專利名稱：用于血液保存的抗病原體組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于血液、血液制品、以及諸如獻血袋等的血液容器的抗病原體組合物。本發(fā)明還一般地涉及處理和消毒人類血液制品的方法。更具體地，本發(fā)明涉及消毒全血、血細胞、血漿蛋白和血漿的方法，使其可安全和有效地用于診斷、治療或研究目的。本發(fā)明還涉及血液循環(huán)系統(tǒng)對由病原體引起的病理狀態(tài)的控制，所述的病原體通常為病毒、細菌、原蟲(protozoan)、真菌或寄生因子(parasitic agent)(寄生因子生命周期的任一階段)。
背景技術：
塑料血液收集袋的發(fā)展促進了捐獻的全部血液分離為各種組分和類似產(chǎn)品，因此使這些不同的血液制品(例如血小板濃縮液)可用作輸血制品。隨著時間的流逝和研究以及臨床數(shù)據(jù)的積累，輸血手段有了很大變化。目前所用方法的一個方面是很少使用全血，而是對需要紅細胞的病人輸入壓積紅細胞(packed red cells)，對需要血小板的病人輸入血小板濃縮液，對需要血漿的病人輸入血漿。
但是輸血制品的增加伴隨著向接受輸血者疾病傳播的增加。對于確保沒有疾病的供血存在著很大的需要。
來自人類和動物捐獻者的血液制品廣泛地用于治療、診斷和實驗目的。與使用來自人類和動物捐獻者的血液制品相關的一直存在的問題是這些制品會被血源性病毒和其他微生物如細菌污染。引起各種形式的肝炎的病毒尤其危險，包括乙型肝炎病毒，非甲非乙型肝炎病毒或多種病毒。其他相關的病毒是巨細胞病毒和愛-巴二氏病毒。
與無法治愈和經(jīng)常是致命的疾病如獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)相關的病毒是由逆轉錄病毒或逆轉錄病毒群(HIV，HIV-1和HIV-2)引起的。HIV-1被認為認為是引起AIDS最通常的原因。
通過輸血和施用血液制品傳播的肝炎、AIDS和細菌的危險并不局限于血細胞，而且延伸到施用血漿和血漿組分如VIII因子濃縮物，IX因子濃縮物，γ球蛋白和抗凝血酶III。
用足以使病毒、細菌和其他生物顯著滅活的消毒劑對包括諸如紅細胞、血漿和血漿組分的全血和血液制品進行消毒已經(jīng)不受歡迎，這是因為足以使病原體滅活的活性通常破壞血細胞組分或使血漿和血漿蛋白組分滅活。另外，在將要用于輸液的血液制品中任何剩余消毒劑的存在可能對接受輸血者是危險的。
在美國通常使用的組分分離步驟，即檸檬酸鹽-磷酸鹽-葡萄糖-腺嘌呤(CPDA-1)系統(tǒng)，采用一系列步驟將捐獻的血液分離為三種組分，每種組分具有顯著的治療和經(jīng)濟價值。該方法通常使用血液收集袋，其通過柔韌的管形材料與至少一個優(yōu)選兩個或更多的隨體袋(satellite bag)整體連接。使用離心過濾，全血可用差示沉降分離為很有價值的組分，如血漿、壓積紅細胞(PRC)、懸浮于澄清血漿中的血小板(富血小板血漿或PRP)、血小板濃縮液(PC)、以及冷凝蛋白質(可能需要額外的加工)。
通常使用的非CPDA-1系統(tǒng)包括Adsol、Nutricell和SAG-M。在后面的這些系統(tǒng)中，收集袋只包含抗凝血劑，而營養(yǎng)液可以預先放置于隨體袋中。在PRP從PRC中分離出以后，可將營養(yǎng)液轉移至PRC中，因此得到較高的血漿收率和PRC較長的儲存期。目前這些病毒標記篩選的改進和捐獻人自動排除的改進不斷地提高了供血安全。但是，盡管有這些方法，由于目前的篩選試驗無法篩選出很少出現(xiàn)的或還未知的輸液傳播病原體，因此隨著輸液血液細胞組分所帶來的傳播病原體的危險仍然存在。(Dodd，R.Y.New Engl.J.Med.327419-421(1992)；Soland，E.M.，等，J.Am.Med.Assoc.2741368-1373(1995)；Schreiber，G.B.，等，New Engl.J.Med.3341685-1690(1996))。
為戰(zhàn)勝與篩選試驗相關的缺陷，使用血液、紅細胞濃縮液(RBCC)和其他血液衍生組分的消毒步驟可確保消除病原體傳播。在這方面，已經(jīng)使用了各種方法消毒血細胞，目前最有效的是使用光化學方法。(Ben-Hur，E.和B.Horowitz Photochem.Photobiol.62383-388(1995)；Ben-Hur，E.和B.HorowitzAIDS 101183-1190(1996))。最有前途的光化學方法采用酞菁染料(在遠紅外(660-700nm)由光活化)對RBCC消毒(Horowitz，B.等.Transfusion31102-108(1991)；Ben-Hur，E.，等.J.Photochem.Photobiol.BBiol.13145-152(1992))。
已經(jīng)使用巴斯德消毒法和其他物理-化學技術除去或使血液組分滅活，但是這些技術的大部分均局限于新鮮血漿或新鮮冷凍的血漿。到現(xiàn)在，這些技術不適合于處理全血的細胞組分。
用于血液制品的一種消毒劑是β-丙內(nèi)酯(beta-propiolactone)。但是β-丙內(nèi)酯是已知的致癌物質，因此非常危險。這種物質顯著的剩余量可能會留在被實際輸血的血液制品中，使用丙內(nèi)酯具有潛在的危險。
在美國專利號4,833,165(1989年5月23日以Allan Louderback的名義授權)中，使用0.1％甲醛和/或苯酚使血液中的HTLV-III滅活。但是最近的數(shù)據(jù)和信息表明處理過的含有少至0.02％甲醛和0.01％苯酚的紅細胞是不可行的，不適用于輸血。
用嚴格滅菌的方式使病毒滅活是不可接受的，這是因為該方法通常破壞紅細胞、血小板和易分解的血漿蛋白，如凝固因子VIII?？尚械腞BC可用以下的一種或多種來表征合成ATP的能力；細胞形態(tài)；P50值；過濾性或變形性；氧基血紅素、高鐵血紅蛋白和血色素值；MCV、MCH和MCHC值；細胞酶活性；以及體內(nèi)存活性。因此，如果病毒滅活的細胞被破壞到細胞不能代謝或合成ATP的程度，或危及到細胞循環(huán)，那么它們用于運輸藥物的用途也會受到危害。
由于上述原因，用嚴格的蒸汽滅菌使病毒滅活是不可接受的。如濕蒸汽一樣，干熱消毒對血細胞和血蛋白在需要降低病毒傳染性的水平上是有害的。諸如碳水化合物等穩(wěn)定劑的使用無法對脆弱的血細胞和蛋白質提供足夠的保護使其免受暴露于高溫和高壓下的影響。
目前采用純化血漿蛋白質組分然后凍干蛋白質制劑的方法，其包括用有機溶劑和加熱處理，或用清潔劑抽提以使膜包被病毒的脂質外殼破裂。單獨的凍干(冷凍-干燥)不足以使病毒滅活，或使血液蛋白對加熱消毒的影響足夠穩(wěn)定。采用有機溶劑或清潔劑法不能與血細胞一起使用，因為這些化學品會破壞包被細胞的脂質膜。
在在1958年首先證明了另一種用于血漿蛋白中病毒滅活的方法，該方法中使用了化合物、β-丙內(nèi)酯和紫外線(UV)照射。由于對β-丙內(nèi)酯在達到某些可滅活病毒的使用量時所具有的毒性以及化學藥劑對蛋白質造成的無法接受的破壞程度，這種方法在美國不被接受。對β-丙內(nèi)酯的爆炸可能性也有擔心。
使用某些非補骨脂素光敏劑開發(fā)了使用光敏劑和光來滅活病毒凈化劑的方法。所采用的光敏劑通常是染料。實例包括二聚血卟啉醚(dihematoporphyrin ether)(DHE)，部花青540(MC540)和亞甲藍。
人們非常希望提供用于血液及血液制品和血液容器如獻血袋的抗病原體組合物。
非常希望提供加工和消毒人類血液制品的方法。
