血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001]本實用新型屬于臨床體外診斷試劑技術領域，具體為一種血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒，應用免疫學原理、側向層析技術以及化學鄰甲苯胺顯色法，通過檢測人糞便中的血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白，發(fā)現(xiàn)下消化道出血癥狀，早期診斷直腸癌或結腸癌等下消化道腫瘤。
【背景技術】
[0002]便隱血在目前臨床上主要檢測方法有化學法和免疫學方法:化學法常用的有鄰甲苯胺法、還原酚酞法、聯(lián)苯胺法、匹拉米洞法、俞創(chuàng)木脂法等。其設計原理基本相同，都是基于血紅蛋白中的含鐵血黃素部分有催化過氧化物分解的作用，能催化試劑中的過氧化氫，分解釋放新生態(tài)氧，氧化上述色原物質(zhì)而呈色，顯色的深淺反應了血紅蛋白的多少。然而在實際應用中由于糞便成份差別很大，各實驗室具體操作細節(jié)不同，用化學法檢測結果存在很大差異，并且缺乏特異性和準確性。外源性食物中如果含有血紅蛋白、肌紅蛋白，其血紅素的作用均可以使實驗呈陽性，大量生食蔬菜中含有活性的植物過氧化物也可催化過氧化物分解，出現(xiàn)假陽性反應。血液在腸道中停留過久，血紅蛋白變性，則會出現(xiàn)與病情不符的陰性結果。此外，如果患者服用大量的維生素C或其他具有還原性的藥物，在實驗中可將過氧化物還原，從而不能氧化色原物質(zhì)，也可使實驗出現(xiàn)假陰性。因此，化學法易受干擾因素多、假陽性率高、冰醋酸配成的試劑易形成晶體等條件限制，未能得到廣泛使用，亟需一種特異性好、靈敏度高、檢測快速、簡單的隱血檢測方法。
[0003]免疫學方法是目前檢測隱血常用的方法，主要包括免疫單抗法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫斑點法、膠乳免疫透射比濁法、放射免疫擴散法、反向間接血凝法、膠體金標記夾心免疫檢驗法等。免疫法檢測的指標一般是人血紅蛋白或人紅細胞基質(zhì)，所用抗體是抗人血紅蛋白抗體或抗人紅細胞基質(zhì)抗體，檢測人血紅蛋白可檢出消化道任何部位的出血，檢測人紅細胞基質(zhì)只能檢出下消化道出血，但是血紅蛋白由于受到腸道內(nèi)細菌的作用及大腸粘膜產(chǎn)生的粘液成分影響而變性，易出現(xiàn)假陰性反應。
[0004]臨床上往往需要兩種或以上的方法聯(lián)合檢測，目前市場上已有血紅蛋白-轉鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒、血紅蛋白-Hb-Hp復合物聯(lián)檢試劑盒等。如中國發(fā)明專利申請公布號為CN101965515A (公布日為2011年2月2日)提供了一種用于檢測潛血的方法和裝置，包括檢測在GI樣品中的轉鐵蛋白和血紅蛋白，以及將檢測到的轉鐵蛋白和血紅蛋白的量與轉鐵蛋白和血紅蛋白的各自的預定值相比較，由此去頂來自GI的出血，并提供使用橫向流動三明治免疫測定裝置來實現(xiàn)對轉鐵蛋白和血紅蛋白的檢測，該技術方案缺少血紅蛋白-結合珠蛋白復合物檢測，對直腸癌或結腸癌的陽性符合率較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本實用新型旨在提供一種血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒，由一根同時檢測血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白的試紙條，化學鄰甲苯胺試紙，上卡殼和下卡殼組成的試劑盒，該試劑盒的結構簡單，檢測快速高效，具有很好靈敏度和特異性，在臨床上對直腸癌或結腸癌等下消化道出血癥狀的腫瘤早期診斷和鑒別有較好的參考價值，對消化道出血性疾病的陽性檢出率有顯著提高。
[0006]針對以上根本技術問題，本實用新型相應的解決技術方案是:
