針狀產物11.1g(50％)。
步驟三 所述喹唑啉(2.4g，7.5×10-3mol)在攪拌下分多次加入三氯氧磷(10mL)中。所述混合物加溫到80℃得到紅色溶液，固體從中開始沉淀?；旌衔镌?0℃攪拌15分鐘，然后加熱使短暫回流。冷卻后所得漿狀物在攪拌下緩慢加入冷10％碳酸鈉溶液(650mL)中。攪拌15分鐘后，固體氯喹唑啉萃取到氯仿(2×150mL)中。合并萃取液用鹽水洗滌，然后用硫酸鎂干燥。過濾溶液除去干燥劑，濾液在真空下汽提得到黃色固體。加入N-甲基吡咯烷酮(NMP，20mL)固體經加溫溶解。加入N，N-二甲基乙二胺(1.32g，0.015mol)，然后在100℃加溫溶液30分鐘。冷卻后用水(200mL)和濃氨水(50mL)稀釋NMP溶液。沉淀產物萃取到二氯甲烷(2×100mL)中。合并萃取液，經硫酸鎂干燥，過濾，然后汽提得到淺棕色油。用含10％甲醇的二氯甲烷作洗脫劑經硅膠色譜繼續(xù)純化。這樣分離得到600mg(1.54×10-3mol)油狀純喹唑啉。產物溶于叔丁基甲基醚(TBME，50mL)，并在攪拌下加入溶于TBME(50mL)中的甲苯磺酸單水合物(584mg，3.1×10-3mol)。過濾分離得到固體雙甲苯磺酸鹽，用TBME洗滌并干燥得到1.0g黃色固體產物。
實施例20合成CMZ 203-44 N，N-二甲基乙二胺(3.5g，0.04mol)和2-苯基-4-氯喹唑啉(2.4g，0.01mol)合并于正丁醇(50mL)中并回流。一旦開始回流，TLC(硅膠，含10％甲醇的二氯甲烷)顯示反應完成。冷卻溶液并汽提。殘余物溶于叔丁基甲基醚(TBME)并用水洗滌溶液。經硫酸鎂干燥后過濾并汽提溶液，得到1.37g(0.0047mol，47％)油狀粗產物。產物溶于乙醇(25mL)中并用溶于乙醇(5mL)中的濃硫酸(0.46g，0.0047mol)溶液處理。幾秒鐘內開始析出結晶硫酸鹽，室溫30分鐘后經過濾分離。用乙醇洗滌所得鹽并干燥。產率是1.77g，(從粗產物中96％)。
實施例21合成CMZ 203-45 60％氫化鈉(0.80g，0.02mol)在NMP(50mL)中的漿狀物在氮氣氛中攪拌，同時經注射器緩慢加入N，N-二甲基乙醇胺(1.96g，0.022mol，2.2mL)。加入所述胺后，在30℃攪拌溶液10分鐘，隨后一次加入2-苯基-4-氯喹唑啉(2.4g，0.01mol)。繼續(xù)在40℃攪拌30分鐘，隨后TLC(硅膠，含10％甲醇的二氯甲烷)顯示反應已經完成。冷卻溶液并倒入水(250mL)中。將產物萃取到二氧甲烷(3×50mL)中。硫酸鎂干燥后過濾并汽提溶液，得到油狀粗產物。產物溶于乙醇(20mL)中，并用溶于乙醇(10mL)中的濃硫酸(0.85g，0.0087mol)溶液處理。結晶硫酸鹽緩慢析出，室溫60分鐘后過濾分離。用乙醇洗滌所得鹽并干燥。產率是1.37g，(基于硫酸為40％)。
實施例22合成CMZ 203-49 所述喹唑啉(3.2g，0.01mol)在攪拌下分多次加入三氯氧磷(10mL)中。所述混合物回流30分鐘。冷卻橙色漿狀物并加入TBME(100mL)。攪拌10分鐘后過濾分離所述氯喹唑啉，并加入N，N-二甲基氨基乙醇鈉鹽的NMP溶液(50mL)中。按如下制備N，N-二甲基氨基乙醇鈉鹽的NMP溶液。60％氫化鈉(2.1g，0.05mol)在NMP(50mL)中的漿狀物在氮氣氛中攪拌，同時經注射器緩慢加入N，N-二甲基乙醇胺(4.9g，0.055mol)。加入所述胺后，在30℃攪拌溶液10分鐘。該混合物在100℃攪拌30分鐘。冷卻后溶液加入二氯甲烷(150mL)中，并用水(3×150mL)萃取該溶液。汽提二氯甲烷溶液，殘余物溶于乙醇(50mL)中。向此溶液中加入溶于乙醇(5mL)中的濃硫酸(0.8g，0.008mol)。過濾分離析出的固體鹽，并依次用乙醇和TBME洗滌，干燥。產率是1.3g，23％。
實施例23合成CMZ 203-51步驟一 在攪拌下向鄰氨基苯甲酰胺(6.8g，0.05mol)和雙苯基甲醛(9.1g，0.05mol)的DMF溶液(100mL)中加入對甲苯磺酸單水合物(1.0g)。隨著二氫喹唑啉沉淀黃色溶液迅速變成稠漿。加熱漿液到100℃使多數固體溶解。向此熱混合物中在2分鐘內期間多次加入氯醌(12.3g，0.05mol)，形成黑色溶液。產物開始從此溶液中結晶。加熱混合物到沸騰得到深色溶液。冷卻后所述喹唑啉形成無色針狀結晶。過濾分離產物，用DMF和丙酮徹底洗滌然后干燥。產率是11.9g，80％。
步驟二 三氯氧磷(12mL)和所述雙苯基喹唑啉(2.98g，0.01mol)一起攪拌回流1小時。蒸餾除去過量三氯氧磷，油狀黃色殘余物用真空吸引裝置除去痕量三氯氧磷。在己烷中粉碎所得黃色固體并傾倒除去己烷。向黃色固體中加入正丁醇(50mL)和N，N-二甲基乙二胺(6mL)。攪拌回流此溶液30分鐘。冷卻正丁醇溶液并倒入含TBME(200mL)和10％鹽酸(200mL)的分液漏斗中。劇烈振蕩漏斗然后靜置分層。分離水層并收集于燒瓶中，用玻棒刮燒瓶，產物立即以淺黃色固體開始析出。室溫30分鐘后過濾分離產物并用少量冷水洗滌。干燥后獲得3.64g(82％)淺黃色固體產物。
實施例24合成CMZ 203-76步驟一 2，4-二氯-6，7-二甲氧基喹唑啉(5.2g，0.02mol)和N，N-二甲基乙二胺(1.76g，0.02mol)的二氯甲烷(65mL)溶液在室溫攪拌2小時。向形成的漿液中加入另一份N，N-二甲基乙二胺(1.76g，0.02mol)形成清澈溶液。室溫攪拌此溶液過夜。將溶液倒入10％碳酸鈉溶液(200mL)中使產物以固體析出。過濾分離固體，然后依次用水和二氯甲烷洗滌。此固體在2-丙醇中重結晶得到2.6g(42％)白色結晶固體的純化產物。
步驟二
所述氯喹唑啉(930mg，0.003mol)和N-甲基哌嗪(5mL)的混合物在100℃加熱3小時。冷卻溶液并真空汽提。加入正丁醇(10mL)并再次真空汽提所述溶液以除去殘余N-甲基哌嗪。剩余物溶于乙醇(20mL)，加入溶于乙醇(5mL)中的硫酸(0.59g，0.006mol)溶液?；旌衔锘亓?分鐘，然后冷卻。過濾分離產物，依次用乙醇和TBME洗滌產物，然后干燥。產率是0.85g，(50％)。
實施例25合成CMZ 203-78 所述氯喹唑啉(1.55g，0.005mol)和N-苯基哌嗪(1.6g，0.01mol)在正丁醇(5mL)中的混合物在100℃加熱2小時。用正丁醇(15mL)稀釋所得漿液，混合物加熱到沸騰以得到清澈溶液。冷卻后析出固體并過濾分離。在溫水中攪拌固體15分鐘以除去少量N-苯基哌嗪。過濾分離產物，用溫水洗滌并干燥，得到1.0g(46％)白色固體產物。
實施例26合成CMZ 203-87
4-氯喹唑啉(2.74g，8.0×10-3mol)和N-氨乙基嗎啉(2.10g，1.6×10-2mol)在乙醇(25mL)中的混合物回流2小時。冷卻反應混合物并倒入含氨水(50mL 28％)的水(200mL)中，沉淀產物萃取到二氯甲烷(3×100mL)中。合并萃取液用水(200mL)洗滌，然后用硫酸鎂干燥。過濾除去干燥劑后真空汽提所述溶液，得到棕褐色固體粗產物。此固體溶于溫二氯甲烷(10mL)，溶液用溫己烷(20mL)稀釋。冷卻后，產物以棕褐色固體結晶析出。過濾分離后固體用含30％二氯甲烷的己烷洗滌并干燥。產率是1.2g，(35％)。
實施例27合成CMZ 203-93步驟一 向鄰氨基苯甲酰胺(13.6g，0.10mol)和3-吡啶甲醛(10.7g，0.10mol)的NMP(100mL)和乙酸(50mL)溶液中加入對甲苯磺酸單水合物(2.0g)。在50℃攪拌溶液30分鐘，并在此時間點通過漏斗在1分鐘期間分多次加入氯醌(24.6g，0.10mol)。攪拌黑色溶液并冷卻到室溫使所述喹唑啉形成結晶。過濾分離固體，并依次用丙酮/NMP(1∶1)和丙酮洗滌。干燥后粗產物在正丁醇(200mL)和NMP(90mL)中重結晶。分離得到所述喹唑啉的棕褐色絲狀結晶，產率10.6g，47.5％。
步驟二 一部分所述喹唑啉(4.46g，0.02mol)在三氯氧磷(20mL)中回流1小時。冷卻后仔細將溶液倒入冷20％碳酸鈉溶液(500mL)中。過濾分離固體氯喹唑啉，用水洗滌并溶于二氯甲烷(400mL)中。溶液用硫酸鎂干燥、過濾并汽提得到所述氯喹唑啉淺黃色固體，產率3.7g，76.5％。所述4-氯喹唑啉(3.7g，0.015mol)在乙醇中與N-2-氨乙基嗎啉(3.99g，0.031mol)共回流1小時。冷卻后馬上汽提溶液，殘余物溶于水(400mL)中。加入碳酸鈉使溶液變堿，將產物萃取到二氯甲烷(2×100mL)中。合并萃取液用水(50mL)洗滌，然后用硫酸鎂干燥。過濾后汽提萃取液，得到棕褐色固體產物。在乙酸乙酯(25mL)和己烷(50mL)中重結晶固體。分離到幾乎白色的固體產物203-93，產率2.86g，56.0％。