非常希望提供消毒全血、血細胞、血漿蛋白和血漿以使其可安全有效地用于診斷、治療或研究目的的方法。
非常希望提供通過血液循環(huán)系統(tǒng)控制病理狀態(tài)的方法，該病理狀態(tài)是由病原體引起，通常是濾過性病毒，細菌，原蟲，真菌或寄生介質。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個目的是提供用于血液及血液制品和血液容器如獻血袋的抗病原體組合物。
本發(fā)明的另一個目的是提供加工和消毒人類血液制品的方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供消毒全血、血細胞、血漿蛋白和血漿以使其可安全有效地用于診斷、治療或研究目的的方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種控制血液循環(huán)系統(tǒng)病理狀態(tài)的方法，該病理狀態(tài)是由病原體引起，通常是濾過性病毒，細菌，原蟲，真菌或寄生介質。
根據(jù)本發(fā)明，提供了用于消毒液體和生物組織以及被液體和/或生物組織污染的表面(surface)的抗病原體組合物，其包括與可接受的載體聯(lián)合的至少一種季銨化合物的抗病原體的量。
本發(fā)明優(yōu)選的抗病原體組合物還包括雙胍化合物。
在本發(fā)明的優(yōu)選的抗病原體組合物中，季銨化合物包括兩種或多種季銨化合物的混合物。
所述的液體和生物組織可選自水、水基溶液、血液(即全血)和血液制品、用于移植的皮膚和器官。
所述的表面選自容器、過濾器、管形材料、封條(seals)、夾鉗、轉換肢封閉物(transfer leg closure)、醫(yī)療器材、操作臺和體檢臺。
容器可以是生物液體的容器或水的容器。
容器為血液容器或血液制品容器，如獻血袋或獻血瓶。
血液制品可選自血漿、壓積紅細胞、富血小板血漿、血小板濃縮液和冷凝蛋白質。
組合物可以是霜、油膏、乳液、凝膠、粉末、清潔劑、肥皂、液體或固體形式。
根據(jù)本發(fā)明，提供了使容器中的血液或血液制品中的病原體滅活的方法，包括使至少一種血液、血液制品和容器與本發(fā)明的組合物接觸。
根據(jù)本發(fā)明，提供了醫(yī)療器材，其包括至少一個用本發(fā)明的抗病原體組合物處理過的表面或含有至少一種本發(fā)明的抗病原體組合物。
醫(yī)療器材可以是諸如獻血袋或獻血瓶等生物液體的容器、在輸送入個體前血液和血液制品通過的內(nèi)嵌式過濾器、以及在從個體采血時血液或血液制品通過的內(nèi)嵌式過濾器。
本發(fā)明的優(yōu)選醫(yī)療器材還包括用于分散所述抗病原體組合物的多孔介質。
根據(jù)本發(fā)明，提供了處理體外(in vitro)或體外-體內(nèi)(ex-vivo)的生物液體的方法，其包括在容器內(nèi)收集生物液體，以及使生物液體暴露于本發(fā)明的抗病原體組合物中。
根據(jù)本發(fā)明，提供了在體外或體外-體內(nèi)抑制生物液體中的人類免疫缺陷病毒的感染或復制的方法，其包括用有效抑制量的雙胍化合物或其衍生物以及至少一種與諸如DMSO等藥學載體相聯(lián)合的季銨化合物來處理生物液體。
根據(jù)本發(fā)明，提供了在體外或體外-體內(nèi)消毒紅細胞的方法，該方法包括以下步驟a)使所述紅細胞與消毒組合物接觸足夠長的時間以使存在于紅細胞中的病原體滅活，其中所述消毒組合物基本由消毒濃度的雙胍化合物組成，該化合物與溶質的等壓有效濃度的溶液聯(lián)合，從而使所述消毒組合物基本與血液等壓；和b)使所述紅細胞與所述消毒組合物分離。
在本發(fā)明的優(yōu)選方法中，雙胍化合物選自季銨化合物及其組合。
本發(fā)明的優(yōu)選方法還進一步包括滅活病原體后除去組合物，或處理生物液體后除去組合物。
本發(fā)明涉及處理捐獻的血液的系統(tǒng)，該捐獻的血液用于血液組分的治療輸血的目的，特別涉及用于制備不含病原體或病原體滅活的血液或血液組分的改進的方法和設備。本發(fā)明也涉及用于加工處理過的生物液體使其成為各種組分的生物液體處理系統(tǒng)。
本發(fā)明提供了減少諸如病毒和/或細菌等病原體含量的組合物和方法，其中所述病原體存在于紅細胞組合物中。特別地，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將紅細胞組合物暴露于諸如季銨化合物的雙胍化合物，足以使病原體滅活以使血液或血液制品可以用于輸血，而不破壞紅細胞或其他血液組分，其中的雙胍化合物存在于具有一種或多種張力活性的表面活性劑組合物中，或與該組合物一起。
本文引用的所有文獻均全文引入作為參考。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及有效安全地消毒全血和血液制品。本發(fā)明對于所有的血液制品如用于輸血的全血、血細胞、血漿和血漿蛋白都有著廣泛的用途。由于很少使用全血，本發(fā)明更具體地涉及含有紅細胞和/或血漿的組合物的消毒方法。
本發(fā)明是組合物，其含有一種或多種諸如季銨化合物的張力活性表面活性劑作為活性劑，該組合物適用于消毒血液或血液制品。
本發(fā)明也是處理血液或血液制品的方法，包括使血液或血液制品與含有一種或多種本發(fā)明的化合物或活性組分的組合物接觸，所述化合物以足夠使血液中的一種或多種病原體滅活的量存在，從而使化合物滅活病原體。該方法可進一步包括從血液或血液制品中除去所述化合物。
本發(fā)明還可用于移植器官和組織中病毒的滅活，還可以局部藥膏、油膏、乳液、凝膠、粉末、液體、固體、清潔劑或肥皂的形式用于治療皮膚或上皮的疾病，或用于局部凈化。
本發(fā)明也可用于生產(chǎn)人用或獸用的病毒疫苗，特別是生產(chǎn)活的，無生存能力的(non-viable)或減毒的病毒疫苗。
本發(fā)明包括減少生物溶液中的病毒、細菌、原蟲、真菌和其他寄生污染物的方法。生物溶液包括但不局限于含有血液、血液組分、細胞培養(yǎng)物或細胞培養(yǎng)物組分的溶液。該方法包括將液態(tài)組合物與本發(fā)明的組合物混合，其中本發(fā)明的組合物能夠使病毒、細菌原蟲、真菌或寄生污染物固定。
本發(fā)明也是減少醫(yī)療器材中的病毒、細菌、原蟲、真菌和其他寄生污染物的方法，所述醫(yī)療器材如醫(yī)生、護士、以及諸如采集血液或血液制品的醫(yī)療技術人員、或牙科醫(yī)生所用的醫(yī)療器材。該方法包括使醫(yī)療器材與含有一種或多種本發(fā)明的化合物或活性劑的組合物相接觸，所述化合物以足以使醫(yī)療器材中或上的一種或多種病原體滅活的量存在。該方法還可進一步包括除去醫(yī)療器材中的化合物。
術語“醫(yī)療器材”指在對動物或人體進行檢查、清潔、從中收集液體或治療(medical intervention)時所使用的任何工具。此類工具包括但不局限于外科設備，其中外科設備包括但不局限于探測器，解剖刀，鉗，鑷子，針；用于除去唾液或血液的抽吸裝置，其包括其中所有的管口，封條，管形材料，過濾器，容器和儲物池(reservoirs)；內(nèi)診鏡；光纖；傳感器；導線；外科活套(surgical loop)；以及內(nèi)嵌和外嵌管形材料和過濾器，其使血液在輸入個體前和/或在從個體進行收集時使血液或血液制品通過。
