天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發(fā)菌生產(chǎn)種的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物的培養(yǎng)方法，具體涉及一種天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發(fā)菌生產(chǎn)種的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]天麻(Gastrodia elata)有性繁殖，即種子繁殖，可防止連續(xù)多代無性繁殖導(dǎo)致的天麻嚴(yán)重退化現(xiàn)象的產(chǎn)生。但天麻種子微小，無胚乳，僅由原胚細(xì)胞組成，需依靠小菇屬(Mycena)—類真菌菌絲侵染種胚提供營(yíng)養(yǎng)才能正常發(fā)芽，故統(tǒng)稱促進(jìn)天麻種子萌發(fā)的這類真菌為天麻種子萌發(fā)菌。到目前為止，文獻(xiàn)報(bào)道的萌發(fā)菌主要包括紫萁小菇(Mycenaosmundicola)、石角斗小燕(Mycena dendrobii)、開唇蘭小燕(Mycena anoectochili)、蘭小^(Mycena orchidicola)等，又以紫萁小燕、石斛小燕應(yīng)用最廣。
[0003]以紫萁小菇為例，凡被紫萁小菇菌絲侵染的天麻種胚或原球莖細(xì)胞，隨著原生質(zhì)及細(xì)胞器的逐漸消失出現(xiàn)許多不定形的囊狀體，在種胚萌發(fā)至原球莖階段，主要靠這種囊狀體對(duì)紫萁小菇菌絲進(jìn)行包圍消化。試驗(yàn)證明，天麻種子從胚萌動(dòng)初期，種子發(fā)芽階段，再到原球莖生長(zhǎng)并分化出營(yíng)養(yǎng)繁殖莖的整個(gè)時(shí)期，都需要消化侵入的紫萁小菇等萌發(fā)菌以獲得營(yíng)養(yǎng)，發(fā)芽后的原球莖及營(yíng)養(yǎng)莖，如能和蜜環(huán)菌建立起營(yíng)養(yǎng)關(guān)系，才能正常生長(zhǎng)，長(zhǎng)出粗壯的新生天麻。因此，萌發(fā)菌的生命力影響著天麻的生長(zhǎng)狀況，要提高天麻栽培的成功率就必須采用優(yōu)良的萌發(fā)菌栽培種。
[0004]萌發(fā)菌母種或原種一般可通過商業(yè)渠道獲得，對(duì)原種進(jìn)行一次擴(kuò)培即得到栽培種，可直接用于天麻有性繁殖。傳統(tǒng)的以樹葉為主要原料的萌發(fā)菌培養(yǎng)基，因樹葉太薄，營(yíng)養(yǎng)不足，致使萌發(fā)菌菌種先天不足，接種到天麻后生長(zhǎng)不良，導(dǎo)致天麻原球莖因營(yíng)養(yǎng)不足而在接蜜環(huán)菌前提前發(fā)亡。
[0005]天麻栽培中目前廣泛使用的萌發(fā)菌栽培種培養(yǎng)基為:78%的闊葉木肩、20%的麥麩、1%的蔗糖、1%的硫酸鈣或闊葉木肩70%、玉米芯粉20%、麥麩10%、磷酸氫二鉀或磷酸二氫鉀
0.01%。本發(fā)明人在實(shí)際栽培中發(fā)現(xiàn)采用該方法的培養(yǎng)基進(jìn)行萌發(fā)菌菌種的培養(yǎng)時(shí)，雖然比傳統(tǒng)的以樹葉為主要原料的培養(yǎng)基效果好，但是卻時(shí)常出現(xiàn)菌種生長(zhǎng)參差不齊、部分菌種瓶長(zhǎng)菌不均勻等情況。研究發(fā)現(xiàn)，天麻種子共生萌發(fā)菌屬于好氣真菌，在培養(yǎng)過程中，如果培養(yǎng)料裝得太多或太緊，會(huì)延緩這類菌的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。由于按上述培養(yǎng)基配方配制的培養(yǎng)基過于致密、透氣性差，有的還出現(xiàn)板結(jié)現(xiàn)象，在裝料過程中，難以保證裝料量和裝料松緊度一致，導(dǎo)致出現(xiàn)菌種生長(zhǎng)狀況差異大、培養(yǎng)周期不一、培養(yǎng)條件不好控制等問題，且樹葉木肩耐腐性差，不利于萌發(fā)菌的長(zhǎng)期生長(zhǎng)及天麻種子的萌發(fā)，從而嚴(yán)重影響了天麻的產(chǎn)量與質(zhì)量。
