一種酚酸類化合物及其制備方法與藥物用途
【專利摘要】本發(fā)明屬于制藥【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明公開(kāi)了一種酚酸類化合物-迷迭香酸乙酯的制備方法與藥物用途。迷迭香酸乙酯是以風(fēng)輪菜(Clinopodium.chinense(Benth.)O.Kuntze)全草為原料，經(jīng)粉碎、醇提取、減壓回收后得到的濃縮物，用石油醚、乙酸乙酯萃取后得到乙酸乙酯提取物，再經(jīng)大孔樹(shù)脂、硅膠、MCI多次柱層析而得到。迷迭香酸乙酯具有顯著地抑制高糖、游離脂肪酸誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，改善胰島素抵抗下肝細(xì)胞糖消耗，改善脂質(zhì)代謝，抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用?？捎糜谥苽漕A(yù)防和治療糖尿病、糖尿病周圍血管病變、糖尿病性心腦血管方面并發(fā)癥、糖脂代謝紊亂、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等心腦血管疾病、肥胖以及脂肪性肝病的藥物。
【專利說(shuō)明】-種齡酸類化合物及其制備方法與藥物用途 -、【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及酷酸類化合物-迷迭香酸己醋的制備方法，并涉 及迷迭香酸己醋在制備預(yù)防和治療糖尿病、糖尿病周圍血管病變、糖尿病性也腦血管方面 并發(fā)癥、糖脂代謝奈亂、動(dòng)脈粥樣硬化、冠也病等也腦血管疾病、服胖W及脂肪性肝病的藥 物中的應(yīng)用。 二、【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是由遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的一組代謝異常綜合征，W高血糖 為特征，代謝奈亂為表現(xiàn)，與膜島素分泌密切相關(guān)。糖尿病可分為膜島素依賴型糖尿病 (Insulin D巧endent Di油etes Melli1:us，IDDM又稱1型）和非膜島素依賴型糖尿病 (Noinsulin Dependent Di油etes Melli1:us，NIDDM又稱 II 型），后者約占患者總數(shù)的 95%-99%。目前的研究認(rèn)為糖尿病引起的血管并發(fā)癥是患者致殘致死的主要原因。截止 到2011年，我國(guó)糖尿病患者高達(dá)9240萬(wàn)之多，是糖尿病患者最多的圍家。據(jù)世界衛(wèi)生組織 預(yù)測(cè)，到2030年時(shí)，我國(guó)的糖尿病患者人數(shù)有可能增加一倍，達(dá)到4230萬(wàn)，已被列為全世界 繼也血管病、腫瘤之后第3位威脅人類健康的慢性非傳染性疾病。因此，積極預(yù)防和治療糖 尿病已成為全球性的問(wèn)題。
[0003] 食物中的糖類化合物多W多糖和二糖形式存在，在體內(nèi)，多糖及二糖需多種酶水 解成單糖才能被人體吸收，a -葡萄糖巧酶是水解多糖及二糖的常見(jiàn)酶，主要分布在小腸 上皮絨毛膜上。a-葡萄糖巧酶抑制劑通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制a-葡萄糖巧酶的作用來(lái)減少糖 類的水解，延緩糖類的吸收，從而有效的降低糖尿病人餐后血糖濃度峰值，抑制餐后的高血 糖，并抑制伴隨的膜島素分泌，改善過(guò)度的膜島素反應(yīng)，使血糖控制狀態(tài)良好。因此，抑制 a -葡萄糖巧酶的活性，對(duì)于降低糖尿病患者餐后血糖具有重要意義。
[0004] 膜島素抵抗（IR)是指祀組織對(duì)膜島素的敏感性和（或）反應(yīng)性降低，表現(xiàn)為肝 臟、肌肉和脂肪等祀組織細(xì)胞對(duì)膜島素生物效應(yīng)的反應(yīng)性降低而產(chǎn)生的一系列臨床表現(xiàn)。 膜島素抵抗是多種疾病發(fā)生的共同基礎(chǔ)，特別是服胖、2型糖尿病、高血脂和高血壓等代謝 綜合征。肝臟膜島素抵抗在2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中占重要地位。服胖所致的血漿游 離肪酸（FFAs)濃度增高是引起IR和2型糖尿病重要危險(xiǎn)因素之一。高濃度FFAs損害肝 細(xì)胞膜島素信號(hào)傳導(dǎo)的磯脂醜肌醇3-激酶（P13K)途徑，使肝細(xì)胞糖異生作用相關(guān)的酶活 性改變，肝糖代謝平衡失調(diào)，肝細(xì)胞出現(xiàn)膜島素抵抗，肝糖生成增加，從而引起空腹高血糖。 因此，改善肝臟膜島素抵抗，對(duì)防治2型糖尿病及多種代謝性疾病具有重大意義。
