專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種快速檢測(cè)西洋參人參及其制劑質(zhì)量真?zhèn)蔚姆椒?br>技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥材檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及中藥藥品、保健品的質(zhì)量檢測(cè)，特別是運(yùn)用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)西洋參與人參及其制劑進(jìn)行快速鑒別及定量測(cè)定的方法。
背景技術(shù)：
：西洋參(PanaxquinquefoliumL.)和人參(PanaxginsengC.A.Mey)同屬五加科植物。西洋參主產(chǎn)于北美洲，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，清熱生津等功效。我國(guó)東北地區(qū)也有引種，俗稱(chēng)為種洋參。人參屬多年生草本植物，主產(chǎn)于我國(guó)東北地區(qū)，具有大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津安神，開(kāi)心益智等功效。二者主要成分均為人參皂苷類(lèi)化合物，但藥效和價(jià)格相差較大。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，西洋參味甘、微苦，性涼，人參味甘、微苦，性平。西洋參具有提高免疫力，增強(qiáng)體質(zhì)的功效，可直接服用或制成各種制品，如膠囊、含片、茶包、沖劑和口服液等產(chǎn)品，可作為日常保健品，市場(chǎng)需求量大。目前全國(guó)生產(chǎn)西洋參含片的生產(chǎn)企業(yè)就有近萬(wàn)家。但由于進(jìn)口西洋參成本高，且產(chǎn)量有限，遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足生產(chǎn)需求，加之國(guó)內(nèi)人參價(jià)格相對(duì)低廉，且成分口感相近，不易區(qū)別，導(dǎo)致西洋參市場(chǎng)以次充好、假冒偽劣商品普遍存在，嚴(yán)重?fù)p害消費(fèi)者利益。而國(guó)內(nèi)外藥典現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)都不能對(duì)西洋參人參制劑進(jìn)行有效鑒別。亟待建立快速、有效的西洋參或人參及其制劑鑒別測(cè)定方法。己有研究成果表明，西洋參和人參所含成分的種類(lèi)相近，但各有其特征成分。西洋參的含特征成分?jǐn)M人參皂苷Fll，人參中僅含百萬(wàn)分之一；而人參中所含特征成分人參皂苷Rf，西洋參中不存在。但擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf屬同分異構(gòu)體，極性非常相似，分子量相同，一般難以分離，導(dǎo)致區(qū)分困難。已有的分析方法樣品處理復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間一般在60min以上，且分離效果不佳，不利于定量檢測(cè)及快速篩選。現(xiàn)行的2005版《中國(guó)藥典》對(duì)西洋參藥材的鑒別采用了薄層鑒別法，使用西洋參對(duì)照藥材、擬人參皂苷F11對(duì)照品、人參皂苷RM對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品、及人參皂苷Rgl對(duì)照品為對(duì)照，其中擬人參皂苷Fll是西洋參區(qū)別于人參的特征成分，但是該成分與人參中所含人參皂苷Rf是同分異構(gòu)體，用薄層層析難以區(qū)分，所以單用此法不足以鑒別西洋參。標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下也僅對(duì)人參皂苷Rgl、人參皂苷Re以及人參皂苷Rbl采用高效液相色譜法在檢測(cè)波長(zhǎng)203nm下進(jìn)行了測(cè)定，仍未涉及西洋參的特征成分。且供試品溶液的制備方法復(fù)雜，需用水飽和的正丁醇加熱回流1.5小時(shí)，放冷，補(bǔ)重后，蒸干，再用50%甲醇復(fù)溶，轉(zhuǎn)移，再稀釋定容。經(jīng)C18柱分離，以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫后，203nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度，單液相檢測(cè)時(shí)間就需100min以上，方法復(fù)雜耗時(shí)，且專(zhuān)屬性不強(qiáng)，仍然難以對(duì)西洋參進(jìn)行鑒別檢測(cè)。目前對(duì)擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf的快速分離測(cè)定方法尚未見(jiàn)報(bào)道。