NF-κB p65/HMGCS2調控途徑在制備調控酮體合成的藥物中的應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了NF?κB p65/HMGCS2調控途徑作為藥物靶點在制備調控酮體合成的藥物、保健品中的應用；NF?κB p65通過HMGCS2啟動子結合，從轉錄水平調控該酶的表達，HMGCS2影響酮體的合成水平；可以激活NF?κB p65，從轉錄水平調控HMGCS2的表達，進而對酮體代謝進行調控，間接加強酮體合成，改善神經細胞等的能量代謝，最終起到防治神經退行性疾病的作用。
【專利說明】NF-kB p65/HMGCS2調控途徑在制備調控酮體合成的藥物中的應用
技術領域
[0001 ]本發(fā)明屬于調控酮體合成的藥物技術領域，涉及NF-KB P65/HMGCS2調控途徑在制備調控酮體合成的藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]酮體，是哺乳動物體內乙酰乙酸，β_輕丁酸(β-hydroxybutyrate，βΟΗΒ)和丙酮的總稱。生酮，即酮體的合成，是哺乳動物代謝的一個分支。在葡萄糖代謝水平下降時，肝臟產生酮體的水平上升。酮體的合成主要發(fā)生在肝臟，此外腦內星型膠質細胞也可以產生少量酮體。在葡萄糖不足時，酮體作為能源底物供肝外組織使用。
[0003]近年來，研究發(fā)現酮體作為葡萄糖能量供應的替代物出現于AD早期，且隨著疾病的進程而下降。研究發(fā)現，給予生酮飲食對帕金森和AD等神經退行性疾病具有保護效果。中鏈甘油三酯改善AD病人的記憶表現，且記憶改善情況和中鏈甘油三酯氧化產生的βΟΗΒ血漿水平陽性相關。進一步研究發(fā)現，直接使用和生酮飲食中濃度大小一致的βΟΗΒ同樣具有神經保護作用。使用D-beta-hydroxybutyrate(bHB)作用Αβ誘導的AD細胞模型，發(fā)現bHB能夠保護海馬神經元抵抗Αβ毒性。
[0004]通過對生酮過程中一些關鍵酶的調控，可以控制酮體水平，進而影響體內能量代謝途徑。其中輕甲基戊二酸單酰CoA合成酶(Hydroxymethylglutary 1-CoA synthase ,HMGCS2)控制HMG-CoA形成這一過程是酮體生成的限速步驟。研究表明，HMGCS2受轉錄水平和翻譯水平的共同調控。在轉錄水平上，HMGCS2至少受三條途徑的調控。一條途徑涉及到叉頭轉錄因子F0XA2 (Forkheaad box A2 )。轉錄因子FOX家族FKHR (Forkhead inrhabdosarcoma)中FKHRLl也參與HMGCS2轉錄途徑的調控。另外，HMGCS2轉錄水平調控與mTORCI(Mammalian target of rapamycin complex I)，PPARa(Peroxisome proliferatoractivated receptora)和FGF21 (Fibroblast growth factor 21)有關。這些轉錄因子結合到HMGCS2啟動子序列上，從轉錄水平上調控基因的表達。在翻譯水平上，HMGCS2的活性同樣受乙酰化和琥珀?；{控。研究發(fā)現，HMGCS2包含一些SIRT3調控的乙?；稽c。但是這些位點的修飾和調節(jié)功能還不清楚。
[0005]核因子NF-kB在多種細胞中表達，主要涉及機體防御反應、組織損傷和應激、細胞分化和凋亡等過程中的信息傳遞。在多數細胞漿內NF-kB處于無活性狀態(tài)，當信息物質作用于相應受體后，NF-kB被激活入核影響基因的轉錄。另外，研究證實炎癥在脂肪代謝和糖代謝中起重要作用。炎性因子的產生可以抑制肝臟脂肪合成及脂肪肝形成。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明解決的問題在于提供NF-kB P65/HMGCS2調控途徑在制備調控酮體合成的藥物中的應用，可以作為分子靶點可應用于生酮藥物與食品的制備，尤其是在防治神經退行性疾病藥物與食品的制備中的應用。