[0006]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的要解決的技術(shù)上存在的問題及克服現(xiàn)有技術(shù)的上述缺點(diǎn)，提供一種以棉籽殼為主要原料制作萌發(fā)菌生產(chǎn)種的方法，該方法采用棉籽殼為主要培養(yǎng)料，大大降低了生產(chǎn)成本，并且提高了萌發(fā)菌生長(zhǎng)速度，增強(qiáng)天麻種子共培養(yǎng)時(shí)菌種培養(yǎng)料的耐腐性，提高了天麻種子萌發(fā)率。
[0008]天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發(fā)菌生產(chǎn)種的方法，包括以下步驟:
(1)稱料:按重量份配比稱取原料:棉籽殼45?55份、玉米面20份、米糠23-33份、石膏I份、鹿糖I份；
(2)拌料:先將組分中的蔗糖和石膏充分混勻溶于水，再轉(zhuǎn)入米糠、玉米面中，充分混拌至勻，最后加入棉籽殼，混勻后加入水至培養(yǎng)料中含水量達(dá)60 %?80 %，拌勻；或者直接將各組分混合攪拌至勻后加入水，加水至培養(yǎng)料中含水量達(dá)60%?80%，拌勻；
(3)裝袋:將拌勻后的培養(yǎng)料裝入聚乙烯或聚丙烯材料的料袋中；
(4)滅菌:將料袋置于101kPa 121°C保持1.5小時(shí);或者常壓下溫度100-105°(3下保持10?12小時(shí)；
(5)接種:從原種瓶里挖取指甲蓋大小萌發(fā)菌菌種塊轉(zhuǎn)入料袋內(nèi)；
(6)培養(yǎng):將接種后的料袋轉(zhuǎn)移到避光的培養(yǎng)室于22?25°C溫度條件下培養(yǎng)至萌發(fā)菌菌絲長(zhǎng)滿料袋后即可。
[0009]優(yōu)選地，步驟(I)中所述棉籽殼、玉米面、米糠均新鮮無霉變。
[0010]優(yōu)選地，步驟(I)中干原料的重量份配比為:棉籽殼45?55份、米糠23?33份、玉米面20份、鹿糖I份、石膏I份。更優(yōu)選地，步驟(I)中原料的重量份配比為:棉籽殼50份、米糠28份、玉米面20份、蔗糖I份、石膏I份。
[0011 ]優(yōu)選地，步驟(3)的料袋在袋口上還套有套環(huán)撐開袋口。
[0012]優(yōu)選地，步驟(2)中的加水量為加入水至培養(yǎng)料中含水量達(dá)68%?72%。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果:有效的縮短了菌種培養(yǎng)時(shí)間，增強(qiáng)了培養(yǎng)料的耐腐性，提高了天麻種子萌發(fā)率及產(chǎn)品成品率，并且避免了木質(zhì)材料的大量使用，從而保護(hù)了森林和生態(tài)環(huán)境。
[0014]
【具體實(shí)施方式】
[0015]天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發(fā)菌生產(chǎn)種的方法，以下提供本發(fā)明的一些具體實(shí)施例，以助于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅于這些實(shí)施例。
[0016]實(shí)施例1天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發(fā)菌生產(chǎn)種的方法
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:棉籽殼45份、玉米面20份、米糠23份、蔗糖I份、石膏I份，所述棉籽殼、玉米面、米糠要新鮮無霉變。
[0017](2)拌料:先將組分中的棉籽殼、玉米面、米糠充分混勻，再澆入蔗糖石膏水，充分混拌至勻，最后加入自來水至培養(yǎng)料中使其含水量達(dá)80%，拌勻后悶放2 ho