超高效液相色譜相比普通液相色譜，具有分析速度快，分離能力強(qiáng)，重復(fù)性好，樣品量小等特點(diǎn)，適合與對(duì)難分離組分進(jìn)行快速分離。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)實(shí)現(xiàn)了對(duì)沸點(diǎn)高、極性強(qiáng)、熱不穩(wěn)定化合物液相分離和定性定量檢測(cè)，靈敏度高、檢出限低、能夠提供化合物結(jié)構(gòu)信息和含量信息，達(dá)到對(duì)樣品同時(shí)進(jìn)行定性定量的目的，增強(qiáng)了選擇性，縮短分析時(shí)間。四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜的結(jié)合，更能夠鎖定目標(biāo)離子，進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜的解析，并具有高分辨率，提供高精確度的分子量。目前，液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用已發(fā)展成為一種重要的分析技術(shù)，在食品生物、環(huán)境化學(xué)、生物化學(xué)等許多領(lǐng)域的應(yīng)用已逐漸展開(kāi)。其分析條件的關(guān)鍵在于流動(dòng)相的選擇以及質(zhì)譜條件的優(yōu)化，如碰撞能量、氮?dú)饬魉俸驮礈氐取?br/>發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于建立一種快速有效的鑒別檢測(cè)方法，即對(duì)西洋參制劑的質(zhì)量真?zhèn)芜M(jìn)行快速測(cè)評(píng)，提供了一種樣品處理方法簡(jiǎn)便、縮短分析時(shí)間和低檢測(cè)限的同時(shí)檢測(cè)西洋參和人參中擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf的方法，并依據(jù)已有實(shí)驗(yàn)考察數(shù)據(jù)，可以測(cè)算西洋參制劑中人參摻雜的含量，是一種對(duì)西洋參產(chǎn)品進(jìn)行快速評(píng)估考察的方法，同時(shí)適用于所有含西洋參及人參的各種劑型產(chǎn)品檢測(cè)。為完成上述目的，本發(fā)明是公開(kāi)如下的技術(shù)方案一種利用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用快速檢測(cè)西洋參人參及其制劑質(zhì)量真?zhèn)蔚姆椒?，主要包括樣品處理、液相分離，質(zhì)譜檢測(cè)三個(gè)方面，其下步驟如下(1)供試品溶液的制備取本品西洋參含片粉末lg，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)定，加入70-95%甲醇50ml，超聲提取20min，取出，放冷，加入甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，備用；(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取擬人參皂苷Fu對(duì)照品、人參皂苷Rf對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每lmL含擬人參皂苷Fu2.028ng、人參皂苷Rf0.684ng的溶液，備用；(3)超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法定性鑒別色譜條件采用力w"/f/〃凡Ci5ffi7C18色譜柱(2.1XlOOmra,1.7ym);液相色譜柱，以流動(dòng)相A乙腈-四氫呋喃I(xiàn)O:1，流動(dòng)相B0.2%甲酸水進(jìn)行等度洗脫，流速0.4mL/min，柱溫3(TC;供試品溶液進(jìn)量5ul。其中優(yōu)選采用的流動(dòng)相A乙腈-四氫呋喃(10:1):B0.29G甲酸水的體積比-30:70。質(zhì)譜條件采用電噴霧電離源，負(fù)離子電離模式，毛細(xì)管電離電壓2.4kV，取樣錐孔電壓15V,離子源溫度12(TC，脫溶劑溫度35(TC，脫溶劑氮?dú)饬魉?00L/hr,錐孔反吹氮?dú)?0L/hr，四級(jí)桿掃描范圍m/z2501000Da，采集時(shí)間08min，掃描時(shí)間O.3s，間隔時(shí)間0.02s，選擇離子m/z835Da作為目標(biāo)離子，碰撞電壓45v,TOF離子飛行方式采用V模式，使用亮氨酸腦啡肽m/z554.2615，作為外標(biāo)物對(duì)目標(biāo)離子進(jìn)行精確質(zhì)量鎖定；根據(jù)所得二級(jí)質(zhì)譜圖判定是否含擬人參皂苷Fn和人參皂苷Rf的二級(jí)碎片離子峰組；(4)擬人參皂苷Fn和人參皂苷Rf定量測(cè)定液相方法同步驟(3)所述，對(duì)照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣5iil，質(zhì)譜方法同步驟(3)所述，碰撞電壓15v，在對(duì)照品質(zhì)譜色譜圖和樣品質(zhì)譜色譜圖中積分，測(cè)定擬人參皂苷Fu質(zhì)譜色譜峰和人參皂苷Rf質(zhì)譜色譜峰的峰面積；(5)計(jì)算樣品中擬人參皂苷Fu和人參皂苷Rf的含量，并根據(jù)已知的西洋參和人參中擬人參皂苷Fu和人參皂苷Rf的含量數(shù)據(jù)，測(cè)定供試品中西洋參和人參藥材含量。