本發(fā)明也提供了減少水中或水容器中的病毒、細菌、原蟲、真菌和其他寄生污染物的方法，如在游泳池、熱浴盆(hot-tubs)、極可意水流按摩浴缸(Jacuzzi)、浴室、渦流浴室、空調和加濕器中所發(fā)現(xiàn)的上述物質，該方法包括使水或水容器與含有一種或多種本發(fā)明的化合物或活性劑的組合物接觸，所述化合物以足以使水中或水容器上的一種或多種病原體滅活的量存在，從而利用化合物使病原體滅活。該方法還可進一步包括除去水或水容器中的化合物。此類水或水容器可以是在家里、酒店、溫泉或度假村、辦公室、或儲藏間。
本發(fā)明也包括對于具體的血型具有特異性的一種或多種組合物。
本發(fā)明也是血液容器等，例如含有一種或多種本發(fā)明化合物的血液或血液制品輸血袋。
在本發(fā)明最優(yōu)選的實施方案中，含有季銨化合物作為活性劑的組合物單獨或以混合物的形式與血液或血液制品混合，用于消毒血液。該組合物對處理血液、血液制品、生物組織、以及其它生物液體有效?；钚詣Χ喾N病原體都有效，病原體包括但不局限于病毒、細菌、原蟲、寄生蟲、真菌和其他病原體。最優(yōu)選的組合物包括一種或多種季銨化合物和任選的一種雙胍化合物。
根據(jù)消毒血液制品的優(yōu)選方法，提供了全血或血液制品中包括HIV病毒在內(nèi)的病毒和細菌的滅活方法。消毒過的血液或血液制品可以安全而有效地用于治療和診斷。本發(fā)明是基于令人意外的發(fā)現(xiàn)，即所述化合物并不溶解紅細胞也不對血液制品造成危害，因此可用作消毒劑除去血液或血液制品中的病原體。而且，與血液非等壓的以及到現(xiàn)在也沒有被考慮用于血液制品的含有這些化合物的消毒劑組合物可以用作血漿和血漿蛋白的消毒，而不會使蛋白質變性，而這種變性導致生理學活性的大量損失。
根據(jù)本發(fā)明，消毒全血或全血制品的方法包括提供消毒濃度的活性劑或化合物以及稀釋劑的消毒組合物，然后將全血或全血制品與消毒組合物混合足夠長的時間以使全血或全血制品中的任何病原體滅活?；旌喜襟E可以通過以下方式進行分別將血液與組合物中的組分混合，與全部組分直接混合，或定時(by timing)加入一種或多種組合物的組分。血液或血液制品消毒后，活性劑或化合物可以任選地從消毒組合物分離，提供安全而且有效的用于治療或診斷用途的血液或血液制品。
術語“藥學可接受的載體”是指可用來在有效的抗病原體濃度溶解和/或稀釋所述季銨化合物的任何載體，包括但不限于鹽水，緩沖液，DMSO和葡萄糖。
術語“雙胍化合物”和“季銨化合物”是指所有的季銨化合物和其衍生物，包括但不限于二癸基二甲基氯化銨、所有的二氨基丙基月桂基胺化合物、壬苯醇醚-9化合物(nonoxynol-9)、雙胍化合物和其衍生物。術語“化合物”應包括上述任何化學品，單獨存在或與其他化學品或化學物質相聯(lián)合，例如在混合溶液中，包括但不限于DMSO。優(yōu)選的活性劑是烷基三甲基季銨chlorhexidrine(alkyl trimethyl quaternary ammonium chlorhexidrine)(和其鹵代物)，二烷基二甲基卞基季銨chlorhexidrine(dialkyl dimethyl benzyl quaternaryammonium chlorhexidrine)。季銨化合物的實例見Marchisio等，J.Biomater.Sci.Polymer Edn.6533-539(1994)，和Gadwallader等，J.Pharm.Sci.，71010-1012(1965)，均全文引入作為參考。
如果需要，含有活性劑的組合物也可包含一種或多種附加的化合物。這些化合物可包括DMSO，或其它改變細胞表面極性的試劑；一種或多種氨基酸；一種稀釋劑；一種或多種氯化物，如氯化銀；和/或EDTA。
如下所述，上述指出的化合物將有效地消毒血液和血液制品而沒有生理學活性的大量損失。預期在本發(fā)明所教導的范圍內(nèi)，用具有足夠氧化性的氧化化合物消毒血液和血液制品使病原體滅活，如病毒，細菌，原蟲，真菌和寄生因子。
術語“液體”指水、水基溶液和生物液體。
術語“生物組織”指用于移植的皮膚和器官。
在本文使用的生物學液體指可被直接輸入病人或病人的循環(huán)系統(tǒng)的任何液體。通常的生物液體包括但不局限于全血；抗凝集全血(AWB)；從AWB得到的壓積紅細胞；從AWB得到的富血小板血漿(PRP)；從AWB或PRP得到的血小板濃縮液(PC)；從AWB或PRP得到的血漿；與血漿分離并重懸于生理學液體中的紅細胞；與血漿分離并重懸于生理學液體中的血小板。血液制品或生理學液體還包括任意處理過的或未處理過的液體，其與活微生物相關，特別是血液包括全血、溫血或冷血，以及儲存的或新鮮的血液；處理的血液，如用生理溶液稀釋的血液，所述生理溶液包括但不局限于鹽水、營養(yǎng)物質、和/或抗凝集溶液；一種或多種血液組分，如血小板濃縮液(PC)、富血小板血漿(PRP)、無血小板血漿、貧血小板血漿、血漿、或壓積紅細胞(PRC)；以及從血液或血液組分或骨髓得到的類似血液。生物學液體可包括白血球，或可以經(jīng)過處理除去白血球。如本文所述，血液制品或生物學液體指上述組分，以及從其他方法得到并具有相似性質的類似的血液制品或生物學液體。根據(jù)本發(fā)明，這些血液制品或生物學液體的每種均可按照本文所述的方式加工。
如本文所述，病原體指一種或多種引起感染的微生物或類似物。病原體的實例包括但不限于病毒，細菌，寄生蟲，原蟲或真菌。病毒的實例包括但不遠限于單純皰疹病毒，HIV，肝炎，甲型肝炎，乙型肝炎，丙型肝炎，呼吸道合體病毒，藍舌病毒，和牛腹瀉病毒。病毒還包括巨細胞病毒，愛巴病毒(Epstein-Barr virus)，I型和II型單純皰疹病毒，以及其它自由地循環(huán)在血液中的病毒，和細胞相關的病毒。細菌的實例包括但不局限于Heliobacterpylori，大腸桿菌(E.coli)，假單胞菌(Pseudomonas)菌株，其包括銅綠菌素(aeruginosa)，葡萄狀球菌(staphylococcus)，普通變形桿菌(Proteus vulgaris)和白色念珠菌(Candida albicans)。真菌的實例包括但不限于曲霉菌(Aspergillus)。典型的寄生蟲包括但不限于阿米巴(Ameoba)、瘧原蟲(Plasmodium)、利什曼蟲(Leishmania)、Mycosus profundus、錐體蟲(Trypanosoma)、螺旋菌(Spirochete)和蟲媒病毒(Arbovirus)。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，要處理的病原體是適合于在血液或血液制品中被滅活。減少感染性病原體的含量或其他類似的用語是指破壞和/或滅活所有的或幾乎所有的傳染性病原體。在本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，減少傳染性病原體的含量指充分地破壞或滅活病原體，以使血液或血液制品可以用于輸液或其他目的。
根據(jù)本發(fā)明，合適的稀釋劑包括用于制備等壓溶液的任何化合物。溶質的實例包括但不限于糖如右旋糖和葡萄糖、多糖如右旋糖苷、白蛋白、以及堿土金屬鹽包括氯化鈉、氯化鉀和溴化鉀。已知用于儲存生理細胞和組織的溶質的組合物也是適合的，包括組合物如檸檬酸鹽-磷酸鹽-右旋糖，檸檬酸鹽-磷酸鹽-右旋糖-腺嘌呤和鹽水-甘露醇-右旋糖-腺嘌呤。在下面的更詳細的描述中，在稀釋劑中以糖的形式存在的至少一種溶質是優(yōu)選的，這是因為糖有助于減少在消毒過程中形成的任何高鐵血紅蛋白和氧化血紅蛋白(oxidizedhemoglobulin)。
在本發(fā)明的實踐中，以等壓特性而采用的稀釋劑可以組合。當消毒紅細胞時，組合的稀釋劑是特別適合的，這是因為紅細胞的可商購的集合單元通常儲存于含有抗凝劑的等壓溶液中，如ACID(酸-檸檬酸鹽-右旋糖)、CPD(檸檬酸鹽-磷酸鹽-右旋糖)、CPD-A(CPD-腺嘌呤)。因此當消毒儲存于含有抗凝劑的等壓溶液中的紅細胞集合單元時，消毒組合物可以在不同的等壓稀釋劑中制備，例如生理鹽水，以及和抗凝劑溶液組合。
