專利名稱：一種煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及煙草種子的生產(chǎn)方法，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種利用現(xiàn)代生物技術(shù)加工煙草包衣種子的方法。
背景技術(shù)：
煙草種子主要霉變真菌是煙草赤星病菌(Alternaria alternata)。它一方面引起種子霉變，另一方面是煙草赤星病的初侵染源。進(jìn)行生物包衣的活性菌如能拮抗煙草赤星病菌，則可減少赤星病菌的帶菌量，有效控制種子霉變，還有可能減少成熟期赤星病的危害。
煙草猝倒病是煙草苗期主要的土傳病害之一，其病原菌主要是腐霉。在云南引發(fā)猝倒的腐霉多達(dá)4種，其中瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)是優(yōu)勢(shì)種群，也是對(duì)煙草致病性最強(qiáng)的種。這些腐霉不僅引起種子腐爛、不能萌發(fā)，還可引起苗期煙苗猝倒，對(duì)煙草生產(chǎn)危害極大。
生物包衣是利用現(xiàn)代生物技術(shù)研制成的一種微生物型種衣劑，它是以活性微生物的原菌劑為有效成分，輔以成膜劑及其它助劑而成，類似文獻(xiàn)報(bào)道甚多。但是，迄今為止，尚無(wú)一種既能有效防治煙草猝倒病，又能拮抗煙草赤星病菌、促進(jìn)種子萌發(fā)、提高種子活力的煙草包衣丸化種子。這是煙草生產(chǎn)中一種急待解決的技術(shù)難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)方法。該方法篩選的活性微生物除能較好的防治煙草萌發(fā)及苗期主要的猝倒病外，還能拮抗種子主要霉變微生物煙草赤星病菌，且可促進(jìn)煙草種子萌發(fā)、促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)。通過(guò)這種活性微生物包衣而形成的生物型包衣丸化種子也具有相同的功效。
本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
(1)生物包衣活性菌的分離與篩選采用同步平皿對(duì)峙法、種子發(fā)芽法及溫室盆栽法篩選拮抗瓜果腐霉、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的根際細(xì)菌；再進(jìn)一步采用同步對(duì)峙法、菌懸液生物處理法篩選對(duì)主要霉變微生物具有防除作用的根際拮抗細(xì)菌，即為篩選的活性菌。適于本發(fā)明的2株活性菌已于2003年7月21日在中國(guó)科學(xué)院微生物菌種保藏中心保藏，保藏號(hào)分別為(2)活性菌原液的制備活性菌活化2～3次后，轉(zhuǎn)入NA斜面培養(yǎng)48小時(shí)，再加入5ml滅菌水，振蕩15分鐘，使菌苔充分懸浮，搖勻，按體積比1∶100接種于篩選的培養(yǎng)液(過(guò)100目黃豆粉，20g；工業(yè)酵母粉，3.0g；食用紅糖，30.0g；工業(yè)硫酸鎂，0.5g；工業(yè)磷酸二氫鉀，0.5g；工業(yè)磷酸氫二鉀，1.0g)中，裝液量為總?cè)萘康?/10～1/5，28±2℃，150rmin-1振蕩培養(yǎng)36小時(shí)，膠體磨磨碎，過(guò)100目流體篩，即可得活性菌原液。