[0007]本發(fā)明是通過以下技術方案來實現:
[0008]NF-kB p65/HMGCS2調控途徑作為藥物靶點在制備調控酮體合成的藥物、保健品中的應用。
[0009]NF-kB P65/HMGCS2調控途徑作為藥物靶點在制備生酮的藥物、保健品中的應用。
[0010]NF-kB p65/HMGCS2調控途徑作為藥物靶點在制備防治神經退行性疾病的藥物、保健品中的應用。
[0011]所述的藥物、保健品是影響NF-KBp65與酮體合成酶HMGCS2啟動子的結合，從轉錄水平調控HMGCS2的表達，影響酮體的合成水平。
[0012]所述的藥物是激活NF-kBp65的藥物，從轉錄水平增強HMGCS2的表達，間接加強酮體合成。
[0013]所述的藥物是增強NF-kBp65表達的炎癥因子、表達載體或化物藥物。
[0014]所述的藥物是影響NF-kBp65與HMGCS2啟動子結合位點的藥物。
[0015]所述的藥物是增強或抑制NF-κΒ p65與HMGCS2啟動子上GGAAGACCT位點的結合。
[0016]活化NF-κΒp65的藥物在制備調控酮體合成的藥物中的應用。
[0017]調控NF-κΒp65表達的藥物或載體在制備調控酮體合成的藥物中的應用。
[0018]與現有技術相比，本發(fā)明具有以下有益的技術效果:
[0019]本發(fā)明提供的NF-κΒP65/HMGCS2調控途徑在制備調控酮體合成的藥物中的應用，NF-kB p65通過HMGCS2啟動子結合，從轉錄水平調控該酶的表達，HMGCS2影響酮體的合成水平;可以激活NF-kB p65，從轉錄水平調控HMGCS2的表達，進而對酮體代謝進行調控，間接加強酮體合成，改善神經細胞等的能量代謝，最終起到防治神經退行性疾病的作用。而NF-kBP65的激活可以采用多種途徑來實現，可以通過白介素-6等分子來活化NF-κΒ p65，可以促進酮體βΟΗΒ合成限速酶HMGCS2的表達;提供了一種可以通過相對常見的藥物來防治神經退行性疾病的途徑。
[0020]本發(fā)明的NF-κΒ p65/HMGCS2調控途徑是依賴于NF-κΒ ρ65與HMGCS2啟動子的結合，本發(fā)明的實驗表明通過IL-6增強NF-κΒ ρ65能夠使HMGCS2啟動子活性上升40%，而使用NF-KBsiRNA ρ65敲除NF-κΒ p65后，HMGCS2的mRNA水平降低約70% ;NF_kB p65通過E-boxl與HMGCS2啟動子的結合作用增強，從而間接調控酮體的合成水平，因此NF-κΒ p65/HMGCS2調控途徑作為藥物靶點可應用于生酮藥物與食品的制備，尤其是在防治神經退行性疾病藥物與食品的制備中的應用。
【附圖說明】
[0021]圖1為白介素-6對細胞活性的影響;觀察不同濃度IL-6處理后，細胞的增殖情況。
[0022]圖2-1為IL-6激活NF-κΒp65的蛋白檢測結果；圖2-2為IL-6激活NF-κΒ p65的熒光檢測結果。
[0023]圖3-1為IL-6對酮體βΟΗΒ水平的促進作用；圖3-2為IL-6對酮體合成代謝酶HMGCS2mRNA水平的影響；圖3_3為IL-6對HMGCS2蛋白水平的影響；圖3_4為IL-6對HMGCS2啟動子活性的影響。
[0024]圖4-1為NF-κΒ p65敲除對HMGCS2mRNA水平的檢測結果；圖4-2為NF-κΒ p65敲除對HMGCS2蛋白水平的檢測結果；圖4-3為NF-κΒ p65敲除對HMGCS2啟動子活性的檢測結果。
[0025]圖5-1為HMGCS2啟動子潛在NF-κΒ p65結合位點預測；圖5-2為NF-κΒ p65結合的HMGCS2啟動子潛在位點的檢測；圖5-3為NF-κΒ p65是否直接與HMGCS2啟動子位點結合的檢測。
【具體實施方式】
[0026]下面結合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。
