一種用于治療肝癌的新的雙萜化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，具體涉及從尾葉香茶菜的干燥全草中分離得到的一種新的 雙萜類(lèi)化合物及其制備方法和醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 尾葉香茶菜Isodon excisa(maxim. )hara屬香茶菜屬植物，在亞洲東部和非洲西 部廣為分布，全世界約有150種，中國(guó)約有90種25個(gè)變種，廣泛分布于全國(guó)各地。其中約 有30種在民間可供藥用，主要作為清熱解毒、抗癌、消炎、健脾、活血、抗菌藥來(lái)使用。
[0003] 尾葉香茶菜含有二萜、三萜、留醇、脂肪酸以及少量的黃酮、倍半萜、連烴甙等多種 活性成分，其中以二萜類(lèi)成分為主，已知有1〇〇余種。近年來(lái)，人們從這些種植物中提取分 離到多種二萜類(lèi)化合物，并通過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)證明部分二萜化合物具有良好的抗菌、消炎、抗氧 化、調(diào)節(jié)免疫力和抗腫瘤活性。
[0004] 現(xiàn)在研究表明尾葉香茶菜具有抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗炎等藥理作用。 尾葉香茶菜提取的二萜類(lèi)化合物可以顯著的抑制人體鼻咽癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞等的生長(zhǎng)。 尾葉香茶菜提取物對(duì)小鼠離體臟器組織中的過(guò)氧化物生成有非常顯著的抑制作用，表明其 中含有的化合物能抑制組織液和細(xì)胞中氧化性物質(zhì)對(duì)不飽和脂肪酸的氧化破壞，達(dá)到保護(hù) 細(xì)胞作用。機(jī)體的免疫能力低下容易收到病毒和細(xì)菌的入侵，或者是受損的細(xì)胞、壞死的細(xì) 胞、變形的細(xì)胞得不到快速的清除，就容易受到攻擊，抗病毒能力弱，比較正常人容易患疾 病，在相同條件下或者疾病加重。通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)該植物能加強(qiáng)小鼠的特異性免疫和非 特異性免疫。尾葉香茶菜抗菌活性成分的研究始于1954年，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)該植物的乙醇 提取物可以抑制抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌（Gram-positivebacteria)的生長(zhǎng)。此外，在臨床上 對(duì)于蟲(chóng)蛇咬傷、跌打損傷、消炎退熱有治療的功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種從尾葉香茶菜的干燥全草中分離得到的一種新的雙 萜類(lèi)化合物；
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供該新化合物的制備方法；
[0007] 本發(fā)明的再一目的在于提供該化合物用于制備治療肝癌藥物的醫(yī)藥用途。
[0008] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0009] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I )，
[0010]
[0011] 所述的化合物（I )的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將尾葉香茶菜的干燥全 草粉碎，用70~80 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b) 步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用75%乙 醇洗脫12個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟（b) 中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、40:1、20 :1、10:1和1:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次 用體積比為25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中 組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗 脫，收集9~13個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I )。
[0012] 進(jìn)一步地，所述大孔樹(shù)脂為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。
[0013] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為75%。
[0014] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I )和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0015] 所述的化合物（I )在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 所述的藥物組合物在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0018] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0019] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為化合物（I )結(jié)構(gòu)式；
[0021] 圖2為化合物（I )理論E⑶值與實(shí)驗(yàn)E⑶值比較；
[0022] 圖3為化合物（I )對(duì)IfepG2及L02細(xì)胞增殖的影響（n = 3)。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0024] 實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0025] 藥材和試劑來(lái)源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海 凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。尾葉香茶菜的干 燥全草購(gòu)于安徽亳州中藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地廣東。
