專利名稱：N－?；分脖Ｋ匮苌锏目咕钚?、誘導(dǎo)、分離與合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具抗菌活性植保素的誘導(dǎo)與分離，植保素衍生物的合成方法，以及作為高效殺菌劑的應(yīng)用，屬于農(nóng)藥和醫(yī)藥的技術(shù)領(lǐng)域。
水稻是主要的糧食作物，長期以來，稻瘟病是水稻生產(chǎn)的嚴(yán)重障礙之一。為了控制稻瘟病的危害，人們對水稻抗稻瘟病的機(jī)理進(jìn)行了深入的研究。迄今已從水稻中分離了10余種植保素，結(jié)構(gòu)上分為二萜、黃酮和氧化脂肪酸類。從水稻中提取和分離N-?；奉愔脖Ｋ?N-acyltryptamine)尚未見報道。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)N-酰基色胺類化合物具有多種生理活性，可作為抗焦慮劑、鎮(zhèn)靜劑和安眠藥劑用于臨床(Chemical Abstract，1997，123350261)；還可作為內(nèi)分泌藥物、免疫系統(tǒng)藥物、眼科疾病藥物和動物飼料添加物等(United StatesPatent，1995，5403851)。但目前尚未見N-?；奉惢衔镒鳛檗r(nóng)用和醫(yī)用抗菌劑的報道。
發(fā)明目的為了保護(hù)環(huán)境，保護(hù)人類及農(nóng)業(yè)的持續(xù)發(fā)展，急需進(jìn)行高效、低毒、低殘留的環(huán)保型農(nóng)藥的研制。本發(fā)明的目的之一是提供N-?；奉愔脖Ｋ氐恼T導(dǎo)和提取的方法；另一個目的是提供植保素衍生物的合成方法；第三個目的是提供N-?；奉惢衔镒鳛楦咝Э咕鷦?yīng)用的例子。
從稻葉中分離純化得到兩種N-?；分脖Ｋ豊-苯甲?；?N-benzoyltryptamine)和N-肉桂?；?N-cinnamoyltryptamine)。以N-苯甲?；泛蚇-肉桂?；窞橄葘?dǎo)化合物，采用化學(xué)合成方法合成了另外25種N-?；坊衔?實施例3～實施例27)。水稻植保素N-苯甲?；泛蚇-肉桂?；芳捌溲苌锞哂酗@著的抗菌活性。
本發(fā)明涉及由通式[I]所示的N-酰基色胺衍生物，通式[I]如下 其中R1表示氫和在吲哚環(huán)上任意地被取代的基團(tuán)(如羥基、鹵素、烷氧基、硝基、芳基、氰基、烷硫基、氨基、雜環(huán)基)；R2表示氫和在芳環(huán)上任意地被取代的基團(tuán)(如羥基、鹵素、烷氧基、硝基、芳基、氰基、烷硫基、氨基、雜環(huán)基)；R3表示任意地被取代的基團(tuán){如-(CH＝CH)n-、-(CH2)n-、-(C≡C)n-}；R4表示任意地被取代的基團(tuán){如-(CH＝CH)n-、-(CH2)n-、-(C≡C)n-}。
本發(fā)明提供了水稻N-苯甲酰基色胺和N-肉桂?；分脖Ｋ匦纬傻恼T導(dǎo)方法、提取和分離方法、分析方法、合成方法和鑒定方法。
本發(fā)明涉及的水稻N-?；分脖Ｋ氐恼T導(dǎo)方法為，將稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)分生孢子懸浮液噴霧接種水稻苗，然后在100％相對濕度、避光一段時間后剪取接種葉片，備用，以便提取和分離植保素。
本發(fā)明專利涉及的水稻N-?；?色胺植保素的提取和分離方法為將稻葉脂溶性物質(zhì)通過植物化學(xué)分離方法(如硅膠柱層析、制備性薄層層析和高效液相色譜)，得到N-苯甲?；泛蚇-肉桂?；穬煞N植保素。
接種稻瘟病菌48小時的稻葉全脂抽提物的高效液相色譜(HPLC)見附圖1。在相同保留時間，稻瘟病菌接種葉提取物出現(xiàn)兩個強(qiáng)的吸收峰P1和P2。P1為N-苯甲?；?，P2為N-肉桂酰基色胺。
本發(fā)明提供了N-苯甲酰基色胺和N-肉桂?；穬煞N植保素的合成方法。取一定量色胺溶解于適當(dāng)體積的吡啶中，在冰水浴冷卻下滴加苯甲酰氯(用以制備N-苯甲?；?或者滴加肉桂酰氯(用以制備N-肉桂?；?，在冰水浴冷卻下攪拌一段時間(如1小時)，然后在室溫下攪拌一段時間(如3小時)，反應(yīng)混合物倒入冰水中，用適當(dāng)體積的氯仿分三次萃取，氯仿部分用水和稀鹽酸洗滌，直至吡啶被去除，氯仿部分用干燥劑(如無水硫酸鈉)干燥，真空濃縮即得反應(yīng)產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)式如下。反應(yīng)產(chǎn)物的氫譜(1H-NMR)和碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)如表2和表3所示，實施例-1為N-苯甲?；?，實施例-2為N-肉桂酰基色胺。 N-苯甲酰基色胺(實施例-1) N-肉桂?；?實施例-2)本發(fā)明基于合成系列N-?；坊衔?，通過抗植物病原菌(包括稻瘟菌、西瓜枯萎菌、黃瓜枯萎菌、棉花枯萎菌、小麥赤霉菌、棉立枯絲核菌、稻紋枯菌)和人體病原菌(包括白色念珠菌)活性的構(gòu)效關(guān)系研究，發(fā)現(xiàn)高活性物質(zhì)，作為新型的抗菌藥物。其化合物結(jié)構(gòu)設(shè)計的思路是，在吲哚環(huán)、苯甲酰基或肉桂?；姆辑h(huán)引入含氧、鹵素、羥基等具有與芳環(huán)形成p-π共軛的取代基，以提高化合物的抗菌活性。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明進(jìn)一步提供了如下技術(shù)方法。
方法A在反應(yīng)容器內(nèi)將色胺與過量三乙胺混和，加入適量的氯仿，在冰水浴中冷卻及攪拌下，滴加與三乙胺等摩爾數(shù)的酰氯溶液，在避光下反應(yīng)，讓反應(yīng)混和物自然升至室溫，攪拌過夜，加入適當(dāng)體積的水，將水層與氯仿層分離后，水層再用等量氯仿洗滌一次，合并氯仿層，依次用酸液(如10％鹽酸)、堿液(如2M氫氧化鈉溶液)及水洗滌，并用干燥劑(如無水硫酸鈉)干燥后，回收溶劑即得到酰化產(chǎn)物。
方法B在反應(yīng)容器內(nèi)將5-羥色胺鹽酸鹽與水及過量的堿水溶液(如2M氫氧化鈉)混和，加入適量的氯仿，在冰水浴冷卻及攪拌下，滴加與堿水溶液等摩爾數(shù)的酰氯溶液，在避光下反應(yīng)，讓反應(yīng)混和物自然升至室溫，攪拌過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，用適當(dāng)體積的氯仿分三次洗滌沉淀，然后將沉淀溶于乙酸乙酯，依次用酸液(如10％鹽酸)、堿液(如2M氫氧化鈉溶液)及水洗滌，并用干燥劑(如無水硫酸鈉)干燥后，回收溶劑即得到?；a(chǎn)物。
通過本發(fā)明的技術(shù)方法合成通式[I]的化合物具有抗菌活性。如N-苯甲?；?5-羥基色胺對稻瘟病菌菌株P(guān)131芽管生長半抑制濃度為0.15(μg/ml)，對稻瘟病菌菌株R1528芽管生長半抑制濃度為0.44(μg/ml)，其作用強(qiáng)度分別是先導(dǎo)物N-苯甲?；返?10倍(16.6μg/ml)及46倍(20.2μg/ml)。
用方法A及B合成N-酰基-色胺及N-?；?5-羥色胺衍生物的實施例如下。反應(yīng)產(chǎn)物、熔點(M.P.，℃)及收率(Yield，％)見表1。反應(yīng)產(chǎn)物的氫譜(1H-NMR)和碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)分別見表2和表3。