本發(fā)明所述的快速鑒別檢測(cè)方法，優(yōu)選取本品西洋參含片粉末lg，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)定，加入70呢甲醇50m1,超聲提取20min，取出，放冷，加入70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液。本發(fā)明所述的快速鑒別檢^!']方法，其中擬人參皂苷Fu的相對(duì)保留時(shí)間在1.5min，而人參皂苷Rf的相對(duì)保留時(shí)間在l.7min，二者達(dá)到基線(xiàn)分離。本發(fā)明所述的快速鑒別檢測(cè)方法，在碰撞電壓為4.5v下，提取離子峰m/z835的二級(jí)質(zhì)譜圖，如出現(xiàn)人參的特征成分人參皂苷Rf的特征碎片峰組m/z799、m/z637、m/z475，碎片峰組m/z799、m/z653、m/z491為西洋參的特征成分?jǐn)M人參皂苷Fu的碎片離子。本發(fā)明所述的快速鑒別檢測(cè)方法，其中的擬人參皂苷Fn和人參皂苷Rf的檢測(cè)方法可以檢測(cè)提取方法相同或相近的含有西洋參、人參的任何一種劑型。例如片劑、膠囊或顆粒劑。本發(fā)明所述的快速鑒別檢測(cè)方法，優(yōu)選70%甲醇為提取溶劑，采用超聲提取方法，超聲20min。對(duì)目標(biāo)成分提取效果好，且方法簡(jiǎn)單易操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該方法的回收率，重復(fù)性和提取效率都達(dá)到要求。本發(fā)明的關(guān)鍵技術(shù)之一在于將擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf這兩種同分異構(gòu)體在2分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速分離，采用流動(dòng)相A-B(30:70)，其中流動(dòng)相A為乙腈-四氫呋喃(10:1)，流動(dòng)相B為0.2W甲酸水，其中加入四氫呋喃可以不同程度增強(qiáng)不同組分在柱中的保留性，量少則分離效果不明顯，量多則不能進(jìn)一步增大分離度，且使得各組分保留時(shí)間延長(zhǎng)，增加檢測(cè)時(shí)間。四氫呋喃鮮見(jiàn)于液相檢測(cè)的流動(dòng)相選擇，在本發(fā)明中效果顯著。采用四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)離子峰m/z835進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)，碰撞能量的選擇至關(guān)重要。能量過(guò)低，離子峰m/z835不足以破碎，形成碎片離子豐度低；能量過(guò)高，擬人參皂苷Fll的特征離子峰組m/z799、m/z653、m/z491和人參皂苷Rf特征離子峰組m/z799、m/z637、m/z475也隨之破碎，無(wú)法鑒別。適用于本發(fā)明的碰撞電壓是45v，選擇m/z835為目標(biāo)離子，此時(shí)各組特征離子峰可以檢測(cè)到且形成的碎片離子峰面積最大。本發(fā)明經(jīng)方法學(xué)研究表明，以70%甲醇超聲提取西洋參制劑，釆用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用方法鑒別檢測(cè)，其中擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf與檢出限分別達(dá)到0.08ng和0.05ng，定量限分別為0.243ng和0.164ng，回收率分別為97.24%(RSD=4.6,n=6)和93.75%(RSD%=4.4，n=6)，線(xiàn)性范圍分別為0.16416.4ng(線(xiàn)性方程y-8.2衡+2.1062，r=0.9989)和0.24324.3ng(線(xiàn)性方程y-8.7416x+1.8629，r=0.9997);自制不同比例的西洋參中摻雜人參樣品(加入人參藥材比例1%、5%、10%、30%、50%、75%、100%)，測(cè)量偏差在0.093.85%。為了能夠通過(guò)對(duì)樣品中擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf兩種成分的定量檢測(cè)結(jié)果，較準(zhǔn)確推測(cè)其中西洋參和人參原藥材的含量，從而得出摻雜人參的比例，本發(fā)明中收集了市面上不同產(chǎn)地的西洋參藥材16批次和人參藥材11批次，分別對(duì)其中擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf的含量進(jìn)行測(cè)定，得到西洋參藥材中擬人參皂苷Fll的含量平均值和人參中人參皂苷Rf的含量平均值。