實施例28合成CMZ 203-95步驟一 向鄰氨基苯甲酰胺(13.6g，0.10mol)和2-吡啶甲醛(10.7g，0.10mol)的甲醇(250mL)和乙酸(25mL)溶液中加入對甲苯磺酸單水合物(2.0g)。在50℃攪拌溶液30分鐘，并在此時間點通過漏斗在1分鐘期間分多次加入氯醌(24.6g，0.10mol)。用NMP(25mL)洗滌漏斗?；旌衔锛訜岬交亓?分鐘。攪拌黑色溶液并冷卻到室溫使所述喹唑啉形成結晶。過濾分離固體并用丙酮洗滌。千燥后粗產物用正丁醇重結晶兩次。在這些條件下少量四氯氫醌會共結晶，這可以通過在溫5％碳酸鈉溶液中攪拌除去。所述喹唑啉作為棕褐色固體分離，產率9.5g，43％。
步驟二 一部分所述喹唑啉(4.46g，0.02mol)在三氯氧磷(20mL)中回流30分鐘。冷卻后仔細將溶液倒入冷水(500mL)中。加入40％氫氧化鈉溶液中和溶液，從而使所述氯喹唑啉以白色固體析出。過濾分離固體氯喹唑啉，用水洗滌并溶于二氯甲烷(300mL)中。溶液用硫酸鎂干燥、過濾并汽提得到所述氯喹唑啉淺黃色固體，產率2.75g，57％。所述4-氯喹唑啉(2.75g，0.0114mol)在乙醇中與N-2-氨乙基嗎啉(2.97g，0.0228mol)共回流30分鐘。冷卻后馬上將溶液倒入10％氫氧化鈉溶液(200mL)中，并將產物萃取到二氯甲烷(3×100mL)中。合并萃取液用10％氫氧化鈉溶液(150mL)洗滌，然后用硫酸鎂干燥。過濾后汽提萃取液得到棕褐色固體產物。在正丁醇(10mL)和己烷(20mL)中重結晶固體。分離到幾乎白色的固體產物203-95，產率1.32g，34.5％。
等價物以上撰寫的說明書足以能使本領域技術人員實施本發(fā)明。本發(fā)明不限于所提供實施例的范圍，因為這些實施例的意圖是作為本發(fā)明一個方面的單個舉例說明，其它功能等價的實施方案包括在本發(fā)明范圍內。除了那些在此處已經給出和描述的以外，從前面的說明中，本發(fā)明的多種改進對本領域技術人員是顯而易見的，并落在附屬權利要求的范圍內。本發(fā)明的優(yōu)點和目的不是必須被本發(fā)明的每個實施方案包括。
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序列表<110>科勒制藥有限公司科勒制藥集團有限公司<120>小分子TOLL樣受體(TLR)拮抗劑<130>C1041.70036WO00<150>US 60/556,007<151>2004-03-23<150>US 60/480,588<151>2003-06-20<160>4<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成寡核苷酸<400>1tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成寡核苷酸<400>2gggggacgat cgtcgggggg 20<210>3<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
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<220>
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<221>修飾堿基<222>(2)..(2)<223>m5c<220>
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<221>修飾堿基<222>(21)..(21)<223>m5c<400>4tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 2權利要求
1.影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式I的化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式I其中2是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中1和2任選的通過B3橋連形成五員到七員環(huán)(3)，其中B3任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中當A是碳時，(3)不是吡啶；其中2任選的包括不飽和鍵；其中(3)任選的包括不飽和鍵；其中當R2存在時，是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，任選的經N、O或S與Z連接；其中當R3、R4、R5、R6、R7和R8存在時，互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中A是選自C、N、O和S的原子；其中A’、A”和A互相獨立的是R9、-NR9R10、-OR9或-CR9R10，其中R9是氫原子、羥基、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，其中R10任選的不存在或是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
2.抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式I化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞， 式I其中2是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中1和2任選的通過B3橋連形成五員到七員環(huán)(3)，其中B3任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中當A是碳時，(3)不是吡啶；其中2任選的包括不飽和鍵；其中(2)任選的包括不飽和鍵；其中當R2存在時，是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，任選的經N、O或S與Z連接；其中當R3、R4、R5、R6、R7和R8存在時，互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中A是選自C、N、O和S的原子；其中A’、A”和A互相獨立的是R9、-NR9R10、-OR9或-CR9R10，其中R9是氫原子、羥基、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，其中R10任選的不存在或是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
3.影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式I化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式I其中2是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中1和2任選的通過B3橋連形成五員到七員環(huán)(3)，其中B3任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中當A是碳時，(3)不是吡啶；其中2任選的包括不飽和鍵；其中(3)任選的包括不飽和鍵；其中當R2存在時，是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，任選的經N、O或S與Z連接；其中當R3、R4、R5、R6、R7和R8存在時，互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中A是選自C、N、O和S的原子；其中A’、A”和A互相獨立的是R9、-NR9R10、-OR9或-CR9R10，其中R9是氫原子、羥基、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，其中R10任選的不存在或是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
