一種載釓聚合物囊泡及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種載釓聚合物囊泡及其制備方法和應(yīng)用，該載釓聚合物囊泡包括聚合物囊泡以及受所述聚合物囊泡承載的金屬釓，聚合物囊泡由兩種聚合物共同自組裝成具有不對稱膜的結(jié)構(gòu)，兩種聚合物分別為FA-PGAx-b-Pβz和ε-PGAy-b-Pβz，金屬釓絡(luò)合在ε上；其制備方法為：先分別合成兩種聚合物，然后使金屬釓絡(luò)合在ε上并最終生成載釓聚合物囊泡；該載釓聚合物囊泡結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，具有很好的生物相容性和生物降解性，對癌細(xì)胞具有良好的靶向性，不僅可以作為用于靶向識別癌細(xì)胞的核磁共振顯影劑，還可以包裹親水或疏水藥物，對靶向部位進(jìn)行可控給藥。
【專利說明】一種載釓聚合物囊泡及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于高分子材料領(lǐng)域，涉及一種聚合物囊泡及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，藥物載體得到了廣泛的研究。其中，關(guān)于兩親性嵌段聚合物在水溶液里進(jìn)行自組裝形成囊泡或膠束作為藥物載體的研究備受廣大研究人員的關(guān)注。兩親性嵌段聚合物在水中可以進(jìn)行自組裝形成囊泡雙層膜，但目前廣泛應(yīng)用的脂質(zhì)體類囊泡的穩(wěn)定性較差，容易破裂并產(chǎn)生囊泡膜間融合。而聚合物囊泡能顯著提高囊泡的機(jī)械性能，由聚碳酸酯類和多肽類聚合物組成的可生物降解聚合物囊泡更是研究的熱點(diǎn)。
[0003]為了提高藥物載體的靶向性，載體表面往往接上一些靶向基團(tuán)。葉酸(Folicacid, FA)本質(zhì)是一種小分子維生素，又稱喋酞谷氨酸，它既參與細(xì)胞DNA和RNA前提的嘧啶和嘌呤核苷酸的合成，又參與蛋氨酸的合成。葉酸受體的研究已經(jīng)表明，人類許多上皮來源的腫瘤如卵巢癌、宮頸癌、乳腺癌、鼻咽癌、肝癌等腫瘤細(xì)胞表面的葉酸受體的活性和數(shù)量顯著高于正常組織細(xì)胞，呈過度表達(dá)。而正常的動物細(xì)胞缺乏葉酸生物合成的關(guān)鍵酶，只能依賴細(xì)胞表面的葉酸特異結(jié)合蛋白(即葉酸受體，F(xiàn)olate receptors, FR)主動攝取外源性葉酸來維持正常的生命活動，因而表達(dá)量極低。因此，根據(jù)正常細(xì)胞與癌細(xì)胞表面葉酸受體的表達(dá)差異，可以制備出帶有葉酸靶向基團(tuán)的聚合物囊泡，以提高聚合物囊泡對癌細(xì)胞的識別能力。
[0004]1973年磁共振 成像(MRI)技術(shù)首次應(yīng)用于人體診斷，經(jīng)過四十多年的發(fā)展，這一技術(shù)已在生物、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域得到迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用。與X-CT、超聲波成像相比，MRI技術(shù)具有諸多突出優(yōu)點(diǎn):無電離輻射；可實(shí)現(xiàn)多核多參數(shù)成像；可施行任意方位層面的掃描；較高的空間分辨率和對比度；無骨質(zhì)偽影；能反映被檢測組織水質(zhì)子周圍環(huán)境并獲取有關(guān)生理生化信息；可提高對心臟、大血管形態(tài)和功能的診斷等。所以，MRI技術(shù)已成為當(dāng)今臨床診斷中最有力的檢測手段之一。此技術(shù)已廣泛應(yīng)用于人體的頭部、神經(jīng)系統(tǒng)、腹部及血管的造影，對檢測組織壞死、局部缺血和各種惡性病變有效，特別用于腫瘤的早期診斷，可使治療成功率有很大程度的提高。臨床上，為確保診斷的準(zhǔn)確性，45%以上的MRI檢查需要使用造影劑提高圖像對比度，其中30%以上使用含釓造影劑。然而，經(jīng)過多次臨床研究發(fā)現(xiàn)，游離的金屬釓離子具有很強(qiáng)的毒副作用，會導(dǎo)致腎臟嚴(yán)重纖維化，臨床上目前使用的釓造影劑都是經(jīng)過絡(luò)合劑作用后制備而成的，例如DTPA-Gd、DOTA-Gd、釓雙銨(Gadodiamide)、?L噴酸葡胺(Gadopcntetate dimeglumine)、禮貝葡胺(Gadobenate dimeglemine)、禮特醇(Gadoteridol)、禮特酸葡胺(Gadoterate meglumine)等,但是這些臨床上使用的禮造影劑仍存在靈敏度不高、生物相容性差、不易降解、載藥率低和成像效果差等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，主要目的在于提供一種無毒副作用、載藥率高、成像效果好、容易降解并且生物相容性好的載釓聚合物囊泡。[0006]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種上述載釓聚合物囊泡的制備方法。