[0026] 制備方法：（a)將尾葉香茶菜的干燥全草（8kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取 (25LX3次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3 次）和水飽和的正丁醇（6LX3次）萃取，濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物 (315g)和正丁醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用純凈水溶解至2L，醫(yī)用脫脂棉 過(guò)濾，濾液用AB-8型大孔樹(shù)脂（1.5kg)分離，依次用10%乙醇（IOL)和75% (12L)乙醇洗 脫，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏（155g);(c)步驟（b)中75 %乙 醇洗脫浸膏用200-300目正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (10個(gè)柱體積）、40:1 (8個(gè)柱 體積）、20:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (8個(gè)柱體積）和1:1 (5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（c)中組分3 (36g)用200-300目正相硅膠進(jìn)一步分離，依次 用體積比為25:1 (8個(gè)柱體積）、20:1 (8個(gè)柱體積）和10:1 (5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟（d)中組分2 (12g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 0DS-C18分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集9~13個(gè)柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I )(25mg)。
[0027] 結(jié)構(gòu)確證：HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z 539. 2608,結(jié)合核磁特征可得分子式為 C29H4A，不飽和度為 10。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)Sh (ppm，DMS0-d6, 500MHz) :H-1 (2.52, t，J = 13. 5)，H-l(l. 46, br，d，J = 13. 5)，H-2(2. 51，m)，H-3(5. 53, t，J = 4. 0)，H-4(2. 08, dd， J = 11. 0,4. 0)，H-5(4. 84, dd，J = 11. 0,4. 5)，H-7(l. 79, t，J = 15. 5)，H-7(l. 25, dd， J = 15. 5,4. 0)，H-8 (I. 97, m)，H-8 (I. 48, t，J = 13. 5)，H-9 (3. 40, dd，J = 10. 0, 5. 5)， H-ll(2.54，d，J = 1.5)，H-12(4. 17，d，J = 1.5)，H-16(1.05，d，J = 7.5)，H-17(0.71，s)， H-18 (I. 06, s)，H-19 (0? 53, s)，H-20 (0? 70, s)，H-2'（7. 57, br，d，J = 7. 0)，H-3'（7. 33, br， t，J = 7. 0)，H-4'（7. 35, br，t，J = 7. 0)，H-5'（7. 34, br，t，J = 7. 0)，H-6'（7. 58, br，d， J = 7. 0)，H-7'（7. 69, d，J = 16. 5)，H-8'（6. 62, d，J = 16. 5)，5-OH(4. 04, d，J = 4. 5)， 9- 0H(3. 60, d，J = 5. 5)，11-OH(5. 37, s)，12-OH(5. 37, s)，15-OH(4. 55, s);核磁共振碳譜 數(shù)據(jù) S c (ppm，DMS0-d6,125MHz) :41. 7 (CH2,1-C)，35. 8 (CH，2-C)，78. 0 (CH，3-C)，54. I (CH， 4-C)，63. 9 (CH，5-C)，49. 5 (C，6-C)，31. 8 (CH2, 7-C)，28. 6 (CH2,8-C)，79. 7 (CH，9-C)，38. 4 (C， 10- C)，59. 0 (CH，11-C)，56. 6 (CH，12-C)，56. 6 (C，13-C)，207. 3 (C，14-C)，85. 7 (C，15-C)， 15. 9(CH3, 16-C)，18. 3(CH3, 17-C)，25. 2(CH3,18-C)，11. 7(CH3, 19-C)，10.1 (CH3,20-C)， 134. 8(C，1' -C)，128. 3(CH，2' -C)，127. 2(CH，3' -C)，130. 5(CH，4' -C)，129. 2(CH，5' -C)， 128. 3(CH，6' -C)，145. 1(CH，7' -C)，118. 7(CH，8' -C)，167. 1(C，9' -C);碳原子標(biāo)記參見(jiàn) 圖1。紅外光譜表明該化合物含有羥基（3584, 3500和3377cm 4，羰基（1708和1689cm 4 和芳環(huán)（1604和1498cm1)基團(tuán)。1H NMR譜顯示該化合物含有一個(gè)反式肉桂酸酯基團(tuán)〔 S H7. 57 (br，d，J = 7. 0Hz，H-2'），7. 33 (br，t，J = 7. 0Hz，H-3'），7. 35 (br，t，J = 7. 0Hz， H-4'），7. 34(br，t，J = 7. 0Hz，H-5'），7. 58(br，d，J = 7. 0Hz，H-6'），7. 69(d，J = 16. 5Hz， H-7'），6. 62 (d，J = 16. 5Hz，H-8'）； S C134.8 (1，-C)，128.3 (2, -C)，127.2 (3, -C)， 130. 5(4' -C)，129. 2(5' -C)，128. 3(6' -C)，145. 1(7' -C)，118. 7(8' -C)，167. 1(9' -C)〕，五 個(gè)含氧次甲基〔S H5. 53(t，J = 4. 0Hz，H-3)，4. 84(dd，J = 11. 0 和 4. 5Hz，H-5)，3. 40(dd， J = 10.0 Hz 和 5. 5Hz，H-9)，2. 54(d，J = I. 5Hz，H-ll)和 4. 17(d，J = I. 5Hz，H-12)〕，三 個(gè)亞甲基，以及五個(gè)甲基〔S HI. 05 (d，J = 7. 5Hz，H3-16)，0? 71 (s，H3-17)，I. 06 (s，H3-18)， 0. 53(s，H3-19)和0. 70(s，H3-20)〕。HMBC譜中，H-3與C-9'的相關(guān)性證實(shí)了該肉桂酸酯基 位于C-3位上。除了反式肉桂酸酯部分， 13C NMR和DEPT譜顯示20個(gè)碳信號(hào)，除了對(duì)應(yīng)上 述的功能單元外還包括五個(gè)季碳（一個(gè)羰基碳S C207. 3和一個(gè)含氧碳5 C85. 7)。上述核 磁數(shù)據(jù)表明該化合物是一個(gè)雙萜醇肉桂酸酯類(lèi)化合物。HMBC譜中，H2-I與C-2, C-3, C-4， C-15 和 C-16 ;H-3 與 C-l，C-15,和 C-9' ；H3-16 與 C-l，