br>[0029] 供試材料為常州世花花卉科技有限公司提供的鐵皮石斛組培種苗
[0030] 2、培養(yǎng)基配制：
[0031] MS基本培養(yǎng)基和1/2基本培養(yǎng)基的配制見〈〈植物組織培養(yǎng)>>(李明浚編譯.北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社，1992)。
[0032] 2,4-0、6-84、嫩4、活性炭、6知均可市售購得。所有培養(yǎng)基均添加瓊脂粉78/1、蔗糖 30g/L和0.1g/L活性炭及不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑，將配制好的培養(yǎng)基用O.lmol/L的 NaOH調(diào)pH值至6.0左右，除GA3外需過濾滅菌外，其他的附加物都在高壓滅菌前加入，壓力 1 · lkg/cm-2并于 121°C時(shí)計(jì)時(shí)20min。
[0033] 3、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
[0034] 開花率=開花的株數(shù)/接種的外植體總數(shù)X 100%
[0035]實(shí)驗(yàn)中，所有數(shù)據(jù)均采用SAS軟件進(jìn)行方差分析與多重比較分析（LSD法，P = 〇.〇5);數(shù)據(jù)為百分?jǐn)?shù)時(shí)先經(jīng)反正弦(7 = &代811?1/2)轉(zhuǎn)換后，再加以分析和比較。
[0036] 4、方法
[0037]以MS添加0.5mg/L NAA，0.1g/L活性炭為基本培養(yǎng)基，將經(jīng)過壯苗培養(yǎng)后的鐵皮石 斛試管苗（圖1)接種到各添加不同激素及不同濃度的開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基中（表1)，每處理培養(yǎng) 基接種10瓶，每瓶4個(gè)外植體，在溫度為24~26°C、濕度為35~45 %，光照強(qiáng)度3000LUX，每天 光照14~16h條件下培養(yǎng)，80d后，統(tǒng)計(jì)不同開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基中試管苗的開花情況，探討不同 濃度的激素組合對(duì)鐵皮石斛開花誘導(dǎo)的影響。
[0038]結(jié)果表明，將鐵皮石斛的試管苗分別接種到不同培養(yǎng)基上進(jìn)行開花誘導(dǎo)，70d后可 見試管苗的綠色花苞形成（圖2 )，隨后5~7d，花苞逐漸展開開放，花器官完整，萼片為黃綠 色，唇瓣為淡綠色，中間有兩塊紫斑，隨后顏色慢慢變淡（圖3)。由表2~3可知，不同濃度的 激素組合對(duì)鐵皮石斛試管苗開花誘導(dǎo)效果存在顯著性差異，培養(yǎng)基中只添加〇.5mg/L NAA， 試管苗開花率只有4.44%;添加不同濃度的6-8六、激動(dòng)素（1^11的111，1(1')、2,4-0及噻苯隆 (Thidiazuron ,TDZ)均可以顯著提高鐵皮石斛試管開花率，其中添加0.5mg/L的2,4-D的試 管開花率最高，可達(dá)42.22 %。在不添加2，4-D的情況下，添加 1.0 mg/!的TDZ和添加 1.0 mg/L 的KT對(duì)試管苗開花影響差異并不顯著，說明2,4-D對(duì)鐵皮石斛試管開花的誘導(dǎo)發(fā)揮重要作 用，因此，選擇MS+2,4-D 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L作為鐵皮石斛試管開花誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基。
[0039]表1不同培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛試管苗開花的影響

[0042] 實(shí)施例2:不同光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛試管苗開花誘導(dǎo)的影響
[0043] 光照強(qiáng)度在植物開花調(diào)控中起到重要的作用，為了探討光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛試管 苗開花的影響，將鐵皮石斛試管苗接種到MS+2，4-D 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L培養(yǎng)基中，在光 照強(qiáng)度分別為1000、2000、3000、4000LUX下進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)光照強(qiáng)度處理10瓶，每瓶4個(gè)外植 體，在溫度為24~26 °C、濕度為35~45 %，每天光照14~16h條件下培養(yǎng)，80d后，統(tǒng)計(jì)不同光 照強(qiáng)度下的開花情況，探討不同光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛試管苗開花誘導(dǎo)的影響。
