溫冷藏72h培養(yǎng)4h的花粉萌發(fā)情況。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，應(yīng)該說(shuō)明的是，下述說(shuō)明僅是為了解 釋本發(fā)明，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。
[0029] 實(shí)施例1 :
[0030] 1.旱柳優(yōu)樹花粉的采集
[0031] 選取發(fā)育正常、無(wú)病蟲危害、生長(zhǎng)健壯的柳樹植株（商19、商10和墾1 ;本發(fā)明中， 商19、商10和墾1表示對(duì)旱柳優(yōu)樹的編號(hào)，其中，"商"代表"商河"，"墾"代表"墾利"），從 樹冠中上部剪取直徑1~2. 5cm、長(zhǎng)1-1. 5m左右的花枝，于溫室（溫度20~25°C，相對(duì)濕 度60~70% )水培；待雄花序下端有少量的熟花粉散落時(shí)，可將干凈白紙托住花序，用手 輕輕抖動(dòng)花序，讓花粉散落于白紙上，然后用毛筆彈去混在花粉中的小雜物，花粉經(jīng)凈化、 干燥后，用干凈白紙包好后放入干燥器內(nèi)（干燥劑為藍(lán)色變色硅膠），將花粉連同干燥器一 起放入0~5°C的冷藏箱內(nèi)貯藏。
[0032] 2.花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)條件的篩選
[0033] 花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基的篩選
[0034] 培養(yǎng)基種類對(duì)植物花粉離體萌發(fā)有較大影響，不同植物花粉萌發(fā)的適宜培養(yǎng)基不 同。設(shè)置3種不同成分的基本培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，分別為：10g/L的瓊脂、150g/L的蔗糖和 〇. 2g/L的硼酸；10g/L的瓊脂、150g/L的蔗糖；蒸餾水、150g/L的蔗糖。
[0035] 培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下：
[0036] 將瓊脂加入到蒸餾水中，隔水加熱，溶解后，加入蔗糖和硼酸，攪拌后即成滅菌培 養(yǎng)液；將配好的滅菌培養(yǎng)液趁熱用取樣器滴一滴于載玻片凹槽中央，使其慢慢擴(kuò)散成一略 帶弧度的平面且基本完全鋪滿凹槽，弧面需盡量薄，冷凝后即得。
[0037] 3.花粉離體培養(yǎng)
[0038] 將低溫冷藏2411、7211的花粉從干燥器中取出，在0-5°(：的溫度和50-90%的相對(duì)濕 度條件下，使其吸水24h，將吸水后的花粉均勻撒在位于載玻片上的旱柳花粉離體萌發(fā)培養(yǎng) 基上，然后將載玻片置入有濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，并置于25°C的恒溫光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分 析基本培養(yǎng)基對(duì)花粉離體萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)的影響。
[0039] 4.測(cè)定花粉活力
[0040] 保持上述溫度條件促使花粉管生長(zhǎng)，離體培養(yǎng)4-10h后，將載玻片在顯微鏡下觀 察（圖2、圖3)，進(jìn)行花粉萌發(fā)率統(tǒng)計(jì)，以花粉管長(zhǎng)度大于花粉粒直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，每處 理重復(fù)3次以上，每重復(fù)隨機(jī)觀察3~5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)花粉萌發(fā)率以反映有活力的花粉所占 比例。結(jié)果見表1。
[0041] 表1 3個(gè)旱柳優(yōu)樹花粉平均萌發(fā)率（％ )
[0042] CN 105176910 A 說(shuō)明書 4/4 頁(yè)
[0043] 從表1可以看出，旱柳優(yōu)樹花粉在固體（10g/L的瓊脂、150g/L的蔗糖）和液體（蒸 餾水、150g/L的蔗糖）基本培養(yǎng)基上均有一定的萌發(fā)率，但以改良后的培養(yǎng)基（加入0. 2g/ L的硼酸）萌發(fā)效果最好，萌發(fā)率最高46. 8%。3個(gè)優(yōu)樹花粉萌發(fā)率，商19和商10基本相 同，墾1的花粉萌發(fā)率稍微低一些，說(shuō)明商19、商10的花粉活力比墾1的活力強(qiáng)，我們進(jìn)行 的雜交育種試驗(yàn)成功率大小也證明了這一點(diǎn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基，其特征在于，是以蒸餾水為溶劑，其成分含有 8-12g/L的瓊脂、140-160g/L的蔗糖和0. 