表1反應(yīng)產(chǎn)物N-?；返氖章屎腿埸c化合物 R1R2R3R4合成方法 收率(％) M.P.(℃)實施例-1 -- - -CH2-CH2-A - -實施例-2 -- -CH20＝CH21- -CH2-CH2-A 96.7135-136實施例-3 5-HO-- - -CH2-CH2-B 72.4195-197實施例-4 5-HO-o-Cl- - -CH2-CH2-B 91.262-64實施例-5 5-HO-p-Cl- - -CH2-CH2-B 91.2142-144實施例-6 5-HO-2，4-2Cl- - -CH2-CH2-B 79.3-實施例-7 5-HO-3，4-2Cl- - -CH2-CH2-B 80.0179-181實施例-8 5-HO-p-OCH320-- -CH2-CH2-B 89.1209-210實施例-9 5-HO-- -CH20＝CH21- -CH2-CH2-B 100.0 80-82實施例-105-HO-- -CH220- -CH2-CH2-B 91.8-實施例-ll-- -CH220- -CH2-CH2-A 94.2139-140實施例-12-o-Cl - -CH2-CH2-A 90.2-實施例-13-p-C1 - -CH2-CH2-A 92.2-實施例-14-2，4-2Cl- - -CH2-CH2-A 91.5-實施例-15-3，4-2Cl- - -CH2-CH2-A 91.5-實施例-16-p-F- - -CH2-CH2-A 77.8138-140實施例-17-o-F- - -CH2-CH2-A 78.9-實施例-185-HO-p-F- - -CH2-CH2-B 58.6172-173實施例-195-HO-o-F- - -CH2-CH2-B 58.0-實施例-20-2，4-2F- - -CH2-CH2-A 85.0-實施例-21-3，4-2F- - -CH2-CH2-A 94.179-81實施例-22-2，4，5-3F-- -CH2-CH2-A 58.3-實施例-235-HO-2，4-2F- - -CH2-CH2-B 93.9-實施例-245-HO-3，4-2F- - -CH2-CH2-B 61.8-實施例-255-HO-2，4，5-3F-- -CH2-CH2-B 68.6177-179實施例-265-HO-o-NH2-- -CH2-CH2-B 63.7-實施例-275-MeO- o-NH2-- -CH2-CH2-B 84.486-89
表2反應(yīng)產(chǎn)物N-?；返臍渥V數(shù)據(jù)*化合物1-H 5-O-H Arom-H 10-H 11-H 12-H 20-H21-HNH2CH3實施例-1 8.2s - 7.07- 3.10t3.80d6.20s- - - -7.64m 6.5Hz 6.5Hz實施例-2 11.64s - 7.24- 3.39t， 4.11q， 9.08s7.06s 7.10s - -8.16m 7.2Hz 6.8Hz實施例-3 11.55s 9.41t，7.19- 3.31t， 4.04q， 8.71s- - - -5.3Hz 8.44m 7.4Hz6.8Hz實施例-4 11.54s 9.19t，7.21- 3.399t， 4.09m8.71s- - -5.6Hz 8.14m 7.2Hz實施例-5 11.56s 9.30s 7.20- 3.30t， 4.01q， 8.71s- - - -8.29m 7.2Hz6.7Hz實施例-6 11.56s 9.32t，7.20- 3.31t， 4.01q， 8.71s- - - -5.5Hz 8.71m 7.0Hz7.0Hz實施例-7 11.52s 9.42t，7.22- 3.33t， 4.03q， 8.71s- - - -5.4Hz 8.41m 7.2Hz6.9Hz實施例-8 11.54s 9.06t，6.99- 3.32t， 4.06q， 8.71s- - - -5.8Hz 8.30m 7.4Hz6.8Hz實施例-9 11.53s 8.89t，7.20- 3.28t， 4.03q， 8.71s6.93d， 6.97d， - -5.6Hz 8.08m 7.2Hz6.8Hz 10.8Hz 10.4Hz實施例-10 11.40s 8.71s 7.17- 3.16t， 4.10m8.58s3.78m - - -7.66m 7.2Hz實施例-11 11.81s - 7.19- 3.19t， 4.07q， 8.71s3.77m - - -8.67m 7.2Hz7.1Hz實施例-12 7.91s- 6.92- 2.95t， 3.66q， 6.06s- - - -7.48m 7.0Hz7.0Hz實施例-13 8.13s- 7.10- 3.13t， 3.82q， 6.19s- - - -7.67m 7.0Hz7.0Hz實施例-14 8.13s- 7.10- 3.04t， 3.85q， 6.29s- - - -7.67m 6.3Hz6.3Hz實施例-15 8.13s- 7.10- 3.13t， 3.81q， 6.18s- - - -7.77m 6.3Hz6.3Hz實施例-16 11.85s - 7.15-8.30m 3.37t， 4.05q， 8.73s- - - -7.2Hz6.4Hz實施例-17 11.85s - 7.21-8.82m 3.36t， 4.07q， 8.71s- - - -7.2Hz6.4Hz實施例-18 11.56s 9.23d，7.11-8.25m 3.30t， 4.01q， 8.69s- - - -5.2Hz 7.2Hz6.8Hz實施例-19 11.60s 8.82d 7.083.33t， 4.07q， 8.71s- - - -5.2Hz 8.13m 7.2Hz6.8Hz實施例-20 -- - --8.71s- - - -實施例-21 11.86s - 7.19-8 54m 3.34t， 4.10q， 8.71s- - - -7.2Hz6.4Hz實施例-22 11.88s - 7.18-8.83m 3.35t， 4.04q， 8.71s- - - -5.8Hz5.2Hz實施例-23 12.09s 8.86d 6.95-8.25m 33.3t， 4.02q， 8.71s- - - -5.2Hz 7.2Hz6.7Hz實施例-24 11.58s 9.39d 7.00-8.54m 3.31t， 4.00q， 8.71s- - - -6.0Hz 7.2Hz6.8Hz實施例-25 11.64s 8.87d 7.17-8.01m 3.31t， 4.00m8.71s- - - -5.2Hz 7.2Hz實施例-26 11.59s 9.00t 6.82-8.39m 3.38m4.00m8.70s- - 6.61m -5.4Hz實施例-27 11.69s - 7.01-8.11m 3.33t， 4.02q， 8.71s- - 6.62q，3.78s7.2Hz6.4Hz 7.2Hz*化學(xué)位移值(δ)單位為ppm