[0007]本發(fā)明的第三個目的在于提供上述載釓聚合物囊泡的用途。
[0008]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的解決方案是:
[0009]一種載釓聚合物囊泡，包括由兩種聚合物共同自組裝成具有不對稱膜結(jié)構(gòu)的聚合物囊泡以及受聚合物囊泡承載的金屬釓，兩種聚合物分別為FA-PGAx-b-P β ζ和e-PGAy-b_Pi3z，F(xiàn)A為葉酸基團(tuán)，χ和y為PGA的聚合度且x>y，ε為用于絡(luò)合金屬釓的絡(luò)合劑，Ρβζ為疏水鏈段，F(xiàn)A-PGAx-b-Pi3z中的PGAxB成聚合物囊泡的外部暈層，ε -PGAy-b-P β z中的PGAy形成聚合物囊泡的內(nèi)部暈層，兩種聚合物中的P β ζ形成聚合物囊泡的膜層。
[0010]上述疏水鏈段為聚己內(nèi)酯、聚三甲基碳酸酯和聚乳酸中的一種；或者，絡(luò)合劑為二乙基三胺五乙酸和1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷_1，4，7，10-四羧酸中的一種；或者聚合物囊泡與金屬禮的摩爾比為1: (0.1~2)。上述聚合物囊泡的粒徑為60~350nm ;或者載禮聚合物囊泡的粒徑為80~400nm。
[0011]一種制備上述載釓聚合物囊泡的方法，包括如下步驟:
[0012](I)、P β z-NH-Boc 的合成步驟:
[0013]將由Boc保護(hù)的乙醇胺、β和催化劑以摩爾比為1: (20~100): (0.005~0.05)反應(yīng)12~48小時，處理后得到P β z-NH-Boc ；
[0014](2)、P β ζ-ΝΗ2 的合成步驟:
[0015]將步驟(1)所得的Ρβ z-NH-Boc溶解在有機(jī)溶劑中，加入過量的三氟乙酸，室溫下反應(yīng)2~24小時，處理后得到P β Ζ-ΝΗ2 ；
[0016](3)、PBLGx-b-P β ζ 和 PBLGy_b_P β z 的合成步驟:
[0017]將步驟⑵所得的P β ζ-ΝΗ2和谷氨酸的NCA單體按照摩爾比為1: χ的比例溶解在無水DMF中，室溫下反應(yīng)12~48小時，處理后得到PBLGx-b-P β ζ ；
[0018]將步驟⑵所得的P β ζ-ΝΗ2和谷氨酸的NCA單體按照摩爾比為1: y的比例溶解在無水DMF中，室溫下反應(yīng)12~48小時，處理后得到PBLGy-b-P β ζ ；
[0019](4)、FA-PBLGx-b-P β z 和 ε -PBLGy_b_P β ζ 的合成步驟:
[0020]將步驟(3)所得PBLGx-b_P β z和FA溶解在無水DMSO中，加入二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫下攪拌5~48小時，處理后得到FA-PBLGx-b-P β ζ。
[0021]將步驟(3)所得PBLGy-b_P β ζ和ε溶解在無水DMSO中，加入二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫下攪拌5~48小時，處理后得到ε -PBLGy-b-P β ζ。
[0022](5)、FA-PGAx-b-P β ζ 和 ε -PGAy_b_P β ζ 的合成步驟:
[0023]將步驟⑷所得FA-PBLGx-b-P β ζ溶解在33 %的HBr/CH3C00H溶液中，反應(yīng)2~12小時，處理后得到FA-PGAx-b-P β ζ ；
[0024]將步驟(4)所得ε -PBLGy-b-P β ζ溶解在33 %的HBr/CH3C00H溶液中，反應(yīng)2~12小時，處理后得到ε -PGAy-b-P β ζ ；
[0025](6)、載釓聚合物囊泡的制備步驟:
[0026]按照I ~30mg/ml 的濃度將步驟(5)得到的 FA-PGAx_b_P β z 和 ε -PGAy_b_P β z 一起溶解在DMF中，避光攪拌并以5~50d/min的速度滴加兩倍于DMF體積的釓離子水溶液，透析除去DMF，得到載釓聚合物囊泡溶液；[0027]β為己內(nèi)酯、三甲基碳酸酯和乳酸中的一種，ζ為β的聚合度。
[0028]在上述步驟(1)中，ζ為30~60 ;優(yōu)選地，當(dāng)β為己內(nèi)酯時，ζ為30或60 ;當(dāng)β為三甲基碳酸酯，ζ為30 ;當(dāng)β為乳酸時，ζ為50。步驟(1)中的催化劑為辛酸亞錫；或者步驟(2)中的有機(jī)溶劑為二氯甲烷。
[0029]在上述步驟(3)中，χ為50~100，y為10~50 ;優(yōu)選地，當(dāng)β為己內(nèi)酯時，χ為70或100，y為20或30 ;當(dāng)β為三甲基碳酸酯，χ為80，y為25 ;當(dāng)β為乳酸時，χ為75，I 為 15。