[0007]一種血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒，包括上卡殼、下卡殼、置于上卡殼和下卡殼之間的免疫試紙條、檢測試紙，上卡殼設有加樣孔、觀察窗口、ID記錄處和化學試紙觀察窗口，下卡殼開有與免疫試紙條位置對應的第一凹槽和與化學法試紙位置對應的第二凹槽，其特征在于免疫試紙條包括吸水紙、硝酸纖維素膜、樣品墊和PVC底板，樣品墊邊緣處黏貼在硝酸纖維素膜上，吸水紙邊緣處黏貼在硝酸纖維素膜上，硝酸纖維素膜固定在PVC底板上，含有血紅蛋白單抗、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物單抗和轉鐵蛋白單抗的金標復合物劃在硝酸纖維素膜上，硝酸纖維素膜上平行設置有3條檢測線、質(zhì)控線以及靠近硝酸纖維素膜底端的金標復合物劃膜線，質(zhì)控線處包被有羊抗鼠IgG，3條檢測線是由氣動微定量噴頭將標記完成的膠體金復合物噴線包被于硝酸纖維素膜上。
[0008]第一凹槽和與化學法試紙位置對應的第二凹槽中間設有凸起的隔斷，檢測試紙上樣段與樣品墊的底部由隔斷分隔開，加樣孔位于隔斷處正上方。
[0009]加樣孔下方為化學法試紙和樣品墊，加樣孔為圓形或橢圓形并同時外漏出化學法試紙和樣品墊，所述的硝酸纖維素膜對應觀察窗口放置。
[0010]所述上卡殼上設有二維碼。
[0011]所述PVC底板是具有粘性膠質(zhì)層的PVC底板。
[0012]所述樣品墊是厚度為355.6-508.0um的奧斯龍8964型玻璃纖維。
[0013]使用該聯(lián)檢試劑盒的檢測時，在圓形或者橢圓形的加樣孔中滴加3-4滴由樣本采集器處理好的樣品液，5到8分鐘判讀免疫試紙條；同時，在化學試紙觀察窗口滴加10%的過氧化氫溶液，觀察顏色變化，最后結合兩種檢測方法的結果判定最終檢測結果:
[0014]全陽性:對于免疫學方法，在長條形觀察窗口中，均在檢測線和質(zhì)控線位置出現(xiàn)紫色紅色帶。表示樣品中存在血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白。對于化學方法，出現(xiàn)藍色反應，表明結果呈陽性；
[0015]全陰性:對于免疫學方法，在長條形觀察窗口中，在質(zhì)控線位置出現(xiàn)紫紅色帶，而在檢測線位置均未出現(xiàn)紫紅色帶，表示樣品中不存在血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白。對于化學方法，不出現(xiàn)藍色反應，表明結果呈陰性；
[0016]相比現(xiàn)有技術，本實用新型提供的聯(lián)檢試劑盒及其制備方法，有益效果在于:
[0017](I)本實用新型是血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒，采用免疫層析膠體金技術結合化學顯色方法，快速、簡便同時檢測大便中的血紅蛋白、血紅蛋白-結合珠蛋白復合物、轉鐵蛋白，可以消除現(xiàn)有技術的弊端，準確發(fā)現(xiàn)消化道癌變引起的少量出血，提高早期直腸癌或結腸癌診斷準確率，也可以為早期診斷此病提供快速、簡便的手段和藥物治療時的監(jiān)測。
[0018](2)本實用新型試劑盒上使用ID和二維碼，一方面，ID處可以手工填寫樣本信息，避免檢測結果的混淆。另一方面，二維碼可以高密度編碼，信息容量大，可以存入大量的零件信息。編碼范圍廣，可以存入文字、圖片、聲音等信息。容錯能力強，具有糾錯能力，表面受到油污、損耗等照樣可以得到識讀。譯碼可靠性高，誤碼率不超過千萬分之一。還有成本低，易制作，持久耐用等優(yōu)點，二維碼可以選擇性的根據(jù)條件進行檢測結果錄入，對患者的治愈和康復過程有一個很好的監(jiān)測，結果查詢更加方便，醫(yī)生統(tǒng)籌治療方案也更加得心應手。甚至在病理方面也具有統(tǒng)計學上的意義。
[0019]本實用新型申請的聯(lián)檢試劑盒特異性強，靈敏度高，易儲存，無須專門技術人員操作，不需任何儀器設備，而且結果易讀。對直腸癌或結腸癌等下消化道出血癥狀的腫瘤早期診斷和鑒別有較好的參考價值，對消化道出血性疾病的陽性檢出率效果更佳。
【附圖說明】
[0020]附圖1是本試劑盒的立體模型示意圖。
[0021]附圖2是本試劑盒的拆分結構示意圖。
[0022]圖中，1.上卡殼，2.下卡殼，3.加樣孔，4.觀察窗口，5.第一凹槽，6.試紙條，17.化學試紙觀察窗口，18.1D記錄，19.二維碼，20.化學試紙，21.第二凹槽，22.隔斷。
[0023]附圖3是免疫試紙條的結構示意圖。
[0024]附圖4是免疫試紙條的結構示意圖。