本發(fā)明涉及皺紋盤鮑基因組DNA的提取方法。
背景技術(shù)：
皺紋盤鮑是一種名貴的海產(chǎn)貝類，別名為：鮑、石決明、九孔螺、海耳、盤大鮑、盤鮑、堪察加鮑、盤鮑北方型、蝦夷盤鮑、鮑魚、紫鮑 。蓬萊市是煙臺皺紋盤鮑的重點(diǎn)產(chǎn)區(qū)。成鮑多生活在深水處，幼齡鮑多棲息在低潮線下水淺處。皺紋盤鮑在夜間活動(dòng)覓食，白天則潛伏于巖礁的縫隙處很少活動(dòng)。鮑魚食性較雜，但以褐藻類的馬尾藻、鼠尾藻、海帶、裙帶菜等為主要食物；攝食量隨著季節(jié)的變化而變化。冬季則多隱在巖礁的石洞或縫隙間很少出來活動(dòng)。
分子生物學(xué)是生物學(xué)研究的一項(xiàng)重要分支，而DNA的提取則是分子生物學(xué)研究的重要基礎(chǔ)，DNA純度的純度及質(zhì)量對后續(xù)的研究工作具有極為重要的影響。每一物種由于其自身各成分的含量不同（比如有的物種蛋白含量高、有的物種糖分含量高），會(huì)對DNA的純度和質(zhì)量產(chǎn)生較大影響。因此，需要針對不同的物種開發(fā)出適宜的有針對性的提取方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對上述問題，本發(fā)明旨在提供一種適于皺紋盤鮑的高質(zhì)量、高純度的DNA提取方法。
皺紋盤鮑基因組DNA的提取方法，步驟如下：
（1）取皺紋盤鮑肌肉組織3-8克，用液氮研磨后，將粉末平均加入到10-15管裝有500μL STE（100mM NaCl；10mM Tris-Cl，pH8.0；1mM EDTA，pH8.0）及50μL 10% SDS裂解緩沖液的1.5mL離心管中，隨即每管加入5μL 濃度為20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60 min，至溶液澄清；
（2）每管加入250μL飽和酚、250μL氯仿/異戊醇（24:1），輕柔晃動(dòng)5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（3）離心后有機(jī)相位于下層，中間層為蛋白層，上層為溶有DNA的水相，吸取上清液至新離心管中，重復(fù)步驟（2），至水相和有機(jī)相之間無蛋白層殘留；
（4）吸取上清液至新離心管中，加入500μL氯仿/異戊醇，輕柔晃動(dòng)5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，緩慢輕柔搖勻，添加1mL在-20℃預(yù)冷的無水乙醇，放置于-20℃冰箱 20-50min，10000-15000rpm 離心8-15min，得到DNA沉淀；
（6）用預(yù)冷的 70%乙醇洗滌沉淀1-3次；
（7）沉淀干燥，根據(jù)沉淀量多少加入不同量的無菌超純水及終濃度為0.05mg/mL的RNase A，37℃水浴15-40min，直至RNA全部溶解；
（8）用分光光度計(jì)測定DNA的濃度，同時(shí)進(jìn)行瓊脂糖電泳檢測。
本發(fā)明的方法針對性強(qiáng)，特別適于皺紋盤鮑DNA的提取，提取的DNA濃度、純度非常高，非常適于文庫構(gòu)建、PCR等后續(xù)研究。
附圖說明
圖1 本發(fā)明方法提取的皺紋盤鮑DNA的電泳圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
從市場購買的皺紋盤鮑在實(shí)驗(yàn)室用無菌海水暫養(yǎng)3-5天后，開始DNA的提取工作，步驟如下：
（1）取皺紋盤鮑肌肉組織3-8克，用液氮研磨后，將粉末平均加入到10-15管裝有500μL STE（100mM NaCl；10mM Tris-Cl，pH8.0；1mM EDTA，pH8.0）及50μL 10% SDS裂解緩沖液的1.5mL離心管中，隨即每管加入5μL 濃度為20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60 min，至溶液澄清；
（2）每管加入250μL飽和酚、250μL氯仿/異戊醇（24:1），輕柔晃動(dòng)5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（3）離心后有機(jī)相位于下層，中間層為蛋白層，上層為溶有DNA的水相，吸取上清液至新離心管中，重復(fù)步驟（2），至水相和有機(jī)相之間無蛋白層殘留；
（4）吸取上清液至新離心管中，加入500μL氯仿/異戊醇，輕柔晃動(dòng)5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，緩慢輕柔搖勻，添加1mL在-20℃預(yù)冷的無水乙醇，放置于-20℃冰箱 20-50min，10000-15000rpm 離心8-15min，得到DNA沉淀；
（6）用預(yù)冷的 70%乙醇洗滌沉淀1-3次；
（7）沉淀干燥，根據(jù)沉淀量多少加入不同量的無菌超純水及終濃度為0.05mg/mL的RNase A，37℃水浴15-40min，直至RNA全部溶解；
（8）用分光光度計(jì)測定DNA的濃度，同時(shí)進(jìn)行瓊脂糖電泳檢測。
經(jīng)檢測，DNA的濃度為939 ng/uL，A260/A280=1.8。電泳結(jié)果如圖1所示，可見DNA的濃度及純度都非常高。