一種葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，包括如下步驟：(1)用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻2～4次，洗滌干凈的螺旋藻經(jīng)壓力為200～400kg/cm2的高壓細(xì)胞勻漿機(jī)破碎5～6min，超聲波處理12?15min，將破碎的螺旋藻懸濁液于離心機(jī)中離心10～18min，離心收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4～5℃下儲(chǔ)存；(2)雙水相萃取：向步驟(1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸鉀鈉，徹底攪拌1～2h，靜置過(guò)夜使兩相分開(kāi)，收集上相；(3)采用膜孔徑為3～5um的濾膜對(duì)藻藍(lán)蛋白粗提液進(jìn)行粗過(guò)濾，制得雙水相萃取藻藍(lán)蛋白。本發(fā)明分離效果好，過(guò)濾分離回收率高，產(chǎn)品質(zhì)量高，運(yùn)行成本低。
【專利說(shuō)明】
一種葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本領(lǐng)域涉及天然產(chǎn)物深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水 相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]藻藍(lán)蛋白是一種天然藍(lán)色色素，已作為食物色素添加在軟飲料，口香糖，唇膏，眼 線等產(chǎn)品中。高純度的藻藍(lán)蛋白因其具有高效的熒光性，被作為生物化學(xué)探針應(yīng)用在免疫 分析研究。藻藍(lán)蛋白具有抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、保肝護(hù)肝、抗癌、抗炎等諸多生理活性， 具有重大的潛在藥用開(kāi)發(fā)價(jià)值。藻藍(lán)蛋白主要從螺旋藻、魚(yú)腥藻等藻類中提取純化得來(lái)，不 同純度(A620/A280)的藻藍(lán)蛋白有不同的用途。
[0003]葡聚糖dextran，glucan又稱右旋糖酐。為一種多糖。存在于某些微生物在生長(zhǎng)過(guò) 程中分泌的粘液中。葡聚糖具有較高的分子量，主要由D-葡萄吡喃糖以a，1-6鍵連接，支 鏈點(diǎn)有1 - 2、1 - 3、1 - 4連接的。隨著微生物種類和生長(zhǎng)條件的不同，其結(jié)構(gòu)也有差別。 八620/六280大于等于0.7時(shí)，澡監(jiān)蛋白為食品級(jí);六620/六280大于等于3.9時(shí)，澡監(jiān)蛋白為反應(yīng) 級(jí);A620/A280大于等于4.0時(shí)，藻藍(lán)蛋白為分析級(jí)。藻藍(lán)蛋白具有十分廣闊的應(yīng)用前景，但 繁瑣的純化步驟不僅制約著它的大規(guī)模生產(chǎn)也導(dǎo)致其價(jià)格昂貴。食品級(jí)藻藍(lán)蛋白的價(jià)格約 為0.13美元/mg，分析級(jí)的藻藍(lán)蛋白價(jià)格為1-5美元/mg。
[0004] 葡聚糖是以葡萄糖為組成糖的多糖的總稱。由于D-葡萄糖殘基彼此間結(jié)合樣式的 不同而分為多種，廣泛分布于微生物、植物、動(dòng)物界。其中代表性的有細(xì)菌的多縮葡萄糖（由 a_l，6鍵的主鏈上支出以a-1，4和a-1，6鍵的側(cè)鏈），褐藻類的海帶多糖（lami-narin)(主要 以0-1，3鍵），地衣類的木聚糖⑴-1，4和0-1，3鍵），高等植物的纖維素、(0-1，4結(jié)合），直鏈淀 粉(a-1，4鍵），支鏈淀粉（由a-1，4鍵的主鏈上支出a-1，6鍵的側(cè)鏈），動(dòng)物的糖原等。藻藍(lán)蛋 白是從藻類中分離出的一種深藍(lán)色物質(zhì).它既是一種蛋白質(zhì)，又是一種極好的天然食用色 素，同時(shí)還是良好的保健食品，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)療價(jià)值。傳統(tǒng)的從藍(lán)藻中提取分離 藻藍(lán)蛋白的方法多采用鹽析沉淀法，包括沉淀、離心和透析3個(gè)主要操作環(huán)節(jié)，這在實(shí)際工 業(yè)化生產(chǎn)中存在操作步驟繁瑣、動(dòng)力能耗高及操作周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)。Albertsson于20世紀(jì)50 年代后期開(kāi)發(fā)了雙水相萃取法。70年代以后，雙水相萃取技術(shù)在生物分離過(guò)程中得到廣泛 應(yīng)用，為蛋白質(zhì)特別是胞內(nèi)蛋白質(zhì)的分離與純化開(kāi)辟了新的途徑，具有良好的發(fā)展前景。
[0005] 目前，缺乏一種分離效果好，過(guò)濾分離回收率高的葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃 取分離藻藍(lán)蛋白的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種分離效果好，過(guò)濾分離回收率高的葡 聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：本發(fā)明的一種葡聚糖和酒石 酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，包括如下步驟：