4.抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式I化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式I其中2是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中1和2任選的通過B3橋連形成五員到七員環(huán)(3)，其中B3任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中當A是碳時，(3)不是吡啶；其中2任選的包括不飽和鍵；其中(3)任選的包括不飽和鍵；其中當R2存在時，是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，任選的經N、O或S與Z連接；其中當R3、R4、R5、R6、R7和R8存在時，互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中A是選自C、N、O和S的原子；其中A’、A”和A互相獨立的是R9、-NR9R10、-OR9或-CR9R10，其中R9是氫原子、羥基、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，其中R10任選的不存在或是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
5.抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法，包括向需要這種治療的患者施用有效量的式I化合物，以抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答， 式I其中2是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中1和2任選的通過B3橋連形成五員到七員環(huán)(3)，其中B3任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中當A是碳時，(3)不是吡啶；其中2任選的包括不飽和鍵；其中(3)任選的包括不飽和鍵；其中當R2存在時，是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，任選的經N、O或S與Z連接；其中當R3、R4、R5、R6、R7和R8存在時，互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中A是選自C、N、O和S的原子；其中A’、A”和A互相獨立的是R9、-NR9R10、-OR9或-CR9R10，其中R9是氫原子、羥基、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，其中R10任選的不存在或是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
6.根據權利要求3-5中任意一項的方法，其中所述患者沒有需要用式I化合物治療的癥狀。
7.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中R2是取代或未取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
8.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中R2是由選自烷基、烷氧基、烷氧烷基、酯基、烷氨基、二烷基氨基、環(huán)氨基、鹵素原子及其任意組合的一個或多個取代基取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
9.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中R2是由選自烷氨基、二烷基氨基和環(huán)氨基的一個或多個取代基取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
10.根據權利要求9的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
11.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中R9是選自環(huán)氨基、烷氨基、二烷基氨基、呋喃基、苯基、噻吩基、氮雜雙環(huán)辛基、氮雜雙環(huán)庚基及其任意組合的取代烷基。
12.根據權利要求11的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
13.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中R4和R5的每一個是氫原子。
14.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中R4、R5和R8的每一個是氫原子。
15.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中R10是氫原子。
16.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中A是氮，(3)是五員環(huán)。
17.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中所述化合物是式II化合物， 式II其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
18.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中A是氮，(3)是六員環(huán)，B3是選自C、N、O和S的一個原子。
19.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中A是氮，(3)是六員環(huán)，B3是S。
20.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中所述化合物是式III化合物， 式III其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接，并且其中X選自N、O和S。
21.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中A是碳，(3)是六員環(huán)，B3是S。
22.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中所述化合物是式IV化合物， 式IV其中X是C或S，R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
23.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中A是氮，(3)是七員環(huán)，B3包含兩個碳原子。
24.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中所述化合物是式V化合物， 式V其中X和Y互相獨立的是C、N、O或S；R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
25.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中1和2不經B3橋連，A是碳，A’是-OR9。
26.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中所述化合物是式VI化合物， 式VI其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；R9是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
27.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中1和2不經B3橋連，A是碳，A’是-NR9R10。
28.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中所述化合物是式VII化合物， 式VII其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
29.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中1和2不經B3橋連，A是碳，A’是-CR9R10。
