一種快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地指一種快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)別稱鐵皮蘭、黑節(jié)草，是蘭 科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium)多年生附生草本植物，因其莖干呈鐵綠色，故而得名 鐵皮石斛。鐵皮石斛具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，含有石斛多糖、石斛堿、石斛酚、石斛胺等，還有 特殊的菲類、聯(lián)芐類抗癌成分，有益胃生津、滋陰清熱、免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老等功效。千百年 以來，鐵皮石斛一直和靈芝、人參、冬蟲夏草等被列為上品中藥，并被道家養(yǎng)生經(jīng)典《道臧》 譽(yù)為"中華九大仙草之首"，屬國家2級(jí)保護(hù)的貴重瀕危藥材。由于鐵皮石斛為附生植物，多 生于溫涼高濕的巖層峭壁或密林的樹杈上，其分布區(qū)域有很大的局限性。自然條件下，鐵皮 石斛開花結(jié)實(shí)率低，僅為〇. 31 %，且種子極小、無胚乳，需與某些真菌共生才能萌發(fā)，自然條 件下萌發(fā)率極低。此外，鐵皮石斛從種子萌發(fā)到開花通常需要3~4年的時(shí)間，因此，研究鐵 皮石斛試管開花，對(duì)闡明開花調(diào)控機(jī)理具有重要的意義。第一，通過研究鐵皮石斛試管開 花，探討其開花規(guī)律和調(diào)控機(jī)理，進(jìn)一步建立試管開花授粉受精體系，可以縮短其育種周 期。此外，研究鐵皮石斛試管開花，為研發(fā)其花期不受季節(jié)限制，研發(fā)具有新穎視覺效果的 試管花卉產(chǎn)品提供理論依據(jù)。
[0003] 近年來，關(guān)于鐵皮石斛的組培快繁及栽培技術(shù)已有較多研究，而對(duì)于其開花調(diào)控 的研究報(bào)道相對(duì)較少。
[0004] 參考文獻(xiàn)(王光遠(yuǎn)，劉培，許智宏，石斛離體培養(yǎng)中ABA對(duì)誘導(dǎo)花芽形成的影響。植 物學(xué)報(bào)，1995，37(5): 374-378;王光遠(yuǎn)，許智宏，蔡德發(fā)，等.鐵皮石斛的離體開花。中國科學(xué) (C輯），1997，27(3): 229-234)，記載了對(duì)鐵皮石斛離體開花的研究，研究人員發(fā)現(xiàn)原球莖作 為起始材料時(shí)形成的植株小，但是花芽時(shí)間出現(xiàn)較早，無根小苗次之，完整的小植物形成花 芽所需時(shí)間最長(zhǎng)，成花頻率也最低。同一莖段的頂芽比下部芽容易誘導(dǎo)花芽形成，開花頻率 高。此外，在培養(yǎng)基中加入葡萄糖，花芽形成的時(shí)間提早，成花率增加。
[0005] 參考文獻(xiàn)(鄒娜，喻蘇琴，王春玲，張露，鐵皮石斛組織培養(yǎng)及試管開花研究。江蘇 農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013,41(12) :42-44)，記載了鐵皮石斛試管苗在不同培養(yǎng)基上均能開花，開花率 在17.18%-35.37%，指出基本培養(yǎng)基成分可能不是影響鐵皮石斛試管開花最主要的因素。
[0006] 參考文獻(xiàn)(趙銀河，鐵皮石斛試管開花的研究。種子，2013，32 (2): 16-23 )，發(fā)現(xiàn)了 不經(jīng)低溫誘導(dǎo)或者其他方法處理，應(yīng)用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑能促進(jìn)鐵皮石斛開花。植物生長(zhǎng)抑 制劑PP 333能夠促進(jìn)花芽的起始和開花，但最高開花率僅為20.0%?；谏鲜鲅芯?，目前關(guān) 于鐵皮石斛試管開花影響因素及如何提高開花率尚需進(jìn)一步深入研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的就是要提供一種快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，該方法簡(jiǎn)便易 行，可人為控制開花時(shí)間，擺脫季節(jié)對(duì)其花期的限制，縮短開花周期，為鐵皮石斛開花機(jī)理 的研究及試管花的生產(chǎn)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)此目的，本發(fā)明所設(shè)計(jì)的快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，其特征在于， 它包括如下步驟：