[0008] (1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液:用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻2~4次，洗滌干凈的螺旋 藻經(jīng)壓力為200~400kg/cm2的高壓細(xì)胞勻漿機(jī)破碎5~6min，超聲波處理12-15min，將破碎 的螺旋藻懸濁液于離心機(jī)中離心1 〇~18min，離心收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于 4~5 °C下儲(chǔ)存；
[0009] (2)雙水相萃取：向步驟（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸鉀 鈉，徹底攪拌1~2h，靜置過(guò)夜使兩相分開(kāi)，收集上相；
[0010] (3)采用膜孔徑為3~5um的濾膜對(duì)藻藍(lán)蛋白粗提液進(jìn)行粗過(guò)濾，處理時(shí)間為20~ 26小時(shí)，再于-13~-8°C冷凍干燥8~15小時(shí)，制得雙水相萃取藻藍(lán)蛋白。
[0011] 進(jìn)一步地，在步驟(1)中，所述離心速率為800~1000r/min。
[0012]進(jìn)一步地，在步驟⑵中，所述葡聚糖質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的9~13%。
[0013] 更進(jìn)一步地，在步驟(2)中，所述酒石酸鉀鈉為雙水相體系總質(zhì)量的16~25%。
[0014] 進(jìn)一步地，在步驟(2)中，含藻藍(lán)蛋白的粗提液的質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的65~ 70% 〇
[0015] 進(jìn)一步地，在步驟（3)中，所述濾膜的流速為150mL/min，滲透通量為58.5L/(h ? m2)〇
[0016] 有益效果:本發(fā)明分離效果好，過(guò)濾分離回收率高，產(chǎn)品質(zhì)量高，運(yùn)行成本低;過(guò)程 無(wú)需添加化學(xué)藥品、溶媒溶劑，不帶入二次污染物質(zhì);設(shè)備可自動(dòng)運(yùn)行，穩(wěn)定性好，容易實(shí)現(xiàn) 工業(yè)化需求。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0018] (1)本發(fā)明的雙水相萃取與其他分離方法相比，具有易放大、操作時(shí)間短、成相物 質(zhì)對(duì)待分離的生物活性物質(zhì)無(wú)毒負(fù)作用等優(yōu)點(diǎn)。在雙水相體系中，待分離的組分選擇性分 配于其中一相，而其他雜質(zhì)組分分配于另一相中，因此使待分離組分的濃度和純度都得到 提高。其中影響雙水相萃取的因素很多，主要有:聚合物種類、聚合物平均分子質(zhì)量和濃度、 成相無(wú)機(jī)鹽種類和濃度、離子強(qiáng)度、pH值等等。
[0019] (2)本發(fā)明的雙水相體系用于萃取螺旋藻細(xì)胞破碎液中藻藍(lán)蛋白，經(jīng)一次萃取藻 藍(lán)蛋白收率可達(dá)90.6%，分配系數(shù)達(dá)到8.03,分離因數(shù)達(dá)到6.5。結(jié)果證實(shí)螺旋藻藻藍(lán)蛋白 在該體系中的分配系數(shù)和分離因數(shù)均較高。
[0020] (3)超/微濾膜過(guò)濾與傳統(tǒng)過(guò)濾的不同在于不同分子質(zhì)量的化合物可通過(guò)膜進(jìn)行 有效分離，這個(gè)過(guò)程是一種物理過(guò)程，不發(fā)生相的變化，不需要添加助劑。
【附圖說(shuō)明】
[0021 ]圖1為破壁后螺旋藻溶液的紫外-可見(jiàn)吸收?qǐng)D；
[0022] 圖2為酒石酸鉀鈉飽和度對(duì)藻藍(lán)蛋白純度的影響圖；
[0023] 圖3為pH值對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024]以下通過(guò)實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)附圖進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例是 本發(fā)明的闡釋和舉例，并不以任何形式限制本發(fā)明的范圍。
[0025] 實(shí)施例1
[0026] 本發(fā)明的一種葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，包括如下步 驟：
[0027] (1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液：用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻2次，洗滌干凈的螺旋藻 經(jīng)壓力為200kg/cm 2的高壓細(xì)胞勾衆(zhòng)機(jī)破碎5min,超聲波處理15min,將破碎的螺旋藻懸池 液于離心機(jī)中離心15min，離心收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4°C下儲(chǔ)存;所述攪 摔轉(zhuǎn)速為800r/min。
