向其中加入0.Ig 4-琉乙基S甲 氧基硅烷，升溫至90°C，在回流攬拌下反應(yīng)2地。反應(yīng)完畢后，分別用甲醇和水洗涂=次，然 后放于50°C烘箱中烘干待用。然后將上述產(chǎn)物放于一 lOOmLS頸瓶中，向其中加入50mL無 水甲苯，0.Olg偶氮二異下臘（AIBN)并緩慢加入1.0血4-乙締基化晚。升溫至60°C，在攬 拌下反應(yīng)30h。反應(yīng)結(jié)束后，分別用水和甲醇洗涂數(shù)次，然后放于50°C真空干燥箱中烘干。 保留產(chǎn)品待用。 W48] 本發(fā)明制備的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性復(fù)合微球?yàn)橥ㄟ^4-琉乙基S甲氧基硅烷偶 聯(lián)而成，引入了-S-原子，通過琉基-締點(diǎn)擊反應(yīng)將4-乙締基化晚固定在磁性基質(zhì)上，在本 發(fā)明所應(yīng)用的條件下硫原子和乙締基化晚通過相互作用，可W得到對(duì)位偶聯(lián)的磁性復(fù)合微 球，結(jié)果如圖5所示。 W例實(shí)施例2 :
[0050] W 3-乙締化晚為配基分離抗體的吸附介質(zhì)的制備
[0051] W化3〇4@Si化磁性復(fù)合微球?yàn)榛|(zhì)，選擇最佳粒徑的磁性納米粒子并對(duì)其進(jìn)行改 性（選用200皿左右的磁性復(fù)合微球），W MEP為配基制備對(duì)抗體具有特異性吸附作用的 化3〇4@Si〇2-MEP磁性復(fù)合微球，制備過程如下：首先砰取適量二氧化娃磁性微球于一干燥的 100血S頸瓶中，向其中加入50血無水甲苯，向其中加入0.1 g 4-琉乙基S甲氧基硅烷，升 溫至90°C，在回流攬拌下反應(yīng)2地。反應(yīng)完畢后，分別用甲醇和水洗涂=次，然后放于50°C 烘箱中烘干待用。然后將上述產(chǎn)物放于一 lOOmL S頸瓶中，向其中加入50mL無水甲苯， 0.0 lg偶氮二異下臘（AIBN)并緩慢加入1. 0血3-乙締基化晚。升溫至60°C，在攬拌下反 應(yīng)30h。反應(yīng)結(jié)束后，分別用水和甲醇洗涂數(shù)次，然后放于50°C真空干燥箱中烘干。保留產(chǎn) 品待用。 陽化引 間位的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性復(fù)合微球?yàn)橥ㄟ^4-琉乙基立甲氧基硅烷偶聯(lián)而成， 引入了 -S-原子，通過琉基-締點(diǎn)擊反應(yīng)將3-乙締基化晚固定在磁性基質(zhì)上，在所應(yīng)用的 條件下硫原子和3-乙締基化晚相互作用，得到間位偶聯(lián)的磁性復(fù)合微球。 陽〇5引實(shí)施例3
[0054] W 2-乙締化晚為配基分離抗體的吸附介質(zhì)的制備 陽化5] W化3〇4@Si化磁性復(fù)合微球?yàn)榛|(zhì)，選擇最佳粒徑的磁性納米粒子并對(duì)其進(jìn)行改 性（選用200皿左右的磁性復(fù)合微球），W MEP為配基制備對(duì)抗體具有特異性吸附作用的 化3〇4@Si〇2-MEP磁性復(fù)合微球，制備過程如下：首先砰取適量二氧化娃磁性微球于一干燥的 100血S頸瓶中，向其中加入50血無水甲苯，向其中加入0.1 g 4-琉乙基S甲氧基硅烷，升 溫至90°C，在回流攬拌下反應(yīng)2地。反應(yīng)完畢后，分別用甲醇和水洗涂=次，然后放于50°C 烘箱中烘干待用。然后將上述產(chǎn)物放于一 lOOmL S頸瓶中，向其中加入50mL無水甲苯， 0.0 lg偶氮二異下臘（AIBN)并緩慢加入1. 0血2-乙締基化晚。升溫至60°C，在攬拌下反 應(yīng)30h。反應(yīng)結(jié)束后，分別用水和甲醇洗涂數(shù)次，然后放于50°C真空干燥箱中烘干。保留產(chǎn) 品待用。
[0056] 鄰位的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性復(fù)合微球?yàn)橥ㄟ^4-琉乙基S甲氧基硅烷偶聯(lián)而成， 引入了 -S-原子，通過琉基-締點(diǎn)擊反應(yīng)將2-乙締基化晚固定在磁性基質(zhì)上，在所應(yīng)用的 條件下硫原子和MEP在通過相互作用，得到鄰位偶聯(lián)的磁性復(fù)合微球。