[0030]上述載釓聚合物囊泡在制備用于治療癌癥的藥物的載體或藥物組合物中得以應(yīng)用。
[0031]上述載釓聚合物囊泡在制備用于靶向識別癌細(xì)胞的核磁共振顯影劑中得以應(yīng)用。
[0032]由于采用上述方案，本發(fā)明的有益效果是:
[0033]第一，因?yàn)槠渲幸环N聚合物上帶有葉酸靶向基團(tuán)，當(dāng)多個聚合物形成載釓聚合物囊泡時，葉酸祀向基團(tuán)位于囊泡外部暈層上，而葉酸祀向基團(tuán)對癌細(xì)胞表面葉酸受體具有較高的親和力，所以載禮聚合物囊泡能夠富集在富含癌細(xì)胞的腫瘤部位；當(dāng)載禮聚合物囊泡內(nèi)填充有治療癌癥的藥物時，其作為藥物載體具有良好的癌細(xì)胞靶向性，可以對癌細(xì)胞進(jìn)行靶向給藥，在葉酸靶向基團(tuán)與癌細(xì)胞表面的葉酸受體進(jìn)行特異性結(jié)合后，能夠大大提聞藥物進(jìn)入癌細(xì)胞的速率，從而提聞了對癌細(xì)胞的抑制或殺滅效果。
[0034]第二，因?yàn)楫?dāng)多個聚合物形成載釓聚合物囊泡時，該載釓聚合物囊泡內(nèi)部暈層的末端有絡(luò)合劑，該絡(luò)合 劑與金屬釓相絡(luò)合，所以該載釓聚合物囊泡在臨床上可以同時作為核磁共振的造影劑使用，并且比當(dāng)前臨床上使用的DTPA-Gd的靈敏度更高。
[0035]第三，當(dāng)載釓聚合物囊泡包裹親水抗癌藥DOX.HCl時，載釓聚合物囊泡暈層親水鏈段側(cè)鏈羧基與DOX -HCl有靜電作用，使其載藥率可達(dá)40%~60%，而當(dāng)前技術(shù)的聚合物囊泡對DOX.HCl的載藥率僅有20%~30%，因此載藥率約提高了一倍。
[0036]第四，載釓聚合物囊泡使用的聚合物為可降解多肽和聚碳酸酯類組成的兩嵌段聚合物，在蛋白酶或者脂肪酶作用下易發(fā)生生物降解，同時由于囊泡的包載作用，大大降低了金屬釓對人體的毒副作用，提高了用藥和顯影的安全性。
[0037]第五，載釓聚合物囊泡具有兩種聚合物，這兩種聚合物的鏈段比例不同，因此，聚合物的自組裝過程使得載釓聚合物囊泡成為不對稱膜的結(jié)構(gòu)，方便對該載釓聚合物囊泡內(nèi)外暈層進(jìn)行功能化設(shè)計。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0038]圖1為本發(fā)明實(shí)施例一所得的載釓聚合物混合囊泡的DLS結(jié)果圖。
[0039]圖2為本發(fā)明實(shí)施例一所得的載釓聚合物混合囊泡的TEM結(jié)果圖。
[0040]圖3為本發(fā)明實(shí)施例一所得的載釓聚合物混合囊泡的弛豫率A的測試結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0041]以下結(jié)合附圖所示實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0042]實(shí)施例一
[0043]本實(shí)施例提供了一種載釓聚合物囊泡，由聚合物囊泡以及受該聚合物囊泡承載的金屬釓組成。
[0044]聚合物囊泡由兩種聚合物共同自組裝而成，具有不對稱的膜結(jié)構(gòu)。這兩種聚合物分別為FA-PGAx-b-P β z和ε _PGAy_b_P β z。其中，F(xiàn)A為葉酸基團(tuán)，作為癌細(xì)胞表面葉酸受體的祀向基團(tuán)而起作用。PGA表示聚谷氨酸(Polyglutamic Acid,PGA),其作為親水鏈段而起作用；χ和y為PGA的聚合度并且χ > y, χ可以為50~100, y可以為10~50。ε為用于絡(luò)合金屬禮的絡(luò)合劑，可以為二乙基三胺五乙酸(Diethylene Triamine PentacetateAcid，DTPA)和1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四羧酸(DOTA)中的任意一種。Ρβζ為疏水鏈段，ζ表示該疏水鏈段的聚合度，ζ可以為30~60。當(dāng)多個聚合物形成聚合物囊泡時，聚合物FA-PGAx-b-P β z中的PGAx形成聚合物囊泡的外部暈層，聚合物ε -PGAy_b_P β ζ中的PGAy形成聚合物囊泡的內(nèi)部暈層，兩種聚合物中的Ρβ ζ形成聚合物囊泡的膜層。
[0045]金屬釓絡(luò)合在ε上。在載釓聚合物囊泡中，聚合物囊泡與金屬釓的摩爾比為1: (0.1~2)，本實(shí)施例中為1:0.5。聚合物囊泡的粒徑為60~350nm，載釓聚合物囊泡的粒徑為80~400nm。
[0046]本實(shí)施例中β可以為己內(nèi)酯(Caprolactone,CL) ,Ρβ ζ(即PCLz)的聚合度ζ優(yōu)選為30。在聚合物FA-PGAx-b-P β z中，PGAx的聚合度χ優(yōu)選為70 ;在聚合物ε -PGAy_b_P β ζ中，PGAy的聚合度y優(yōu)選為20。絡(luò)合劑ε優(yōu)選為DTPA。此時，兩種聚合物的結(jié)構(gòu)式分別為:FA-PGA70-b-PCL30 和 DTPA-PGA2(l-b-PCL3。。