30.根據權利要求1-5中任意一項的方法，其中化合物是式VIII化合物， 式VIII其中R1是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
31.影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式IX化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式IX其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
32.抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式IX化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞， 式IX其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
33.影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式IX化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式IX其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
34.抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式IX化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式IX其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
35.抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法，包括向需要這種治療的患者施用有效量的式IX化合物，以抑制所述患者中的免疫刺激性核酸相關應答， 式IX其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
36.根據權利要求33-35中任意一項的方法，其中所述患者沒有需要用式IX化合物治療的癥狀。
37.根據權利要求31-35中任意一項的方法，其中R2是取代或未取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
38.根據權利要求31-35中任意一項的方法，其中R2是由選自烷基、烷氧基、烷氧烷基、酯基、烷氨基、二烷基氨基、環(huán)氨基、鹵素原子及其任意組合的一個或多個取代基取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
39.根據權利要求31-35中任意一項的方法，其中R2是由選自烷氨基、二烷基氨基和環(huán)氨基的一個或多個取代基取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
40.根據權利要求39的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
41.根據權利要求31-35中任意一項的方法，其中R9是選自環(huán)氨基、烷氨基、二烷基氨基、呋喃基、苯基、噻吩基、氮雜雙環(huán)辛基、氮雜雙環(huán)庚基及其任意組合的取代烷基。
42.根據權利要求41的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
43.根據權利要求31-35中任意一項的方法，其中R5和R8的每一個是氫原子。
44.根據權利要求31-35中任意一項的方法，其中R10是氫原子。
45.影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式X化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式X其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
46.抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式X化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞， 式X其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
47.影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式X化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式X其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
48.抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式X化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式X其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
49.抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法，包括向需要這種治療的患者施用有效量的式X化合物，以抑制所述患者中免疫刺激性核酸相關應答， 式X其中R2是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
50.根據權利要求47-49中任意一項的方法，其中所述患者沒有需要用式X化合物治療的癥狀。
51.根據權利要求45-49中任意一項的方法，其中R2是取代或未取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
52.根據權利要求45-49中任意一項的方法，其中R2是由選自烷基、烷氧基、烷氧烷基、酯基、烷氨基、二烷基氨基、環(huán)氨基、鹵素原子及其任意組合的一個或多個取代基取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
53.根據權利要求45-49中任意一項的方法，其中R2是由選自烷氨基、二烷基氨基和環(huán)氨基的一個或多個取代基取代的苯基、萘基、菲基、苯乙烯基、氮雜雙環(huán)辛烷或氮雜雙環(huán)庚烷基。
54.根據權利要求39的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
55.影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式XI化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式XI其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、R11和R12中的每一個是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；X是C、N、O或S。
56.抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式XI化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞， 式XI其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、R11和R12中的每一個是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；X是C、N、O或S。
57.影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式XI化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式XI其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、R11和R12中的每一個是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；X是C、N、O或S。