[0027]HepG2為肝癌細胞系，是研究肝細胞比較常用的細胞模型，IL_6是NF-κΒ p65激活的常用因子，瞬時轉染siRNA也是比較常用的體外敲除方法，為觀察NF-κΒ p65對肝細胞酮體代謝的影響及其作用機制，所以選擇HepG2作為細胞模型，采用NF-κΒ p65siRNA方法作為體外敲低的細胞模型。
[0028]I IL-6對細胞活性的影響
[0029]將長滿的細胞傳代于96孔板中，24小時后加入10或者30ng/mL IL-6，孵育12、24小時后進行細胞存活率檢測。用無血清培養(yǎng)基以1:10的比例配制3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT，5mg/ml)，將混合液加入細胞中，培養(yǎng)箱中孵育I小時。然后去上清，加入10yL DMS0，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀0D490nm測量各孔的吸光值。[°03°]結果如圖1所不，橫坐標為不同濃度的IL-6作用時間，該圖的縱坐標為吸光度OD值，由圖可見，不同濃度的IL-6在觀察時間內，對細胞的增殖并無明顯影響。
[0031]2.1 IL-6激活NF-κΒ p65的蛋白檢測結果
[0032]將HepG2細胞培養(yǎng)在10mm培養(yǎng)皿中，待細胞生長至80 %左右，棄掉培養(yǎng)基，加含30ng/mL IL-6的培養(yǎng)基至培養(yǎng)皿中，空白組加培養(yǎng)基，培養(yǎng)0.5小時，利用碧云天細胞核蛋白與細胞楽蛋白抽提試劑盒分離細胞核和細胞楽，western blots檢測IL_6處理的細胞中NF-kB p65在細胞核和細胞漿的表達情況。
[0033]由圖2-1所示，正常情況下，NF-κΒp65分布在細胞漿，IL-6處理后，胞漿NF-κΒ p65含量輕微增加，同時，NF-κΒ p65在細胞核中的表達量上升。
[0034]2.2 IL-6激活NF-κΒ p65的熒光檢測結果
[0035]將HepG2細胞按6X 14傳代于預鋪有滅菌載玻片的12孔板中。次日，棄掉培養(yǎng)基，加30ng/mL IL-6的培養(yǎng)基至孔板中，空白組加培養(yǎng)基，處理0.5小時后，棄掉培養(yǎng)基，PBS洗2次，4%多聚甲醛固定15分鐘，PBS洗3次，每次5分鐘，0.2%Tritonl00處理7分鐘，PBS洗3次，每次5分鐘，2%BSA封閉I小時后，一抗孵育過夜。次日，PBS洗3次，每次5分鐘，FITC-標記的羊抗兔IgG I小時，PBS洗3次，每次5分鐘，DAPI處理10分鐘，PBS洗3次，每次5分鐘，抗猝滅熒光封片劑封片，熒光顯微鏡下拍照觀察NF-κΒ p65的細胞定位。
[0036]由圖2-2所示，正常情況下，NF-κΒp65定位在細胞漿，使用30ng/mL IL-6處理!fepG2細胞，NF-κΒ p65被激活而轉運入核。
[0037]下面通過IL-6激活NF-κΒ p65來說明NF-κΒ p65對酮體合成水平調節(jié)進行說明。
[0038]3.1 IL-6對βΟΗΒ水平的作用
[0039]將HepG2細胞培養(yǎng)在10mm培養(yǎng)皿中，待細胞生長至80 %左右，棄掉培養(yǎng)基，加含30ng/mL IL-6的培養(yǎng)基至培養(yǎng)皿中，空白組加培養(yǎng)基，培養(yǎng)24小時，觀察IL-6對細胞酮體βOHB水平的影響。在觀察點，利用ELISA試劑盒對細胞內βΟΗΒ水平進行檢測。
[0040]結果如圖3-1所示，橫坐標為IL-6的濃度，該圖的縱坐標為βΟΗΒ水平，由圖可見，30ng/mL IL-6能夠顯著提升細胞βΟΗΒ水平。
[0041 ] 3.2 IL-6對酮體合成代謝酶HMGCS2mRNA水平的調控