進一步根據(jù)本發(fā)明，消毒血漿或血漿制品如血漿蛋白組分的過程任選地利用沒有溶質的消毒組合物，其中該消毒組合物的稀釋劑是無菌水、水、蒸餾水或無菌蒸餾水。由于血漿和血漿制品不包括組織或其他形式的細胞物質，因此沒有要保持細胞滲透壓的等壓介質的迫切需要。
可以通過僅將血液或血液制品和消毒組合物在合適的容器中混合并輕微攪拌以確保血液也和消毒組合物充分反應來進行消毒組合物與血液或血液制品的混合。合適的容器包括但不限于血液收集袋和儲血設備。但是優(yōu)選使用本領域已知的自動細胞清洗設備，其可從包括Cobe的多種來源得到。
根據(jù)本發(fā)明，季銨化合物優(yōu)選與雙胍聯(lián)合的季銨的消毒有效濃度、以及消毒血液和血液制品的足夠長的時間主要取決于所選擇的化合物?？梢岳斫饨M合物中的每種組分的有用濃度和消毒時間是互相影響的。因此當與血液或血液制品混合較長時間，化合物的濃度可以不同，一種或多種活性劑的相對較小的濃度可以是消毒有效濃度。相反，當在消毒組合物中使用較高濃度時，充分消毒血液或血液制品的時間較短。
消毒血液或血液制品的方法的實例可包括首先將血液與DMSO混合，攪拌，加入一定量的表面活性劑如季銨或雙胍，其加入量使表面活性劑不沉淀，以及攪拌。該方法還可任選地進一步包括從血液組合物中除去活性劑的步驟。
本發(fā)明還包括收集和處理血液的方法，包括在容器中收集血液和血液制品；任選地除去或分離血液制品，例如血漿，并將血液或血液制品與含有活性劑的組合物接觸，其中需和物中含有的活性劑足以使血液或血液制品中的病原體滅活。
用于生物液體處理的容器可以由任何與生物液體如全血或血液組分相容且能經(jīng)受離心過濾和滅菌環(huán)境的材料制成，此類容器的很多種在本領域是已知的。例如血液收集及隨體袋通常由塑化聚氯乙烯制成，例如用鄰苯二甲酸二辛酯(dioctylphthalate)、鄰苯二甲酸二乙基己酯(diethylhexylphthalate)或苯三甲酸三辛酯(trioctyltrimellitate)塑化的PVC。收集袋可以由聚烯烴、聚亞安酯、聚酯和聚碳酸酯制成。
如本文所述，管形材料可以是提供容器間的液體連接的任何導管或設備，通常由用于容器的同樣彈性的材料制成，優(yōu)選塑化的PVC。管形可延伸入容器的內(nèi)部，可用作例如虹吸管?？赡苡泻芏喙苄尾牧咸峁┤魏螁蝹€容器間的液體連接，管道可以很多方式定位。例如至少兩個管道定位于收集袋的頂部，或位于袋的底部，或管形材料位于袋的每個末端。
封條、閥、夾鉗、轉換肢封閉物等通常位于管形材料內(nèi)或其上。本發(fā)明并不限于制作容器或連接容器的導管的材料的類型。
很多附加的容器可以是與生物液體加工系統(tǒng)有聯(lián)系的，可用來限制不同的流動路徑。例如含有生物溶液的附加隨體袋可以放置在與生物液體加工體系相聯(lián)系的位置。
根據(jù)本發(fā)明，生物液體的收集和加工裝置應能夠經(jīng)受嚴格的滅菌和離心分離環(huán)境，這些環(huán)境通常包括輻射消毒(在約2.5兆拉德)，和/或高壓滅菌(在約110-120℃進行約15-60分鐘)，和/或離心分離(通常約2500-3500G，進行約5-15分鐘；但其取決于需要使哪種生物液體達到最大回收，離心分離可以在約5000G下進行約10-20分鐘)。
本發(fā)明參照以下實施例更容易理解，以下實施例只是用于說明的目的而非限制本發(fā)明的范圍。
實施例1-測試HIV-1病毒活性抑制的方法能夠用各種實驗技術篩選用于抑制HIV的雙胍。一種實驗技術包括抑制病毒在人外周血單核細胞(PBM)中復制。測定存在于培養(yǎng)基中的病毒編碼的逆轉錄酶(在逆轉錄病毒中發(fā)現(xiàn)的酶)確定產(chǎn)生病毒的量。另一種技術涉及在不含細胞的體系中對純化的逆轉錄酶的活性抑制進行測量。本領域已知的篩選方法的實例在以下詳細介紹。
檢測抑制人外周血單核細胞(PBM)中HIV-1復制的抗病毒藥物的方法采用下述方法分離來自HIV-1和B病毒血清反應陰性的捐獻者的細胞用Ficoll-Hypaque非連續(xù)梯度在1,000次/g離心30分鐘，用PBS洗滌兩次，然后在在300次/g沉淀10分鐘。接種前，在RPMI 1640培養(yǎng)基中，用濃度為16.7μg/ml的植物血球凝集素(PHA)刺激細胞三天，其中所述的RPMI1640培養(yǎng)基中還添加了15％加熱滅活的胎牛血清、1.5mM的L-谷胺酰胺、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100μg/ml)、以及4mM碳酸氫鈉緩沖液。
從亞特蘭大的疾病控制中心得到HIV-1(LAV-1菌株)，用以上的RPMI1640培養(yǎng)基在PHA刺激的人PBM細胞中傳播，其中該RPMI 1640培養(yǎng)基中不含有PHA，但添加了7％的白細胞介素-2(Advanced Biotechnologies，Silver Spring，Md.)、7μg/ml DEAE-右旋糖苷(Pharmacia，Uppsala，Sweden)、和370U/ml抗人類白細胞(α)干擾素(ICN，Lisle，III)。從不含細胞的培養(yǎng)物上清液中獲得病毒，并在-70℃儲存直至使用。
用于細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基在T線(line T)上研究細胞毒性，所用培養(yǎng)基相當于添加了10％胎牛血清(BIO-LAB)、1％的谷胺酰胺(GIBCO)、1％抗生素(PSN，GIBCO)的RPMI 1640。
為研究病毒制劑處理后的剩余感染強度，所用常規(guī)人類淋巴T細胞的培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)相當于添加了10％白細胞介素-II、多聚季胺(polybrene，2mg/ml)和人-抗干擾素血清(1.2500(M.A.Rey等)，Biochem.Biophys.Res.Com.，1984，121 126-133)的上述培養(yǎng)基。
細胞采用一種CEM細胞克隆株--未成熟T的淋巴細胞系進行細胞毒性研究。
采用T淋巴細胞進行感染性研究，該T淋巴細胞從健康捐獻者的外周血液得到，并在Ficoll梯度上分離。
以稀釋至1/500并在完全培養(yǎng)基中培育的植物血球凝集素P(PHA P)刺激淋巴細胞三天。用病毒感染原始T細胞(blastic cells T)，處理或不處理，顯示剩余傳染強度。
HIV-病毒從HIV-1感染的CEM細胞系的上清液培養(yǎng)液中獲得病毒。采用該HIV-1感染的類T淋巴母細胞系來進行病毒制備。
進行病毒的逆轉錄酶活性(ATI)的定量分析后，評價所用上清物質的滴度。
在下列測試中，使用上清物質，其ATI值是1.8×106cpm/ml。
方法對T細胞的化合物細胞毒性的研究細胞具有1×106細胞/ml的CEM克隆株的細胞懸浮液。
產(chǎn)品采用QACs，Bardac22化合物制備的RPMI 1640培養(yǎng)基進行各種稀釋。
在24孔細胞培養(yǎng)板上每孔加入0.5ml的稀釋液和0.5ml CEM克隆株的細胞懸浮液(5×105細胞)，在37℃的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