(3)種子的生物包衣精選質(zhì)量達(dá)一級(jí)良種標(biāo)準(zhǔn)的煙草種子，分袋盛裝，活性菌原液浸泡15～20分鐘，晾干；再按本領(lǐng)域常規(guī)方法進(jìn)行裸種重量擴(kuò)大0～20倍的包衣丸化；用噴霧器向種子噴灑以活性菌原液(或其濃縮液)為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液，并加入滑石粉，當(dāng)丸化倍數(shù)達(dá)20～25倍時(shí)，取出用孔徑為1.5～1.8mm的不銹鋼篩過(guò)篩除大顆粒。繼續(xù)邊加包衣輔料邊噴灑以活性菌原液為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液，丸化70～75倍，定型、拋光、染色，在45℃以下烘干，即為所需的煙草生物型包衣丸化種子。
本發(fā)明煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下有益效果1.腐霉是一種兼性寄生的土壤習(xí)居菌，高度適應(yīng)了根際土壤環(huán)境，一旦氣候條件適宜，如高溫高濕，就會(huì)引起根部病害，如猝倒病、根腐、莖腐等，致使煙草在苗期較感病。本發(fā)明通過(guò)生物包衣引入拮抗菌能很好地控制該病在苗期的危害。
2.煙草根際細(xì)菌能較好地存活、定殖于煙株根際，是一個(gè)豐富的生防資源庫(kù)。從中篩選拮抗菌與自然生態(tài)條件極為相似，能明顯提高篩選菌株的可利用率，特別是從重病田的健株或抑病土中分離、篩選更有效，能顯著減少篩選的工作量。篩選出的拮抗根際細(xì)菌，易于進(jìn)行菌劑生產(chǎn)，可滿足種子生物處理的實(shí)際需要。
3.煙草種子主要的霉變微生物是煙草赤星病菌，采用其拮抗細(xì)菌處理能有效減少該病菌引起的種子霉變；同時(shí)也可減少由于種子帶菌作為初侵染源而引發(fā)的成熟期赤星病對(duì)煙草葉片的危害。因此，對(duì)種子進(jìn)行生物處理是一種簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)有效途徑之一。
4.本發(fā)明不需制備生物型種衣劑，直接利用活性菌原液(或其濃縮液)，在加工完成后即可形成生物型包衣丸化種子。因此，與生物型種衣劑生產(chǎn)生物型包衣丸化種子相比，其操作流程大大簡(jiǎn)化，可以降低生產(chǎn)成本。也是本發(fā)明的核心技術(shù)所在。
具體實(shí)施例方式
通過(guò)下面給出的具體實(shí)施例和應(yīng)用實(shí)施例，可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明。但它們不是對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例1煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)。采用同步平皿對(duì)峙法、種子發(fā)芽法及溫室盆栽法篩選拮抗瓜果腐霉、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的根際細(xì)菌；再進(jìn)一步采用同步對(duì)峙法、菌懸液生物處理法篩選對(duì)主要霉變微生物具有防除作用的根際拮抗細(xì)菌，即為篩選的活性菌。
A.煙草猝倒病拮抗細(xì)菌的篩選1.過(guò)程1.1拮抗根際細(xì)菌的分離與純化采集根病較重的病田健株根際土樣，采用稀釋涂布的方法在NA平板上分離、純化。
1.2拮抗作用檢測(cè)1.2.1拮抗活性測(cè)定將分離的根際細(xì)菌點(diǎn)種在直徑為10cm的PDA平板的四周，間隔3cm點(diǎn)種一個(gè)菌株，同時(shí)，在平板相距4cm的正中接直徑5mm的按常規(guī)病組織素瓊脂法分離、純化得到的強(qiáng)致病力瓜果腐霉菌株菌絲塊，28℃恒溫培養(yǎng)45天，挑選抑菌帶大于5mm的根際細(xì)菌作拮抗篩選。
1.2.2拮抗篩選采用對(duì)峙培養(yǎng)。將抑菌帶大于5mm的根際細(xì)菌與猝倒病原菌進(jìn)行同步對(duì)峙培養(yǎng)，根際細(xì)菌劃線接種于四周，直徑5mm的病原菌菌絲接種于相距3cm的正中，每直徑9cm平板接四個(gè)菌株，重復(fù)3次。4-5天后，測(cè)抑菌帶的寬度，保存抑菌帶大于5mm、重復(fù)性較好的拮抗菌。