[0047]本實(shí)施例中的載釓聚合物囊泡的制備方法包括如下步驟:
[0048](I)Pcl30-NH-Boc 的合成步驟； [0049]將干燥后的叔丁基(Boc)保護(hù)的乙醇胺、己內(nèi)酯單體(CL)和催化劑辛酸亞錫按照摩爾比為1: 30: 0.005的比例加入到圓底燒瓶中，于110°C下反應(yīng)48小時，然后加入溶劑二氯甲烷溶解，在甲醇中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色粉末狀聚合物PCL3tl-NH-B0c。
[0050](2)大分子引發(fā)劑PCL3tl-NH2的合成步驟；
[0051]將步驟(1)所得聚合物PCL3tl-NH-B0c溶解在有機(jī)溶劑二氯甲烷當(dāng)中，加入過量三氟乙酸(TFA)，于室溫下攪拌反應(yīng)12小時，旋蒸濃縮，甲醇中沉淀，抽濾，真空干燥，重復(fù)操作三次，得到白色粉末狀大分子引發(fā)劑pcl3(1-nh2。
[0052](3)兩種兩嵌段聚合物PBLG7Q-b-PCL3Q和PBLG2(|-b-PCL3(l的合成步驟；
[0053]將步驟(2)所得大分子引發(fā)劑PCL3tl-NH2和谷氨酸的NCA單體分別按照摩爾比為I: 70的比例溶解在無水DMF中，于室溫下密封攪拌反應(yīng)48小時，在乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物PBLG7(l-b-PCL3(l。b表示block，即鏈段。
[0054]將步驟⑵所得大分子引發(fā)劑PCL3tl-NH2和谷氨酸的NCA單體分別按照摩爾比為I: 20的比例溶解在無水DMF中，于室溫下密封攪拌反應(yīng)48小時，在乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物PBLG2Q-b-PCL3Q。
[0055](4) FA-PBLG70-b-PCL30 和 DTPA-PBLG2Q-b-PCL3(l 的合成步驟；
[0056]將步驟(3)所得聚合物PBLG7Q-b-PCL3Q和葉酸(FA)溶解在無水DMSO中，加入一定量的二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，室溫下攪拌24小時，旋蒸濃縮，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到黃色聚合物FA-PBLG7(l-b-PCL3(l。
[0057]將步驟(3)所得聚合物PBLG2Q-b-PCL3Q與DTPA溶解在無水DMSO中，加入一定量的二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，室溫下攪拌24小時，旋蒸，沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物DTPA-PBLG2Q-b-PCL3Q。
[0058](5)兩親性聚合物 FA-PGA7Q-b-PCL3Q 和 DTPA-PGA2Q-b-PCL3(l 的合成步驟；
[0059]將步驟(4)所得FA-PBLG7Q-b-PCL3Q溶解在33 % HBr/CH3C00H溶液中，攪拌反應(yīng)5小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到粉末狀聚合物FA-PGA7(l-b-PCL3(l。
[0060]將步驟(4)所得DTPA-PBLG2Q-b-PCL3Q溶解在33 % HBr/CH3C00H溶液中，攪拌反應(yīng)5小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到粉末狀聚合物DTPA-PGA2(l-b-PCL3(l。
[0061](6)載釓聚合物囊泡的制備步驟；
[0062]按照3mg/ml的濃度將步驟(5)得到的聚合物FA-PGA7(|-b-PCL3(l和DTPA-PGA2(l-b-PCL3(l —起溶解在DMF中，在避光劇烈攪拌的條件下，以10d/min的速度滴加兩倍于DMF體積的釓離子的水溶液，避光透析除去有機(jī)溶劑DMF，得到淺藍(lán)色溶液即為載釓聚合物囊泡溶液。 [0063]本實(shí)施例所得的載釓聚合物囊泡溶液的DLS結(jié)果如圖1所示。該載釓聚合物囊泡溶液的TME結(jié)果如圖2所示。該載釓聚合物囊泡溶液的弛豫率的測試結(jié)果如圖3所示。
[0064]本實(shí)施例中的載釓聚合物囊泡溶液能夠用來制備用于靶向識別癌細(xì)胞的核磁共振顯影劑，還能用來制備用于治療癌癥的藥物的載體或藥物組合物。
[0065]本實(shí)施例中的載釓聚合物囊泡在蛋白酶或脂肪酶的作用下容易發(fā)生降解，因此生物相容性好，對人的機(jī)體不會產(chǎn)生 毒理作用。