[0028] (2)雙水相萃?。合虿襟E（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸鉀 鈉，徹底攪拌lh，靜置過(guò)夜使兩相分開(kāi)，收集上相;所述葡聚糖質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的 9%。酒石酸鉀鈉為雙水相體系總質(zhì)量的16%。含藻藍(lán)蛋白的粗提液的質(zhì)量為雙水相體系總 質(zhì)量的68%。
[0029] (3)采用膜孔徑為3um的濾膜對(duì)藻藍(lán)蛋白粗提液進(jìn)行粗過(guò)濾，處理時(shí)間為20小時(shí)， 再于-13°C冷凍干燥8小時(shí)得藻藍(lán)蛋白粉末。所述濾膜的流速為150mL/min，滲透通量為 58.5L/(h ? m2)〇
[0030]如圖1所示，圖1為破壁后螺旋藻溶液的紫外-可見(jiàn)吸收?qǐng)D，藻藍(lán)蛋白溶液在280nm 和620nm處有最大吸收波長(zhǎng)，螺旋藻蛋白在280nm處有最大吸收峰，藻藍(lán)蛋白在620nm處有最 大吸收峰，凍融破壁后螺旋藻溶液中藻藍(lán)蛋白純度為0.4,其中螺旋藻雜蛋白含量較多。 [0031] 實(shí)施例2
[0032]實(shí)施例2與實(shí)施例1的區(qū)別在于:本發(fā)明的一種葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分 離藻藍(lán)蛋白的方法，包括如下步驟：
[0033] (1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液：用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻3次，洗滌干凈的螺旋藻 經(jīng)壓力為300kg/cm 2的高壓細(xì)胞勻漿機(jī)破碎5.5min，超聲波處理12min，將破碎的螺旋藻懸 濁液于離心機(jī)中離心10min，離心收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于5°C下儲(chǔ)存;所述 攪拌轉(zhuǎn)速為900r/min。
[0034] (2)雙水相萃?。合虿襟E（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸鉀 鈉，徹底攪拌2h，靜置過(guò)夜使兩相分開(kāi)，收集上相;所述葡聚糖質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的 10%。酒石酸鉀鈉為雙水相體系總質(zhì)量的21 %。含藻藍(lán)蛋白的粗提液的質(zhì)量為雙水相體系 總質(zhì)量的70 %。
[0035] (3)采用膜孔徑為4um的濾膜對(duì)藻藍(lán)蛋白粗提液進(jìn)行粗過(guò)濾，處理時(shí)間為24小時(shí)， 再于-8°C冷凍干燥15小時(shí)得藻藍(lán)蛋白粉末。所述濾膜的流速為150mL/min，滲透通量為 58.5L/(h ? m2)〇
[0036] 實(shí)施例3
[0037] 實(shí)施例3與實(shí)施例1的區(qū)別在于:本發(fā)明的一種葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分 離藻藍(lán)蛋白的方法，包括如下步驟：
[0038] (1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液：用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻4次，洗滌干凈的螺旋藻 經(jīng)壓力為400kg/cm 2的高壓細(xì)胞勾衆(zhòng)機(jī)破碎6min，超聲波處理14min,將破碎的螺旋藻懸池 液于離心機(jī)中離心18min，離心收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4.5°C下儲(chǔ)存;所述 攪拌轉(zhuǎn)速為l〇〇〇r/min。
[0039] (2)雙水相萃?。合虿襟E（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸鉀 鈉，徹底攪拌1.5h，靜置過(guò)夜使兩相分開(kāi)，收集上相;所述葡聚糖質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量 的13%。酒石酸鉀鈉為雙水相體系總質(zhì)量的25%。含藻藍(lán)蛋白的粗提液的質(zhì)量為雙水相體 系總質(zhì)量的65 %。
[0040] (3)采用膜孔徑為5um的濾膜對(duì)藻藍(lán)蛋白粗提液進(jìn)行粗過(guò)濾，處理時(shí)間為26小時(shí)， 再于-10°c冷凍干燥12小時(shí)得藻藍(lán)蛋白粉末。所述濾膜的流速為150mL/min，滲透通量為 58.5L/(h ? m2)〇
[0041] 試驗(yàn) 1
[0042] 酒石酸鉀鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)C 一 PC分配影響