1.3拮抗根際細(xì)菌的生防作用1.3.1接種體的制備待測(cè)拮抗根際細(xì)菌懸液的制備待測(cè)的拮抗根際細(xì)菌活化2-3次后，轉(zhuǎn)入NA斜面培養(yǎng)48小時(shí)，再加入5ml滅菌水，振蕩15分鐘，使菌苔充分懸浮，搖勻，吸取1ml接種于40ml NA培養(yǎng)液中，28±2℃，150rmin-1振蕩培養(yǎng)36小時(shí)，再用滅菌水稀釋成106-7cfu/ml菌懸液。
1.3.2病原腐霉孢子液的制備病原腐霉在CA平板上活化2-3次后，挑菌絲接種于CA平板，28℃培養(yǎng)7天，每直徑9cm培養(yǎng)皿加滅菌自來(lái)水20ml，浸泡30分鐘，刮下菌絲及孢子，用組織搗碎機(jī)打碎，調(diào)節(jié)菌絲片段或孢子濃度為105-6個(gè)/ml，即為病原菌接種體。
1.3.3生防作用的測(cè)定煙草種子發(fā)芽測(cè)定在直徑10cm的培養(yǎng)皿上鋪三層直徑9cm的定性濾紙，121℃濕熱滅菌30分鐘，80℃烘干，冷卻至室溫，在超凈工作臺(tái)上打開，培養(yǎng)皿中的1層濾紙吸足待測(cè)的拮抗根際細(xì)菌懸液后，鋪在已吸足病原腐霉孢子液的2層濾紙上，點(diǎn)播清洗、晾干的紅大裸種，每皿8×8粒，28℃保濕培養(yǎng)7天，其間滴加滅菌水保濕。用同樣稀釋的拮抗根際細(xì)菌培養(yǎng)液作對(duì)照，用1000×的甲霜靈錳鋅作為藥劑對(duì)照，重復(fù)3次。7天后調(diào)查萌發(fā)種子總數(shù)及萌發(fā)后發(fā)病的種子數(shù)，計(jì)算發(fā)病率及拮抗根際細(xì)菌的防效。
溫室盆栽試驗(yàn)選擇種子發(fā)芽病變較低的拮抗根際細(xì)菌，如上所述制備菌懸液，灌根接種紅大5-6葉期的煙苗(4株共栽于一個(gè)小花盆內(nèi))，每株5ml，24小時(shí)后灌根接種病原腐霉懸浮液，每株5ml。用同樣稀釋的拮抗根際細(xì)菌培養(yǎng)液作對(duì)照，用1000×的甲霜靈錳鋅作為藥劑對(duì)照，重復(fù)3次。在28-30℃的溫室中保濕培養(yǎng)，7～10天后調(diào)查萌發(fā)病的株數(shù)，計(jì)算發(fā)病率及拮抗根際細(xì)菌的防效。
測(cè)定結(jié)果采集重病煙田的健株根際土樣分離根際細(xì)菌876株，平皿拮抗篩選到拮抗腐霉霉的根際細(xì)菌184株，篩選率為21.0％，其中形成抑菌帶在5mm以上的菌株92個(gè)，拮抗活性較穩(wěn)定的菌株44個(gè)。在拮抗篩選到的44株根際細(xì)菌中，防效在75.0％以上的有24個(gè)菌株，占篩選菌株的54.5％，防效與對(duì)照藥劑防效相當(dāng)?shù)挠?1個(gè)菌株，防效達(dá)100.0％，見表1。
表1.種子發(fā)芽測(cè)定拮抗根際細(xì)菌的抑病效果菌株抑菌帶病變率防效菌株抑菌帶病變率 防效(％)編號(hào) (mm) (％) (％)編號(hào) (mm) (％)1 10 11.4 84.3 1458.5 88.1
續(xù)表26 15.6 78.515190 100.035 9.3 87.2165 0 100.04130100.0 17130.7 99.055 0100.0 18120 100.065 0100.0 195 14.1 80.575 8.5 88.3205 4.3 94.185 0100.0 21160 100.095 0100.0 22167.4 89.810 6 0100.0 23112.2 97.011 5 6.7 90.724140 100.012 160100.0 CK- 72.4 -13 133.8 94.8CK* - 0 100.0注CK表示空白對(duì)照，CK*表示甲霜靈錳鋅藥劑對(duì)照；表中數(shù)字為3次的平均值。