[0066]實(shí)施例二
[0067]在實(shí)施例一中，載釓聚合物囊泡中的兩種聚合物為FA-PGA7(|-b-PCL3(l和DTPA-PGA20-b-PCL30O實(shí)際上，載釓聚合物囊泡中的兩親性嵌段聚合物還可以為FA-PGA100-b-PCL60 和 DTPA-PGA3(l-b-PCL6(l。此時，F(xiàn)A-PGA1(l(l-b-PCL6(l 中 GA 的聚合度 χ 為 100，CL的聚合度ζ是60，DTPA-PGA30-b-PCL60中GA的聚合度χ為30，CL的聚合度ζ是60。
[0068]本實(shí)施例中的載釓聚合物囊泡的制備方法包括如下步驟:
[0069](I)PCL60-NH-Boc 的合成步驟；
[0070]將干燥后的叔丁基保護(hù)的乙醇胺、己內(nèi)酯單體(CL)和催化劑辛酸亞錫按照摩爾比為1: 60: 0.005的比例加入到圓底燒瓶中，于110°C下反應(yīng)48小時，加入溶劑二氯甲烷溶解，甲醇中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色粉末狀聚合物PCL6tl-NH-B0c。
[0071 ] (2)大分子引發(fā)劑PCL6tl-NH2的合成步驟；
[0072]將步驟(1)所得聚合物PCL6tl-NH-B0c溶解在二氯甲烷當(dāng)中，加入過量三氟乙酸，室溫下攪拌反應(yīng)8小時，旋蒸濃縮，甲醇中沉淀，抽濾，真空干燥，重復(fù)操作三次，得到白色粉末狀大分子引發(fā)劑PCL6tl-NH2。
[0073](3)兩種兩嵌段聚合物PBLG1Q(|-b-PCL6Q和PBLG3(|-b-PCL6Q的合成步驟；
[0074]將步驟(2)所得大分子引發(fā)劑PCL6tl-NH2和谷氨酸的NCA單體分別按照摩爾比為I: 100的比例溶解在無水DMF中，室溫下密封攪拌反應(yīng)48小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物PBLG1Q(l-b-PCL6Q。
[0075]將步驟(2)所得大分子引發(fā)劑PCL6tl-NH2和谷氨酸的NCA單體分別按照摩爾比為1: 30的比例溶解在無水DMF中，室溫下密封攪拌反應(yīng)48小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物PBLG3Q-b-PCL6Q。
[0076](4) FA-PBLG100-b-PCL60 和 DTPA-PBLG3(l-b-PCL6。的合成步驟；[0077]將步驟(3)所得聚合物PBLGltltTb-PCL6tl和葉酸溶解在無水DMSO中，加入一定量的DCC和NHS，室溫下攪拌24小時，旋蒸濃縮，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到黃色聚合物FA-PBLG1(l(l-b-PCL6(l。
[0078]將步驟(3)所得聚合物PBLG3Q-b-PCL6Q與DTPA溶解在無水DMSO中，加入一定量的二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，室溫下攪拌24小時，旋蒸，沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物DTPA-PBLG3Q-b-PCL6Q。
[0079](5)兩親性聚合物 FA-PGA1Q(|-b-PCL6Q 和 DTPA-PGA3(|-b-PCL6(l 的合成步驟；
[0080]將步驟(4)所得聚合物FA-PBLG1Q(l-b-PCL6Q溶解在33 % HBr/CH3C00H溶液中，攪拌反應(yīng)5小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到粉末狀聚合物FA-PGAltltTb-PCL6tl。
[0081 ] 將步驟(4)所得聚合物DTPA-PBLG3Q-b-PCL6Q溶解在33 % HBr/CH3C00H溶液中，攪拌反應(yīng)5小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到粉末狀聚合物DTPA-PGA3(l-b-PCL6Q。
[0082](6)載釓聚合物囊泡的制備步驟；
[0083]按照3mg/ml的濃度將步驟(5)得到的聚合物FA-PGA1(l(|-b-PCL6(l和DTPA-PGA3(l-b-PCL6(l —起溶解在DMF中，在避光劇烈攪拌的條件下，以10d/min的速度滴加兩倍于DMF體積的釓離子的水溶液，避光透析除去有機(jī)溶劑，得到淺藍(lán)色溶液即為載釓聚合物囊泡溶液。
[0084]實(shí)施例二所得載釓聚合物囊泡和實(shí)施例一的在用途上無顯著區(qū)別，只是聚合度不一樣，得到的載釓聚 合物囊泡的粒徑會有差異，可以在不同的情況下選擇適用。
[0085]實(shí)施例三
[0086]與實(shí)施例一相比，在載釓聚合物囊泡的聚合物中，Ρβζ還可以為聚三甲基碳酸酯(PTMC)。當(dāng)多個聚合物形成聚合物囊泡時，這些聚合物的PTMC形成聚合物囊泡的膜層。