[0018](3)裝袋:將拌勻并悶放2 h后的培養(yǎng)料裝入12 cmX25 cm聚乙烯或聚丙烯折角袋中，邊裝邊壓，至緊實(shí)，松緊需均勻，料裝至菌袋2/3長(zhǎng)即可，然后在培養(yǎng)料中插入一根直徑為2 cm的打孔棒，最后在菌袋口部套上套環(huán)支撐，并蓋上海綿透氣蓋。
[0019](4)滅菌:將料袋置于高壓滅菌鍋內(nèi)，121°C 101 kPa下保持1.5小時(shí)；滅菌后自然冷卻至室溫。
[0020](5)接種:于超凈工作臺(tái)或經(jīng)殺菌后的接種箱內(nèi)接種，接種前用75%消毒酒精擦拭手、接種針，再將接種針置于酒精燈火焰上灼燒，冷卻后先用接種針挑出打孔棒，再?gòu)脑N瓶里挑取指甲蓋大小的萌發(fā)菌菌種塊轉(zhuǎn)入料袋內(nèi)。
[0021](6)培養(yǎng):將接種后的料袋轉(zhuǎn)移到避光的培養(yǎng)室于25°C溫度條件下培養(yǎng)至萌發(fā)菌菌絲長(zhǎng)滿料袋后即可。
[0022]結(jié)果描述:接種后7天可見新生菌絲從原種塊長(zhǎng)出，10天左右即能長(zhǎng)入培養(yǎng)料內(nèi)，隨后在菌絲周圍生長(zhǎng)出白色菌絲，菌絲密集，初期呈白色，35天以后先期生長(zhǎng)的菌絲外表逐漸變?yōu)槊装咨?0天左右萌發(fā)菌菌絲即長(zhǎng)滿整個(gè)料袋。
[0023]實(shí)施例2天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發(fā)菌生產(chǎn)種的方法:
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:棉籽殼50份、玉米面20份、米糠28份、蔗糖I份、石膏I份;所述棉籽殼、玉米面、米糠均要新鮮無霉變。
[0024](2)拌料:將各組分轉(zhuǎn)入攪拌機(jī)中，開機(jī)攪拌，至勻后加入水，加水量為至培養(yǎng)料中含水量達(dá)75%，拌勻。
[0025](3)裝袋:將拌勻后的培養(yǎng)料用手工或裝袋機(jī)裝入12 cmX25 cm聚乙烯或聚丙烯折角袋中，手工裝料邊裝邊壓，至緊實(shí)，松緊需均勻，料裝至菌袋2/3長(zhǎng)即可，然后在培養(yǎng)料中插入一根圓柱形打孔棒，最后在料袋口部套上套環(huán)以撐開袋口，并蓋上無棉蓋。
[0026](4)滅菌:將料袋置于高壓滅菌鍋內(nèi)，121 0C 101 kPa下保持1.5小時(shí);滅菌后自然冷卻至室溫。
[0027](5)接種:于超凈工作臺(tái)或經(jīng)殺菌后的接種箱內(nèi)接種，接種前用75%消毒酒精擦拭手、接種針，再將接種針置于酒精燈火焰上灼燒，冷卻后挑出打孔棒，并從原種瓶里挖取2塊萌發(fā)菌菌種塊轉(zhuǎn)入料袋內(nèi)，一塊置于料袋中下部(即料袋1/3部位)，一塊置于料袋中部(即料袋1/2部位)。
[0028](6)培養(yǎng):將接種后的料袋轉(zhuǎn)移到避光的培養(yǎng)室于24?26°C溫度條件下培養(yǎng)至萌發(fā)菌菌絲長(zhǎng)滿料袋后即可。
[0029]結(jié)果描述:接種7天后，新生萌發(fā)菌菌絲長(zhǎng)入培養(yǎng)料內(nèi)，菌絲長(zhǎng)至料內(nèi)后迅速多級(jí)分叉，致密，色白，后期呈米白色。32天左右菌絲即長(zhǎng)滿料袋。
[0030]實(shí)施例3，天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發(fā)菌生產(chǎn)種的方法:
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:棉籽殼53份、米糠25份、玉米面20份、蔗糖I份、石膏I份;所述棉籽殼和米糠新鮮無霉變。
[0031](2)拌料:將各組分轉(zhuǎn)入攪拌機(jī)中，開機(jī)攪拌，至勻后加入水，加水量為至培養(yǎng)料中含水量達(dá)72%，拌勻。
[0032](3)