[0005] 血管內(nèi)皮功能障礙是糖尿病血管病變發(fā)生的主要因素之一。血管內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)產(chǎn) 生多種活性物質(zhì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)理化信號(hào)產(chǎn)生應(yīng)答，產(chǎn)生多重生物學(xué)功能，從而保持血管正常張 力，維持內(nèi)皮細(xì)胞正常功能。高血糖可通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡，進(jìn)而導(dǎo)致血管 內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。另外，2型糖尿病常伴隨膜島素抵抗出現(xiàn)的循環(huán)游離脂肪酸水平升高， 或者高脂血癥患者體內(nèi)的循環(huán)游離脂肪酸含量增加，均可增加細(xì)胞的氧化應(yīng)激過(guò)程，使內(nèi) 皮細(xì)胞調(diào)亡。因此，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受有害因素的損傷，維護(hù)其正常功能對(duì)預(yù)防糖尿病慢性 血管并發(fā)癥W及動(dòng)脈粥樣硬化和冠也病等也血管疾病具有重要的意義。
[0006] 肝臟是脂肪合成、糖原合成和膽固醇代謝的重要器官，在維持機(jī)體糖脂代謝平衡 中起重要作用。當(dāng)肝臟發(fā)生膜島素抵抗時(shí)，糖脂代謝發(fā)生奈亂，后者又加重膜島素抵抗，形 成惡性循環(huán)。
[0007] 近年來(lái)隨著人們飲食中脂肪、高糖的增加，多坐少動(dòng)的工作方式等因素，致使我國(guó) 脂肪性肝病發(fā)病率越來(lái)越高，且年齡呈現(xiàn)出低齡化趨勢(shì)。脂肪性肝病包括酒精性脂肪肝病 (AFLD)和非酒精性脂肪肝?。╪onalcoholic fatty liver diseases，NAFLD)兩大類，其中， NAFLD在臨床上發(fā)病率更高。NAFLD是W彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪病變?yōu)橹饕卣?，W肝實(shí) 質(zhì)細(xì)胞脂肪膽積和脂肪變性為特征的臨床病理綜合癥。NAFLD發(fā)病過(guò)程中，首先脂肪酸在肝 臟內(nèi)W甘油H醋的形式沉積，發(fā)生脂肪變性，隨之產(chǎn)生的活性氧進(jìn)一步誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反 應(yīng)及炎癥反應(yīng)，加劇病情，誘導(dǎo)脂肪性肝炎的發(fā)生。但是，脂肪性肝病的發(fā)病機(jī)制未完全清 楚，藥物治療也不完善，因此尋找良好的預(yù)防和治療脂肪肝病的藥物尤為迫切。
[0008] 風(fēng)輪菜為唇形科風(fēng)輪菜屬植物風(fēng)輪菜（Clinopodium chinense炬enth.) 0. Kuntze)的全草。風(fēng)輪菜微苦、澀，涼。歸肝經(jīng)。風(fēng)輪菜屬植物具有止血活血、抗炎、降 血糖、保護(hù)血管內(nèi)皮、收縮子宮、抗菌等廣泛的藥理活性，極具藥用價(jià)值。迷迭香酸己醋 Crosmarinic acid et的1 ester，RAE)是風(fēng)輪菜的一個(gè)重要活性成分。但是，尚未有迷迭香 酸己醋在改善高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡、減輕游離脂肪酸誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡、 改善膜島素抵抗下肝細(xì)胞糖消耗、抑制油酸所致的肝細(xì)胞脂肪堆積和調(diào)控餐后血糖活性報(bào) 道。 H、
【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明包括兩部分內(nèi)容，第一部分；迷迭香酸己醋的制備方法；第二部分；迷迭香 酸己醋在改善游離脂肪酸所致的膜島素抵抗、降血糖及保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞作用，及其在預(yù) 防和治療糖尿病、糖尿病周圍血管病變、糖尿病性也腦血管方面并發(fā)癥、糖脂代謝奈亂、動(dòng) 脈粥樣硬化、冠也病等也腦血管疾病、服胖W及脂肪性肝病的藥物中的應(yīng)用。
[0010] 1、迷迭香酸己醋的提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定
[0011] (1)將風(fēng)輪菜全草干燥，粉碎；
[0012] (2)用己醇及其含水物、甲醇及其含水物或丙醇及其含水物回流提取，或浸潰提 取，提取液減壓濃縮；
[001引 做將步驟（2)中的濃縮的提取物依次用石油離、己酸己醋萃取3?4次；
[0014] (4)將己酸己醋萃取液減壓濃縮至干，進(jìn)行大孔樹(shù)脂柱層析，依次用蒸觸水、60%、 95 %己醇水洗脫，收集60 %己醇水洗脫液，減壓濃縮至干；
[001引 妨步驟（4)中濃縮的提取物，進(jìn)行MCI柱層析，50%甲醇水洗脫，收集洗脫液，減 壓濃縮至干，得到迷迭香酸己醋粗品；
[0016] (6)將步驟（5)中粗品進(jìn)行娃膠柱層析，二氯甲焼：甲醇（20 : 1)洗脫，收集洗脫 液，濃縮干燥，得到迷迭香酸己醋。