表1的數(shù)據(jù)表明，平皿拮抗抑菌帶的寬度大小與發(fā)芽測(cè)定的防效之間無(wú)多大的相關(guān)性，因此，平皿拮抗篩選僅可作為生防菌篩選的輔助依據(jù)。
煙草種子發(fā)芽測(cè)定結(jié)果中，篩選防效在75.0％的24個(gè)菌株進(jìn)行盆栽試驗(yàn)。結(jié)果表明，盆栽防治效果在75.0％以上的菌株有16個(gè)，占發(fā)芽篩選菌株的66.7％。在盆栽試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)1、3、5、7、10等5個(gè)菌株有較明顯的促生作用，尤其是5、7這2株促生效果最顯著。這些菌株既有較好的防病作用，又有較好的促生效果，是較有應(yīng)用前景的優(yōu)良出發(fā)菌株(表2)。
表2.拮抗根際細(xì)菌盆栽防病效果

注CK表示空白對(duì)照，CK*表示甲霜靈錳鋅藥劑對(duì)照；表中數(shù)字為3次的平均值。
B.煙草主要霉變微生物拮抗細(xì)菌的篩選(1)以猝倒病拮抗菌為篩選對(duì)象，同法進(jìn)行平皿篩選對(duì)煙草種子主要霉變真菌的防除作用測(cè)定利用拮抗菌懸浮液(108cfu/ml)處理帶真菌量16.25％煙草種子15min，超凈臺(tái)風(fēng)干，按常規(guī)種子發(fā)芽試驗(yàn)方法在濾紙平皿上排列成10×10方陣，28℃半光照保濕培養(yǎng)7天，其間滴加滅菌水保濕。用400×的菌核凈作為藥劑對(duì)照，重復(fù)3次。7天后調(diào)查萌發(fā)種子總數(shù)及霉變種子數(shù)，計(jì)算發(fā)病率及拮抗菌防效，結(jié)果如表4所示。在測(cè)定的24個(gè)拮抗猝倒病病菌的菌株中有14株可拮抗煙草赤星病菌，其抑菌帶寬度均在5mm以上；防治煙草種子霉變的效果大部分比對(duì)照藥劑菌核凈效果好，最高可達(dá)100％(表3)。
表3拮抗細(xì)菌對(duì)種子霉變的防治效果菌株抑菌帶病變率防效菌株抑菌帶 病變率防效編號(hào)(mm)(％)(％)編號(hào)(mm)(％)(％)1 18 3.00 81.548 13 0.00100.002 16 1.00 93.859 12 1.0093.853 9 2.67 83.5710 19 0.00100.004 17 1.00 93.8511 10 3.3379.515 20 2.00 87.6912 10 5.0069.236 16 3.00 81.5413 11 11.20 31.087 14 2.00 87.6914 7 12.67 22.03CK - 16.25-CK*- 10.25 36.92注CK表示空白對(duì)照，CK*表示菌核凈藥劑對(duì)照；表中數(shù)字為3次的平均值。
(2)活性菌原液的制備活性菌活化2～3次后，轉(zhuǎn)入NA斜面培養(yǎng)48小時(shí)，再加入5ml滅菌水，振蕩15分鐘，使菌苔充分懸浮，搖勻，按體積比1∶100接種于篩選的培養(yǎng)液(過(guò)100目黃豆粉，20g；工業(yè)酵母粉，3.0g；食用紅糖，30.0g；工業(yè)硫酸鎂，0.5g；工業(yè)磷酸二氫鉀，0.5g；工業(yè)磷酸氫二鉀，1.0g)中，裝液量為總?cè)萘康?/10～1/5，28±2℃，150rmin-1振蕩培養(yǎng)36小時(shí)，膠體磨磨碎，過(guò)100目流體篩，即可得活性菌原液。