[0009] 步驟1:鐵皮石斛試管苗的壯苗培養(yǎng)；
[0010] 將鐵皮石斛組培種苗接種到壯苗培養(yǎng)基上，在溫度為24~26 °C、濕度為35~45%、 每天光照14~16h的條件下培養(yǎng)，經(jīng)過25~30d的培養(yǎng)，獲得健壯鐵皮石斛試管苗；
[0011] 步驟2:鐵皮石斛試管苗的花芽誘導(dǎo)和開花培養(yǎng)；
[0012] 將株高3~5cm長(zhǎng)的健壯鐵皮石斛試管苗，接種到花芽誘導(dǎo)和開花培養(yǎng)基上并在溫 度為24~26 °C、濕度為35~45 %的條件下每天光照14~16h，再經(jīng)過70~90d培養(yǎng)后，可獲得 開花的試管植株。
[0013] 本發(fā)明的有益效果：
[0014] (1)本發(fā)明簡(jiǎn)便易行，操作方便，可人為控制開花時(shí)間，擺脫季節(jié)對(duì)其花期的限制。
[0015] (2)本發(fā)明采用健壯試管苗直接誘導(dǎo)花芽和開花，時(shí)間僅需70~90d，周期短，成花 率高。
[0016] (3)本發(fā)明誘導(dǎo)的試管花花型大，花器官完整，具有較高觀賞價(jià)值。
【附圖說明】
[0017] 圖1為鐵皮石斛試管苗壯苗培養(yǎng)示意圖；
[0018] 圖2為鐵皮石斛試管苗花芽誘導(dǎo)示意圖；
[0019] 圖3為鐵皮石斛試管苗開花培養(yǎng)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明：
[0021] 本發(fā)明的快速誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法，它包括如下步驟：
[0022]步驟1:將鐵皮石斛組培種苗接種到壯苗培養(yǎng)基上，在溫度為24~26°C、濕度為35 ~45%、光照強(qiáng)度為2000Lux、每天光照14~16h的條件下培養(yǎng)，經(jīng)過25~30d的培養(yǎng)，獲得健 壯鐵皮石斛試管苗；
[0023] 步驟2:將株高3~5cm長(zhǎng)的健壯鐵皮石斛試管苗，接種到花芽誘導(dǎo)和開花培養(yǎng)基上 并在溫度為24~26°C、濕度為35~45%、光照強(qiáng)度為3000LUX的條件下每天光照14~16h，再 經(jīng)過70~90d培養(yǎng)后，可獲得開花的試管植株。
[0024] 上述技術(shù)方案中，所述壯苗培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)， 其中附加成份包括2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤（6-BA)、0.5mg/L的萘乙酸（.4，€(-Naphthaleneacetic acid)、0· 5mg/L的赤霉素(GA3)、30g/L的鹿糖、7g/L的瓊脂和0 · lg/L的 活性炭。所述壯苗培養(yǎng)基內(nèi)的PH值范圍為5.8~6.0。上述6-芐基腺嘌呤（6-ΒΑ)、α-萘乙酸 (ΝΑΑ)、赤霉素(GA 3)用O.lmol/L的NaOH或酒精溶解，再用蒸溜水稀釋后分別配制成0.5mg/ ml的母液，裝入容量瓶中，置于冰箱保存。除赤霉素(GA3)需過濾滅菌外，其它的附加物都在 高壓滅菌前加入，壓力為I. lkg/cnf2并于121°C時(shí)計(jì)時(shí)20min。
[0025] 上述技術(shù)方案中，所述花芽誘導(dǎo)和開花培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的 物質(zhì)，其中附加成份包括〇.5mg/L的2,4-0、0.511^/1的財(cái)4、3(^/1的蔗糖、78/1的瓊脂和 〇. lg/L的活性炭。所述花芽誘導(dǎo)和開花培養(yǎng)基的pH值為范圍5.8~6.0。
[0026] 上述pH值通過NaOH調(diào)節(jié)。
[0027] 實(shí)施例1:不同濃度的激素組合對(duì)鐵皮石斛試管苗開花誘導(dǎo)的影響
[0028] 1、試驗(yàn)材料<