表3反應(yīng)產(chǎn)物N-?；返奶甲V數(shù)據(jù)*C- 實施例-1 實施例-2 實施例-3 實施例-4 實施例-5 實施例-6 實施例-7 實施例-8 實施例-92122.07d123.2d124.0d124.0d124.1d124.1d124.0d124.1d124.2d3113.05s113.4s112.6s113.0s112.7s112.7s112.5s112.7s112.5s4118.75d119.5d112.9d113.1d113.0d113.0d113.0d112.7d113.0d5119.37d119.4d152.3s152.4s152.4s152.3s152.4s152.3s152.3s6122.29d122.1d104.1d104.2d104.1d104.0d104.1d104.7d104.7d7111.27d112.3d112.6d112.4d112.5d112.7d112.8d112.7d112.7d8136.44s137.9s132.5s132.6s132.6s132.4s132.6s132.6s132.6s9127.32s128.7s129.6s129.7s129.7s129.6s129.7s129.6s129.6s10 25.29t 26.5t 26.6t 26.6t 26.5t 26.3t 26.4t 26.7t 26.6t11 40.22t 41.3t 41.5t 41.5t 41.6t 41.7t 41.7t 41.5t 41.0t13 167.44s166.8s167.8s168.0s166.8s165.5s165.8s167.4s166.4s14 134.69s140.2s136.4s136.4s132.6s135.8s135.6s128.6s139.9s15 126.81d128.7d130.3d138.4s134.7s136.9s131.0s132.6s128.6d16 128.48d124.0d128.7d129.7d129.0d130.8d129.7s114.1d124.2d17 131.30d129.8d132.8d133.5d137.0s136.9s135.1s162.4s129.7d18 128.48d123.8d127.9d124.5d128.9d134.3d136.3d112.9d124.2d19 126.81d128.3d131.2d132.6d132.6d135.4d132.6d132.6d128.1d20 - 112.3d- - - - -55.4q** 113.0d21 - 136.1d- - - - - 136.0d*化學(xué)位移值(δ)單位為ppm；^-CH2- be assigned.**-O-CH3be assigned續(xù)表3反應(yīng)產(chǎn)物N-酰基色胺的碳譜數(shù)據(jù)*C- 實施例-10 實施例實施例-12 實施例-13 實施例-14 實施例-15 實施例-16 實施例-17 實施例-18-112124.1d123.3d122.2d122.1d122.2d122.1d123.8d123.8d123.9d3112.4s113.2s112.8s113.0s112.7s112.9s113.3s113.1s113.0s4113.0d119.2d118.7d118.7d118.7d118.6d119.2d119.3d104.1d5152.4s119.2d119.5d119.6d119.6d119.7d121.9d121.9d152.4d6104.1d121.8d122.3d122.4d122.3d122.4d119.2d119.3d104.1d7112.8d112.0d112.2d111.3d111.3d111.4d112.0d112.1d112.6d8132.6s137.7s130.6s133.0s133.5s133.0s137.7d137.8d132.6d9129.6s128.5s127.2s127.3s127.2s127.3s132.6s134.3s130.5s10 26.5t 26.2t 25.2t 25.2t 25.1t 25.1t 26.3t 26.2t 26.6t11 41.6t 41.4t 40.2t 40.4t 40.3t 40.6t 41.6t 41.4t 41.7t13 171.4s171.0s166.5s166.3s165.4s165.2s166.7s164.3s166.9s14 135.3s135.3s135.2s136.4s136.4s136.4s128.6s128.5s129.7s15 129.6d129.8d136.4s128.7d131.4s126.0d130.3d161.8s130.5d16 129.0d128.9d127.0d128.3d127.4d134.5s115.4d116.2d115.5d17 127.1d127.3d131.1d137.5s136.6s135.7s166.0s132.9d166.1s18 129.0d128.8d130.2d128.3d130.0d129.1d115.6d124.8d115.7d19 129.1d128.9d130.0d128.7d131.2d130.5d130.4d131.5d130.5d20 61.0t^60.8d^- - - - - - -21-- - - - - - - -*化學(xué)位移值(δ)單位為ppm；^-CH2- be assigned.
續(xù)表3反應(yīng)產(chǎn)物N-酰基色胺的碳譜數(shù)據(jù)*C- 實施例-19 實施例-20 實施例-21 實施例-22 實施例-23 實施例-24 實施例-25 實施例-26 實施例-272 124.1d123.5d123.6d123.8d123.8d124.0d124.1d124.1d124.1d3 112.2s112.8s113.0s112.9s113.6s112.4s112.1s112.4s113.3s4 104.1d119.0d120.0d119.3d106.1d104.0d104.0d104.4d101.3d5 152.3s121.7d121.7d122.0d150.2s152.3s152.4s152.4s154.5s6 104.1d119.0d120.1d119.2d105.9d104.0d104.0d104.1d101.3d7 112.6d111.7d111.8d112.2d112.5d112.6d112.6d112.7d112.4d8 132.7s137.5s137.5s137.8s133.2s133.5s132.5s132.6s132.9s9 131.5s134.5s133.3s128.5s128.8s129.6s129.5s129.6s129.0s1026.4t 25.9t 26.0t 26.1t 26.0t 26.3t 26.1t 26.7t 26.5t1141.3t 41.2t 41.5t 41.6t 41.5t 41.7t 41.5t 41.1t 41.2t13164.3s165.4s165.3s165.5s167.5s166.6s162.2s163.7s170.4s14129.5s120.6s133.3s120.6s121.0s133.4s119.4s117.3s116.9s15161.8s163.1s125.6s162.3s163.5s124.7d162.2s128.8d128.7d16116.4d104.5d118.5d106.6d104.6d117.5d106.6d116.8d117.2d17132.6d165.3s153.2s150.1s165.6s152.3s150.1s132.2d132.2d18124 8d111.8d148.8d137.8d111.9d149.1s135.8s115.8d115.6d19131.5d132.9d118.3d119.3d133.1d117.4d119.2d152.4s150.8s20- - - - - - - - -21- - - - - - - - -CH3O - - - - - - - - 55.8q*化學(xué)位移值(δ)單位為ppm；^-CH2- be assigned.