(3)種子的生物包衣精選質(zhì)量達(dá)一級(jí)良種標(biāo)準(zhǔn)的煙草種子，分袋盛裝，活性菌原液浸泡15～20分鐘，晾干；再按本領(lǐng)域常規(guī)方法進(jìn)行裸種重量擴(kuò)大0～20倍的包衣丸化；用噴霧器向種子噴灑以活性菌原液(或其濃縮液)為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液，并加入滑石粉，當(dāng)丸化倍數(shù)達(dá)20～25倍時(shí)，取出用孔徑為1.5～1.8mm的不銹鋼篩過(guò)篩除大顆粒。繼續(xù)邊加包衣輔料邊噴灑以活性菌原液為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液，丸化40～45倍，定型、拋光、染色，在40℃～42℃下烘干處理5～6小時(shí)，即為所需的煙草生物型包衣丸化種子。
實(shí)施例2種衣劑的制備種衣劑原料組成的重量份數(shù)為特種礦質(zhì)粘土30，滑石粉66，90％萬(wàn)靈原粉0.5，煙草復(fù)合肥3.5；將滑石粉的一半加入混合機(jī)內(nèi)，然后加入特種礦質(zhì)粘土，90％萬(wàn)靈原粉和煙草復(fù)合肥，最后將剩余的滑石粉加入混合機(jī)中；啟動(dòng)機(jī)器，混合15～25分鐘后，停機(jī)，即制得種衣劑。
實(shí)施例3以活性菌為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)液的配制可如表4所示。
表4以活性菌為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液

續(xù)表

應(yīng)用實(shí)施例1生物包衣對(duì)烤煙種子活力的影響。將已活化的供試活性菌菌苔一環(huán)接種于NB培養(yǎng)液，28℃、150rpm振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，獲得各活性菌的原菌液，再分別以各活性菌原菌液替代常規(guī)化學(xué)處理藥劑對(duì)供試K326裸種進(jìn)行包衣，以常規(guī)化學(xué)處理藥劑進(jìn)行包衣對(duì)照，晾干，裝袋，即形成了7種生物包衣種子處理和一個(gè)對(duì)照包衣種子處理。
發(fā)芽試驗(yàn)在φ10cm的培養(yǎng)皿的內(nèi)蓋內(nèi)墊上2層Φ12cm的濾紙，外蓋內(nèi)墊一層Φ10cm的濾紙，滅菌，在比較干凈的地方，隨機(jī)取上述包衣種子，以10×10的正方形定點(diǎn)點(diǎn)播，冷卻的滅菌水或蒸餾水小心潤(rùn)濕濾紙，以培養(yǎng)皿傾斜有2-3毫升明水為宜。每樣品重復(fù)4次。置27℃全光照的培養(yǎng)箱中正置培養(yǎng)。種子發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率按常規(guī)方法進(jìn)行，計(jì)算發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。
表5不同活性菌包衣對(duì)煙草種子發(fā)芽的影響處理樣 品發(fā)芽勢(shì)(％) 發(fā)芽率(％)發(fā)芽指數(shù)活力指數(shù)(mg)編號(hào)1 本發(fā)明樣93.00aA 95.75aA 18.29aA 32.38aA2″90.50abA93.50abAB16.86bBC 27.80abcAB3″86.75bA 90.00bB 16.53bcBC26.60bcdAB4″88.25abA90.50bB 16.72bcBC25.10cdAB5″88.50abA92.25abAB16.96bBC 29.25abcAB6″89.75abA92.25abAB17.24bB 28.78abcAB7″91.00abA92.50abAB16.97bBC 31.10abA8常規(guī)化學(xué)農(nóng)藥 87.50bA 90.00bB 16.12cC 25.15cdAB