[0017] 上述制備方法的條件范圍為：步驟（2)中己醇或甲醇或丙醇的濃度為30?90%， 提取方法為回流、浸潰；步驟（4)中的大孔樹(shù)脂可選用DlOl和CAD-40大孔樹(shù)脂中的任意 一種，用于洗脫的醇溶液也可W為甲醇的水溶液，收集50%甲醇水洗脫液；步驟巧）也可 W用二氯甲焼：丙麗（3?5 : I)、二氯甲焼：己酸己醋（I?3 : I)、氯仿：甲醇（20? 30 : 1)、氯仿：丙麗巧?8 : 1)、氯仿：己酸己醋（2?4 : 1)洗脫。
[0018] 迷迭香酸己醋（Rosmarinic acid eth}d ester, RAE)，蹤黃色油狀（氯仿-甲醇）， mpl78 ?180°C，分子量為 388。咱 NMR(500Hz，DMS0-de) 5 ;7. 56(lH，d，J= 15. 9Hz，7-H), 6. 26 (IH，d，J = 15. 9Hz，8-H)，7. 05 (IH，d，J = 2. OHz，2-H)，6. 96 (IH，dd，J = 8. 2, 2. OHz, 6-H)，6. 72(1H，d，J = 8. 2Hz，5-H)，6. 78(1H，d，J = 2. 0Hz，2' -H)，6. 70(1H，dd，J = 8. 2， 2. 0Hz，6, -H)，6. 58(1H，d，J = 8. 2Hz，5, -H)，5. 16(1H，dd，J = 9,4Hz，8, -H)，4. 14(2H，q， J = 7. lHz，-0CH2CH3)，3. 04(lH，dd，J = 14,4Hz，7, -H)，3. 33(lH，dd，J = 14,9Hz，7, -H), I. 20 (3H，t，J = 7. IHz，-OC肥C冊(cè)）。W上數(shù)據(jù)與與文獻(xiàn)報(bào)道的迷迭香酸己醋理化性質(zhì)與光 譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定為迷迭香酸己醋。其結(jié)構(gòu)式如下所示：
【權(quán)利要求】
1. 一種酚酸類化合物-迷迭香酸乙酯的制備方法是： (1) 風(fēng)輪菜全草干燥，粉碎； (2) 用乙醇及其含水物、甲醇及其含水物或丙醇及其含水物回流提取，或浸漬提取，提 取液減壓濃縮； (3) 將步驟（2)中的濃縮的提取物依次用石油醚、乙酸乙酯萃取3?4次； (4) 將乙酸乙酯萃取液減壓濃縮至干，進(jìn)行大孔樹(shù)脂柱層析，依次用蒸餾水、60%、95% 乙醇水洗脫，收集60 %乙醇水洗脫液，減壓濃縮至干； (5) 步驟（4)中濃縮的提取物，進(jìn)行MCI柱層析，50%甲醇水洗脫，收集洗脫液，減壓濃 縮至干，得到迷迭香酸乙酯粗品； (6) 將步驟（5)中粗品進(jìn)行硅膠柱層析，二氯甲烷：甲醇（20 : 1)洗脫，收集洗脫液， 濃縮干燥，得到迷迭香酸乙酯； 上述制備方法的條件范圍為：步驟（2)中乙醇或甲醇或丙醇的濃度為30?90%，提取 方法為回流、浸漬；步驟（4)中的大孔樹(shù)脂可選用D101和CAD-40大孔樹(shù)脂中的任意一種， 用于洗脫的醇溶液也可以為甲醇的水溶液，收集50%甲醇水洗脫液；步驟（5)也可以用二 氯甲烷：丙酮（3?5 : 1)、二氯甲烷：乙酸乙酯（1?3 : 1)、氯仿：甲醇（20?30 : 1)、 氯仿：丙酮（5?8 : 1)、氯仿：乙酸乙酯（2?4 : 1)洗脫。
2. -種治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于含有權(quán)利要求1所述的迷迭香酸乙酯與 一種或多種輔助劑和/或賦形劑混合。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于其被制備成各種劑型。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，所述劑型為針劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、糖衣丸 劑或溶液劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，所得到的迷迭香酸乙酯能顯著改善高糖誘導(dǎo)的血 管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、減輕游離脂肪酸誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、改善胰島素抵抗下肝細(xì)胞糖 消耗、抑制油酸所致的肝細(xì)胞脂肪堆積和抑制α-葡萄糖苷酶活性而調(diào)控餐后血糖。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的迷迭香酸乙酯的用途，其特征在于其用于制備預(yù)防和治療糖 尿病、糖尿病周圍血管病變、糖尿病性心腦血管方面并發(fā)癥、糖脂代謝紊亂、動(dòng)脈粥樣硬化、 冠心病等心腦血管疾病、肥胖以及脂肪性肝病的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P9/10GK104262155SQ201410442584
【公開(kāi)日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】吳斐華, 梁敬鈺, 王立英, 何柏球, 王珊珊, 陳凱, 曾彪 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)