圖1為接種稻瘟病菌48小時的稻葉全脂抽提物和模擬接種稻葉全脂抽提物的高效液相色譜(HPLC)圖，圖1A為模擬接種稻葉全脂抽提物的HPLC圖，圖1B為稻瘟病菌接種稻葉全脂抽提物的HPLC圖。采用的層析柱為C18反相液相色譜柱；流動相為甲醇∶水＝52∶48(v/v)；流速1ml/min；吸收波長220nm。在相同提取條件和層析條件下，稻瘟病菌接種葉(圖1B)提取物出現(xiàn)兩個強(qiáng)的吸收峰P1和P2，保留時間分別(Retention time)為21.31min和28.42min；而模擬接種稻葉(圖1A)提取物在相同保留時間只出現(xiàn)非常小的吸收峰P1和P2。P1為N-苯甲?；罚琍2為N-肉桂?；贰?br> 實施例-1取0.6g色胺溶解于15ml的吡啶中，在冰水浴冷卻下滴加0.58g苯甲酰氯，在冰水浴冷卻下攪拌1小時，然后在室溫下攪拌3小時，反應(yīng)混合物倒入冰水中，用15ml的氯仿分三次萃取，氯仿部分用水和稀鹽酸洗滌，直至吡啶被去除，氯仿部分用無水硫酸鈉干燥，真空濃縮溶劑即得產(chǎn)物實施例-2，結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H16N2O，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-1結(jié)構(gòu)式實施例-2取0.6g色胺溶解于15ml的吡啶中，在冰水浴冷卻下滴加0.62g肉桂酰氯，在冰水浴冷卻下攪拌1小時，然后在室溫下攪拌3小時，反應(yīng)混合物倒入冰水中，用15ml的氯仿分三次萃取，氯仿部分用水和稀鹽酸洗滌，直至吡啶被去除，氯仿部分用無水硫酸鈉干燥，真空濃縮溶劑即得產(chǎn)物實施例-2，結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C19H18N2O，EIMS 290(M+，13)，159(C10H9NO+，8)，143(C9H8NO+，77)，131(C9H7O+，29)，130(C9H8N+，65)，117(C8H7N+，3)，115(C9H7+，4)，103(C9H6+，22)，91(C6H5CH2+，8)，77(C6H5+，17).IR(KBr)，cm-13311(NH)，263，2840(C-H)，1653(C＝O)，1607，1558(C＝C)，1457，1348，1379(C-H)，1219，1076，1060，1006(C-O)，978，819，744，686(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-2結(jié)構(gòu)式實施例-3在反應(yīng)容器內(nèi)將5-羥色胺鹽酸鹽(100mg，0.4702mM)與水(5ml)及過量150-200％的2M氫氧化鈉溶液混和，加入5ml氯仿，在冰水浴冷卻及攪拌下，滴加與氫氧化鈉等摩爾數(shù)的苯甲酰氯(溶于1ml氯仿)溶液，在避光下反應(yīng)，讓反應(yīng)混和物自然升至室溫，攪拌過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，用30ml氯仿分三次洗滌沉淀，然后將沉淀溶于乙酸乙酯，依次用10％鹽酸、2M氫氧化鈉溶液及水洗滌并用無水硫酸鈉干燥后，真空濃縮溶劑即得產(chǎn)物實施例-3，結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H16N2O2，EIMS 280(M+，12)，263(M+-OH，2)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，62)，130(C9H8N+，2)，117(C8H7N+，7)，105(C6H5CO+，28)，91(C6H5CH2+，7)，77(C6H5+，29).IR(KBr)，cm-13426，3294(OH，NH)，1701(C＝O)，1578，1538(C＝C)，1454，1376(C-H)，1186，1290，1066(C-O)，939，850，708，624(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-3結(jié)構(gòu)式實施例-4按合成實施例-3所述的方法合成實施例-4，但酰氯為2-氯苯甲酰氯。實施例-4結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H15ClN2O2，EIMS 314(M+，11)，297(M+-OH，0.2)，263(M+-Cl-OH，0.2)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，70)，130(C9H8N+，2)，117(C8H7N+，7)，105(C6H5CO+，4)，91(C6H5CH2+，7)，77(C6H5+，5).IR(KBr)，cm-13310(OH，NH)，1692(C＝O)，1593，1538(C＝C)，1471，1315(C-H)，1276，1187，1050(C-O)，933，746(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-4結(jié)構(gòu)式實施例-5按合成實施例-3所述的方法合成實施例-5，但酰氯為4-氯苯甲酰氯。實施例-5結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H15ClN2O2，EIMS 314(M+，11)，297(M+-OH，0.2)，263(M+-Cl-OH，0.2)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，70)，130(C9H8N+，2)，117(C8H7N+，7)，105(C6H5CO+，4)，91(C6H5CH2+，7)，77(C6H5+，5).IR(KBr)，cm-13412，3344(OH，NH)，1624(C＝O)，1567，1546(C＝C)，1486，1443(C-H)，1285，1184，1094(C-O)，937，844，754(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-5結(jié)構(gòu)式實施例-6按合成實施例-3所述的方法合成實施例-6，但酰氯為2，4-二氯苯甲酰氯。實施例-6結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H14Cl2N2O2，EIMS 349(M+，2)，348(M+-1，12)，331(M+-OH，1)，314(M+-Cl，0.5)，278(0.2)，190(M+-C10H9NO，2)，173(C6H2Cl2CO+，20)，174(C6H3Cl2CO+，12)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，91)，130(C9H8N+，3)，117(C8H7N+，10)，109(C5H5NO+，6)，105(C6H5CO+，5)，91(C6H5CH2+，11)，77(C6H5+，6).IR(KBr)，cm-13375(OH，NH)，1642(C＝O)，1588，1542(C＝C)，1460，1378(C-H)，1217，1190，1063(C-O)，938，801，762，624(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-6結(jié)構(gòu)式實施例-7按合成實施例-3所述的方法合成實施例-7，但酰氯為3，4-二氯苯甲酰氯。實施例-7結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H14Cl2N2O2，EIMS 349(M+，5)，348(M+-1，29)，331(M+-OH，1)，314(M+-Cl，3)，190(M+-C10H9NO，2)，173(C6H2Cl2CO+，42)，174(C6H3Cl2CO+，28)，159(C10H9NO+，99)，146(C9H8NO+，100)，130(C9H8N+，8)，117(C8H7N+，24)，109(C5H5NO+，6)，105(C6H5CO+，5)，91(C6H5CH2+，11)，77(C6H5+，6).IR(KBr)，cm-13333(OH，NH)，1640(C＝O)，1589，1542(C＝C)，1466，1375，1313(C-H)，1221，1183，1030(C-O)，936，839，754(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-7結(jié)構(gòu)式實施例-8按合成實施例-3所述的方法合成實施例-8，但酰氯為4-甲氧基苯甲酰氯。