專利名稱：注射用人膠原制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)用生物材料，將人膠原注射進(jìn)入皮膚以填充皮膚小型凹陷性缺陷，達(dá)到美容或整形效果。
目前國際上用以填充小型凹陷性皮膚缺陷(如疤痕、皺紋等)的生物材料為注射用牛膠原，效果較好。但有學(xué)者認(rèn)為，牛膠原雖然免疫原性低，仍可在部分使用者體內(nèi)引起對異種系蛋白的免疫反應(yīng)。
本發(fā)明的目的是，克服牛膠原在應(yīng)用中的弊端，制備出純度高、能夠通過注射進(jìn)入皮膚的人膠原注射劑，用于美容或整形，填充小型凹陷性皮膚缺陷，獲得更好的美容或整形效果。
取健康人組織(如人的皮膚、引產(chǎn)胎兒組織、健康產(chǎn)婦胎盤等)，經(jīng)檢驗(yàn)確認(rèn)無肝炎、艾滋病及其它傳染病，無遺傳性膠原病。冷凍保存過夜。次日精選色澤正常的部分，噴淋沖洗清除血液污染至組織呈乳白色。清洗液為含酶抑制劑的磷酸緩沖液。剔除或刮去附著的脂肪結(jié)締組織。硬組織經(jīng)粉碎、脫鈣后提取膠原蛋白。軟組織剪碎后丙酮脫脂提取膠原蛋白。丙酮浸泡過夜，次日更換丙酮2次，再用清洗液清洗5次。將脫脂(或脫鈣)的組織置于0.5mol/L(PH2.5)乙酸中并打碎，加胃蛋白酶(0.1-2.0g/100g濕組織)，消化1-3天。離心30分鐘，14，000rpm，留沉淀(沉淀A)。上清加10ml/L NaOH至pH至7.2-7.8，棄沉淀，上清對0.02mol/L Na HPO透析4-6天，離心，棄上清，留沉淀(膠原A)。
沉淀A用5倍體積10% NaCL洗8次，再用5倍體積的0.067mol/L Na HPO反復(fù)提取3次，離心去除清洗液，沉淀用5倍體積的檸檬酸緩沖液(pH3.7，0.15mol/L)提取4次，離心去上清，留沉淀(膠原B)。
將膠原A與膠原B按不同比例(1∶0，4∶1，3∶1，2∶1…0∶1)混勻，對PBS透析至平衡(pH7.0-7.4)。
加入生長激素(0.01-0.2u/ml)和利多卡因(0.1-0.5%)，分散化使之通過6號針頭，安全檢驗(yàn)合格后用于臨床。
本生物材料經(jīng)過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)其存留率、通過熱源實(shí)驗(yàn)、安全實(shí)驗(yàn)、皮膚刺激實(shí)驗(yàn)。大鼠背部皮下注射，每只大鼠注射6個(gè)注射點(diǎn)，雙側(cè)，每側(cè)3個(gè)注射點(diǎn)，于注射后1個(gè)月至12個(gè)月宰殺大鼠進(jìn)行存留率、大體解剖、組織學(xué)及組織化學(xué)檢查，存留率為100%，組織相容好，無包膜形成，無炎癥反應(yīng)。免疫學(xué)檢驗(yàn)表明血清中無抗膠原抗體存在。
本生物材料經(jīng)政府有關(guān)部門許可在市級以上醫(yī)院進(jìn)行了臨床驗(yàn)證，共觀察皮膚缺陷受術(shù)者123例，男性 17例，女性 106例。最小年齡19歲，最大年齡59歲。每位求治者在皺紋或淺疤痕處，根據(jù)缺陷情況注射0.2-1.0ml。經(jīng)30天后再在同一部位注射第2次，再經(jīng)30天判斷效果。部分病例追蹤到術(shù)后3-10個(gè)月。要求注射在真皮乳頭層內(nèi)，注射越淺越好，注射到皮膚發(fā)白隆起為宜。結(jié)果表明，123例受術(shù)者優(yōu)53例，占43%;良58例，占47.2%;差12例，占9.8%。優(yōu)良率90.2%。(優(yōu)指完全達(dá)到填平效果，看不到凹陷;良指達(dá)到滿意填平效果，尚能看出凹陷;差指未達(dá)到填平效果，仍然明顯可見凹陷)。123例受術(shù)者中無全身不良反應(yīng)。有局部反應(yīng)者20例，發(fā)生率為16.2%，其中注射膠原部位稍有“皮下結(jié)節(jié)”者18例，皮下出血者2例。此種局部反應(yīng)較輕微，不影響繼續(xù)注射。所謂“皮下結(jié)節(jié)”實(shí)為注射不均勻所致，注射技術(shù)改進(jìn)可使之避免。一年多的臨床驗(yàn)證表明，注射用人膠原是一種安全、具有明顯效果的新型生物材料，用以填充皮膚小型凹陷性缺陷，可以達(dá)到美容或整形效果，受到受術(shù)者歡迎，得到臨床醫(yī)生認(rèn)可。
本生物材料用于填充皮膚小型凹陷性缺陷，無需手術(shù)，無痛苦，僅通過注射即可達(dá)到矯正效果。由于本品為生物材料，不會(huì)引起由于非生物材料(如硅膠)植入所導(dǎo)致的排斥反應(yīng)及整形錯(cuò)位。本材料為人體蛋白，不引起受術(shù)者產(chǎn)生免疫反應(yīng)，存留時(shí)間長，矯正效果優(yōu)于牛膠原同類產(chǎn)品。膠原是細(xì)胞外間質(zhì)主要組成部分，是細(xì)胞生長的良好環(huán)境，因此，注入皮膚后，可誘導(dǎo)受術(shù)者自身細(xì)胞向移植物內(nèi)生長并合成自身膠原，隨著自身毛細(xì)血管的長入，最終達(dá)到長期矯形效果。
權(quán)利要求
1.用一種含有由各種人組織提取的人膠原的復(fù)合物作醫(yī)用生物材料，其特征是所說的復(fù)合物包括膠原A、膠原B、生長激素和利多卡因，用以填充皮膚小型凹陷性缺陷，以實(shí)現(xiàn)美容或整形。
2.按照權(quán)利要求1.所述的復(fù)合物的應(yīng)用，其特征是膠原A與膠原B按不同比例(1∶0，4∶1，3∶1，2∶1…0∶1)混勻，對PBS透析至平衡(pH7.0-7.4)。
3.按照權(quán)利要求1.所述的復(fù)合物的應(yīng)用，其特征是加入生長激素(0.01-0.2u/ml)和利多卡因(0.1-0.5%)，分散化，使之通過6號注射針頭。
4.按照權(quán)利要求1-3所述的復(fù)合物的應(yīng)用，其特征是用注射器將含有人膠原的復(fù)合物直接注射進(jìn)人體相應(yīng)部位。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有人膠原的醫(yī)用生物材料，它是由膠原A、膠原B、生長激素和利多卡因等組成，膠原A與膠原B按不同比例混勻，對PBS透析至平衡，加入生長激素和利多卡因，分散化，使之通過6號針頭，使用時(shí)，用注射器將含有人膠原的復(fù)合物直接注射進(jìn)人體相應(yīng)部位，其美容或整形效果明顯優(yōu)于目前使用的牛膠原。
文檔編號C09H1/04GK1106439SQ9410641
公開日1995年8月9日 申請日期1994年6月21日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月21日
發(fā)明者劉秉慈 申請人:中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院