[0087]本實(shí)施例中的載釓聚合物囊泡的制備方法包括如下步驟:
[0088](I)PTMC3O-NH-Boc 的合成步驟；
[0089]將干燥后的叔丁基保護(hù)的乙醇胺、TMC單體和催化劑辛酸亞錫按照摩爾比為1:30: 0.005的比例加入到圓底燒瓶中，110°C下反應(yīng)40小時，加入溶劑二氯甲烷溶解，甲醇中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色粉末狀聚合物PTMC3tl-NH-B0c。
[0090](2)大分子引發(fā)劑PTMC3tl-NH2的合成步驟；
[0091]將步驟(1)所得聚合物PTMC3c1-NH-Boc溶解在二氯甲烷中，加入過量三氟乙酸，室溫下攪拌反應(yīng)8小時，旋蒸濃縮，甲醇中沉淀，抽濾，真空干燥，重復(fù)操作三次，得到白色粉末狀大分子引發(fā)劑PTMC3tl-NH2。
[0092](3)兩種兩嵌段聚合物PBLG8Q-b-PTMC3Q和PBLG25-b_PTMC3(l的合成步驟；
[0093]將步驟(2)所得大分子引發(fā)劑PTMC3tl-NH2和谷氨酸的NCA單體分別按照摩爾比為1: 80的比例溶解在無水DMF中，室溫下密封攪拌反應(yīng)48小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物PBLG8Q-b-PTMC3Q。
[0094]將步驟⑵所得大分子引發(fā)劑PTMC3tl-NH2和谷氨酸的NCA單體分別按照摩爾比為I: 25的比例溶解在無水DMF中，于室溫下密封攪拌反應(yīng)48小時，在乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物PBLG25-b-PTMC3Q。
[0095](4) FA-PBLG80-b-PTMC30 和 DTPA-PBLG25-b_PTMC3(l 的合成步驟；
[0096]將步驟(3)所得聚合物PBLG8Q-b-PTMC3Q和葉酸溶解在無水DMSO中，加入一定量的DCC和NHS，室溫下攪拌24小時，旋蒸濃縮，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到黃色聚合物FA-PBLG80-b-PTMC30o
[0097]將步驟(3)所得聚合物PBLG25-b_PTMC3(l與DTPA溶解在無水DMSO中，加入一定量的二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫下攪拌24小時，旋蒸，沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物DTPA-PBLG25-b-PTMC3Q。
[0098](5)兩親性聚合物 FA-PGA8Q-b-PTMC3Q 和 DTPA-PGA25-b_PTMC3(l 的合成步驟；
[0099]將步驟(4)所得聚合物FA-PBLG8Q-b-PTMC3Q溶解在33 % HBr/CH3C00H溶液中，攪拌反應(yīng)5小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到粉末狀聚合物FA-PGA8(l-b-PTMC3(l。
[0100]將步驟(4)所得聚合物DTPA-PBLG25-b-PTMC3Q溶解在33 % HBr/CH3C00H溶液中，攪拌反應(yīng)5小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到粉末狀聚合物DTPA-PGA25-b-PTMC3(l。
[0101](6)載釓聚合物囊泡的制備步驟；
[0102]按照3mg/ml的濃度將步驟(5)得到的聚合物FA-PGA8(l-b-PTMC3(l和DTPA-PGA25-b-PTMC30 一起溶解在DMF中，在避光劇烈攪拌的條件下，以10d/min的速度滴加兩倍于DMF體積的釓離子的水溶液，避光透析除去DMF，得到淺藍(lán)色溶液即為載釓聚合物囊泡溶液。
[0103]實(shí)施例四
[0104]與實(shí)施例一相比，在載釓聚合物囊泡的聚合物中，？@2還可以為聚乳酸(PLA)。當(dāng)多個聚合物形成聚合物囊泡時，這些聚合物的PLA形成聚合物囊泡的膜層。
[0105]本實(shí)施例中的載釓聚合物囊泡的制備方法包括如下步驟: [0106](I)PLA50-NH-Boc 的合成步驟；
[0107]將干燥后的叔丁基保護(hù)的乙醇胺、乳酸單體(LA)和催化劑辛酸亞錫按照摩爾比為1: 50: 0.005的比例加入到圓底燒瓶中，125°C下反應(yīng)48小時，加入溶劑二氯甲烷溶解，甲醇中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色粉末狀聚合物PLA5tl-NH-Boc。
[0108](2)大分子引發(fā)劑PLA5tl-NH2的合成步驟；