實施例-8結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C18H18N2O3，EIMS 310(M+，19)，293(M+-OH，0.2)，175(C10H11N2O+，2)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，77)，135(C8H7O2+，61)，130(C9H8N+，4)，117(C8H7N+，10)，109(C5H5NO+，2)，105(C6H5CO+，3)，91(C6H5CH2+，11)，77(C6H5+，25).IR(KBr)，cm-13411，3313(OH，NH)，2932，2849(CH3)，1615，1603(C＝O)，1543，1504(C＝C)，1485，1320(C-H)，1259，1180，1063，1024(C-O)，936，847，803，664(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-8結(jié)構(gòu)式實施例-9按合成實施例-3所述的方法合成實施例-9，但酰氯為肉桂酰氯。實施例-9結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C19H18N2O2，EIMS 306(M+，19)，175(C10H11N2O+，2)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，90)，131(C9H7O+，48)，117(C8H7N+，15)，109(C5H5NO+，2)，105(C6H5CO+，2)，103(C8H7+，46)，91(C6H5CH2+，16)，77(C6H5+，40).IR(KBr)，cm-13383(OH，NH)，1662(C＝O)，1611，1540(C＝C)，1454，1372(C-H)，1215，1187，1069(C-O)，965，937，833，766(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-9結(jié)構(gòu)式實施例-10按合成實施例-3所述的方法合成實施例-10，但酰氯為苯乙酰氯。實施例-10結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C18H18N2O2，EIMS 294(M+，24)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，77)，130(C9H8N+，6)，117(C8H7N+，11)，105(C6H5CO+，2)，91(C6H5CH2+，56)，77(C6H5+，5).IR(KBr)，cm-13335(OH，NH)，2727(C-H)，1703(C＝O)，1539，1496，1456(C＝C)，1342，1190，1031(C-H)，1285，1184，1094(C-O)，932，798，700，678(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。

實施例-15按合成實施例-11所述的方法合成實施例-15，但酰氯為3，4-二氯苯甲酰氯。實施例-15結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H14Cl2N2O，EIMS 332(M+，20)，173(C6H2Cl2CO+，19)，143(C9H8NO+，98)，130(C9H8N+，100)，117(C8H7N+，2)，105(C6H5CO+，0.5)，77(C6H5+，8).IR(KBr)，cm-13392，3285(NH)，1630(C＝O)，1589，1545(C＝C)，1462(C-H)，1348，1229，1132(C-O)，886，845，757，738(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-15結(jié)構(gòu)式實施例-16按合成實施例-11所述的方法合成實施例-16，但酰氯為4-氟苯甲酰氯。實施例-16結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H15FN2O，EIMS m/z283(M++1，12)，282(M+，41)，264(M++1-F，0.5)，155(C8H10FNO+，1)，143(C10H9N+，100)，130(C9H8N+，93)，123(C7H7FO+，55)，115(C8H5N+，13)，103(C6H3CO+，22)，95(C6H4F+，33)，77(C6H5+，26)。IR(KBr)cm-13391，3283(NH)，1628(C＝O)，2933，1564，1506(C＝C)，1454，1328(C-H)，1242，1162，1096(C-O)，855，741，669(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-16結(jié)構(gòu)式實施例-17按合成實施例-11所述的方法合成實施例-17，但酰氯為2-氟苯甲酰氯。實施例-17結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H15FN2O，EIMS m/z283(M++1，10)，282(M+，34)，264(M++1-F，0.5)，155(C8H10FNO+，2)，143(C10H9N+，100)，130(C9H8N+，89)，123(C7H7FO+，50)，115(C8H5N+，13)，103(C6H3CO+，22)，95(C6H4F+，42)，77(C6H5+，26)。IR(KBr)，cm-13276(NH)，1621(C＝O)，1565(C＝C)，1454，1333(C-H)，1221，1166，1105(C-O)，845，763，746(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-17結(jié)構(gòu)式實施例-18按合成實施例-3所述的方法合成實施例-18，但酰氯為4-氟苯甲酰氯。實施例-18結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H15FN2O2，EIMS m/z299(M++1，8)，298(M+，34)，281(M+-OH，2)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，90)，130(C9H8N+，2)，117(C8H7N+，20)，105(C6H5CO+，2)，91(C6H5CH2+，22)，77(C6H5+，7)。IR(KBr)，cm-13408，3324(OH，NH)，2929，1629(C＝O)，1584，1548(C＝C)，1500，1443，1370(C-H)，1287，1185，1160(C-O)，937，851，759(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-18結(jié)構(gòu)式實施例-19按合成實施例-3所述的方法合成實施例-19，但酰氯為2-氟苯甲酰氯。實施例-19結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H15FN2O2，EIMS m/z299(M++1，6)，298(M+，28)，281(M+-OH，2)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，91)，130(C9H8N+，7)，117(C8H7N+，22)，105(C6H5CO+，2)，91(C6H5CH2+，21)，77(C6H5+，7)。IR(KBr)，cm-13419，3311(OH，NH)，2927，2862，1641(C＝O)，1530(C＝C)，1479，1433(C-H)，1294，1218，1099(C-O)，937，839，755(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-19結(jié)構(gòu)式實施例-20按合成實施例-11所述的方法合成實施例-20，但酰氯為2，4-二氟苯甲酰氯。實施例-20結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H14F2N2O，EIMS m/z301(M++1，8)，300(M+，31)，155(C8H10FNO+，2)，143(C10H9N+，97)，130(C9H8N+，100)，115(C8H5N+，16)，113(C6H3F2+，36)，103(C6H3CO+，30)，91(C6H5CH2+，2)，77(C6H5+，26)。