1-0. 3g/L的硼酸。2. 如權(quán)利要求1所述的旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基，其特征在于，是以蒸餾水為溶 劑，其成分含有l(wèi)〇g/L的瓊脂、150g/L的蔗糖和0. 2g/L的硼酸。3. 權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基在旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)中的應(yīng)用。4. 權(quán)利要求1或2所述的旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，將瓊 脂加入到蒸餾水中，隔水加熱，溶解后，加入蔗糖和硼酸，攪拌后即成滅菌培養(yǎng)液；將配好的 滅菌培養(yǎng)液趁熱滴一滴于載玻片凹槽中央，使其擴(kuò)散成一略帶弧度的平面且基本完全鋪滿 凹槽，冷凝后即為旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基。5. 權(quán)利要求1或2所述的旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基用于測(cè)定旱柳花粉活力的方 法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 花粉采集 選取發(fā)育正常、無(wú)病蟲危害、生長(zhǎng)健壯的旱柳植株，從樹冠中上部剪取直徑1-2. 5cm、長(zhǎng) 1-1. 5m的花枝，在溫度20-25°C，相對(duì)濕度60-70%條件下水培；待雄花序下端有少量的熟 花粉散落時(shí)，收集花粉，放入干燥器內(nèi)，于〇_5°C條件下貯藏； (2) 花粉離體培養(yǎng) 將花粉從干燥器中取出，在0-5°C的溫度和50-90%的相對(duì)濕度條件下，使其吸水 20-28h，將吸水后的花粉均勻撒在位于載玻片上的旱柳花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基上，然后將載 玻片置入有濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，并置于恒溫光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； (3) 花粉活力的測(cè)定 保持上述溫度條件促使花粉管生長(zhǎng)，離體培養(yǎng)4-10h后，將載玻片在顯微鏡下觀察，進(jìn) 行花粉萌發(fā)率統(tǒng)計(jì)，以花粉管長(zhǎng)度大于花粉粒直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，每處理重復(fù)3次以上， 每重復(fù)隨機(jī)觀察3~5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)花粉萌發(fā)率以反映有活力的花粉所占比例。6. 如權(quán)利要求5所述的測(cè)定旱柳花粉活力的方法，其特征在于，步驟（2)中，恒溫光照 培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為25°C，光照強(qiáng)度為50001x。7. 如權(quán)利要求5所述的測(cè)定旱柳花粉活力的方法，其特征在于，步驟（3)中，花粉萌發(fā) 率的計(jì)算公式為：花粉萌發(fā)率=(萌發(fā)花粉數(shù)/總花粉數(shù)）X100%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基，是以蒸餾水為溶劑，其成分含有8-12g/L的瓊脂、140-160g/L的蔗糖和0.1-0.3g/L的硼酸。本發(fā)明還公開了該旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基的用途和制備方法，以及采用該旱柳花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基測(cè)定旱柳花粉活力的方法。本發(fā)明利用該旱柳優(yōu)樹花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基與花粉管生長(zhǎng)顯微觀測(cè)技術(shù)測(cè)定花粉活力的測(cè)定結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
【IPC分類】C12Q1/02, C12N5/04
【公開號(hào)】CN105176910
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】喬玉玲, 秦光華, 宋玉民, 姜岳忠, 康智, 于振旭
【申請(qǐng)人】山東省林業(yè)科學(xué)研究院
【公開日】2015年12月23日
【申請(qǐng)日】2015年10月28日