[0109]將步驟(1)所得聚合物PLA5q-NH-Boc溶解在二氯甲烷當(dāng)中，加入過量三氟乙酸(TFA)，室溫下攪拌反應(yīng)8小時，旋蒸濃縮，甲醇中沉淀，抽濾，真空干燥，重復(fù)操作三次，得到白色粉末狀大分子引發(fā)劑pla5(1-nh2。
[0110](3)兩種兩嵌段聚合物PBLG75-b-PLA5Q和PBLG15-b_PLA5(l的合成步驟；
[0111]將步驟(2)所得大分子引發(fā)劑PLA5tl-NH2和谷氨酸的NCA單體分別按照摩爾比為1: 75的比例溶解在無水DMF中，室溫下密封攪拌反應(yīng)48小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物PBLG75-b-PLA5Q。
[0112]將步驟(2)所得大分子引發(fā)劑PLA5tl-NH2和谷氨酸的NCA單體分別按照摩爾比為I: 15的比例溶解在無水DMF中，室溫下密封攪拌反應(yīng)48小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物PBLG15-b-PLA5Q。
[0113](4) FA-PBLG75-b-PLA50 和 DTPA-PBLG15-b_PLA5。的合成步驟；
[0114]將步驟(3)所得聚合物PBLG75-b_PLA5(l和葉酸(FA)溶解在無水DMSO中，加入一定量的DCC和NHS，室溫下避光攪拌24小時，旋蒸濃縮，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到黃色聚合物 FA-PBLG75-b-PLA5。。
[0115]將步驟⑶所得聚合物PBLG15-b-PLA5(l與DTPA溶解在無水DMSO中，加入一定量的DCC和NHS，室溫下攪拌24小時，旋蒸，沉淀，抽濾，真空干燥，得到白色聚合物DTPA-PBLG15-b-PLA50O
[0116](5)兩親性聚合物 FA-PGA75-b-PLA5Q 和 DTPA-PGA15-b_PLA5(l 的合成步驟；
[0117]將步驟(4)所得聚合物FA-PBLG75-b-PLA5Q溶解在33 % HBr/CH3C00H溶液中，攪拌反應(yīng)5小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到粉末狀聚合物FA-PGA75-b-PLA5(l。
[0118]將步驟(4)所得聚合物DTPA-PBLG15-b-PLA5(l分別溶解在33 % HBr/CH3C00H溶液中，攪拌反應(yīng)5小時，乙醚中沉淀，抽濾，真空干燥，得到粉末狀聚合物DTPA-PGA15-b-PLA5Q。
[0119](6)載釓聚合物囊泡的制備步驟；
[0120]按照3mg/ml的濃度將將步驟(5)得到的聚合物FA-PGA75-b_PLA5(l和DTPA-PGA15-b-PLA50 一起溶解在DMF中，在避光劇烈攪拌的條件下，以10d/min的速度滴加兩倍于DMF體積的含一定量釓的水溶液，避光透析除去DMF，得到淺藍(lán)色溶液即為即為載釓聚合物囊泡溶液。
[0121]上述的對實(shí)施例的描述是為便于該【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員能理解和使用本發(fā)明。熟悉本領(lǐng)域技術(shù)的人員顯然可以容易地對這些實(shí)施例做出各種修改，并把在此說明的一般原理應(yīng)用到其他實(shí)施例中而不必經(jīng)過創(chuàng)造性的勞動。因此，本發(fā)明不限于上述實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的揭示，不脫離本發(fā)明范疇所做出的改進(jìn)和修改都應(yīng)該在本發(fā)明的保護(hù)范圍之 內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種載釓聚合物囊泡，其特征在于:包括由兩種聚合物共同自組裝成具有不對稱膜結(jié)構(gòu)的聚合物囊泡以及受所述聚合物囊泡承載的金屬釓，所述兩種聚合物分別為FA-PGAx-b-P β z和ε -PGAy_b_P β z，F(xiàn)A為葉酸基團(tuán)，x和y為PGA的聚合度且x > y，ε為用于絡(luò)合所述金屬釓的絡(luò)合劑，P β ζ為疏水鏈段，F(xiàn)A-PGAx-b-P β z中的PGAx形成所述聚合物囊泡的外部暈層，ε -PGAy-b-P β z中的PGAy形成所述聚合物囊泡的內(nèi)部暈層，所述兩種聚合單體中的Ρβ ζ形成所述聚合物囊泡的膜層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載釓聚合物囊泡，其特征在于:所述疏水鏈段為聚己內(nèi)酯、聚三甲基碳酸酯和聚乳酸中的一種；或者，所述絡(luò)合劑為二乙基三胺五乙酸和1，4，7，10_四氮雜環(huán)十二烷_1，4，7，10-四羧酸中的一種；或者所述聚合物囊泡與所述金屬釓的摩爾比為 1: (0.1 ~2)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載釓聚合物囊泡，其特征在于:所述聚合物囊泡的粒徑為60~350nm ;或者，所述載釓聚合物囊泡的粒徑為80~400nm ;或者，x為50~100，y為10 ~50, ζ 為 30 ~60。
