挵(R表示 H，X-Y表示0=01，·^表示H)在25.0 μΜ濃度下對Afo-42自身聚集的抑制率均小于10%。
[0014] (2)4-羥基噢挵類化合物(I)與金屬離子絡(luò)合作用的測定 用甲醇溶解CuCl2 · 2H20、ZnCl2、FeS〇4 · 7H20、A1C13及待測化合物，配成75 ymol/L的溶 液，向96孔板中加入100yL待測化合物溶液和100yL金屬離子溶液，混勻，室溫靜置30 min， 在Varioskan Flash Multimode Reader儀上記錄混合物在200-600 nm范圍內(nèi)的紫外吸收 曲線，并以100yL待測化合物溶液和100 yL甲醇混合液為對照，觀察金屬離子與待測化合物 混合液的最大吸收峰的紅移現(xiàn)象及最大吸收峰的強度。測定結(jié)果表明，本發(fā)明實施例中所 公開的4-羥基噢挵類化合物(I)均表現(xiàn)出對金屬離子有強絡(luò)合作用。
[0015 ] (3 ) 4-羥基噢挵類化合物（I)對Cu2+誘導(dǎo)的Αβι-42聚集的抑制活性 將CuCl2用HEPES緩沖液配成75 μΜ溶液，用HEPES緩沖液將化合物儲備液（2.5 mM)和 200 μΜ的Αβ!-42儲備液稀釋至75 μΜ，分別取20yL Cu2+溶液+20yL Afo-42溶液+20yL待測化合 物溶液、20yL Cu2+溶液+20yL Afo-42溶液+20yL HEPES緩沖液以及60yL HEPES緩沖液于96孔 板中，混勻，37° C孵育24 h，然后加入190yL含有5μΜ硫黃素 T的50mM的甘氨酸-NaOH緩沖液 (pH=8.5)，振搖5s后立即用多功能酶標(biāo)儀在446nm激發(fā)波長和490nm發(fā)射波長下測定焚光 值;4 2+待測化合物的熒光值記錄為IFhCi^+Afo-42+HEPES緩沖液的熒光值記錄為 IF。，只含有HEPES緩沖液的熒光值記錄為IFo,化合物對Cu2+誘導(dǎo)的Αβ!-42聚集的抑制率為： lOO-aFi-IFd/aFc-IFohlOO。每個化合物每個濃度測定三個復(fù)孔，以姜黃素為陽性對照。 測定結(jié)果表明，本發(fā)明實施例中所公開的4-羥基噢挵類化合物（I)在25.0 μΜ濃度下對Cu2+ 誘導(dǎo)的Α?^-42聚集的抑制率均大于80.0%;而姜黃素在相同濃度下的抑制率為62.1%，化合物 (I)的母核--4-羥基噢挵(R表示Η，Χ-Υ表示表示Η)在相同濃度下的抑制率小于 20.0%〇
[0016] (4 ) 4-羥基噢挵類化合物(I)的抗氧化活性(0RAC-FL方法） 參照文獻（Qiang, X.M. et al.Eur. J Med. Chem.2014, 76，314-331)所報道的方 法進行測定，即：6-羥基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸(Trolox)用pH7.4的PBS緩沖液配成 10-80 ymol/L的溶液，焚光素(fluorescein)用pH7.4的PBS緩沖液配成250 nmol/L的溶液， 2，2 ' -偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽(AAPH)使用前用pH7.4的roS緩沖液配成40 mmol/L的溶液。 向96孔板中加入50-10 ymol/L的化合物溶液和熒光素溶液，混勻，37°C孵育15min，加入 AAPH溶液，使每孔總體積為200 yL，混勾，立即置于Varioskan Flash Multimode Reader儀 中，在485 nm激發(fā)波長和535 nm發(fā)射波長下連續(xù)測定90 min。計算出焚光衰減曲線下面積 AUC，其中以l-8ymol/L的Trolox作為標(biāo)準(zhǔn)，以不加待測樣品為空白，化合物的抗氧化活性結(jié) 果表達為Trolox的當(dāng)量，其計算公式為：[(AUC Sample-AUC blank)AAUC Trolox-AUC blank)]/[(concentration of Trolox/concentration of sample)]，每個化合物每次測 定3個復(fù)孔，每組實驗獨立重復(fù)三次。測定結(jié)果表明，本發(fā)明實施例中所公開的4-羥基噢挵 類化合物(I)的抗氧化活性為Trolox的1.5-10.0倍，說明該類化合物具有強抗氧化活性。
【具體實施方式】
[0017] 通過下面的實施例可對本發(fā)明進行進一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限于 下述實施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對 本發(fā)明進行各種變化和修飾。