注表中字母表示經(jīng)LSD檢測(cè)的結(jié)果，在α＝0.01水平上的差異顯著性用大寫字母表示；在α＝0.05水平上的差異顯著性用小寫字母表示。其中處理編號(hào)為1、7的活性菌株即為本發(fā)明所述的保藏菌株。
表5的數(shù)據(jù)顯示，不同生物包衣種子與常規(guī)包衣種子比較，發(fā)芽勢(shì)在0.01水平上無(wú)顯著差異，在0.05水平存在顯著差異，其中1號(hào)生物處理最顯著，比常規(guī)包衣種子高出5.50％，2、4、5、6、7號(hào)生物包衣略有提高，而3號(hào)生物包衣稍有下降。發(fā)芽率與常規(guī)包衣種子比較存在顯著差異，1號(hào)生物處理最顯著，比常規(guī)包衣種子高出5.75％，2、5、6、7號(hào)生物包衣略有提高，而3、4號(hào)生物包衣與常規(guī)包衣種處于同等水平。發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)與常規(guī)包衣種子比較存在顯著差異，所有的生物處理都有提高，其中本發(fā)明的生物處理達(dá)極顯著水平?？梢?，本發(fā)明的生物型包衣丸化種子可以顯著提高煙草種子的發(fā)芽勢(shì)、活力指數(shù)，大大提高了煙草種子的活力，對(duì)進(jìn)一步提高煙草種子田間出苗整齊度、增加成苗可利用率有很大作用，能顯著改善煙草包衣種子的質(zhì)量，滿足煙草漂浮育苗、濕潤(rùn)育苗對(duì)煙草包衣種子提出的新要求。
應(yīng)用實(shí)施例2生物包衣種子對(duì)猝倒病的防治效果測(cè)定。①煙草種子發(fā)芽測(cè)定在直徑10cm的培養(yǎng)皿上鋪2層直徑9cm的定性濾紙，121℃濕熱滅菌30分鐘，80℃烘干，冷卻至室溫，在超凈工作臺(tái)上打開，培養(yǎng)皿中的2層濾紙吸足病原腐霉孢子液后，點(diǎn)播包衣種子，每皿8×8粒，28℃保濕培養(yǎng)7天，其間滴加滅菌水保濕。用常規(guī)藥劑包衣種子作為藥劑對(duì)照，無(wú)菌水包衣種子作為空白對(duì)照，重復(fù)3次。7天后調(diào)查萌發(fā)種子總數(shù)及萌發(fā)后發(fā)病的種子數(shù)，計(jì)算發(fā)病率及防效。②溫室育苗測(cè)定將用麥麩28℃培養(yǎng)7天的煙草猝倒病菌菌絲攪碎，按0.5％的重量比與煙草育苗基質(zhì)混合均勻，裝于20×16cm的塑料篩筐中，以行株距均為2cm的間隔定點(diǎn)點(diǎn)播生物包衣種子，下墊稍大的托盤，按標(biāo)準(zhǔn)濕潤(rùn)育苗的方法進(jìn)行育苗至大十字期調(diào)查，每處理播2框共180粒，以未加病菌菌絲的處理作矯正計(jì)測(cè)發(fā)病率與防效。試驗(yàn)結(jié)果表明生物包衣種子對(duì)煙草猝倒病具有明顯的防效，有些微生物菌劑的包衣防效可高達(dá)100％，見表6。試驗(yàn)結(jié)果顯示，生物包衣種子對(duì)煙草猝倒病具有明顯的防效。
表6不同活性菌包衣種子對(duì)煙草猝倒病的防治效果處理 試驗(yàn)樣品 平皿發(fā)病率 平皿防效苗床發(fā)病率苗床防效編號(hào)(％) (％) (％)(％)1 本發(fā)明樣品0100.0 0 100.02 ″ 0100.0 0 100.03 ″ 7.8 91.48.6 89.94 ″ 12.3 86.415.4 81.95 ″ 0100.0 0 100.06 ″ 16.8 81.45.7 93.37 ″ 0100.0 0 100.08 常規(guī)化學(xué)農(nóng)藥12.3 86.415.4 82.0CK無(wú)菌水 90.2 - 85.4 -
權(quán)利要求