IR(KBr)，cm-13248(NH)，1654(C＝O)，1530(C＝C)，1488，1338(C-H)，1296，1262，1229，1091(C-O)，968，843，746(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-20結(jié)構(gòu)式實施例-21按合成實施例-11所述的方法合成實施例-21，但酰氯為3，4-二氟苯甲酰氯。實施例-21結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H14F2N2O，EIMS m/z301(M++1，3)，300(M+，15)，155(C8H10FNO+，2)，143(C10H9N+，100)，130(C9H8N+，95)，115(C8H5N+，5)，113(C6H3F2+，29)，103(C6H3CO+，10)，91(C6H5CH2+，2)，77(C6H5+，14)。IR(KBr)cm-13347(NH)，3067，1636(C＝O)，1547，1513(C＝C)，1447，1322(C-H)，1284，1204，1109(C-O)，934，736(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-21結(jié)構(gòu)式實施例-22按合成實施例-11所述的方法合成實施例-22，但酰氯為2，4，5-三氟苯甲酰氯。實施例-22結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H13F3N2O，EIMS m/z319(M++1，5)，318(M+，23)，190(C8H5F3NO+，5)，176(C7H5F3NO+，28)，159(C7H2F3O+，100)，143(C10H9N+，61)，131(C6H2F3+，47)，130(C9H8N+，68)，115(C8H5N+，4)，113(C6H2F2+，5)，103(C6H3CO+，6)，91(C6H5CH2+，2)，77(C6H5+，11)。IR(KBr)cm-13267(NH)，3064，1662(C＝O)，1611，1540(C＝C)，1425，1342(C-H)，1196，1141，1069(C-O)，901，862，839，791，751(＝CH)，607。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-22結(jié)構(gòu)式實施例-23按合成實施例-3所述的方法合成實施例-23，但酰氯為2，4-二氟苯甲酰氯。實施例-23結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H14F2N2O2，EIMS m/z316(M+，2)，299(C17H13F2N2O，70)，286(45)，159(C10H9NO+，8)，146(C9H8NO+，13)，141(C7H3F2O+，100)，130(C9H8N+，6)，113(C6H3F2+，24)，105(C6H5CO+，2)，91(C6H5CH2+，3)，77(C6H5+，2)。IR(KBr)cm-13396，3293(OH，NH)，3065(C-H)，1654(C＝O)，1540，1493，1432(C＝C)，1266(C-H)，1184，1113(C-O)，970，855，762(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-23結(jié)構(gòu)式實施例-24按合成實施例-3所述的方法合成實施例-24，但酰氯為3，4-二氟苯甲酰氯。實施例-24結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H14F2N2O2，EIMS m/z316(M+，60)，299(C17H13F2N2O，17)，286(10)，160(C10H10NO+，35)，159(C10H9NO+，100)，146(C9H8NO+，100)，141(C7H3F2O+，65)，130(C9H8N+，6)，117(C8H7N+，17)，113(C6H3F2+，50)，105(C6H5CO+，2)，91(C6H5CH2+，16)，77(C6H5+，5)。IR(KBr)，cm-1IR(KBr)cm-13405，3162(OH，NH)，2952，2882(C-H)，1643(C＝O)，1550，1503，1468(C＝C)，1294(C-H)，1202，1105，1070(C-O)，932，852，776(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-24結(jié)構(gòu)式實施例-25按合成實施例-3所述的方法合成實施例-25，但酰氯為2，4，5-三氟苯甲酰氯。實施例-25結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H13F3N2O2，EIMS m/z334(M+，8)，298(C17H12F2N2O，1)，176(C7H5F3NO+，5)，160(C10H10NO+，8)，159(C10H9NO+，75)，146(C9H8NO+，48)，141(C7H3F2O+，4)，13(C9H9N+，15)，117(C8H7N+，5)，113(C6H3F2+，2)，105(C6H5CO+，5)，91(C6H5CH2+，16)，77(C6H5+，5)。
IR(KBr)cm-13316(OH，NH)，1651(C＝O)，1542，1426(C＝C)，1327，1276，1192(C-H)，1141，1103，1044(C-O)，931，845，798(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-25結(jié)構(gòu)式實施例-26按合成實施例-3所述的方法合成實施例-26，但酰氯為2-氨基苯甲酰氯。實施例-26結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C17H17N3O2，EIMS m/z296(M++1，10)，295(M+，40)，163(C9H11N2O+，9)，159(C10H9NO+，8)，146(C9H8NO+，100)，130(C9H8N+，11)，105(C6H5CO+，5)，92(C6H6N，65)，77(C6H5+，14)。IR(KBr)cm-13369(OH，NH)，2918，1625(C＝O)，1579，1542(C＝C)，1485，1366(C-H)，1283，1159，1095(C-O)，935，755(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-26結(jié)構(gòu)式實施例-27在反應(yīng)容器內(nèi)將5-甲氧基色胺鹽酸鹽(100mg，0.4702mM)與水(5ml)及過量150～200％的2M氫氧化鈉溶液混和，加入5ml氯仿，在冰水浴冷卻及攪拌下，滴加與氫氧化鈉等摩爾數(shù)的2-氨基苯甲酰氯(溶于1ml氯仿)溶液，在避光下反應(yīng)，讓反應(yīng)混和物自然升至室溫，攪拌過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，用30ml氯仿分三次洗滌沉淀，然后將沉淀溶于乙酸乙酯，依次用10％鹽酸、2M氫氧化鈉溶液及水洗滌并用無水硫酸鈉干燥后，真空濃縮溶劑即得產(chǎn)物實施例-27，結(jié)構(gòu)式如下，分子式為C18H19N3O2，EIMS m/z309(M+，5)，163(C9H11N2O+，55)，146(C9H8NO+，7)，137(C7H7N2+O，15)，105(C6H5CO+，1)，92(C6H6N，92)，77(C6H5+，5)。IR(KBr)cm-13358(NH)，2990，2930，1629(C＝O)，1582，1536，1485(C＝C)，1325，1260，1214(C-H)，1157，1034，1016(C-O)，922，825，807，755(＝CH)。收率和熔點數(shù)據(jù)見表1，氫譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)見表2，碳譜(13C-NMR)數(shù)據(jù)見表3。 實施例-27結(jié)構(gòu)式實施例-28本發(fā)明合成的化合物對植物病原真菌菌絲生長抑制作用的研究實例1、菌種棉花枯萎菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)、棉花黃萎菌(Verticillium dahliae)、西瓜枯萎菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、黃瓜枯萎菌(Fuusarium oxysporum f.sp.cucumerimum)、稻紋枯菌(Rhizoctonia solani fromrice)、棉花立枯絲核菌(Rhizoctonia solani from cotton)、小麥赤霉菌(Fusariumgraminearum)。