[0042]將HepG2細胞培養(yǎng)在6孔板中，待細胞生長至80%左右，棄掉培養(yǎng)基，加含30ng/mLIL-6的培養(yǎng)基至孔板中，空白組加培養(yǎng)基，培養(yǎng)0.5小時，觀察IL-6對細胞酮體代謝酶HMGCS2的影響。在觀察點，利用實時定量PCR儀器對細胞內HMGCS2mRNA水平進行檢測；
[0043]HMGCS2 弓I 物序列上游為AAGTCTCTGGCTCGCCTGATGT;下游為TCCAGGTCCTTGTTGGTGTAGG；
[0044]β-actin 引物序列上游為 TGCGTGACATTAAGGAGAAG;下游為 GCTCGTAGCTCTTCTCCA。
[0045]結果如圖3-2所示，橫坐標為IL-6的濃度，該圖的縱坐標為HMGCS2mRNA相對水平。由圖可見，30ng/mL IL-6能夠顯著提升細胞HMGCS2mRNA水平。
[0046]3.3IL-6對酮體合成代謝酶HMGCS2蛋白水平的調控
[0047]將HepG2細胞培養(yǎng)在6孔板中，待細胞生長至80%左右，棄掉培養(yǎng)基，加含30ng/mLIL-6的培養(yǎng)基至孔板中，空白組加培養(yǎng)基，培養(yǎng)24小時，觀察IL-6對細胞酮體代謝酶HMGCS2蛋白表達的影響。在觀察點，利用western blot對細胞內HMGCS2蛋白水平進行檢測。
[0048]結果如圖3-3所示，橫坐標為IL-6的濃度，該圖的縱坐標為HMGCS2蛋白相對水平。有圖可見，30ng/mL IL-6能夠顯著提升細胞HMGCS2蛋白水平。
[0049]3.4 IL-6對HMGCS2啟動子活性的影響
[0050]pGL-HMGCS2質粒的構建，首先在NCBI找到人源HMGCS2起始密碼子上游2000bp堿基，設計一對引物用于擴增這2000bp啟動子序列，并在引物兩端加上限制性內切酶位點，[0051 ]引物序列上游為5 ’ -CGGGGTACCGAGTAGATTAAGAGTTGGGT-3 ’ ；
[0052]下游為5’-CCCAAGCTTCTCCAGAGGAGCAAGCAGAA-3’ ；
[0053]橫線部分分別為Kpn 1.Hind III酶切位點，之后由Kpn I和Hind III酶切PCR產物鏈接于PGL3載體，構建pGL3-HMGCS2。
[0054]將HepG2細胞按6X104傳代于6孔板中，隔天進行轉染，取2.55μLX-tremeGENE HPDNA轉染試劑，Iyg pGL3-HMGCS2質粒和20ng內參照(PRL-TK)質粒于102yL無血清培養(yǎng)基中，輕輕晃動幾下將其混勻繼續(xù)撫育30分鐘。然后將混合液體分別加入6孔板中，放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24小時后，棄掉培養(yǎng)基，加含30ng/mL IL-6的培養(yǎng)基至孔板中，空白組加培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24小時。利用Iuciferase分析試劑盒檢測HMGCS2啟動子活性。
[0055]結果如圖3-4所示，IL-6處理的HepG2細胞中，HMGCS2啟動子活性上升40%。
[0056]4.1 NF-κΒ p65敲除對HMGCS2mRNA水平的檢測
[0057]從吉馬公司購買NF-κΒ p65siRNA序列，其中
[0058]正義鏈5’ -CCUCCUUUCAGGAGAUGAATT-3 ’，
[0059]反義鏈5’ -UUCAUCUCCUGAAAGGAGGTT-3 ’，
[0060]陰性對照s iRNA 序列為正義鏈 5 ’ -UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3，
[0061 ]反義鏈5，-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3，。