[0043] 酒石酸鉀鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)C 一 PC分配影響如表1所示，
[0044] 表 1
[0047]由表1所示，當(dāng)葡聚糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)一定時(shí)，酒石酸鉀鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%，pH值為 6.2，室溫條件下，當(dāng)酒石酸鉀鈉低于某一用量時(shí)不能形成雙水相體系，隨著酒石酸鉀鈉質(zhì) 量分?jǐn)?shù)增加，相比值逐漸減小，分配系數(shù)、純度和回收率逐漸增大。當(dāng)酒石酸鉀鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為21 %時(shí)，C一 PC的分配系數(shù)、純度和收率最高，然后逐漸減小。造成這種現(xiàn)象的原因可能 是，酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加，下相的鹽析作用增加，使C 一 PC由下相向上相迀移。但酒石 酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)過(guò)高時(shí)，下相鹽析作用過(guò)強(qiáng)，破壞C-PC表面的水化層，C-PC被部分或全 部析出。再者，在葡聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)不變的情況下，隨著酒石酸鉀鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)在一定范圍內(nèi)的 提高，雙水相體系逐漸遠(yuǎn)離臨界點(diǎn)，物質(zhì)在兩相中界面張力增大，有利于藻藍(lán)蛋白在上相富 集，多糖在下相富集；當(dāng)酒石酸鉀鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)更大時(shí)，上相體積逐漸減小，上相體積逐漸減 小，同時(shí)粘度逐漸增大，不利于藻藍(lán)蛋白的在上相的富集。C 一 PC的迀移能力受到限制，不利 于C-PC的富集。
[0048] 如圖2所示，10 %~30 %酒石酸鉀鈉析得到的藻藍(lán)蛋白純度較低，30 %~45 %酒石 酸鉀鈉析出藻藍(lán)蛋白，藻藍(lán)蛋白純度逐漸增加，大于45%飽和度酒石酸鉀鈉鹽析藻藍(lán)蛋白 純度變化不大。確定：10 %~30 %之間的酒石酸鉀鈉飽和度可以用來(lái)除去大量螺旋藻雜蛋 白，大于40%飽和度的酒石酸鉀鈉用于沉淀藻藍(lán)蛋白和藻藍(lán)蛋白的富集純化。
[0049] 試驗(yàn) 2
[0050] 葡聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)藻藍(lán)蛋白萃取的影響
[0051] 表 2
[0053] 從表2可以看出，葡聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化對(duì)藻藍(lán)蛋白萃取率和純度均有影響。當(dāng)葡 聚糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11%時(shí)，藻藍(lán)蛋白萃取率達(dá)到了 94.3%，純度達(dá)到了 0.77。
[0054] 由試驗(yàn)2可知，葡聚糖與酒石酸鉀鈉形成的雙水相體系中，上相為葡聚糖相，下相 為酒石酸鉀鈉鹽相。當(dāng)葡聚糖的濃度大于其成相臨界點(diǎn)的濃度時(shí)，系統(tǒng)遠(yuǎn)離臨界點(diǎn)，系線長(zhǎng) 度增大，兩相性質(zhì)的差別也增大，同時(shí)蛋白質(zhì)在兩相中的界面張力差別增大，使其趨于向一 側(cè)分配。在葡聚糖-酒石酸鉀鈉雙水相體系中，酒石酸鉀鈉濃度的增高會(huì)使下相鹽析作用加 強(qiáng)，下相中的藻藍(lán)蛋白向上相轉(zhuǎn)移，并富集于上相。當(dāng)富集到上相的藻藍(lán)蛋白濃度超過(guò)其溶 解度時(shí)，藻藍(lán)蛋白就會(huì)被析出而分布在上下相之間，造成萃取率下降。同時(shí)，當(dāng)葡聚糖相對(duì) 分子質(zhì)量較大時(shí)，由于其極強(qiáng)的吸水能力，會(huì)導(dǎo)致下相酒石酸鉀鈉濃度增大，上相自由水含 量降低，也會(huì)造成部分蛋白質(zhì)在上下相之間析出。當(dāng)葡聚糖的相對(duì)分子質(zhì)量為4000u-6000u 時(shí)，下相中沒(méi)有檢測(cè)到藻藍(lán)蛋白，但上下相之間有藻藍(lán)蛋白析出。選擇適宜的葡聚糖相對(duì)分 子質(zhì)量及酒石酸鉀鈉濃度對(duì)于提高藻藍(lán)蛋白的萃取率非常重要。
[0055] 試驗(yàn) 3
[0056] 離子強(qiáng)度對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響
[0057]雙水相體系上下相間存在電位差，通過(guò)加入不同種類和濃度的鹽可以使得體系的 電荷狀態(tài)和疏水作用發(fā)生改變，進(jìn)而對(duì)物質(zhì)在兩相中的分配產(chǎn)生顯著影響。配置葡聚糖質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為11%，酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21%的體系，并考察分別添加不同濃度的NaCl情 況下對(duì)藻藍(lán)蛋白萃取的影響如表2所示，