1.一種煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)方法，該方法包括以下步驟(1)生物包衣活性菌的分離與篩選采用同步平皿對(duì)峙法、種子發(fā)芽法及溫室盆栽法篩選拮抗瓜果腐霉、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的根際細(xì)菌；再進(jìn)一步采用同步對(duì)峙法、菌懸浮液生物處理法篩選對(duì)主要霉變微生物具有防除作用的根際拮抗細(xì)菌，即為篩選的活性菌；(2)活性菌原液的制備活性菌活化后，轉(zhuǎn)接NA斜面培養(yǎng)3～5天，制菌懸浮液，接種培養(yǎng)液，振蕩培養(yǎng)，采用膠體磨碎，過(guò)100目流體篩，即得活性菌原液；(3)種子的生物包衣以活性菌原液或者其濃縮液替代水配制營(yíng)養(yǎng)液，按常規(guī)方法進(jìn)行種子丸化處理，即得到所需的的煙草生物型包衣丸化種子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)方法，其中所述的制菌懸浮液的具體方法為再加入5ml滅菌水，振蕩15分鐘，使菌苔充分懸浮，搖勻，按體積比1∶100接種于篩選的培養(yǎng)液中；所述的培養(yǎng)液包括過(guò)100目黃豆粉20g；工業(yè)酵母粉3.0g；食用紅糖30.0g；工業(yè)硫酸鎂0.5g；工業(yè)磷酸二氫鉀0.5g；工業(yè)磷酸氫二鉀1.0g，裝液量為總?cè)萘康?/10～1/5，28±2℃，150rmin-1振蕩培養(yǎng)36小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)方法，其中所述的種子的生物包衣的具體方法為精選質(zhì)量達(dá)一級(jí)良種標(biāo)準(zhǔn)的煙草種子，分袋盛裝，活性菌原液浸泡15～20分鐘，晾干；再按本領(lǐng)域常規(guī)方法進(jìn)行裸種重量擴(kuò)大0～20倍的包衣丸化；用噴霧器向種子噴灑以活性菌原液或其濃縮液為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液，并加入滑石粉，當(dāng)丸化倍數(shù)達(dá)20～25倍時(shí)，取出用孔徑為1.5～1.8mm的不銹鋼篩過(guò)篩除大顆粒；繼續(xù)邊加包衣輔料邊噴灑以活性菌原液為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液，丸化70～75倍，定型、拋光、染色，在45℃以下烘干。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)方法，其中所述的以活性菌原液或其濃縮液為溶劑配制的營(yíng)養(yǎng)液如下表
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙草生物型包衣丸化種子的生產(chǎn)方法。該方法主要包括①生物包衣活性菌的分離與篩選；②活性菌原液的制備；③種子的生物包衣。本發(fā)明以活性菌原液或者其濃縮液替代水配制營(yíng)養(yǎng)液，按常規(guī)方法進(jìn)行種子丸化處理。本發(fā)明生產(chǎn)的生物型包衣丸化種子除能較好的防治煙草萌發(fā)及苗期主要的猝倒病外，還能拮抗種子主要霉變微生物煙草赤星病菌，并可促進(jìn)煙草種子萌發(fā)、促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)。
文檔編號(hào)A01C1/06GK1486584SQ0313548
公開日2004年4月7日 申請(qǐng)日期2003年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月23日
發(fā)明者白永富, 盧秀萍, 方敦煌, 郭生云, 李永平, 鄧云龍, 張恒, 肖炳光, 馬文廣 申請(qǐng)人:云南煙草科學(xué)研究院農(nóng)業(yè)研究所