用Tryptan Blue計數(shù)細胞懸浮液并與未處理細胞的對照樣品進行比較后，來評價細胞生長。
Bardac，單獨或相聯(lián)合，對HIV-1病毒感染正常人T淋巴細胞的能力的作用病毒溶液的制備取含有1ml ATI為1.8×106cmp/ml的病毒上清液的一些試管用超速離心進行濃縮。采用無菌雙蒸的水制備的QACs不同的稀釋液或水(未處理的對照病毒)懸起所得到的病毒殘余物。
病毒制劑的處理根據(jù)下列步驟處理濃縮的病毒制劑處理病毒樣品將采用超速離心得到的病毒殘余物用各種濃度的所研究產(chǎn)品(QACs)100μ進行重懸，并溫育10分鐘。
病毒樣品對照未處理的對照病毒以100μl無菌雙蒸水代替產(chǎn)品。
10分鐘的溫育時間后，漂洗每種樣品中的病毒，然后加入12ml的RPMI1640培養(yǎng)基再次濃縮，超速離心。然后用1ml完全培養(yǎng)基懸起病毒殘余物，將其用于感染正常人的T淋巴細胞。
樣品感染性的測定采用上述的每種處理的病毒制劑或對照品感染4×106正常的人淋巴T細胞。T細胞的感染根據(jù)前人所述方法進行(F.BarreSnoussi等.Science，1983，220868-871)，計算總數(shù)，在37℃，用1ml每種處理的病毒制劑或對照品對懸浮于1ml完全培養(yǎng)基中的4×106細胞溫育1小時。
用幾毫升的培養(yǎng)基洗滌兩次后，調節(jié)細胞懸浮液至1×106細胞/ml的濃度。感染的那一天定義為第0天。
對照細胞培養(yǎng)4×106的T淋巴細胞，在與其他樣品相同的條件下每3-4天進行傳代。
該對照品相當于在操作過程中的病毒產(chǎn)品的陰性對照。
通過下列步驟，測量存在于培養(yǎng)物上清液中的逆轉錄酶活性從而確定該段時間中的病毒生成。
對照病毒制劑和用所述產(chǎn)品處理的病毒樣品的逆轉錄酶活性的測定采用定量分析使得可能對起始樣品中未滅活的殘余病毒進行評估。該分析是在每2天或3天取出1ml的培養(yǎng)上清液并超速離心的基礎上進行。
在50μl的反應混合物中測定酶活性，該混合物含有50mM Tris pH7.8，20mM MgCl2，20mM KCl，2mM dithotreitol，0.25OD/ml的oligo dT，0.25OD/ml的polyrA，0.1％Triton×100和2.5μCi 3H DTTP。
在37℃培育1小時后，加入10μl 0.2M的EDTA使反應停止，樣品在DE81膜上沉積。
用5％Na2HPO4然后用蒸餾水洗滌幾次后，干燥該膜，用β閃爍計數(shù)器(PACKARD)測定放射活性。
結果表1是不同產(chǎn)品處理病毒樣品對HIV-1病毒感染性的的影響。
表1在感染的培養(yǎng)物上上清液物質中的ATI數(shù)量分析(cpm/ml)

T1用100μl雙蒸水處理的對照病毒T2用100μl雙蒸水處理的對照病毒T3對照病毒，確認T4對照細胞，未感染表1清楚地表明了在低濃度(0.002+0.002濃度)的Bardac/二葡萄糖酸氯己定(chlorohexidine digluconate)聯(lián)合的協(xié)同反應，其顯示了在第30天沒有病毒，實際上，在同樣的濃度，所用的兩種產(chǎn)品本身不是殺病毒的(virocidal)。
實施例2-本發(fā)明的組合物對HBV病毒的殺病毒反應對乙型肝炎病毒的乙型肝炎病毒抗原(AgHBs)體外降解的作用virocide+從乙型肝炎病人提取的人血清(1/1000th)表II所測試的混合物Bardac(％)+CHG*(％)單獨Bardac單獨CHG0.2 -0.25 0.2 0.250.1 -0.1 0.1 0.10.04-0.05 0.040.050.2 -0.050.04-0.25*CHG相當于二葡萄糖酸氯己定的縮寫表III結果所測試的殺病毒劑 剩余AgHBs(比例)Bardac0.2％ 1.35Bardac0.1％-CHG0.1％ 2.18Bardac0.2％-CHG0.05％3.07Bardac0.2％-CHG0.25％3.23與0.2％ Bardac本身相比，即使劑量減少50％，包含0.1％ Bardac和0.1％CHG的混合物也顯示出有趣的活性。
所測試的各種混合物的一般性結論只有殘留的乙型肝炎病毒的抗原可能在測試的Bardac-CHG混合物中進行辨別。
與0.025％CHG聯(lián)合的0.02％的Bardac與0.1％Bardac同樣有效。5倍的減少是顯著而且重要的，尤其是在本發(fā)明的組合物與彈性體材料共同使用時，Bardac對彈性體有毒。
實施例3-本發(fā)明組合物對單純皰疹病毒(HSV)的殺病毒菌反應體外測試所進行的測試病毒株這是I型人皰疹病毒(herpes virus Hominis type I)株，Bey株(HSV1)，其在人纖維原細胞或KB細胞上保持存活，在一種或其他類型的細胞上進行很多重要的改變。
當獲得了至少80％的細胞病變后，不進行事先的離心處理，使用同一批的冷凍于-80℃的病毒，其中所述離心處理去除接種物中大部分的細胞碎片；實際上，當在細胞外時，病毒的傳染性很快消失，因此當使用同一批病毒時，其結果便更接近于實際的體內(nèi)感染，其中在同一批病毒中，能夠在細胞碎片中發(fā)現(xiàn)病毒粒子。
將該批分配為整份的0.5ml后，保持在-80℃，在人纖維原細胞上滴定--將1份稀釋為10份(By dilution of 1 in 10)，稀釋接種8個培養(yǎng)管106ml；和在陪替氏培養(yǎng)皿(35mm)中接種培養(yǎng)物，向上清液中加入抗HSV1血清以中和可能釋放進入液體培養(yǎng)基中的病毒粒子，因此能夠計數(shù)區(qū)域(zones)每個培養(yǎng)皿具有100-150個單元性成區(qū)域，其中所述培養(yǎng)皿是以0.5ml稀釋至10-4的病毒溶液進行接種。
細胞毒性檢查在測試中所用的細胞培養(yǎng)物的產(chǎn)品上進行，也就是所說的人纖維原細胞。
在富含10％胎牛血清的Dulbecco培養(yǎng)基上培育細胞；使用時，采用不含小牛血清的同樣的培養(yǎng)基來洗滌細胞。
對于每個測試的產(chǎn)品或每種組合物，使用10試管的細胞培養(yǎng)物，接種產(chǎn)品后，對試管繼續(xù)觀察3天。
觀察到的各種產(chǎn)品的作用按順序，每種產(chǎn)品使用純的并稀釋至10-1，10-2，10-3加入培養(yǎng)管中，該1ml的管中含有體積為0.1ml的營養(yǎng)培養(yǎng)基。
結果
Bardac0.04％溶液在稀釋至10-3沒有毒性二葡萄糖酸氯己定，0.05％溶液沒有毒性。
觀察到的即時殺病毒作用活性測定將0.2ml病毒懸浮液與0.2ml測試化合物的稀釋溶液中的一種混合。然后立即取出0.2ml混合物稀釋至比率為10-4的從而中止產(chǎn)品的活性。然后取體積為1ml的混合物稀釋液沉積于在直徑為6cm的陪替氏培養(yǎng)皿上培育的非洲綠猴腎細胞層上。
吸附1小時后，傾倒出上清液體，加入5ml的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中不含有動物血清，但加入了1％的I型抗皰疹型多克隆兔血清。
在感染的細胞破壞過程中其不影響細胞間病毒的增殖但中和了進入液相的粒子；4-5天后，裸眼可觀察到細胞裂解的區(qū)域，其延伸類似油點，每個點理論上相當于存在于病毒稀釋液的“區(qū)域形成單元”(UFP)的增殖，該稀釋液沉積于培養(yǎng)物上。區(qū)域形成單元可粗略估計，相當于感染粒子或病毒粒子。
表IV第4天每毫升稀釋至10-4的病毒區(qū)域形成單元數(shù)目(在三個培養(yǎng)物皿上進行的滴定)