見(jiàn)表2、3。表2.各批次西洋參樣品測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3.各批次人參樣品測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>RsOll人參(自有)475.62平均值503.49本發(fā)明與現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)相比所具有的積極效果在于:(1)首次實(shí)現(xiàn)西洋參和人參各自特征成分?jǐn)M人參皂苷Fll和人參皂苷Rf的快速分離，2min內(nèi)即可完檢測(cè)。(2)采用二級(jí)質(zhì)譜，找到兩種成分的各自特征碎片離子峰，可以同時(shí)對(duì)組分進(jìn)行鑒別鑒定。(3)提取方法簡(jiǎn)單易行，方法操作性強(qiáng)，回收率高，重復(fù)性好。(4)經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該方法準(zhǔn)確度高，積累了可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，可以通過(guò)對(duì)單一成分的含量測(cè)定，推斷制劑中藥材加入量及加入比例。圖1擬人參皂苷Fll對(duì)照品和人參皂苷Rf對(duì)照品TIC圖，保留時(shí)間分別在1.5min和1.7min(T0FMSMSES-TIC);圖2西洋參茶樣品的TIC圖(T0FMSMSES-TIC);圖3擬人參皂苷Fll的二級(jí)質(zhì)譜圖(T0FMSMS835.00ES.228);圖4人參皂苷Rf的二級(jí)質(zhì)譜圖(T0FMSMS835.00ES.228)。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合較佳實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式詳細(xì)說(shuō)明如下；同時(shí)為了簡(jiǎn)單和清楚的目的，下文恰當(dāng)?shù)氖÷粤斯夹g(shù)的描述，以免那些不必要的細(xì)節(jié)影響對(duì)本技術(shù)方案的描述。實(shí)施例11、材料1.1儀器和材料美國(guó)WatersACQUITYUltraPerformanceLC超高效液相色譜儀；WatersQ-TOFPremier高分辨四極桿與飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀；配備電噴霧離子源(ESI)以及Masslynx4.l數(shù)據(jù)采集軟件。1.2藥品與試劑人參皂苷Rf(Extmsynthese公司，批號(hào)03091112)、擬人參皂苷F11對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)841-9903);乙腈(色譜純、美國(guó)Fisher公司)，甲酸(色譜純，美國(guó)Fisher公司)，四氫呋喃(色譜純，美國(guó)Fisher公司)；超純水(milliQ超純水系統(tǒng)，過(guò)0.2211111濾膜)。氨酸腦啡肽購(gòu)買(mǎi)于美國(guó)Sigma公司。2.方法取西洋參含片粉末(過(guò)40目篩)lg,精密稱(chēng)定，加入70%甲醇50ml，超聲提取20min，取出，放冷，加入70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取擬人參皂苷F11對(duì)照品、人參皂苷Rf對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每lraL含擬人參皂苷Fll2.028ng、人參皂苷Rf0.684ng的溶液，即得；定性鑒別液相條件，色譜柱AcquityUPLCBEHC18色譜柱(2.1xlOOmm，1.7jum);流動(dòng)相表l;流速0.4ml/min;柱溫30'C;供試品溶液進(jìn)樣量1，樣品室溫度4'C;室溫24°C。表1流動(dòng)相流速(mL/min)0.2%甲酸水(％)乙腈-四氫呋喃(io:i))0.47030Q-TOFMS條件采用電噴霧電離源，負(fù)離子電離模式，毛細(xì)管電離電壓2.4kV，取樣錐孔電壓15V，離子源溫度12(TC,脫溶劑溫度.*350'C，脫溶劑氮?dú)饬魉?00L/hr，錐孔反吹氮?dú)?0L/hr。四級(jí)桿掃描范圍m/z2501000Da，采集時(shí)間5min，掃描時(shí)間0.3s，間隔時(shí)間0.02s，選擇離子m/z835Da作為目標(biāo)離子，碰撞電壓45v，TOF離子飛行方式采用V模式，使用亮氨酸腦啡肽(m/z554.2615)作為外標(biāo)物對(duì)目標(biāo)離子進(jìn)行精確質(zhì)量鎖定。