[0018] 實施例1 4-羥基噢挵類化合物(la)的制備通法 將2.0 mmol相應(yīng)的4-羥基苯并呋喃-3(2H)_酮類化合物(1)、3.0 mmol相應(yīng)的取代氨基 苯甲醛類化合物(2 )和20 ml乙醇加入反應(yīng)瓶中，攪拌均勻后，加入50%K0H水溶液10 ml，室 溫攪拌反應(yīng)2.0~72.0小時(反應(yīng)進程用TLC跟蹤）;反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸除溶劑，殘余物中加 入30 mL去離子水，用10%鹽酸水溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至強酸性，再用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào) 節(jié)反應(yīng)液pH至弱堿性，用120 mL二氯甲烷分三次萃取，有機層合并后用飽和氯化鈉水溶液 洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后過濾，減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)硅膠柱層析純化(洗脫液:石油 醚:丙酮=2:1 v/v)，得相應(yīng)的4-羥基噢挵類化合物（la)，收率30.5%-86.0%，其化學(xué)結(jié)構(gòu)均 經(jīng)1H-NMR、 13C-NMR和ESI-MS確證;所得目標(biāo)物的純度經(jīng)HPLC測定均大于97.0%。采用上述通 法制備得到的目標(biāo)物結(jié)構(gòu)如下：

[0019]實施例2 4-羥基噢挵類化合物(lb)的制備通法 將按照實施例1方法所制備得到的4-羥基噢挵類化合物(Ia)l .0 mmol、乙醇20 ml加入 反應(yīng)瓶中，攪拌均勻后，加入10%Pd/C 50mg，通氫氣置換三次后，于室溫常壓下通氫攪拌反 應(yīng)2.0~24.0小時(反應(yīng)進程用TLC跟蹤），反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)硅膠柱層析 純化(洗脫液:二氯甲烷：甲醇=20:1 v/v)，得相應(yīng)的4-羥基噢挵類化合物(lb)，收率65.0%-80.0%，其化學(xué)結(jié)構(gòu)均經(jīng)1H-NMR、 13C-NMR和ESI-MS確證;所得目標(biāo)物的純度經(jīng)HPLC測定均大 于97.0%。采用上述通法制備得到的目標(biāo)物結(jié)構(gòu)如下：
[0020]實施例3 4-羥基噢挵類化合物(I)與酸成鹽制備通法 在反應(yīng)瓶中加入按照上述實施例1或2所得之4-羥基噢挵類化合物(1)1.0 mmol和丙酮 25 ml，攪拌均勻后加入4.0 mmol相應(yīng)的酸，升溫回流攪拌反應(yīng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至 室溫，減壓蒸除溶劑，殘余物用丙酮重結(jié)晶，過濾析出的固體，即得4-羥基噢挵類化合物(I) 的鹽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR和ESI-MS確證。
【主權(quán)項】
1. 一類4-?基噢瞬類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于該類化合物的化學(xué)結(jié) 構(gòu)通式如（I)所示：式中：R表示 OH、Cl ~Ci2 烷基、Cl ~Ci2 烷氧基、CN、面素、NR3R4，X-Y表示 C=CH、CH-CH2，Ri、R2、 R3和R4各自獨立地表示Cl~Ci2烷基，NRiR2和NRsR地可表示四氨化咯基、嗎嘟基、贓晚基、4-位 被Cl~Ci2烷基所取代的贓晚基、贓嗦基、4-位被Cl~Ci2烷基所取代的贓嗦基、4-位被芐基或取 代芐基所取代的贓嗦基，R和NR巧2可在苯環(huán)任意可能的位置;但當(dāng)R表示OH且位于6位，同時 NRiR2位于4'位時，NRiR2不表示(Me)2N、N(C2也)2、嗎嘟基、贓晚基、N-甲基贓嗦基。2. 如權(quán)利要求1所述的4-徑基噢瞬類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于所述 的藥學(xué)上可接受的鹽為此類4-徑基噢瞬類化合物與鹽酸、氨漠酸、硝酸、硫酸、憐酸、Ci-6脂 肪簇酸、草酸、苯甲酸、水楊酸、馬來酸、富馬酸、班巧酸、酒石酸、巧樣酸、蘋果酸、硫辛酸、 Cl-6烷基橫酸、精腦橫酸、苯橫酸或?qū)妆綑M酸的鹽。