活性出現(xiàn)的時間0.2ml未稀釋的病毒懸浮液與0.2ml下列兩種混合物的每種混合0.04％Bardac+0.05％CHG(二葡萄糖酸鹽)0.02％Bardac+0.025CHG
培育1、5和15分鐘后，將一滴混合物接種入5個培養(yǎng)管，觀察5天。
作為對照，稀釋的病毒以同樣的方式接種入培養(yǎng)基而非混合物中。
表V所述兩種混合物5個試管在第2天觀察到的結果病毒+混合物細胞病變結果(在第2天)對照病毒2/51分鐘5/50/55分鐘5/50/515分鐘 5/5體內(nèi)測試對裸鼠進行測試，該裸鼠以病毒懸浮液浸漬過的針進行肌肉注射，或用感染的針(也就是在病毒懸液中浸漬過的針)穿過微囊體后注射，如下所述，該微囊體包覆有乳膠(實施例8，樣品1)，針穿過微囊體能夠有足夠多的、迅速的感染動物的量。
操作過程類似于實施例8，但培養(yǎng)基必須對皰疹病毒適合。
實施例4-組合物的殺菌作用測試I材料·測試的微生物參考菌株銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CIP A22大腸埃希菌(Escherichia coli)CIP 54127金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CIP5314Oxford菌株醫(yī)院菌株(hospital strains)銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)大腸埃希菌(Escherichia coli)金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)普通變形菌(Proteus vulgaris)白色念珠菌(Candida albicans)
·Millipore薄膜HAE P047SO(0.45μm)·Mueller Hinton 2瓊酯糖43301(Biomerieux)·無菌和非高熱(apyrogenic)蒸餾水(biosedra)步驟菌株的維護使用前，對每個細菌菌株在Meuller Hinton瓊酯糖上以24小時的間隔進行三次傳代培養(yǎng)。
細菌接種體的制備·初始細菌懸浮液A以細菌分離物為基礎進行制備，其必須符合渾濁度(opacity)，相當于McFarland天平上的點1。其被用于最后的測試。
·用于對照和預測試的懸液B由懸液A連續(xù)稀釋至10-6制備得到。
對照組用Mueller Hinton瓊酯糖將1ml懸浮液B“一同”種入。
對照過濾計數(shù)用Millipore薄膜過濾1ml懸液B，然后用50ml蒸餾水洗滌。
在37℃、24小時后，計數(shù)菌落。
預測試對四個殺菌混合物的每種以及每個細菌菌株進行下列測試·過濾1ml殺菌混合物·洗滌(用50ml蒸餾水洗2次)·過濾1ml懸浮液B·用50ml蒸餾水浸滌·在37℃、24小時后，計數(shù)菌落。
最后的測試每種殺菌混合物以雙濃度(double concentration)放置1、5和10分鐘，與1ml懸浮液A接觸，然后過濾。
進行預測試所定義的洗滌步驟后，將膜于37℃放置25小時。
結果解釋在該過程中，如果接觸特定時間后，該混合物至少減少了5個對數(shù)的細菌接種體，則可認為該混合物能用作殺菌劑。
在最后的測試薄膜上，通過與同樣菌株、同樣混合物在預測試種的計數(shù)結果進行比較可觀察到這種效果。
結果表VI組合物在t＝1分鐘時的功效菌株混合物No.1混合物No.2Bardac4％ Bardac0.04g/100ml二葡萄糖酸鹽0.05g/100mlS.aureus CIP 53154 E EE.coli CIP 54127E EP.aeruginosa CPI A22E ES.aureusE EE.coli E EP.aeruginosaNEEP.vulgaris NENEC.albicans E EE或NE(有效或無效)表VII組合物在t＝5分鐘的功效菌株混合物No.1混合物No.2Bardac4％ Bardac0.04g/100ml二葡萄糖酸鹽0.05g/100mlS.aureus CIP 53154 E EE.coli CIP 54127E EP.aeruginosa CPI A22E ES.aureusE EE.coli E EP.aeruginosaNEEP.vulgaris NENEC.albicans E EE或NE(有效或無效)
表VIII組合物在t＝10分鐘的功效菌株混合物No.1 混合物No.2Bardac4％Bardac0.04g/100ml二葡萄糖酸鹽0.05g/100mlS.aureus CIP 53154 E EE.coli CIP 54127E EP.aeruginosa CPI A22E ES.aureusE EE.coli E EP.aeruginosaE EP.vulgaris E EC.albicans E EE或NE(有效或無效)結論接觸1分鐘后，沒有混合物在所有的菌株上有效。但混合物No.2時最有效的，這是因為只有一個乎不敏感。
接觸5分鐘后，如果不是同一菌株--普通變形菌(Proteus vulgari)即使在5分鐘后對產(chǎn)品仍有抗性，則可認為混合物No.2在所有的菌株上都有效。
接觸10分鐘后，混合物No.1和No.2在所有的菌株上得到滿意的結果。
測試2在下列溶液的基礎上進行另一個測試--0.1％的二葡萄糖酸氯己定溶液100ml(pH6)；--0.1％的Bardac22溶液100ml。
特別測定了上述溶液單獨或結合對金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC 6538、大腸埃希菌(Escherichia coli)ATCC 11229和白色念珠菌(Candida albicans)ATCC 10231的活性。
根據(jù)Tichtlinien fur die Prufung und Bewertung chemischerDesinfektionsverfahren der DGHM/Guidelines for Testing and EvaluatingChemical Disinfection Processes of DGHM as at 1.1.，1981的第I章/2.1和2.2描述的步驟測試。
表IX，X和XI分別說明了二葡萄糖酸氯己定0.1％水溶液、Bardac220.1％水溶液以及兩種化合物的等量混合物的抗細菌活性和抗真菌活性。這些表格所顯示結果包括在37℃培育72小時，并采用下列滅活的物質作為對比A3％Tween80+0.3％卵磷脂+0.1％半胱氨酸，B3％Tween80+3％皂角苷+0.1％半胱氨酸+0.1％組氨酸；C3％Tween80+0.3％卵磷脂+0.1％組氨酸+0.5％硫代硫酸鈉。
在這些表格中，符號“+”表示生長增加，“-”表示沒有生長。
下表IX顯示了二葡萄糖酸氯己定0.1％水溶液(1％測試溶液對應于0.001％二葡萄糖酸鹽)的抗細菌活性和抗真菌活性，其顯示0.5％的二葡萄糖酸氯己定稀釋液對S.aureus和E.coli具有生長抑制，該濃度相當于0.0005％活性物質的濃度；所述溶液(0.001％二葡萄糖酸氯己定)的1％稀釋液抑制了C.albicans。在表X，二癸基二甲基氯化銨的0.1％稀釋液(＝0.0001％二癸基二甲基氯化銨)更顯著的抑制了革蘭氏陽性菌S.aureus和C.albicans，E.coli，其0.5％的稀釋液(＝0.0005％二癸基二甲基氯化銨)抑制了E.coli(革蘭氏陰性菌)。
表X.
