專利名稱：一種觀葉植物異色芋的快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種觀葉植物異色芋的快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
異色芋(Colocasia heterochroma H.Li et Z.X.Wei)是李恒等1991年發(fā)現(xiàn)并定名的芋屬新種。它分布于云南西南部海拔1100m處的陰濕處，株高20cm左右。異色芋葉片盾狀著生，卵狀心形，膜質(zhì)，長(zhǎng)12cm，寬10cm。該種葉片綠色，葉主脈及側(cè)脈間為墨綠色或暗紫色，遠(yuǎn)看葉面似天鵝絨狀，十分漂亮，經(jīng)改造后可作為觀葉盆栽植物。但由于它的分布區(qū)十分局限，加上繁殖主要靠匍匐莖的無(wú)性繁殖，自然更新速度極慢，由于其生境受到了較大的破壞，加上隨意采挖，目前已很難找到野生植株。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的問(wèn)題，對(duì)異色芋進(jìn)行組織培養(yǎng)和快速繁殖的研究，提供一種觀葉植物異色芋的快速繁殖方法，建立快繁工藝，為開(kāi)發(fā)和持續(xù)利用這一野生資源提供新的繁殖技術(shù)，并為創(chuàng)造新品種增加了一個(gè)新的原始材料。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案一種觀葉植物異色芋的快速繁殖方法，取野生異色芋塊莖主芽、匍匐莖腋芽，采用外植體消毒后接入含不同植物激素的叢芽誘導(dǎo)、壯苗、生根培養(yǎng)基后，進(jìn)行移栽入種植煉苗基質(zhì)，叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA3-5mg/L+NAA0-1mg/L，壯苗培養(yǎng)基為MS+BA1-2mg/L+BAA0.5mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MS.NAA1mg/L，瓊脂6.2g/L，蔗糖30g/L，pH值5.8，培養(yǎng)溫度27±2℃，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000LX。
上述方法外植體消毒先用自來(lái)水沖洗掉材料上所帶泥土，清除塊莖和匍匐莖上纖維化的褐色外皮，用75％的酒精處理10s，再用0.1％HgCl2消毒20-30min，無(wú)菌水沖洗5min沖洗2-3次，用無(wú)菌紙吸干材料上所帶水分，修整后接入滅過(guò)菌所帶水分的培養(yǎng)瓶，6d左右又進(jìn)行二次滅菌，分別切割葉片、葉柄、芽和莖，接入培養(yǎng)基中。
上述方法種植煉苗基質(zhì)為用挖地基時(shí)土層深處的黃土與腐葉土按1∶1比例混勻，用1/20甲醛液消毒，密封24h，打開(kāi)周邊覆蓋塑膜，約6d左右便可裝筐，供移苗備用，所說(shuō)試管苗的移栽為當(dāng)完整的試管苗高約3-5cm、具3-5片葉且有根3條左右、長(zhǎng)約1cm時(shí)，便可移栽，栽在先前消過(guò)毒的基質(zhì)上，打開(kāi)培養(yǎng)瓶口封膜，取苗時(shí)不要碰傷葉片或根尖，認(rèn)真細(xì)心清除干凈根系上所帶瓊脂，便可移苗，澆透定根水，注意保濕和防止陽(yáng)光直射，在移苗3d要注意通風(fēng)通氣，待試管苗長(zhǎng)出新葉，可出去覆蓋保濕的塑料膜，粗放管理。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)施例11材料與方法1.1材料 野生異色芋塊莖主芽、匍匐莖腋芽1.2方法1.2.1外植體消毒 因異色芋長(zhǎng)期靠無(wú)性繁殖后代，塊莖和匍匐莖又在土中生長(zhǎng)，所帶雜菌較多，用常規(guī)方法滅菌不徹底，造成材料浪費(fèi)和試驗(yàn)失敗。為解決這一問(wèn)題，本發(fā)明采集外植體后，先用自來(lái)水沖洗掉材料上所帶泥土，清除塊莖和匍匐莖上纖維化的褐色外皮(注意不要損傷內(nèi)部組織)，用75％的酒精處理10s，再用0.1％HgCl2消毒20-30min，無(wú)菌水沖洗5min沖洗2-3次，用無(wú)菌紙吸干材料上所帶水分，修整后接入滅過(guò)菌所帶水分的培養(yǎng)瓶，6d左右又進(jìn)行二次滅菌(方法同上)，分別切割葉片、葉柄、芽和莖，接入培養(yǎng)基中。
1.2.2培養(yǎng)條件 叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA3-5mg/L(單位下同)+NAA0-1(詳見(jiàn)表1)，壯苗培養(yǎng)基為MS+BA1-2+BAA0.5，生根培養(yǎng)基為1/2MS.NAA1，瓊脂6.2g/L，蔗糖30g/L，pH值5.8，培養(yǎng)溫度27±2℃，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000LX。