[0044] 結(jié)果如表2所示，鐵皮石斛試管苗隨著光照強(qiáng)度的增加開花率升高，當(dāng)光照強(qiáng)度為 30001UX時(shí)，鐵皮石斛試管苗開花率最高，達(dá)44.44%，隨后，隨著光照強(qiáng)度的增加，鐵皮石斛 的開花率降低。
[0045] 表2不同光照強(qiáng)度對(duì)鐵皮石斛試管苗開花的影響
[0048]本說明書未作詳細(xì)描述的內(nèi)容屬于本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員公知的現(xiàn)有技術(shù)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，其特征在于，它包括如下步驟： 步驟1:將鐵皮石斛組培種苗接種到壯苗培養(yǎng)基上，在溫度為24~26°C、濕度為35~ 45%、每天光照14~16h的條件下培養(yǎng)，經(jīng)過25~30d的培養(yǎng)，獲得健壯鐵皮石斛試管苗； 步驟2:將株高3~5cm長的健壯鐵皮石斛試管苗，接種到花芽誘導(dǎo)和開花培養(yǎng)基上并在 溫度為24~26°C、濕度為35~45 %的條件下每天光照14~16h，再經(jīng)過70~90d培養(yǎng)后，可獲 得開花的試管植株。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，其特征在于:所述壯苗培 養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，其中附加成份包括2. Omg/L的6-芐基腺嘌 呤、0.5mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的赤霉素、30g/L的蔗糖、7g/L的瓊脂和0.1g/L的活性炭，pH 值范圍為5.8~6.0。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，其特征在于:所述花芽誘 導(dǎo)和開花培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，其中附加成份包括0.5mg/L的2， 4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的萘乙酸、30g/L的蔗糖、7g/L的瓊脂和0.1g/L的活性炭，pH值范 圍為5.8~6.0。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，其特征在于:所述步驟1 中，將鐵皮石斛組培種苗接種到壯苗培養(yǎng)基上，在溫度為24~26°C、濕度為35~45%、光照 強(qiáng)度為2000Lux、每天光照14~16h的條件下培養(yǎng)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，其特征在于:所述步驟2 中，將株高3~5cm長的健壯鐵皮石斛試管苗，接種到花芽誘導(dǎo)和開花培養(yǎng)基上并在溫度為 24~26°C、濕度為35~45%、光照強(qiáng)度為3000Lux的條件下每天光照14~16h，再經(jīng)過70~ 90d培養(yǎng)后，可獲得開花的試管植株。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，它包括如下步驟：步驟1：將鐵皮石斛組培種苗接種到壯苗培養(yǎng)基上，在溫度為24～26℃、濕度為35～45％、每天光照14～16h的條件下培養(yǎng)，經(jīng)過25～30d的培養(yǎng)，獲得健壯鐵皮石斛試管苗；步驟2：將株高3～5cm長的健壯鐵皮石斛試管苗，接種到花芽誘導(dǎo)和開花培養(yǎng)基上并在溫度為24～26℃、濕度為35～45％的條件下每天光照14～16h，再經(jīng)過70～90d培養(yǎng)后，可獲得開花的試管植株。該方法簡便易行，可人為控制開花時(shí)間，擺脫季節(jié)對(duì)其花期的限制，縮短開花周期，為鐵皮石斛開花機(jī)理的研究及試管花的生產(chǎn)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105638459
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】陽永學(xué), 楊潔, 祝菊紅, 趙志遠(yuǎn), 李其友, 張安華, 畢秋榮, 楊皓瓊
【申請(qǐng)人】武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所
【公開日】2016年6月8日
【申請(qǐng)日】2015年12月29日