2、培養(yǎng)基①PDA(Potato Dextrose Agar)培養(yǎng)基用于所試真菌的繼代培養(yǎng)和菌種保存。每升培養(yǎng)基含200g土豆煮沸濾液(具體操作為取土豆200g，去皮，切成小塊或小片，沸水中煮30min，四層紗布過濾)、葡萄糖20g、瓊脂20g，調(diào)pH值至5.5，121℃濕熱滅菌15min。
②查氏(Czapek-Dox)培養(yǎng)基用于棉花黃萎病菌、棉花立枯絲核菌、稻紋枯菌的繼代培養(yǎng)和菌種保存。每升培養(yǎng)基含KCl 0.5g、KH2PO41g、MgSO4·7H2O 0.5g(與其它成分分開滅菌)、NaNO32g、FeSO4·7H2O 10mg、蔗糖30g，瓊脂20g(液體培養(yǎng)基則不加瓊脂)，調(diào)pH值至6.0，121℃濕熱滅菌15min。
③Armstrong鐮刀菌培養(yǎng)基用于鐮刀菌屬(Fusarium)真菌的液體培養(yǎng)(包括搖床懸浮培養(yǎng)和微孔板培養(yǎng))。每升培養(yǎng)基含KCl 1.6g、KH2PO41.1g、MgSO4·7H2O 0.4g(與其它成分分開滅菌)、Ca(NO3)2·4H2O 8.49g、MnSO4·H2O0.2μg、FeCl3·6H2O 0.2μg、ZnSO4·7H2O 0.2μg、葡萄糖20g，調(diào)pH值至4.5，121℃濕熱滅菌15min。
3、化合物濃度配制取1mg樣品，用無水乙醇完全溶解，并定容至1ml，制成1000μg/ml的母液，-20℃保存。實驗前臨時將化合物母液稀釋成不同濃度，并使溶液的乙醇濃度固定為10％。
4、真菌液體懸浮培養(yǎng)在容積為50ml的無菌三角瓶中加入已滅菌的液體培養(yǎng)基20ml。挑取生長于固體培養(yǎng)基上真菌菌落邊緣的少許菌絲于20ml培養(yǎng)液中，在搖床上懸浮培養(yǎng)(175±5rpm)，25℃，暗，每培養(yǎng)48-72小時(不同菌種培養(yǎng)時間不同)，更換培養(yǎng)液1次(即取含菌培養(yǎng)液200μl于20ml新鮮培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng))。
5、用于抗菌活性測定菌液的準(zhǔn)備取培養(yǎng)48-72小時的菌懸液，用鑷子將菌絲團(tuán)搗碎，單層紗布過濾，加入2倍濃度的新鮮培養(yǎng)液將短菌絲稀釋成一定濃度，用于抗菌活性測定。
6、具體操作取含96孔的微孔板，每孔加入不同濃度的化合物溶液50μl，每個濃度重復(fù)5孔，每孔加入已制備好的菌液50μl，在搖床上混均后，于655nm波長處測定各孔的光吸收值，然后避光培養(yǎng)，48小時或更長一段時間后重復(fù)測定各孔的光吸收值。
7、抑制率和生長半抑制率(IC50)的計算采用3倍標(biāo)準(zhǔn)差檢驗法剔除異常數(shù)據(jù)。對照光吸收值變化的平均值(ΔC)與化合物在某一濃度光吸收值變化的平均值(ΔT)之差除以對照光吸收值變化的平均值(ΔC)，再乘以100％，即為化合物在某一濃度時的抑制率。
8、對植物病原真菌菌絲生長抑制作用的測定(表4)表4化合物對植物病原真菌菌絲生長的抑制作用菌絲生長半抑制濃度(IC50，μg/ml)化合物西瓜枯萎菌黃瓜枯萎菌棉花枯萎菌 小麥赤霉菌棉立枯絲核菌 稻紋枯菌實施例-10.26 1.00 1.05 - - -實施例-22.21 0.11 1.10 - - -實施例-12 0.46 8.20 0.44 - - -實施例-13 0.30 - 0.83 3.5 19.20 -實施例-14 0.76 15.30 0.22 0.60 - -實施例-15 0.70 8.50 0.90 0.49 - 0.86
實施例-29本發(fā)明合成的化合物對稻瘟病菌孢子萌發(fā)抑制作用的研究實例1、菌種稻瘟病菌P131及S1528(Magnaporthe grisea P131 and S1528)。
2、培養(yǎng)基燕麥西紅柿培養(yǎng)基(Oat tomato Agar)用于稻瘟病菌的培養(yǎng)。每升培養(yǎng)基中含番茄汁150ml(取番茄250g，用榨汁機(jī)榨汁，然后用雙層紗布過濾)，燕麥汁750ml(30g燕麥片，加水1000ml，煮沸15min，然后用雙層紗布過濾)，瓊脂20g，121℃濕熱滅菌15min。
3、化合物濃度配制取1mg樣品，用無水乙醇完全溶解，并定容至1ml，制成1000μg/ml的母液，-20℃保存。實驗前將化合物母液稀釋成不同的濃度，并使溶液的乙醇濃度固定為20％。
4、稻瘟病菌的培養(yǎng)和孢子懸液的制備1)涂菌用700μl無菌水將稻瘟病菌的菌絲洗下，移至培養(yǎng)基上，涂布均勻，自然涼干(約30分鐘)，25 ℃下光照培養(yǎng)；2)洗氣生菌絲待長出氣生菌絲后(一般2天)，加入1ml無菌水，用滅菌的棉球輕輕打斷氣生菌絲，倒置涼干，覆蓋滅菌紗布，25℃光照培養(yǎng)；3)孢子懸浮液的制備長出灰色孢子后(一般1天)，用無菌水洗下孢子，用四層紗布過濾，2640g(轉(zhuǎn)速5000rpm)離心15分鐘，去掉上清液，孢子用無菌水制成孢子懸液，然后用四層紗布過濾，用Neubauer血球計數(shù)板計數(shù)，然后將孢子懸液稀釋到1×106個ml。
5、具體操作取化合物溶液30μl，孢子懸液30μl，于eppendorf管中混均，取10μl于載波片上，形成水滴，于相對濕度100％、25℃避光培養(yǎng)16小時，然后于顯微鏡下觀測孢子萌發(fā)和芽管生長狀況。在低倍鏡下，隨機(jī)檢查100～200個孢子，孢子有芽管的均算發(fā)芽，沒有的為不發(fā)芽。
先求出各濃度的孢子萌發(fā)抑制率和芽管生長抑制率，然后采用插值公式求出化合物半抑制濃度(IC50)。孢子萌發(fā)抑制率和芽管生長抑制率計算公式如下
6、對稻瘟病菌孢子萌發(fā)抑制作用的測定(表5)。
表5化合物對稻瘟病菌菌株P(guān)131和S1528的抑制作用

/表示尚未進(jìn)行抗菌活性測定。
實施例-30本發(fā)明合成的化合物抗白色念珠菌活性的研究實例1、菌種白色念珠菌(Candida albicans Berkh ATCC10231)。
2、白色念珠菌培養(yǎng)基用于白色念珠菌的平板培養(yǎng)和液體培養(yǎng)。每升培養(yǎng)基含KH2PO40.5g、MgSO4·7H2O 0.5g(與其它成分分開滅菌)、CaCl2·2H2O 0.3g、(NH4)2SO42g、KI0.1g、天門冬酰胺(L-天冬素)2g、葡萄糖20g、微量元素(B，Mn，Zn，Cu，Mo，F(xiàn)e)少量(具體配法為從含MnCl2·4H2O 450.7mg、(NH4)6Mo7O24·4H2O 23mg、H3BO3282.2mg、ZnSO4·7H2O 11mg、CuSO4·5H2O 9.8mg、FeC6H5O7·5H2O 2.998g的500ml母液中取1ml)、D-生物素(維生素H)2mg、瓊脂20g(液體培養(yǎng)基則不加)，調(diào)pH值至5.5，121℃濕熱滅菌15min。
3、白色念珠菌液體懸浮培養(yǎng)在容積為50ml的無菌三角瓶中加入已滅菌的液體培養(yǎng)基20ml。挑取生長于固體培養(yǎng)基上真菌菌落邊緣的少許菌絲于20ml培養(yǎng)液中，在搖床上懸浮培養(yǎng)(175±5rpm)，25℃，暗，每培養(yǎng)48-72小時，更換培養(yǎng)液1次(即取含菌培養(yǎng)液200μl于20ml新鮮培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng))。
4、化合物濃度配制取1mg樣品，用無水乙醇完全溶解，并定容至1ml，制成1000μg/ml的母液，-20℃保存。實驗前臨時將化合物母液稀釋成不同濃度，并使溶液的乙醇濃度固定為10％。
5、具體操作取含96孔的微孔板，每孔加入不同濃度的化合物溶液50μl，每個濃度重復(fù)5孔，每孔加入已制備好的菌液50μl，在搖床上混均后，于655nm波長處測定各孔的光吸收值，然后避光培養(yǎng)，48小時或更長一段時間后重復(fù)測定各孔的光吸收值。