58.抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式XI化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式XI其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、R11和R12中的每一個是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；X是C、N、O或S。
59.抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法，包括向需要這種治療的患者施用有效量的式XI化合物，以抑制所述患者中免疫刺激性核酸相關應答， 式XI其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、R11和R12中的每一個是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；X是C、N、O或S。
60.根據權利要求57-59中任意一項的方法，其中所述患者沒有需要用式XI化合物治療的癥狀。
61.根據權利要求55-59中任意一項的方法，其中R1是選自環(huán)氨基、烷氨基、二烷基氨基、呋喃基、苯基、噻吩基、氮雜雙環(huán)辛烷、氮雜雙環(huán)庚烷基及其任意組合的取代烷基。
62.根據權利要求61的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
63.影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式XII化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式XII其中R1-R11中的每一個獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
64.抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式XII化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞， 式XII其中R1-R11中每一個獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
65.影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式XII化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式XII其中R1-R11中每一個獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
66.抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式XII化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式XII其中R1-R11中每一個獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
67.抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法，包括向需要這種治療的患者施用有效量的式XII化合物，以抑制所述患者中免疫刺激性核酸相關應答， 式XII其中R1-R11中每一個獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接。
68.根據權利要求65-67中任意一項的方法，其中所述患者沒有需要用式XII化合物治療的癥狀。
69.影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式XIII化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式XIII其中2’是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2’任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中2’任選的包含不飽和鍵；其中R4、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中A”是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
70.抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式XIII化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞， 式XIII其中2’是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2’任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中2’任選的包含不飽和鍵；其中R4、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中A”是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
71.影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式XIII化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式XIII其中2’是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2’任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中2’任選的包含不飽和鍵；其中R4、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中A”是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
72.抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式XIII化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式XIII其中2’是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2’任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中2’任選的包含不飽和鍵；其中R4、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中A”是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
73.抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法，包括向需要這種治療的患者施用有效量的式XIII化合物，以抑制所述患者中免疫刺激性核酸相關應答， 式XIII其中2’是五員到七員同素環(huán)或雜環(huán)，其中X、Y和Z中的每一個獨立的選自C、N、O和S，其中B2’任選的包括選自C、N、O和S的至少一個原子；其中2’任選的包含不飽和鍵；其中R4、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；其中R10是氫原子、低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團；并且其中A”是取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
74.根據權利要求71-73中任意一項的方法，其中所述患者沒有需要用式XIII化合物治療的癥狀。
75.根據權利要求69-73中任意一項的方法，其中R9是選自環(huán)氨基、烷氨基、二烷基氨基、呋喃基、苯基、噻吩基、氮雜雙環(huán)辛基、氮雜雙環(huán)庚基及其任意組合的取代烷基。
76.根據權利要求75的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