4.一種制備如權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的載釓聚合物囊泡的方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)、Pβ Z-NH-Boc的合成步驟: 將由Boc保護(hù)的乙醇胺、β和催化劑以摩爾比為1: (20~100): (0.005~0.05)反應(yīng)12~48小時，處理后得到P β z-NH-Boc ； (2)、Pβ ζ-ΝΗ2的合成步驟: 將步驟(1)所得的PPz-NH-Boc溶解在有機(jī)溶劑中，加入過量的三氟乙酸，室溫下反應(yīng)2~24小時，處理后得到P β ζ-ΝΗ2 ；
(3)、PBLGx-b-Pβ ζ 和 PBLGy-b-P β ζ 的合成步驟: 將步驟(2)所得的P β ζ-ΝΗ2和谷氨酸的NCA單體按照摩爾比為1: X的比例溶解在無水DMF中，室溫下反應(yīng)12~48小時，處理后得到PBLGx-b-P β ζ ； 將步驟(2)所得的P β ζ-ΝΗ2和谷氨酸的NCA單體按照摩爾比為1: y的比例溶解在無水DMF中，室溫下反應(yīng)12~48小時，處理后得到PBLGy-b-P β ζ ；
(4)、FA-PBLGx-b-Pβ z 和 ε -PBLGy_b_P β ζ 的合成步驟: 將步驟(3)所得PBLGx-b-Pi3 z和FA溶解在無水DMSO中，加入二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫下攪拌5~48小時，處理后得到FA-PBLGx-b-P β ζ ； 將步驟(3)所得ε溶解在無水DMSO中，加入二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫下攪拌5~48小時，處理后得到ε -PBLGy-b-P β ζ ；
(5)、FA-PGAx-b-Pβ ζ 和 ε -PGAy_b_P β ζ 的合成步驟 將步驟(4)所得FA-PBLGx-b-P β ζ溶解在33 %的HBr/CH3C00H溶液中，反應(yīng)2~12小時，處理后得到FA-PGAx-b-P β ζ ； 將步驟(4)所得ε -PBLGy-b-P β ζ溶解在33 %的HBr/CH3C00H溶液中，反應(yīng)2~12小時，處理后得到ε -PGAy-b-P β ζ ； (6)、載釓聚合物囊泡的制備步驟: 按照I~30mg/ml的濃度將步驟(5)得到的FA_PGAx-b_P β z和ε -PGAy_b_P β z 一起溶解在DMF中，避光攪拌并以5~50d/min的速度滴加兩倍于DMF體積的釓離子水溶液，透析除去DMF，得到載釓聚合物囊泡溶液； β為己內(nèi)酯、三甲基碳酸酯和乳酸中的一種，ζ為β的聚合度。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備載釓聚合物囊泡的方法，其特征在于:在步驟(1)中，ζ為30~60 ; 優(yōu)選地，當(dāng)β為己內(nèi)酯時，ζ為30或60;當(dāng)β為三甲基碳酸酯，ζ為30;當(dāng)β為乳酸時，ζ為50。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備載釓聚合物囊泡的方法，其特征在于:步驟(1)中的催化劑為辛酸亞錫；或者步驟(2)中的有機(jī)溶劑為二氯甲烷。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備載釓聚合物囊泡的方法，其特征在于:在步驟(3)中，X為50~100，y為10~50 ;優(yōu)選地，當(dāng)β為己內(nèi)酯時，χ為70或100，y為20或30 ;當(dāng)β為三甲基碳酸酯，χ為80, y為25 ;當(dāng)β為乳酸時，χ為75, y為15。
8.如權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的載釓聚合物囊泡在制備用于治療癌癥的藥物的載體或藥物組合物中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的載釓聚合物囊泡在制備用于靶向識別癌細(xì)胞的核磁共振顯影劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK104013967SQ201410172409
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月25日
【發(fā)明者】杜建忠, 劉秋明 申請人:同濟(jì)大學(xué)