[0062]將HepG2細胞按6 X 14傳代于6孔板中，隔天進行轉染。分別取3.5yLRNAimax和7yL20yMsiRNA于150yL無血清培養(yǎng)基中分別孵育5分鐘后，將其混勻，輕輕晃動幾下繼續(xù)撫育15-20分鐘。然后將混合液體分別加入6孔板中，繼續(xù)放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。利用TriZ01提取細胞總RNA，反轉錄合成cDNA，熒光實時定量per檢測mRNA水平變化。
[0063]結果如圖4-1所示，橫坐標為轉染陰性對照s iRNA和NF-κΒ p65s iRNA，該圖的縱坐標為mRNA相對水平。由圖可見，使用NF-kBsiRNA p65敲除NF-κΒ p65后，HMGCS2的mRNA水平降低約70 %。
[0064]4.2 NF-κΒ p65敲除對HMGCS2蛋白水平的檢測
[0065]轉染方法同4.1，待細胞轉染72小時后，提取細胞總蛋白，β-巰基乙醇處理使蛋白變性，western blots檢測蛋白水平變化。
[0066]結果如圖4-2所示，橫坐標為轉染陰性對照siRNA和NF-κΒ p65siRNA，該圖的縱坐標為蛋白相對水平，由圖可見，使用NF-KBsiRNA p65敲除NF-κΒ p65后，HMGCS2的表達相對對照組偏低。
[0067]4.3 NF-κΒ p65敲除對HMGCS2啟動子活性的檢測
[0068]將HepG2細胞按6 X 14傳代于6孔板中，隔天進行轉染。陰性對照siRNA和NF-kBp65siRNA轉染24小時后，取2.55yLX-tremeGENE HP DNA轉染試劑，Iyg pGL3_HMGCS2質粒和20ng內參照(PRL-TK)質粒于102yL無血清培養(yǎng)基中，輕輕晃動幾下將其混勻繼續(xù)撫育30分鐘。然后將混合液體分別加入6孔板中，繼續(xù)放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。利用Iuciferase分析試劑盒檢測NF-kB p65敲除后，對HMGCS2啟動子活性的影響。
[0069]結果如圖4-3所示，在HepG2細胞中，敲除NF-κΒ p65之后，HMGCS2啟動子活性水平降低約25 %。
[0070]5.1 HMGCS2啟動子潛在NF-κΒ p65結合位點預測
[0071 ]利用JASPAR在線分析軟件，找到NF-κΒ p65的保守結合位點，并在NCBI中找到人源HMGCS2基因啟動子序列(Gene ID,3158)，預測HMGCS2啟動子的潛在NF-κΒ p65結合位點。
[0072]結果如圖5-1所示，通過JASPAR在線分析，找到NF-κΒp65的保守結合位點GGAATTTCC。通過對HMGCS2啟動子的生物信息學分析發(fā)現在HMGCS2啟動子-2000?O區(qū)域含有6個NF-κΒ p65潛在結合位點。分別命名為E-boxl (GGAAGACCT)、E_box2(GGAAAATCA)、
[0073]E-box3(GGGAAAATG)、E_box4(AGAGTTTCC)、
[0074]E-box5(GGAACACCC)、E_box6(GGAACATCA)。
[0075]5.2 NF-κΒ p65與HMGCS2啟動子潛在結合位點的檢測
[0076]根據軟件預測的6個潛在結合位點，設計了包含6個潛在位點的6對引物，引物序列如下:
[0077]PMl:上游，ATTTAAAGATAAGATCATAGACCTAGATATCCT，
[0078]下游，AGGATATCTAGGTCTATGATCTTATCTTTAAAT；
[0079]PM2:上游，GGGAGACATTCATTTCATAAATCAGATGGCAGG，
[0080 ]下游，CCTGCCATCTGATTTATGAAATGAATGTCTCCC ；
[0081 ] PM3:上游，AGCTGCAGGTCTTTGCATAAATGACTCCTTTAT，
