專利名稱：一種用于生物殺菌劑活菌代謝物有效組份的生物膜提取法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種制備生物農(nóng)藥制劑的技術(shù)，特別是一種用于生物殺菌劑代謝物有效組份的生物膜提取法。
傳統(tǒng)的殺菌劑絕大部分都是化學(xué)農(nóng)藥。其殺菌的主要成份(有效成份)是通過(guò)其化學(xué)物質(zhì)的作用來(lái)抑制殺滅病菌，由于這類化合物在自然界中很難分解，殘留期長(zhǎng)，對(duì)生物有害，在生產(chǎn)使用中勢(shì)必帶來(lái)污染和藥物殘留等藥害問(wèn)題。為了克服上述缺點(diǎn)，人們研制開(kāi)發(fā)出許多對(duì)人畜無(wú)害，不污染環(huán)境，還能保護(hù)害蟲(chóng)天敵的微生物農(nóng)藥，但當(dāng)前國(guó)內(nèi)所出現(xiàn)的生物殺菌劑因只能是通過(guò)微生物活體細(xì)胞自身的代謝活動(dòng)來(lái)抑制有害微生物，這樣勢(shì)必帶來(lái)防效穩(wěn)定性差，作用效果慢等缺點(diǎn)，其原因就在于這些生物制劑施用后，微生物活體細(xì)胞的存活、代謝強(qiáng)弱是和施用地的環(huán)境密切相關(guān)的，各種不同環(huán)境的差異必然帶來(lái)作用效果上的差異。為了克服上述生物農(nóng)藥的局限，本申請(qǐng)人曾研制了一種以發(fā)酵液活菌代謝物中有效抗菌物質(zhì)的多少為取舍的微生物農(nóng)藥殺菌劑。該生物殺菌劑的成份是由所篩選的枯草芽孢桿菌(Bacillu subtili)及其代謝物為主要?dú)⒕镔|(zhì)成份(見(jiàn)中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?2110602.9，申請(qǐng)日2002年1月18日)，由于該發(fā)明所用培養(yǎng)基配方與傳統(tǒng)技術(shù)的配方有所不同，其活菌代謝物中有效抗菌物質(zhì)成份含量高，具有使用方便，防治效果受環(huán)境因素影響小的特點(diǎn)，但當(dāng)采用常規(guī)方法的蒸餾法提取、吸附提取，濾膜提取，沉淀物等電點(diǎn)提取法提取其有效抗菌物質(zhì)時(shí)，存在成本高，效果差，市場(chǎng)難以接受的缺點(diǎn)。如何采用措施實(shí)現(xiàn)低成本最佳提取才能理想地分離出發(fā)酵液活菌代謝物中的具有活性最高，有效組份量最大的有效抗菌物成為一道有待科研人員繼續(xù)探索的技術(shù)難題。
有鑒于此，本發(fā)明的目的是要設(shè)計(jì)提供一種用于生物殺菌劑活菌代謝物有效組份的生物膜(分離)提取法，它可適用于枯草芽孢桿菌類生物殺菌劑的提取，使得所制備的這類生物農(nóng)藥中活性最高、組份量(成份含量)最大的有效抗菌物能夠?qū)崿F(xiàn)最佳提取，且提取工藝簡(jiǎn)單、成本低，提取物可以象一般農(nóng)藥一樣方便使用，且見(jiàn)效速度快，防治效果穩(wěn)定。
本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的該提取方法依序包括以下步驟將已經(jīng)發(fā)酵好的發(fā)酵罐中的微生物即芽孢桿菌發(fā)酵菌液(為一種高產(chǎn)抗菌物質(zhì)的發(fā)酵液)經(jīng)100-150目網(wǎng)篩過(guò)濾去渣——調(diào)PH值6-6.4至等電點(diǎn)(以便有效物沉淀)——在溫度＜20℃以下至少靜置0.5小時(shí)(如靜置0.5-1.5小時(shí))后去上清液——膜分離提取(即利用生物膜提取獲有效組份)——添加填充助劑SH—烘干粉碎——包裝得成品。
本發(fā)明在具體實(shí)施時(shí)仍采用常規(guī)微生物工業(yè)發(fā)酵的設(shè)備條件進(jìn)行提取前的發(fā)酵。在進(jìn)行實(shí)際提取工藝步驟時(shí)還具有以下幾點(diǎn)技術(shù)特征一、所述的膜分離提取工序步驟是指利用孔徑為30000-100000目的生物膜對(duì)菌液進(jìn)行分離過(guò)濾以得到發(fā)酵液中活菌代謝物中組份量最大的有效抗菌物。