[0058]表3
[0060]由表3可知，隨著NaCl濃度的升高，上相中藻藍(lán)蛋白純度與分離回收率都先升高后 降低。當(dāng)葡聚糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%，酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%時(shí)，與未添加NaCl的體系 相比，添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0%的NaCl情況下，上相中藻藍(lán)蛋白純度與分離回收率都較高。 [0061 ]試驗(yàn) 4
[0062] pH值對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響
[0063] 雙水相體系pH值變化能改變兩相的點(diǎn)位，并影響蛋白質(zhì)帶點(diǎn)性質(zhì)，從而影響藻藍(lán) 蛋白在兩相中的分配。配制酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%，葡聚糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的雙 水相體系，體系pH為5.8~6.3。由于藻藍(lán)蛋白較穩(wěn)定的pH范圍為4.5~8.5，因此調(diào)節(jié)體系pH 分別為4.0，5.0，6.0，7.0和8.0 值對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響如圖3所示，隨著 雙水相體系pH的升高，上相中藻藍(lán)蛋白的純度與分離回收率都呈降低趨勢(shì)。而體系原始的 pH約為6.2。
[0064]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù) 人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，本發(fā)明 要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)、說(shuō)明書(shū)及其等效物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，其特征在于包括如下步 驟： (1) 制備藻藍(lán)蛋白粗提取液:用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻2~4次，洗滌干凈的螺旋藻經(jīng) 壓力為200~400kg/cm2的高壓細(xì)胞勻漿機(jī)破碎5~6min，超聲波處理12-15min，將破碎的螺 旋藻懸濁液于離心機(jī)中離心10~18min，離心收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4~5 °(：下儲(chǔ)存； (2) 雙水相萃?。合虿襟E（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸鉀鈉，徹 底攪拌1~2h，靜置過(guò)夜使兩相分開(kāi)，收集上相； (3) 采用膜孔徑為3~5um的濾膜對(duì)藻藍(lán)蛋白粗提液進(jìn)行粗過(guò)濾，處理時(shí)間為20~26小 時(shí)，再于-13~_8°C冷凍干燥8~15小時(shí)，制得雙水相萃取藻藍(lán)蛋白。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，其特征 在于:在步驟(1)中，所述離心速率為800~1000r/min。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，其特征 在于:在步驟(2)中，所述葡聚糖質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的9~13%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，其特征 在于:在步驟(2)中，所述酒石酸鉀鈉為雙水相體系總質(zhì)量的17~25%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，其特征 在于:在步驟(2)中，含藻藍(lán)蛋白的粗提液的質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的65~70%。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述葡聚糖和酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，其特征 在于:在步驟(3)中，所述濾膜的流速為150mL/min，滲透通量為58.5L/(h · m2)。
【文檔編號(hào)】C07K1/14GK105820237SQ201610239713
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年4月18日
【發(fā)明人】高志剛, 汪世軍, 王峰
【申請(qǐng)人】東臺(tái)市賜百年生物工程有限公司