1.2.3種植煉苗基質(zhì) 煉苗基質(zhì)用挖地基時(shí)土層深處的黃土與腐葉土按1∶1比例混勻，用1/20甲醛液消毒，密封24h，打開(kāi)周邊覆蓋塑膜，約6d左右便可裝筐，供移苗備用。
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1叢芽誘導(dǎo)由表1可知，異色芋叢芽最合適的外植體為塊莖主芽和匍匐莖腋芽。最合適的培養(yǎng)基為MS+BA5+NAA0-0.1，月增殖率為1∶4-5，MS+BA5誘導(dǎo)出的叢芽較小密集呈團(tuán)塊狀，芽大小為0.2cm左右，可切割繼代，但增殖必須經(jīng)過(guò)壯苗階段(MS+BA1-2+NAA0.2-0.5)，芽才能長(zhǎng)大。葉柄和根段培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)5個(gè)月觀察，沒(méi)誘導(dǎo)出叢芽，基部在培養(yǎng)過(guò)程中還會(huì)產(chǎn)生壞死現(xiàn)象。
表1 不同外植體在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)反應(yīng)外植體 培養(yǎng)基 生長(zhǎng)狀況MSBA351d芽基部切口長(zhǎng)叢芽MSBA526d芽基部切口有密集叢芽約20個(gè)塊莖主芽 MSBA5NAA145d芽基部切口叢芽長(zhǎng)根MSBA5NAA0.1 43d芽基部切口有叢芽約10個(gè)MSBA5IBA0.1 43d芽基部切口有叢芽約6個(gè)MSBA371d芽基部切口長(zhǎng)單芽匍匐莖腋芽MSBA5NAA0.05 71d芽基部切口長(zhǎng)從芽、愈傷組織根 MSBA4NAA0.05 90d根緩慢生長(zhǎng)，根白色MSBA320d葉長(zhǎng)大、皺，30d出現(xiàn)極少淡綠色愈傷葉組織MSBA4NAA0.05 23d葉長(zhǎng)大、皺，切口出現(xiàn)淡綠色愈傷組織MS 15d沒(méi)有明顯變化MSBA4NAA0.05 23d切口處膨大，長(zhǎng)不發(fā)達(dá)愈傷組織葉柄 MSBA560d切口處膨大，長(zhǎng)不發(fā)達(dá)愈傷組織MSBA5NAA160d切口處膨大，長(zhǎng)不發(fā)達(dá)愈傷組織MSBA5NAA0.05 23d切口處膨大，長(zhǎng)不發(fā)達(dá)愈傷組織2.2誘導(dǎo)生根異色芋叢芽可切割為單芽，芽高在1-2cm時(shí)，放在1/2MS+NAA1的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，經(jīng)過(guò)20-25d培養(yǎng)，生根在90％以上，每株苗可長(zhǎng)出數(shù)條根，當(dāng)根長(zhǎng)出1cm時(shí)，有2-3片葉的苗便可以進(jìn)行移栽。
2.3試管苗的移栽當(dāng)完整的試管苗高約3-5cm、具3-5片葉且有根3條左右、長(zhǎng)約1cm時(shí)，便可移栽，栽在先前消過(guò)毒的基質(zhì)上。打開(kāi)培養(yǎng)瓶口封膜，取苗時(shí)不要碰傷葉片或根尖，認(rèn)真細(xì)心清除干凈根系上所帶瓊脂，便可移苗，澆透定根水，注意保濕和防止陽(yáng)光直射，在移苗3d要注意通風(fēng)通氣，待試管苗長(zhǎng)出新葉，可出去覆蓋保濕的塑料膜，粗放管理，移栽成活率90％。
3討論異色芋的組織培養(yǎng)中，叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA5mg/L+NAA0-0.1mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MSNAAmg/L?？焖俜敝吵绦?yàn)楫惿髩K莖主芽和匍匐莖腋芽→在叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上得到叢生芽→MS+BA1-2mg/L+NAA0.5mg/L壯苗→在生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根。月增殖率1∶4，整個(gè)生殖周期約5個(gè)月。
結(jié)果顯示，根切段在培養(yǎng)中僅緩慢生長(zhǎng)，葉片切段和葉柄切段也僅生長(zhǎng)出不發(fā)達(dá)的愈傷組織，沒(méi)有不定芽的再生，可能原因是培養(yǎng)條件不合適，或者是單子葉植物特化器官培養(yǎng)難度較大，所需培養(yǎng)周期更長(zhǎng)所致，試驗(yàn)仍在進(jìn)行中。