本發(fā)明之所以采用(上述孔徑的)生物膜取提工藝，是鑒于生物膜在廢水生物處理，醫(yī)藥食品加工，生化技術(shù)領(lǐng)域，包括微生物發(fā)酵物處理等領(lǐng)域應(yīng)用時(shí)皆有其獨(dú)特的適用性和良好的效果，而本發(fā)明之所以采用上述孔徑的生物膜分離提取工藝，又是鑒于如下試驗(yàn)結(jié)果當(dāng)采用不同孔徑生物膜來(lái)分離發(fā)酵液的有效代謝物組份，并將所獲得的這些不同的組份做抑菌圈試驗(yàn)，從而看出不同孔徑的組份對(duì)病菌的生物抗菌活性是不相同的，當(dāng)采用孔徑為600-1400目生物膜分離提取時(shí)，其抑菌圈直徑為0；當(dāng)采用孔徑為10000-20000目生物膜分離提取時(shí)，其抑菌圈直徑皆為0.5mm；當(dāng)采用孔徑為30000目生物膜分離提取時(shí)，其抑菌圈直徑為1.2mm；當(dāng)孔徑為50000目生物膜分離提取時(shí)，其抑菌圈直徑為14mm；當(dāng)孔徑為70000目生物膜分離提取時(shí)，其抑菌圈直徑為8mm；當(dāng)孔徑為100000-200000目生物膜分離提取時(shí)其抑菌圈直徑為5-4mm；當(dāng)孔徑為500000目生物膜分離提取時(shí)，其抑菌圈直徑為3mm。從以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)可看出以通過(guò)30000-200000目孔徑的濾液組份對(duì)假單孢病原菌(為防治對(duì)象的病原指示菌)的抗菌活性最高。
二、所添加的填充助劑SH是由農(nóng)副產(chǎn)品有機(jī)物和高嶺土組成，并經(jīng)消毒粉碎過(guò)200目篩后所得的細(xì)粉。
本發(fā)明適用于枯草芽孢桿菌所產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的提取，與已有技術(shù)比較，利用本發(fā)明的生物膜提取工藝可使得該生物農(nóng)藥制劑中有效殺菌物質(zhì)成份顯著提高，這種提取物在使用中可以象一般農(nóng)藥一樣方便使用，兼有生物農(nóng)藥和化學(xué)農(nóng)藥的使用優(yōu)點(diǎn)，且提取成本低。由于富含生化產(chǎn)物，可以直接作用于防治對(duì)象，其作用效果快于活菌，使用中受環(huán)境影響小，使用范圍廣，不僅能使用于根部、葉面也一樣使用，防治效果穩(wěn)定，有利提高經(jīng)濟(jì)效益。
權(quán)利要求
1.一種用于生物殺菌劑活菌代謝物有效組份的生物膜提取法，其特征是該提取方法依序包括以下步驟將已經(jīng)發(fā)酵好的發(fā)酵罐中的微生物即芽孢桿菌(Bacillu subtilis)發(fā)酵菌液經(jīng)100-150目網(wǎng)篩過(guò)濾去渣——調(diào)PH值6-6.4至等電點(diǎn)，以便有效物沉淀——在溫度＜20℃以下至少靜置0.5-1.5小時(shí)后去上清液——膜分離提取，即利用生物膜提取獲得有效組份——添加填充助劑SH——烘干粉碎——包裝得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物膜提取法，其特征是所述的膜分離提取工序步驟是指利用孔徑為30000-100000目的生物膜對(duì)菌液進(jìn)行分離過(guò)濾以得到發(fā)酵液活菌代謝物中組份量最大的有效抗菌物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物膜提取法，其特征是所添加的填充助劑SH是由農(nóng)副產(chǎn)品有機(jī)物和高嶺土組成，并經(jīng)消毒粉碎過(guò)200目篩后所得的細(xì)粉。
全文摘要
一種用于生物殺菌劑活菌代謝物有效組份的生物膜提取法，其特征是該提取法含括以下步驟將已經(jīng)發(fā)酵好的微生物即芽孢桿菌發(fā)酵菌液經(jīng)100－150目網(wǎng)篩過(guò)濾去渣—調(diào)pH值6－6.4至等電點(diǎn)—在溫度＜20℃以下至少靜置0.5小時(shí)后去上清液—利用生物膜分離提取—添加填充助劑SH—烘干粉碎—包裝得成品，其中所述生物膜提取步驟是指利用孔徑為30000－100000目的生物膜對(duì)菌液進(jìn)行分離過(guò)濾以得到活菌代謝物中組份量最大的有效抗菌物。本發(fā)明的生物膜提取法可使制劑中有效殺菌物成份顯著提高，提取成本低，可以象一般農(nóng)藥一樣方便使用，還兼有生物農(nóng)藥和化學(xué)農(nóng)藥的使用優(yōu)點(diǎn)。由于富含生化產(chǎn)物，可以直接作用于防治對(duì)象，根部和葉面能一樣使用，其作用效果快于活菌，使用中受環(huán)境影響小，防治效果穩(wěn)定，有利提高經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)A01N63/04GK1444855SQ02111070
公開(kāi)日2003年10月1日 申請(qǐng)日期2002年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月15日
發(fā)明者林國(guó)憲 申請(qǐng)人:福建泰禾生化科技股份有限公司