[0082 ]下游，ATAAAGGAGTCATTTATGCAAAGACCTGCAGCT ；
[0083]PM4:上游，CTACTATTAAAAGAGTCACACTTTGGTTTAGAA，
[0084]下游，TTCTAAACCAAAGTGTGACTCTTTTAATAGTAG；
[0085]PM5:上游，CACAGAGAGGAGTGTCATACACCCAGTGAGAGT ；
[0086]下游，ACTCTCACTGGGTGTATGACACTCCTCTCTGTG；
[0087]PM6:上游，GATGTGATACAACAACATACATCATAACCTCCT，
[0088]下游，AGGAGGTTATGATGTATGTTGTTGTATCACATC。
[0089]以上述構建的pGL3_HMGCS2作為模板，利用PhantaSuper-Fidelity DNA?01711^^86擴增6個突變載體，分別命名為11(04了464(:(:1')、]\12(04了4441^4)、]\13(GCATAAATG)、M4(AGAGTCACA)、M5(CATACA CCC)和M6(CATACATCA)。
[0090]將HepG2細胞按6X104傳代于6孔板中，取2.55μLX-tremeGENE HP DNA轉染試劑，IygpGL3-Basic/pGL3-HMGCS2/Ml/M2/M3/M4/M5/M6 質粒 / 和 20ng 內參照(PRL-TK)質粒于 102μL無血清培養(yǎng)基中，輕輕晃動幾下將其混勻繼續(xù)撫育30分鐘。然后將混合液體分別加入6孔板中，放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。利用luciferase分析試劑盒檢測潛在結合位點突變后，HMGCS2啟動子活性的變化。
[0091]結果如圖5-2所示，在HepG2細胞分別轉染HMGCS2啟動子和6個突變型啟動子。潛在結合位點E-boxl突變后，HMGCS2的啟動子活性降低約80%，潛在結合位點E-box3和E-box6突變后，HMGCS2啟動子活性減低約20%，潛在結合位點E-box2，E-box4和E-box5突變后，HMGCS2啟動子活性沒有變化。由以上結果，初步確定E-boxl是NF-κΒ p65與HMGCS2啟動子的結合位點。
[0092]5.3 NF-κΒ p65直接與HMGCS2啟動子位點結合的檢測
[0093]將HepG2接種于2個1cm平板內，并分別加入8mL培養(yǎng)液。當細胞生長至密度約為80 %時，加入216yL 37 %的甲醛至終濃度約為I %，37°C撫育10分鐘，使得DNA與相近的蛋白交聯。加入880yL Glycine Soulut1n(10 X )，室溫放置5分鐘。吸棄培養(yǎng)液，冰浴PBSd3BS液中含ImM PMSF，并且在使用前加入)洗滌兩次。然后將細胞刮下，收集至1.5ml離心管。4°C，2000rpm離心4分鐘，棄上清。加入含蛋白酶抑制劑(同上)的300μ1 SDS Lysis Buffer/盤細胞，移液器吹打數次。超聲裂解細胞，將DNA切割至大小約加200-1000bp。本實驗中，設置的超聲功率為最大功率的40%，超I秒，停I秒，間隙時間為I分鐘，總共8個循環(huán)。后續(xù)步驟按照碧云天ChIP檢測試劑盒進行。通過ChIP試劑盒獲得DNA后，通過實時定量per檢測不同E-box與HMGCS2啟動子的結合強度。
[0094]6個潛在結合位點的引物序列分別為:
[0095]HMGCS2PK-1084—1203bp):
[0096]上游，TGAGTTAGAACACCAACAC,
[0097]下游，TTCATGTTCCTACAGACAG；
[0098]HMGCS2P2(-844—953bp):
[0099]上游，GGTAGAGGAAGATTGGTGCTG，
[0100]下游，CTGGTCCTTCTGCTTTGCTCT；