根據(jù)所得二級(jí)質(zhì)譜圖判定是否含人參皂苷Rf的二級(jí)碎片離子峰組。定量測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣5ul，檢測(cè)方法同上述定性鑒別，碰撞電壓改為15v，在對(duì)照品質(zhì)譜色譜圖和樣品質(zhì)譜色譜圖中積分，測(cè)定擬人參皂苷Fll質(zhì)譜色譜峰和人參皂苷Rf質(zhì)譜色譜峰的峰面積。計(jì)算樣品中擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf的含量，并根據(jù)已知的西洋參和人參中擬人參皂苷Fll和人參皂苷Rf的含量數(shù)據(jù)，測(cè)定供試品中西洋參和人參藥材含量及比例。2.1線(xiàn)性范圍分別制得不同濃度的人參皂苷Rf與擬人參皂苷FlI對(duì)照品溶液，分別進(jìn)入液質(zhì)聯(lián)用儀，按上述定量測(cè)定條件測(cè)定，在形成的質(zhì)譜色譜圖中提取m/z835離子流圖，對(duì)峰面積進(jìn)行積分，以進(jìn)樣量(pg)為橫坐標(biāo)x，以峰面積為縱坐標(biāo)y，進(jìn)行回歸處理。人參皂苷Rf回歸方程y-8.7416x+1.8629，r=0.9997;擬人參皂苷Fll回歸方程y=S.2405x+2.1062，r=0.9989。結(jié)果表明，人參皂苷Rf和擬人參皂苷Fll分別在0.164~16.4ng和0.243~24.3ng進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。2.2精密度取同一批號(hào)的樣品照供試品溶液制備方法制備，平行制備6份供試品溶液，按上述測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算人參皂苷Rf與擬人參皂苷FU含量，結(jié)果RSD(%)分別為4.00和1.08，表明本方法重復(fù)性好。2.3回收率取己知含量的樣品(人參皂苷Rfl0.01pg/g，擬人參皂苷Fll50.45jxg/g)6份，每份約0.5g，至100ml具塞錐形瓶中，分別精密加入70%甲醇溶液(含人參皂苷Rf對(duì)照品0.1026嗎/ml和擬人參皂苷Fll對(duì)照品0.507嗎/ml)50ml，精密加入70%甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理20min，放冷，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算人參皂苷Rf和擬人參皂苷Fll平均回收率分別為97.24%和93.75%,RSD(%)分別為4.39和4.61(n-6)。3.結(jié)果測(cè)定了市售A產(chǎn)家的2種西洋參制劑中人參皂苷Rf和擬人參皂苷Fll的含量，以人參藥材和西洋參藥材中所含人參皂苷Rf和擬人參皂苷Fll的標(biāo)準(zhǔn)含量計(jì)，計(jì)算出西洋參制劑中所含人參藥材及西洋參藥材的比例，檢測(cè)結(jié)果(見(jiàn)表4)表4.市售A廠(chǎng)家西洋參制劑測(cè)定結(jié)果樣品Fll含量(ug/g)Rf含量(ug/g)摻雜比例(％)A含片50.4510.0116.56A膠囊487.9323.054.51實(shí)施例2方法同實(shí)施例1。測(cè)定了市售B產(chǎn)家的2種西洋參制劑中人參皂苷Rf和擬人參皂苷Fll的含量，以人參藥材和西洋參藥材中所含人參皂苷Rf和擬人參皂苷Fll的標(biāo)準(zhǔn)含量計(jì)，計(jì)算出西洋參制劑中所含人參藥材及西洋參藥材的比例，檢測(cè)結(jié)果(見(jiàn)表5)表5.市售B廠(chǎng)家西洋參制劑測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>在詳細(xì)說(shuō)明的較佳實(shí)施例之后，熟悉該項(xiàng)技術(shù)人士可清楚地了解，在不脫離上述申請(qǐng)專(zhuān)利范圍與精神下可進(jìn)行各種變化與修改，凡依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍。且本發(fā)明亦不受限于說(shuō)明書(shū)中所舉實(shí)例的實(shí)施方式。權(quán)利要求1、一種利用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用快速檢測(cè)西洋參人參及其制劑質(zhì)量真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于該方法依次包括以下步驟(1)供試品溶液的制備取本品西洋參含片粉末1g，精密稱(chēng)定，超聲提取20-30min，取出，放冷，加入甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，備用；(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取擬人參皂苷F11對(duì)照品、人參皂苷Rf對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1mL含擬人參皂苷F112.028ng、人參皂苷Rf0.684ng的溶液，備用；(3)超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法定性鑒別色譜條件采用C18液相色譜柱；以流動(dòng)相A乙腈-四氫呋喃10∶1，B0.2％甲酸水進(jìn)行等度洗脫，流速0.4mL/min，柱溫30℃；供試品溶液進(jìn)量5μl.