表XI顯示這兩種殺菌劑的組合能夠在更高稀釋度的情況下顯著抑制前述微生物(根據(jù)0.00025％二葡萄糖酸氯己定和0.00025％二癸基二甲基氯化銨對E.coli和C.albicans的反應；根據(jù)上述兩種殺菌劑在0.00005％濃度時對S.aureus的反應)。
表IX單獨的二葡萄糖酸氯己定(1％溶液→0.001％二葡萄糖酸鹽)測試菌株 S.aureus E.colli Candida albicansATCC 6538 ATCC 11229ATCC 1031濃度％notABCnotABCnotABC(體積/體積)1.0 - +++- +++- +++0.5 - +++- ++++ +++0.1 + ++++ ++++ +++0.05 + ++++ ++++ +++0.025 + ++++ ++++ +++0.0125+ ++++ ++++ +++0.00625 + ++++ ++++ +++
表X單獨的Bardac22(1％溶液→0.001％Bardac22)測試菌株 S.aureus E.colli Candida albicansATCC 6538 ATCC 11229ATCC 1031濃度％ notABCnotABCnotABC(體積/體積)1.0 - +++- +++- +++0.5 - +++- +++- +++0.1 - ++++ +++- +++0.05 + ++++ ++++ +++0.025+ ++++ ++++ +++0.0125 + ++++ ++++ +++0.00625 + ++++ ++++ +++表XI本發(fā)明組合物(2％溶液→0.001％Bardac22和0.001％CHG)測試菌株 S.aureus E.colli Candida albicansATCC 6538 ATCC 11229ATCC 1031濃度％ notABCnotABCnotABC(體積/體積)2.0 - +++- +++- +++1.0 - +++- +++- +++0.5 - +++- +++- +++0.1 - ++++ ++++ +++0.05 + ++++ ++++ +++0.025+ ++++ ++++ +++0.0125 + ++++ ++++ +++0.00625 + ++++ ++++ +++表XII，XIII和XV所列結果的實驗是采取下述方法進行的利用在37℃下傳代培養(yǎng)72小時的溫育物進行測試，在反應溫度22℃下采用下述成分作為滅活物質3％Tween80+3％皂角苷+0.1％半胱氨酸+0.1％組氨酸；這些表格分別闡述了0.1％二葡萄糖酸氯己定水溶液、0.1％Bardac水溶液、以及這兩種化合物的等份混合物的抗細菌和抗真菌活性，并且說明了前述殺菌劑的反應是作為接觸時間的函數(shù)，并且出現(xiàn)了與上述聯(lián)合應用相同的協(xié)同效應。兩種化合物的聯(lián)合應用就能夠顯著地降低達到相同效果的濃度。
表XII(CHG本身)菌株S.aureus ATCC 6538E.coli ATCC 11229C.albicans ATCC 1031微生物/ml 微生物/ml微生物/ml8×1082×1098×107感染時間(分鐘)濃度％(體積/ 1 3 5 15 30 60 1 3 5 15 30 60 1 3 5 15 30 60體積)25 + + + + - - + + + - - - + + + - - -10 + + + + + - + + + - - - + + + + - -5 + + + + + + + + + + - - + + + + - -1 + + + + + + + + + + + + + + + + + -0.5 + + + + + + + + + + + + + + + + + +0.1 + + + + + + + + + + + + + + + + + +0.05+ + + + + + + + + + + + + + + + + +表XIII(Bardac本身)菌株S.aureus ATCC 6538E.coli ATCC 11229C.albicans ATCC 1031微生物/ml 微生物/ml微生物/ml8×1082×1098×107感染時間(分鐘)濃度％(體積/ 1 3 5 15 30 60 1 3 5 15 30 60 1 3 5 15 30 60體積)25 + - - - - - - - - ---- - - - - -10 + - - - - - + + - ---- - - - - -5 + + + - - - + + + ---+ + - - - -1 + + + + - - + + + ++++ + + + - -0.5 + + + + + + + + + ++++ + + + + +0.1 + + + + + + + + + ++++ + + + + +0.05+ + + + + + + + + ++++ + + + + +
表XIV(本發(fā)明組合物)菌株S.aureus ATCC 6538E.coli ATCC 11229C.albicans ATCC 1031微生物/ml 微生物/ml微生物/ml8×1082×1098×107感染時間(分鐘)濃度(體積/ 1 3 5 15 30 60 13515 30 60 13515 30 60體積)25 + - - - - - ------+--- - -10 + + + - - - ------+--- - -5 + + + + - - +-----+++- - -1 + + + + + + ++++--++++ + +0.5 + + + + + + ++++++++++ + +0.1 + + + + + + ++++++++++ + +0.05+ + + + + + ++++++++++ + +實施例5-殺精子反應步驟從健康的志愿者獲得各種精液樣品(每個樣品一滴精液)。
活力測定用曙紅-尼格羅黑(eosine-nigrosine)處理一滴精液。然后制備涂片，用顯微鏡檢查100個游動精子。死精子全部或部分是紅色的，活精子是無色的。
研究的物質研究的物質是Bardac和二葡萄糖酸氯己定，單獨測試以及根據(jù)本發(fā)明聯(lián)合測試。各種步驟的階段見表XV-XVII。
各種物質與精液的最大接觸時間限制為3分鐘，以保證在使用條件下的方法的有效性。精液中活性溶液的濃度限制為10％以減少產(chǎn)品對粘膜層的毒性。
表XV物質與精液的接觸時間1分鐘 3分鐘Bardac 精液中的溶液濃度在TO的對照 活性物質的溶液濃度5％ 10％ 5％ 10％82.8±7.10.4％ 10.7±7.65±6.4 0.8±1.20.8±181.4±5.90.6％ 10.5±9.79.2±12.92.2±4.50.4±0.981.4±5.90.8％ 9.7±10.21.8±2.5 0 079.7±5.31％ 000 0表XVI物質與精液的接觸時間1分鐘3分鐘Chlorohexidine Digluconate 精液中的溶液濃度在TO的對照 活性物質的溶液濃度 5％ 10％ 5％10％98±6.2％ 0.5％ 77±10.877.2±5.678±5.775.5±4.8表XVII物質與精液的接觸時間1分鐘 3分鐘Bardac+Chlorohexidine digluconate 精液中的溶液濃度在TO的對照活性物質的溶液濃度5％ 10％ 5％ 10％88.4±5.4％ B0.4％+DC0.5％15.6±13.2 5.1±8 8.6±10.82.4±4.1B0.4％+DC0.8％21.3±14 6.7±3 18.3±13.3 6.3±7.8B0.4％+DC1％ 19±11.1 10±8.7 16±9.8 9.3±11.9B0.6％+DC0.5％6.3±11 4±6.9 1.3±2.3 1±1.7B0.8％+DC0.5％3.7±6.3 02±3.5 0實施例6-對Bardac22和二葡萄糖酸氯己定混合物水溶液的研究在室溫(20℃±1C)下，在遠離光線的塑料瓶中制備所有的混合物，以重量/重量百分比表示。
每天觀察這些塑料瓶能夠監(jiān)測是否出現(xiàn)了白色沉淀。白色沉淀大部分會在瓶子的殘余物上發(fā)現(xiàn)(當其形成時)，在液體濕潤的瓶壁上也會有。
不同濃度的Bardac-氯己定50/50溶液的研究在第一階段，在活性組分不同濃度的水溶液對兩種活性組分(Bardac和二葡萄糖酸氯己定)的等份混合物(50/50)進行研究活性組分30％溶液-24小時出現(xiàn)沉淀活性組分20％溶液-24小時出現(xiàn)沉淀活性組分10％溶液-24小時出現(xiàn)沉淀活性組分5％溶液-24小時出現(xiàn)沉淀活性組分1％溶液-24小時出現(xiàn)沉淀不等份的Bardac和氯己定10％和20％溶液的研究在第二步，活性組分的濃度定于10％和20％，但兩種活性組分不等份。
表XVIII活性組分10％溶液的概括表二葡萄糖酸氯己定 Bardac二葡萄糖酸氯己定(％) 備注/Bardac的比例 (％)0.5/99.5 0.059.95 無沉淀1/99 0.1 9.9無沉淀2/98 0.2 9.8無沉淀4/96 0.4 9.6無沉淀8/92 0.8 9.2無沉淀16/84 1.6 8.4無沉淀25/75 2.5 7.52個月出現(xiàn)沉淀35/65 3.5 6.59天出現(xiàn)沉淀40/60 4.0 6.46天出現(xiàn)沉淀50/50 5.0 5.024小時出現(xiàn)沉淀表XIX活性組分20％溶液的概括表二葡萄糖酸氯己定 Bardac二葡萄糖酸氯己定(％) 備注/Bardac的比例 (％)0.5/99.5 0.119.9無沉淀1/99 0.219.8無沉淀2/98 0.419.6無沉淀4/96 0.819.2無沉淀8/92 1.618.4無沉淀3.2 16.8 8.4 無沉淀25/75 5.015.02個月出現(xiàn)沉淀35/65 7.013.09天出現(xiàn)沉淀40/60 8.012.06天出現(xiàn)沉淀50/50 10.0 10.024小時出現(xiàn)沉淀實施例7-對Bardac22二葡萄糖酸氯己定混合物的醇溶液的研究當兩種產(chǎn)品是甘油溶液時，以水表示的溶解比例是相同的。