異色芋塊莖主芽經(jīng)過(guò)4個(gè)月的組織培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)叢芽間有數(shù)個(gè)橙紅色1-2mm大小圓點(diǎn)狀不知名菌溢出叢芽或在叢芽接觸培養(yǎng)基的一面出現(xiàn)，可清除該菌轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基上，叢芽仍能繼續(xù)生長(zhǎng)，但又有新的小圓點(diǎn)狀菌出現(xiàn)，若用0.1％HGCL2滅5min材料出現(xiàn)的白色粘菌，不久材料全毀。這些有顏色菌有可能是酵母菌，有待鑒定和探討防治方法。異色芋組培中，BA5NAA0.1組合優(yōu)于BA5IBA0.1組合，前者對(duì)叢芽增殖和生長(zhǎng)均有利。若在芋芽培養(yǎng)中，芽在培養(yǎng)基上約有30d左右的停滯期；然后才在芽基部產(chǎn)生單芽、叢芽。
權(quán)利要求
1.一種觀葉植物異色芋的快速繁殖方法，取野生異色芋塊莖主芽、匍匐莖腋芽，采用外植體消毒后接入含不同植物激素的叢芽誘導(dǎo)、壯苗、生根培養(yǎng)基后，進(jìn)行移栽入種植煉苗基質(zhì)，其特征在于叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA3-5mg/L+NAA0-1mg/L，壯苗培養(yǎng)基為MS+BA1-2mg/L+BAA0.5mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MS.NAA1mg/L，瓊脂6.2g/L，蔗糖30g/L，pH值5.8，培養(yǎng)溫度27±2℃，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000LX。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所說(shuō)外植體消毒先用自來(lái)水沖洗掉材料上所帶泥土，清除塊莖和匍匐莖上纖維化的褐色外皮，用75％的酒精處理10s，再用0.1％HgCl2消毒20-30min，無(wú)菌水沖洗5min沖洗2-3次，用無(wú)菌紙吸干材料上所帶水分，修整后接入滅過(guò)菌所帶水分的培養(yǎng)瓶，6d左右又進(jìn)行二次滅菌，分別切割葉片、葉柄、芽和莖，接入培養(yǎng)基中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所說(shuō)種植煉苗基質(zhì)為用挖地基時(shí)土層深處的黃土與腐葉土按1∶1比例混勻，用1/20甲醛液消毒，密封24h，打開(kāi)周邊覆蓋塑膜，約6d左右便可裝筐，供移苗備用，所說(shuō)試管苗的移栽為當(dāng)完整的試管苗高約3-5cm、具3-5片葉且有根3條左右、長(zhǎng)約1cm時(shí)，便可移栽，栽在先前消過(guò)毒的基質(zhì)上，打開(kāi)培養(yǎng)瓶口封膜，取苗時(shí)不要碰傷葉片或根尖，認(rèn)真細(xì)心清除干凈根系上所帶瓊脂，便可移苗，澆透定根水，注意保濕和防止陽(yáng)光直射，在移苗3d要注意通風(fēng)通氣，待試管苗長(zhǎng)出新葉，可出去覆蓋保濕的塑料膜，粗放管理。
全文摘要
本發(fā)明提供一種觀葉植物異色芋的快速繁殖方法，叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA5mg/L+NAA0－0.1mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MSNAAmg/L?？焖俜敝吵绦?yàn)楫惿髩K莖主芽和匍匐莖腋芽→在叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上得到叢生芽→MS+BA1－2mg/L+NAA0.5mg/L壯苗→在生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根。月增殖率1∶4，整個(gè)生殖周期約5個(gè)月。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1460411SQ0313514
公開(kāi)日2003年12月10日 申請(qǐng)日期2003年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月4日
發(fā)明者龍春林, 程漢英, 張長(zhǎng)芹, 羅吉鳳, 王俐, 張自林 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所