6、抑制率和生長半抑制率(IC50)的計算采用3倍標(biāo)準(zhǔn)差檢驗法剔除異常數(shù)據(jù)。對照光吸收值變化的平均值(ΔC)與化合物在某一濃度光吸收值變化的平均值(ΔT)之差除以對照光吸收值變化的平均值(ΔC)，再乘以100％，即為化合物在某一濃度時的抑制率。
7、對白色念珠菌生長的抑制作用的測定在所試驗的化合物中，有6個化合物在所試濃度下對白色念珠菌的生長表現(xiàn)抑制作用(結(jié)果如表6所示)。
表6化合物對白色念珠菌的抑制作用化合物 IC50(μg/ml) 化合物 IC50(μg/ml)實施例-16.15實施例-1714.56實施例-28.31實施例-2110.59實施例-516.46 實施例-2219.89實施例-614.38 實施例-2312.45實施例-10 63.15 實施例-2510.14實施例-14 8.74實施例-2412.69實施例-15 11.98 實施例-265.08實施例-16 12.95 實施例-273.80
實施例-31本發(fā)明合成的部分化合物對棉花枯萎病的防治效果研究實例1、菌種棉花枯萎菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)2、培養(yǎng)基1)PDA(Potato Dextrose Agar)培養(yǎng)基用于所試真菌的繼代培養(yǎng)和菌種保存。每升培養(yǎng)基含200g土豆煮沸濾液(具體操作為取土豆200g，去皮，切成小塊或小片，沸水中煮30min，四層紗布過濾)、葡萄糖20g、瓊脂20g，調(diào)pH值至5.5，121℃濕熱滅菌15min。2)麥粒沙培養(yǎng)基取麥粒于燒杯中，加水煮沸30min，然后與已過篩并洗凈的細(xì)沙以1∶2的體積比混勻，121℃濕熱滅菌60min。
3、接種體的制備自新培養(yǎng)的棉花枯萎菌的菌落邊緣切取含菌絲的瓊脂塊，接種于裝有麥粒砂培養(yǎng)基的三角瓶中，充分混勻，25℃下培養(yǎng)10天左右，每天注意搖勻，用于病土的制備。
4、種子播種前預(yù)處理棉花種子于100±5℃濃硫酸中脫絨(500顆種子約需10ml濃硫酸)，然后用自來水沖洗至中性，除去秕粒，晾干。催芽前，將種子于58℃溫水浸泡30min，然后置于濕紗布上，37℃恒溫箱中催芽(一般為24h)。
5、化合物的準(zhǔn)備配制濃度為20μg/g。按每種處理裝土500g計算(即每缽裝土125g，共4小缽)，稱取化合物10mg，先用3ml乙醇溶解，加入5g石英砂，拌勻，待乙醇揮發(fā)后備用。
6、病土的制備稱取已滅菌的栽培土于盆中，按一定比例加入含有棉花枯萎菌的麥粒沙(栽培土∶麥粒沙＝10∶1，w/w；或栽培土∶烘干的麥粒沙＝15∶1，w/w)，混勻。稱取500g病土，加入含化合物的石英砂，使化合物的濃度為20ug/g。另取含菌但不含化合物、含化合物但不含菌、以及菌和化合物都不含的土作為對照。
7、播種將催好芽的種子播入杯中，每杯播5顆種子，用無菌水從杯底部浸濕，然后放于生長室中培養(yǎng)，22℃，待棉苗出土后第3周和第7周，觀察結(jié)果，本研究的棉花枯萎病癥狀主要表現(xiàn)為青枯型，同時病株表現(xiàn)為矮小。如果青枯干死，即被認(rèn)為枯萎。防治效果的表示方法為
8、棉花枯萎病的防治效果測定(表7)選用化合物實施例-7、實施例-14和實施例-15，采用盆栽試驗法測定化合物對棉花枯萎病的防治效果?；衔镌谕寥乐械臐舛葹?0mg/kg，結(jié)果見表7。實施例-7、實施例-14和實施例-15對棉花枯萎病均有一定的防治效果，其中實施例-14和實施例-15的防病效果要優(yōu)于實施例-7。
表7化合物對棉花枯萎病的防治效果

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權(quán)利要求
1.通式[I]所示的N-?；坊衔?N-acyltryptamines)，通式[I]為 其中R1表示氫和在吲哚環(huán)上任意地被取代的基團(tuán)(如羥基、鹵素、烷氧基、硝基、芳基、氰基、烷硫基、氨基、雜環(huán)基)；R2表示氫和在芳環(huán)上任意地被取代的基團(tuán)(如羥基、鹵素、烷氧基、硝基、芳基、氰基、烷硫基、氨基、雜環(huán)基)；R3表示任意地被取代的基團(tuán){如-(CH＝CH)n-、-(CH2)n-、-(C≡C)n-}；R4表示任意地被取代的基團(tuán){如-(CH＝CH)n-、-(CH2)n-、-(C≡C)n-}。
2.將稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)分生孢子懸浮液噴霧接種水稻苗，然后在100％相對濕度、避光一段時間后剪取接種葉片，將稻葉脂溶性物質(zhì)通過植物化學(xué)分離方法(如硅膠柱層析、制備性薄層層析和高效液相色譜)，分離純化到權(quán)利要求1所述的N-?；坊衔颪-苯甲?；?N-benzoyltryptamine)和N-肉桂?；?N-cinnamoyltryptamine)兩種植保素，通過波譜解析，進(jìn)行了結(jié)構(gòu)測定，其結(jié)構(gòu)式如下 N-苯甲?；?N-肉桂?；?br> 3.取一定量色胺溶解于適當(dāng)體積的吡啶中，在冰水浴冷卻下滴加苯甲酰氯，在冰水浴冷卻下攪拌一段時間(如1小時)，然后在室溫下攪拌一段時間(如3小時)，反應(yīng)混合物倒入冰水中，用適當(dāng)體積的氯仿分三次萃取，氯仿部分用水和稀鹽酸洗滌，直至吡啶被去除，氯仿部分用干燥劑(如無水硫酸鈉)干燥，真空濃縮即得N-苯甲?；?。
4.取一定量色胺溶解于適當(dāng)體積的吡啶中，在冰水浴冷卻下滴加肉桂酰氯，在冰水浴冷卻下攪拌一段時間(如1小時)，然后在室溫下攪拌一段時間(如3小時)，反應(yīng)混合物倒入冰水中，用適當(dāng)體積的氯仿分三次萃取，氯仿部分用水和稀鹽酸洗滌，直至吡啶被去除，氯仿部分用干燥劑(如無水硫酸鈉)干燥，真空濃縮即得N-肉桂酰基色胺。
5.在反應(yīng)容器內(nèi)將色胺與過量三乙胺混和，加入適量的氯仿，在冰水浴中冷卻及攪拌下，滴加與三乙胺等摩爾數(shù)的酰氯溶液，在避光下反應(yīng)，讓反應(yīng)混和物自然升至室溫，攪拌過夜，加入適當(dāng)體積的水，將水層與氯仿層分離后，水層再用等量氯仿洗滌一次，合并氯仿層，依次用酸液(如10％鹽酸)、堿液(如2M氫氧化鈉溶液)及水洗滌，并用干燥劑(如無水硫酸鈉)干燥后，回收溶劑即得到權(quán)利要求1中的5-位不含羥基的酰化產(chǎn)物。
6.在反應(yīng)容器內(nèi)將5-羥色胺鹽酸鹽與水及過量的堿水溶液(如2M氫氧化鈉)混和，加入適量的氯仿，在冰水浴冷卻及攪拌下，滴加與堿水溶液等摩爾數(shù)的酰氯溶液，在避光下反應(yīng)，讓反應(yīng)混和物自然升至室溫，攪拌過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，用適當(dāng)體積的氯仿分三次洗滌沉淀，然后將沉淀溶于乙酸乙酯，依次用酸液(如10％鹽酸)、堿液(如2M氫氧化鈉溶液)及水洗滌，并用干燥劑(如無水硫酸鈉)干燥后，回收溶劑即得到權(quán)利要求1中的5-位含羥基的?；a(chǎn)物。
7.權(quán)利要求1中的N-酰基色胺化合物通過抗植物病原菌(包括稻瘟菌、西瓜枯萎菌、黃瓜枯萎菌、棉花枯萎菌、小麥赤霉菌、棉立枯絲核菌、稻紋枯菌)活性的構(gòu)效關(guān)系研究，發(fā)現(xiàn)高活性物質(zhì)，作為新型的抗菌藥物，用于防治植物病害。
8.權(quán)利要求1中的N-?；坊衔锿ㄟ^抗人體病原菌(如白色念珠菌)活性的構(gòu)效關(guān)系研究，發(fā)現(xiàn)高活性物質(zhì)，作為新型的抗菌藥物，用于臨床。
全文摘要
N－?；分脖Ｋ匮苌锏目咕钚浴⒄T導(dǎo)、分離與合成。涉及兩種N－?；分脖Ｋ卣T導(dǎo)、分離和結(jié)構(gòu)測定。以這兩種?；分脖Ｋ貫橄葘?dǎo)化合物合成了25種衍生物,涉及式[I]化合物,其中:R
文檔編號A01N43/34GK1365971SQ02103940
公開日2002年8月28日 申請日期2002年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月19日
發(fā)明者彭友良, 郝小江, 范軍, 周立剛, 左國營, 王斌貴 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué), 中國科學(xué)院昆明植物研究所