77.根據權利要求69-73中任意一項的方法，其中A”是選自環(huán)氨基、烷氨基、二烷基氨基、呋喃基、苯基、噻吩基、氮雜雙環(huán)辛基、氮雜雙環(huán)庚基及其任意組合的取代烷基。
78.根據權利要求77的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
79.根據權利要求69-73中任意一項的方法，其中R5和R8中的每一個是氫原子。
80.根據權利要求69-73中任意一項的方法，其中R10是氫原子。
81.影響TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式XIV或式XV化合物接觸，以抑制或促進TLR介導的、對TLR配體應答的信號傳遞， 式XIV 式XV其中R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；并且其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
82.抑制TLR介導的免疫刺激性信號傳遞的方法，包括將表達TLR的細胞與有效量的式XIV或式XV化合物接觸，以抑制TLR介導的、對TLR配體應答的免疫刺激性信號傳遞， 式XIV 式XV其中R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；并且其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
83.影響患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式XIV或式XV化合物，以抑制或促進所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式XIV 式XV其中R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；并且其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
84.抑制患者中TLR介導的免疫刺激的方法，包括向具有TLR介導的免疫刺激或有發(fā)生該免疫刺激風險的患者施用有效量的式XIV或式XV化合物，以抑制所述患者中TLR介導的免疫刺激， 式XIV 式XV其中R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；并且其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
85.抑制患者中免疫刺激性核酸相關應答的方法，包括向需要這種治療的患者施用有效量的式XIV或式XV化合物，以抑制所述患者中免疫刺激性核酸相關應答， 式XIV 式XV其中R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團，每個任選的經N、O或S連接；并且其中R9是氫原子、取代或未取代的低級烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或烷基雜環(huán)基團。
86.根據權利要求83-85中任意一項的方法，其中所述患者沒有需要用式XIV或式XV化合物治療的癥狀。
87.根據權利要求81-85中任意一項的方法，其中R9是選自環(huán)氨基、烷氨基、二烷基氨基、呋喃基、苯基、噻吩基、氮雜雙環(huán)辛基、氮雜雙環(huán)庚基及其任意組合的取代烷基。
88.根據權利要求87的方法，其中所述環(huán)氨基是哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基或嗎啉基。
89.具有結構式XVI的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽， 式XVI其中X不存在或是芳基、烷基、雜環(huán)基或苯乙烯基；R1和R2互相獨立的是氫原子或取代或未取代的烷基、烷烯基或芳基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)；R3是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R3任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR8R9或NR10，其中R8、R9和R10互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L是含1到10個碳的烷基或烷烯基，或是芳基；并且R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R4、R5、R6和R7的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
90.權利要求89的取代4-伯氨基喹啉組分，其中R5和R6互相獨立的是鹵素原子或烷氧基。
91.權利要求89的取代4-伯氨基喹啉組分，其中R5和R6互相獨立的是氯原子或甲氧基。
92.權利要求89的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X不存在或是芳基；NR1R2是雜環(huán)胺或是NR8(CH2)nNR9R10，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R8、R9和R10互相獨立的是氫原子或烷基；R3是氫原子；Y是芳基或是NR11，其中R11是氫原子或芳基或烷基；L不存在或是C2-C6的烷基；并且R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
93.權利要求89的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X不存在或是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基或是NR8(CH2)nNR9R10，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R8是氫原子，R9與R10互相獨立的是烷基；R3是氫原子；Y是NH；L是C2-C6的烷基；并且R4、R5、R6和R7互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
94.權利要求89的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X是苯基；NR1R2是連接到所述苯基X對位的 Y是NH；L是-(CH2)n-，其中n是2到6的整數，包括2和6在內；并且R3、R4、R5、R6和R7中的每一個是氫原子。
95.抑制經Toll樣受體(TLR)信號傳遞的方法，包括將表達功能性TLR的細胞與有效量的具有結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以抑制經TLR信號傳遞， 式XVII其中X不存在或是氮、氧或硫原子或SO或SO2基團；R1是氫原子或取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基；R2是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR7R8或NR9，其中R7、R8和R9互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L不存在或是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；并且R3、R4、R5和R6互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R3、R4、R5和R6的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
96.權利要求95的方法，其中所述取代4-伯氨基喹啉組分是權利要求89-94中任意一項的取代4-伯氨基喹啉組分。
97.權利要求95的方法，其中所述TLR是Toll樣受體9(TLR9)。