實施例8-含有本發(fā)明的組合物并包覆聚乙烯外殼的微囊體在所述組織被針刺穿后對細菌和真菌的殺菌能力的研究。
材料和方法包覆聚乙烯或乳膠外殼的兩個微囊體樣品中含有樣品1含有本發(fā)明組合物并包覆PVDC的微囊體。包覆微囊體的外殼的厚度約為500μm，外殼的總厚度約1300μm，外殼被針(0.5×16mm)刺穿后，殺菌劑的可用量是約1.5μg；樣品2含有本發(fā)明一致的I型組合物的微囊體并包覆于EVA中。包覆微囊體外殼的厚度約為500μm，外殼被針(0.5×16mm)刺穿后，殺菌劑的可用量是約0.4μg。
用下列微生物制備測試的微生物樣品大腸埃希菌(Escherichia coli)ATCC 11229，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 6538和白色念珠菌(Candida albicans)ATCC 10231。
在37C下，在CSL培養(yǎng)基(Merck)中培育菌株24小時，然后在0.9％氯化鈉溶液中制備10-3-10-6的稀釋液。
將獲得的各種培養(yǎng)物1ml(稀釋或未稀釋)加入至盛有9ml滅活人血清的池(pool)中。每毫升測試溶液的微生物數(shù)目見表XX。
使用三種類型的針0.7×30mm(22G×1/4”，Terumo)，0.5×16mm(25G×5/8”，Terumo)，0.3×13mm(30G×1/2”，Microlance，Becton Dickinson)。
針固定于1ml的注射器上，在上述微生物溶液中浸漬(至少1cm的針浸漬在溶液中)，吸入0.1ml溶液。然后用針刺入上述外殼，該外殼放置于以casoagar(Merck，添加了3％的Tween80和0.3％卵磷脂的培養(yǎng)基)覆蓋的陪替氏培養(yǎng)皿上。
標記用針接種瓊脂的位置，然后在讀取結果前，在37℃下培育培養(yǎng)物介質72小時。
結果表XX是用0.3×13mm的針(30G×1/2”，Microlance，Becton Dickinson)穿孔的陽性培養(yǎng)物的數(shù)目(每個實驗5次穿孔)，在如上所述進行添加的casoagar培養(yǎng)基(Merk)上穿孔外殼的培養(yǎng)物的數(shù)目。
表XX穿孔后獲得陽性培養(yǎng)物的數(shù)目樣品1 樣品2微生物溶液微囊體對照品微囊體對照品E.coli3×108/ml +---- ++++- +++-- +++++2×102/ml ----- ----- ----- -----102/ml----- ----- ----- -----S.aureus2×108/ml +++-- +++++ +++++ +++++2×105/ml ----- ----- ----- -----102/ml----- ----- ----- -----C.albicans3×107/ml ----- +---- ++--- ++---3×105/ml ----- ----- ----- -----102/ml----- ----- ----- -----+微生物生長-沒有生長這些結果具體表明，低濃度的細菌或真菌(102/ml)可被吸收或被聚乙烯外殼機械地除去；當使用最小的針時(0.3×13mm，表XX)，每毫升105微生物濃度可以認為是不產(chǎn)生生長的限制濃度；另一方面，分別用0.7×30mm和0.5×16mm的針，獲得相同順序的結果。如果只是對照品外殼穿孔(樣品1)，則只有高濃度的細菌(108/ml)或真菌(107/ml)獲得生長。
這些結果表明樣品1的微囊體(PVDC)比樣品2的微囊體(EVA)更有效。
結論樣品1的測試表明加入微囊體的本發(fā)明組合物的瞬時殺菌劑達到了在類似于醫(yī)院條件下所起到的效果。
實施例9-化合物對紅細胞溶血的作用以分光光度計法監(jiān)測化合物對肝素化的全血中的體外紅細胞溶血的作用。
向肝素化的牛血中加入各種濃度和制劑的化合物，在1.5ml的微型離心試管中輕柔混合。在37℃下培育樣品1小時。培育結束后，從恒溫箱中移出樣品，在2000rpm離心5分鐘。從樣品中將200μl的整份上清液移入96孔的微量滴定板，在413nm讀數(shù)。測試樣品的吸光率與含有磷酸緩沖鹽水的對照品比較，pH7.2。測試樣品的吸光率讀數(shù)高于對照樣品被認為是溶血的。
表XXI歸納了在測試條件下非溶血的測試化合物組分和濃度。
表XXI非溶血測試化合物

盡管本發(fā)明以具體優(yōu)選的實施例描述，但不限于這些實施例。本領域的技術人員可以實施包含在本發(fā)明內(nèi)的替換實施方案、實施例和改進，尤其是根據(jù)前述的那些描述。
權利要求
1.用于對液體和生物組織以及被液體和/或生物組織污染的表面進行消毒的抗病原體組合物，該組合物包含抗病原體量的至少一種季銨化合物，該季銨化合物與一種可接受的載體相結合。
2.權利要求1的抗病原體組合物，其進一步包含一種雙胍化合物。
3.權利要求1的抗病原體組合物，其中所述季銨化合物包含兩種或多種季銨化合物的混合物。
4.權利要求1-3之一的抗病原體組合物，其中所述液體和生物組織選自水、水基溶液、血液和血液制品、用于移植的皮膚和器官。
5.權利要求1-3之一的抗病原體組合物，其中所述表面選自容器、過濾器、管形材料、封條、夾鉗、轉換肢封閉物、醫(yī)療器材、操作臺和體檢臺。
6.權利要求5的抗病原體組合物，其中所述容器是生物液體容器或水容器。
7.權利要求5的抗病原體組合物，其中所述容器是血液或血液制品容器。
8.權利要求5的抗病原體組合物，其中所述容器是獻血袋或瓶。
9.權利要求1-3之一的抗病原體組合物，其中所述血液是全血。
10.權利要求1-3之一的抗病原體組合物，其中所述血液制品選自血漿、壓積紅細胞、富血小板血漿、血小板濃集液和冷凝蛋白質。
11.權利要求1-3之一的抗病原體組合物，其中所述組合物是霜、油膏、乳液、凝膠、粉末、清洗劑、肥皂、液體或固體形式。
12.對容器內(nèi)血液或血液制品中的病原體進行滅活的方法，包括使血液、血液制品和容器中的至少一種與權利要求1-3之一的組合物接觸。
13.醫(yī)療器材，包括至少一種以權利要求1-3之一的抗病原體組合物處理的表面或含有至少一種權利要求1-3之一的抗病原體組合物。
14.權利要求13的醫(yī)療器材，其中所述醫(yī)療器材是生物液體容器。
15.權利要求14的醫(yī)療器材，其中所述生物液體容器是獻血袋或瓶。
16.權利要求13的醫(yī)療器材，其中所述醫(yī)療器材是內(nèi)嵌式過濾器，在對個體輸血前，血液或血液制品通過該過濾器。
17.權利要求13的醫(yī)療器材，其中所述醫(yī)療器材是內(nèi)嵌式過濾器，血液或血液制品在從個體進行收集時通過該過濾器。
18.權利要求13的醫(yī)療器材，其進一步包含用于分散所述抗病原體組合物的多孔介質。
19.在體外或體外-體內(nèi)處理生物液體的方法，包括將生物液體收集在容器中、以及將該生物液體暴露于權利要求1-3之一的抗病原體組合物中。
20.體外或體外-體內(nèi)對生物液體中的人免疫缺陷病毒的感染或復制進行抑制的方法，包括用抑制有效量的雙胍化合物或其衍生物以及與藥學載體聯(lián)合的至少一種季銨化合物處理所述生物液體。
21.權利要求20的方法，其中所述載體是DMSO。
22.在體外或體外-體內(nèi)消毒紅細胞的方法，所述方法包括下列步驟a)使所述紅細胞與消毒組合物接觸足夠長的時間以使紅細胞中的病原體滅活，其中所述消毒組合物基本由消毒濃度的雙胍化合物組成，該化合物與溶質的等壓有效濃度的溶液聯(lián)合，從而使所述消毒組合物基本與血液等壓；以及；b)從所述消毒組合物中分離所述紅細胞。
23.權利要求22的方法，其中所述雙胍化合物選自季銨化合物和其組合。
24.權利要求12的方法，還包括在病原體滅活后除去組合物。
25.權利要求19-21之一的方法，還包括在處理生物液體后除去組合物的步驟。
全文摘要
本發(fā)明包括從生物溶液中減少病毒、細菌、原蟲、真菌和其他寄生污染物的方法。該生物溶液包括但不局限于含有血液、血液組分、細胞培養(yǎng)物或細胞培養(yǎng)物組分的溶液。根據(jù)本發(fā)明，提供了滅活容器中的血液或血液制品中病原體的方法，包括使血液、血液制品和容器的至少一種與本發(fā)明的組合物接觸。根據(jù)本發(fā)明，提供了一種醫(yī)療器材，該設備包括至少一個用本發(fā)明的抗抗病原體組合物處理過的表面或含有至少一種本發(fā)明的抗抗病原體組合物。根據(jù)本發(fā)明，提供了抗病原體組合物，該組合物用于液體和生物組織和用液體和/或生物組織污染的表面的消毒，其包括與可接受的載體聯(lián)合的銨化合物的至少四分之一的抗病原體量。本發(fā)明優(yōu)選的抗病原體組合物還包括雙胍(bisguanidine)化合物。根據(jù)本發(fā)明，提供了在體外或體內(nèi)抑制生物液體中人類免疫缺陷病毒的感染或復制的方法，其包括用雙胍化合物或其衍生物以及至少一種與藥學可接受的載體如DMSO聯(lián)合的季銨化合物的有效抑制量處理生物液體。
文檔編號A01N25/30GK1612688SQ02826773
公開日2005年5月4日 申請日期2002年11月21日 優(yōu)先權日2001年11月21日
發(fā)明者巴比·I·惠特克, 勒內(nèi)－蓋伊·比內(nèi)爾 申請人:阿爾塔切姆法爾馬有限公司