3. 如權(quán)利要求1-2任一項所述4-徑基噢瞬類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方 法，其特征在于所述化合物可通過W下方法制備得到：式中：R、Ri和R2的定義與4-徑基噢瞬類化合物（I)的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式相同； 步驟A):4-^基苯并巧喃-3(2H)-酬類化合物（1)和取代氨基苯甲醒類化合物（2)在溶 劑和堿性條件下直接縮合，得相應(yīng)的4-徑基噢瞬類化合物(Ia); 步驟B):由步驟A)得到的4-徑基噢瞬類化合物（Ia)在適當(dāng)溶劑中經(jīng)催化氨化還原，得 4-徑基噢瞬類化合物(Ib); 利用上述方法所得之4-徑基噢瞬類化合物（I)分子中含有氨基，該氨基呈堿性，可與任 何合適的酸通過藥學(xué)上常規(guī)的成鹽方法制得其藥物學(xué)上可接受的鹽。4. 如權(quán)利要求3所述4-徑基噢瞬類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，其特征 在于所述步驟A)中，反應(yīng)所用堿為:堿金屬氨氧化物、堿±金屬氨氧化物、堿金屬碳酸鹽、堿 ±金屬碳酸鹽、堿金屬碳酸氨鹽、堿±金屬碳酸氨鹽、Cl-8醇的堿金屬鹽;反應(yīng)所用溶劑為： Ci-8脂肪醇、C3-8脂肪酬、乙酸、四氨巧喃、2-甲基四氨巧喃、N，N-二甲基甲酯胺、二甲基亞諷、 二氯甲燒、氯仿、1,4-二氧六環(huán)、苯、甲苯、乙臘或C5-8燒控;4-徑基苯并巧喃-3(2H)-酬類化 合物（1):取代氨基苯甲醒類化合物（2):堿的摩爾投料比為1.0:1.0~10.0:1.0~50.0;反應(yīng) 溫度為0~150°C ;反應(yīng)時間為^120小時。5. 如權(quán)利要求3所述4-徑基噢瞬類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，其特征 在于所述步驟B )中，反應(yīng)所用溶劑為:Cl-6脂肪醇、C3-8脂肪酬、Cl-6脂肪酸、Cl-6脂肪酸與Cl-6 脂肪醇所形成醋、乙酸、異丙酸、甲基叔下基酸、四氨巧喃、乙二醇二甲酸、苯、甲苯或二甲 苯;催化氨化所用催化劑為：1%~30%Pd-C、1%~30% Pd(0H)2-C;4-?基噢瞬類化合物（la)與 催化劑的質(zhì)量比為1.0:0.Ol~1.0;反應(yīng)壓力為常壓~10.0 MPa;反應(yīng)溫度為室溫~150°C;反 應(yīng)時間為^96小時。6. -類藥物組合物，其特征在于包含如權(quán)利要求1-2任一項所述的4-徑基噢瞬類化合 物或其藥學(xué)上可接受的鹽W及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。7. 如權(quán)利要求1-2任一項所述的4-徑基噢瞬類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治 療和/或預(yù)防神經(jīng)退行性相關(guān)疾病藥物中的用途，運類神經(jīng)退行性相關(guān)疾病為:血管性癡 呆、阿爾茨海默氏癥、帕金森癥、亨廷頓癥、HIV相關(guān)癡呆癥、多發(fā)性硬化癥、進行性脊髓側(cè)索 硬化癥、神經(jīng)性疼痛、或青光眼。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一類新型的4-羥基噢哢類化合物（<b>I</b>）及其藥學(xué)上可接受的鹽、其制備方法、藥物組合物和在制備治療和/或預(yù)防神經(jīng)退行性相關(guān)疾病藥物中的用途，包括但不限于血管性癡呆、阿爾茨海默氏癥、帕金森癥、亨廷頓癥、HIV相關(guān)癡呆癥、多發(fā)性硬化癥、進行性脊髓側(cè)索硬化癥、神經(jīng)性疼痛、青光眼等神經(jīng)退行性疾病；。
【IPC分類】A61K31/343, A61K31/496, A61P27/06, A61P31/18, A61K31/4525, A61P25/14, C07D307/83, A61P25/16, A61K31/4025, A61K31/5377, A61P25/28, A61P29/00
【公開號】CN105646417
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】鄧勇, 李巖, 強曉明, 羅禮, 肖柑媛, 楊霞, 徐銳
【申請人】四川大學(xué)
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年3月31日