98.抑制經Toll樣受體(TLR)信號傳遞的方法，包括將表達功能性TLR的免疫細胞(a)在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下和有效量的TLR信號激動劑接觸，以刺激經TLR的信號傳遞，并(b)和有效量的具有結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以與缺少所述取代4-伯氨基喹啉組分下TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞相比，抑制TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞， 式XVII其中X不存在或是氮、氧或硫原子或SO或SO2基團；R1是氫原子或取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基；R2是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR7R8或NR9，其中R7、R8和R9互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L不存在或是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；并且R3、R4、R5和R6互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R3、R4、R5和R6的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
99.權利要求98的方法，其中所述取代4-伯氨基喹啉組分是權利要求89-94中任意一項的取代4-伯氨基喹啉組分。
100.權利要求98的方法，其中所述TLR信號激動劑是CpG DNA。
101.權利要求98的方法，其中所述TLR信號激動劑是含核酸的免疫復合體。
102.權利要求98的方法，其中所述TLR是Toll樣受體9(TLR9)。
103.抑制對抗原性物質的免疫應答的方法，包括將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞(a)在缺少取代4-伯氨基喹啉組分下和有效量的抗原性物質接觸，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答，并(b)和有效量的具有結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以與缺少所述取代4-伯氨基喹啉組分下對抗原性物質的免疫應答相比，抑制對抗原性物質的免疫應答， 式XVII其中X不存在或是氮、氧或硫原子或SO或SO2基團；R1是氫原子或取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基；R2是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR7R8或NR9，其中R7、R8和R9互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L不存在或是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；并且R3、R4、R5和R6互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R3、R4、R5和R6的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
104.權利要求103的方法，其中所述取代4-伯氨基喹啉組分是權利要求89-94中任意一項的取代4-伯氨基喹啉組分。
105.權利要求103的方法，其中所述接觸發(fā)生在體內。
106.權利要求103的方法，其中所述免疫應答包含適應性免疫應答。
107.權利要求103的方法，其中所述免疫應答是先天性免疫應答。
108.治療患者中自身免疫疾病的方法，包括向患有自身免疫疾病的患者施用有效量的具有結構式XVII的取代4-伯氨基喹啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，以治療所述自身免疫病 式XVII其中X不存在或是氮、氧或硫原子或SO或SO2基團；R1是氫原子或取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基；R2是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR7R8或NR9，其中R7、R8和R9互相獨立的是氫原子或取代或未取代烷基、烷烯基或芳基；L不存在或是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；并且R3、R4、R5和R6互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R3、R4、R5和R6的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
109.權利要求108的方法，其中所述取代4-伯氨基喹啉組分是權利要求89-94中任意一項的取代4-伯氨基喹啉組分。
110.權利要求108的方法，其中所述自身免疫疾病選自系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、斯耶格倫綜合征、多肌炎、脈管炎、韋格納肉芽腫、結節(jié)病、強直性脊柱炎、賴特綜合征、牛皮癬性關節(jié)炎和貝赫切特綜合征。
111.權利要求108的方法，其中所述自身免疫疾病是與免疫復合體相關的疾病。
112.權利要求108的方法，其中所述患者是人。
113.具有結構式XVIII的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽， 式XVIII其中X不存在或是芳基、烷基、雜環(huán)基或苯乙烯基，如果X是苯基，NR1R2是雜環(huán)的部分或是二胺；R1和R2互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R1和R2任選地組合形成雜環(huán)；Y是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成取代或未取代的雜環(huán)；L是含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)。
114.權利要求113的喹唑啉組分，其中R6和R7互相獨立的是鹵素原子或烷氧基。
115.權利要求113的喹唑啉組分，其中R6和R7互相獨立的是氯原子或甲氧基。
116.權利要求113的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X不存在或是芳基；NR1R2是雜環(huán)胺或是NR9(CH2)nNR10R11，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基；Y是芳基或是NR12，其中R12是氫原子或芳基或烷基；L不存在或是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
117.權利要求116的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X不存在或是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基或是NR9(CH2)nNR10R11，其中n是2到6的整數，包括2和6在內，R9是氫原子，R10和R11互相獨立的是烷基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
118.權利要求117的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X是芳基；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是甲基或乙基，或R3和R4任選地組合形成嗎啉基；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
119.權利要求118的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X是苯基；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；并且R5、R6、R7和R8中的每一個是氫原子。