質(zhì)譜條件采用電噴霧電離源，負(fù)離子電離模式，毛細(xì)管電離電壓2.4kV，取樣錐孔電壓15V，離子源溫度120℃，脫溶劑溫度350℃，脫溶劑氮?dú)饬魉?00L/hr，錐孔反吹氮?dú)?0L/hr，四級(jí)桿掃描范圍m/z250～1000Da，采集時(shí)間0～8min，掃描時(shí)間0.3s，間隔時(shí)間0.02s，選擇離子m/z835Da作為目標(biāo)離子，碰撞電壓45v，TOF離子飛行方式采用V模式，使用亮氨酸腦啡肽m/z554.2615，作為外標(biāo)物對(duì)目標(biāo)離子進(jìn)行精確質(zhì)量鎖定；根據(jù)所得二級(jí)質(zhì)譜圖判定是否含擬人參皂苷F11和人參皂苷Rf的二級(jí)碎片離子峰組；(4)擬人參皂苷F11和人參皂苷Rf定量測(cè)定液相方法同步驟(3)所述，對(duì)照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣5μl，質(zhì)譜方法同步驟(3)所述，碰撞電壓15v，在對(duì)照品質(zhì)譜色譜圖和樣品質(zhì)譜色譜圖中積分，測(cè)定擬人參皂苷F11質(zhì)譜色譜峰和人參皂苷Rf質(zhì)譜色譜峰的峰面積；(5)計(jì)算樣品中擬人參皂苷F11和人參皂苷Rf的含量，并根據(jù)已知的西洋參和人參中擬人參皂苷F11和人參皂苷Rf的含量數(shù)據(jù)，測(cè)定供試品中西洋參和人參藥材含量。2、如權(quán)利要求l所述快速檢測(cè)方法，其特征在于取本品西洋參含片粉末lg，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)定，加入7(^甲醇50ml，超聲提取20min,取出，放冷，加入70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液。3、如權(quán)利要求l所述的快速檢測(cè)方法，其步驟(3)流動(dòng)相的體積比A:B=30:70。4、如權(quán)利要求l所述的快速檢測(cè)方法，其中擬人參皂苷F,:的相對(duì)保留時(shí)間在l.5min，而人參皂苷Rf的相對(duì)保留時(shí)間在l.7min，二者達(dá)到基線(xiàn)分離。5、如權(quán)利要求l所述的快速檢測(cè)方法，在碰撞電壓為4.5v下，提取離子峰m/z835的二級(jí)質(zhì)譜圖；其中人參成分人參皂苷Rf的特征碎片離子峰組為ra/z799、m/z637、m/z475;西洋參成分?jǐn)M人參皂苷Fll的碎片離子峰組為m/z799、m/z653、ra/z491。6、如權(quán)利要求書(shū)15任一項(xiàng)所述的快速檢測(cè)方法，其中的擬人參皂苷Fn和人參皂苷Rf的檢測(cè)方法可以檢測(cè)提取方法相同或相近的含有西洋參、人參的任何一種劑型。7、如權(quán)利要求書(shū)6所述的快速檢測(cè)方法，其中的劑型包括片劑、膠囊或顆粒劑。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)一種快速檢測(cè)西洋參人參及其制劑質(zhì)量真?zhèn)蔚姆椒āＫ且?0％甲醇為樣品超聲提取溶劑，采用C18色譜柱，以乙腈-四氫呋喃-甲酸-水體系為流動(dòng)相，電噴霧(ESI)離子源，負(fù)離子模式的二級(jí)質(zhì)譜分析條件下，首次將西洋參和人參的各自特征成分?jǐn)M人參皂苷F11和人參皂苷Rf在2min鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速分離、鑒別和測(cè)定，判斷西洋參制劑中是否摻雜人參，并計(jì)算摻雜人參的原藥材含量。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是專(zhuān)屬性強(qiáng)，能夠同時(shí)定性、定量，前處理簡(jiǎn)便快捷，檢測(cè)速度快，2min內(nèi)即可以檢測(cè)出西洋參及人參含量，檢測(cè)靈敏度高，重復(fù)性好，適用于西洋參和人參及其產(chǎn)品的快速質(zhì)量篩選。文檔編號(hào)G01N30/06GK101685089SQ200910069378公開(kāi)日2010年3月31日申請(qǐng)日期2009年6月23日優(yōu)先權(quán)日2009年6月23日發(fā)明者孟憲生,奕程,羅國(guó)安,莉黎申請(qǐng)人:天津海世達(dá)檢測(cè)技術(shù)有限公司;華東理工大學(xué)