[0101]HMGCS2P3(-696—812bp):
[0102]上游，CATTCTGCAACTTCCTAGC,
[0103]下游，GGTGACAGTTTGAAGCTCA;
[0104]HMGCS2P4(-426—548bp):
[0105]上游，CAACACTCACTCCCAACTC,
[0106]下游，CACTCCTCTCTGTGGTGTTAG；
[0107]HMGCS2P5(-344—451bp):
[0108]上游，AACAACTAACACCACAGAGAG，
[0109]下游，TGTATCACATCCCAAGGTAAC；
[0110]HMGCS2P6(-286—368bp):
[0111]上游，AGGGTTACCTTGGGATGTG，
[0112]下游，CTCTGTGGCAGCCTTGATTC.
[0113]人源GAPDH作為對照引物:
[0114]上游，TACTAGCGGTTTTACGGGCG,
[0115]下游，TCGAACAGGAGGAGCAGAGAGCGA。
[0116]由圖5-3所示，E-boxl與HMGCS2啟動子的結合作用增強，其他E-box與HMGCS2啟動子的不結合，E-boxl是NF-κΒ p65與HMGCS2的結合位點。
[0117]綜合以上表明:核因子NF-κΒ p65可以與酮體合成酶HMGCS2啟動子結合，從轉錄水平調控該酶的表達，HMGCS2影響酮體的合成水平；可以激活NF-kB p65，從轉錄水平調控HMGCS2的表達，而從通過間接加強酮體合成對AD等神經退行性疾病起保護作用。
[0118]因此，NF-κΒP65/HMGCS2可應用于生酮藥物與食品的制備，尤其是在防治神經退行性疾病藥物與食品的制備中的應用。
[0119]以上給出的實施例是實現本發(fā)明較優(yōu)的例子，本發(fā)明不限于上述實施例。本領域的技術人員根據本發(fā)明技術方案的技術特征所做出的任何非本質的添加、替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。
【主權項】
1.NF-KB p65/HMGCS2調控途徑作為藥物靶點在制備調控酮體合成的藥物、保健品中的應用。2.NF-kBP65/HMGCS2調控途徑作為藥物靶點在制備生酮的藥物、保健品中的應用。3.NF-kB p65/HMGCS2調控途徑作為藥物靶點在制備防治神經退行性疾病的藥物、保健品中的應用。4.如權利要求1?3任何一項所述的應用，其特征在于，所述的藥物、保健品是影響NF-κB p65與酮體合成酶HMGCS2啟動子的結合，從轉錄水平調控HMGCS2的表達，影響酮體的合成水平。5.如權利要求1?3任何一項所述的應用，其特征在于，所述的藥物是激活NF-kBp65的藥物，從轉錄水平增強HMGCS2的表達，間接加強酮體合成。6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述的藥物是增強NF-kBp65表達的炎癥因子、表達載體或化物藥物。7.如權利要求1?3任何一項所述的應用，其特征在于，所述的藥物是影響NF-κΒp65與HMGCS2啟動子結合位點的藥物。8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的藥物是增強或抑制NF-κΒp65與HMGCS2啟動子上GGAAGACCIli點的結合。9.活化NF-κΒp65的藥物在制備調控酮體合成的藥物中的應用。10.調控NF-κΒp65表達的藥物或載體在制備調控酮體合成的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P3/00GK105920602SQ201610495233
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月28日
【發(fā)明人】龍建綱, 時樂, 劉健康, 趙黛娜, 秦川, 王永耀
【申請人】西安交通大學