120.權利要求118的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X是苯基；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4組合形成嗎啉基；并且R5、R6、R7和R8中的每一個是氫原子。
121.權利要求117的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X不存在；NR1R2是取代或未取代的哌嗪基或嗎啉基；Y是NH；L是C2-C6的烷基；R3和R4互相獨立的是甲基或乙基，或R3和R4任選地組合形成嗎啉基；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子或烷氧基。
122.權利要求121的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X不存在；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；R6和R7都是甲氧基；并且R5和R8都是氫原子。
123.權利要求121的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X不存在；NR1R2是N-苯基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4都是甲基；R6和R7都是甲氧基；并且R5和R8都是氫原子。
124.權利要求121的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，其中X不存在；NR1R2是N-甲基哌嗪；Y是NH；L是-CH2CH2-；R3和R4組合形成嗎啉基；R6和R7都是甲氧基；并且R5和R8都是氫原子。
125.抑制經Toll樣受體(TLR)的信號傳遞的方法，包括將表達功能性TLR的細胞與有效量的具有結構式XIX的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以抑制經TLR的信號傳遞， 式XIX其中X是取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基，任選的經氮、氧或硫原子或經SO或SO2基團與喹唑啉連接；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成雜環(huán)；L不存在或是氫原子、含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
126.權利要求125的方法，其中所述喹唑啉組分是權利要求113-124中任意一項的喹唑啉組分。
127.權利要求125的方法，其中所述TLR是Toll樣受體9(TLR9)。
128.抑制經Toll樣受體(TLR)的信號傳遞的方法，包括將表達功能性TLR的免疫細胞(a)在缺少喹唑啉組分下和有效量的TLR信號激動劑接觸，以刺激經TLR的信號傳遞，并(b)和有效量的具有結構式XIX的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以與缺少喹唑啉組分下TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞相比，抑制TLR應答TLR信號激動劑的信號傳遞， 式XIX其中X是取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基，任選的經氮、氧或硫原子或經SO或SO2基團與喹唑啉連接；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成雜環(huán)；L不存在或是氫原子、含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜、或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
129.權利要求128的方法，其中所述喹唑啉組分是權利要求113-124中任意一項的喹唑啉組分。
130.權利要求128的方法，其中所述TLR信號激動劑是CpG DNA。
131.權利要求128的方法，其中所述TLR信號激動劑是含核酸的免疫復合體。
132.權利要求128的方法，其中所述TLR是Toll樣受體9(TLR9)。
133.抑制對抗原性物質的免疫應答的方法，包括將表達功能性Toll樣受體的免疫細胞(a)在缺少喹唑啉組分下和有效量的抗原性物質接觸，以刺激對所述抗原性物質的免疫應答，并(b)和有效量的具有結構式XIX的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽接觸，以與缺少喹唑啉組分下對所述抗原性物質的免疫應答相比，抑制對所述抗原性物質的免疫應答， 式XIX其中X是取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基，任選的經氮、氧或硫原子或經SO或SO2基團與喹唑啉連接；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成雜環(huán)；L不存在或是氫原子、含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜、或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
134.權利要求133的方法，其中所述喹唑啉組分是權利要求113-124中任意一項的喹唑啉組分。
135.權利要求133的方法，其中所述接觸發(fā)生在體內。
136.權利要求133的方法，其中所述免疫應答包含適應性免疫應答。
137.權利要求133的方法，其中所述免疫應答是先天性免疫應答。
138.治療患者中自身免疫疾病的方法，包括向患有自身免疫疾病的患者施用有效量的具有結構式XIX的喹唑啉組分及其藥學上可接受的水合物和鹽，以治療所述自身免疫病， 式XIX其中X是取代或未取代的芳基、烷基、雜環(huán)或苯乙烯基，任選的經氮、氧或硫原子或經SO或SO2基團與喹唑啉連接；Y不存在或是氧原子、硫原子、CR9R10或NR11，其中R9、R10和R11互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R9、R10和R11中任意一個任選的與R3或R4組合形成雜環(huán)；L不存在或是氫原子、含1到10個碳的烷基或烷烯基或是芳基；R3和R4互相獨立的是氫原子或烷基、烷烯基或芳基，其中R3和R4任選地組合形成雜環(huán)；并且R5、R6、R7和R8互相獨立的是氫原子、鹵素原子，或是烷基、烷烯基、芳基、雜環(huán)基、硝基、氰基、羧基、酯基、酮、氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、巰基、硫代、亞砜、砜或亞磺酰氨基，其中R5、R6、R7和R8的互相臨近的任意對任選地組合形成雜環(huán)或碳環(huán)。
139.權利要求138的方法，其中所述喹唑啉組分是權利要求113-124中任意一項的喹唑啉組分。
140.權利要求138的方法，其中所述自身免疫病選自系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、斯耶格倫綜合征、多肌炎、脈管炎、韋格納肉芽腫、結節(jié)病、強直性脊柱炎、賴特綜合征、牛皮癬性關節(jié)炎和貝赫切特綜合征。
141.權利要求138的方法，其中所述自身免疫病是與免疫復合體相關的疾病。
142.權利要求138的方法，其中所述患者是人。
全文摘要
本發(fā)明提供用于調節(jié)經Toll樣受體的信號傳遞的方法和組合物。所述方法涉及將表達TLR的細胞與具有包括至少兩個環(huán)的核心結構的小分子接觸。某些所述化合物是4－伯氨基喹啉。很多所述化合物和方法特異性的用于抑制涉及TLR9、TLR8、TLR7和TLR3中至少一個的免疫刺激。所述方法可用于治療自身免疫、炎癥、變態(tài)反應、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主疾病、感染、膿毒癥、癌癥和免疫缺陷。
文檔編號A01N43/54GK1809357SQ200480017064
公開日2006年7月26日 申請日期2004年6月18日 優(yōu)先權日2003年6月20日
發(fā)明者格雷森·B·利普福德, 亞歷山德拉·福斯巴赫, 查爾斯·M·澤普 申請人:科勒制藥有限公司, 科勒制藥集團有限公司