[0057] 實(shí)施例4 : 陽05引對(duì)應(yīng)用本發(fā)明制備的化3〇4@Si化-S-MEP磁性復(fù)合微球進(jìn)行了磁學(xué)性質(zhì)測(cè)試。在 本發(fā)明中，我們采用溶膠凝膠法制備了均一的化化納米粒子，并對(duì)其進(jìn)行了包覆，制備了 化3〇4@Si〇2微球和化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性復(fù)合微球。其納米性質(zhì)通過超導(dǎo)量子干設(shè)磁測(cè)量 系統(tǒng)（S卵ID)在298K下分別測(cè)試，圖6是Fe3〇4J的〇4@Si〇2微球和化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性復(fù) 合微球的磁滯回線，施加的外磁場(chǎng)是從-250000e到2500006。樣品在外加磁場(chǎng)的作用下，達(dá) 到飽和時(shí)的磁化強(qiáng)度隨著包覆厚度的增加逐漸減小，化3〇4的磁化強(qiáng)度為約為66. 48emu/g， 化3〇4@Si〇2的磁化強(qiáng)度約為61. 25emu/g左右，而化3〇4@Si〇2@MEP的磁化強(qiáng)度約為58. 13emu/ 邑。
[0059] 應(yīng)用本發(fā)明制備的化^@Si〇2-S-MEP磁性復(fù)合微球在外加磁場(chǎng)的作用下，實(shí)現(xiàn)快 速分離，此過程在一分鐘之內(nèi)即可完成，說明我們合成的復(fù)合微球具有很好的超順磁性，可 W用磁性分離的方法將磁性顆粒與溶液快速分離。 W60] 實(shí)施例5
[0061] 應(yīng)用本發(fā)明的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性復(fù)合微球?qū)ρ?丙種球蛋白和HSA的靜態(tài)吸 附等溫線
[0062] 吸附選擇性是評(píng)價(jià)吸附劑性能不可缺少的因素。在血清中，存在很多種蛋白。其主 要包括=種：白蛋白、球蛋白和纖維蛋白原，由于纖維蛋白原含量較少且實(shí)驗(yàn)室條件有限， 在本方法中不進(jìn)行研究。我們對(duì)血清中存在的主要蛋白，免疫球蛋白和白蛋白的吸附性能 進(jìn)行了研究，探討了本發(fā)明的化3〇4@Si化-S-MEP磁性復(fù)合微球的對(duì)抗體的選擇吸附性能。 陽06引首先，準(zhǔn)確稱取兩份鍵合MEP的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性復(fù)合微球lOmg，將其分別放 于兩個(gè)5mL離屯、管中，吸取200 y L 丫-丙種球蛋白和服A標(biāo)準(zhǔn)溶液（lOmg/mL)分別注入到 兩個(gè)離屯、管中，然后用PBS(20mmol/L K&PO"抑為7. 4,0. 5mol/L化C1)溶液稀釋至4血。 在25°C下進(jìn)行緩慢震蕩吸附，并每隔30min進(jìn)行磁分離并吸取一定量上清液在595nm處進(jìn) 行蛋白含量的測(cè)定。 W64] 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可W看出：MEP磁性吸附劑可W特異性的吸附目標(biāo)蛋白丫-丙種球蛋 白，并對(duì)雜蛋白HSA基本不吸附。通常情況下，肥1C配基對(duì)目標(biāo)蛋白的作用力主要包括疏水 作用力、特異性作用力、靜電排斥、范德華力及氨鍵作用力等，在優(yōu)化條件下，MEP對(duì)HSA的 疏水作用力很弱，基本不被吸附，IgG由于其強(qiáng)的疏水作用力及特異性的結(jié)合力，在吸附條 件下作用力仍然很強(qiáng)，可W被大量吸附。因而，在優(yōu)化條件下，本實(shí)驗(yàn)制備的磁性基質(zhì)在模 擬的血清中可W實(shí)現(xiàn)特異性的捕獲目標(biāo)蛋白的目的，結(jié)果如圖7所示。 W65] 實(shí)施例6
[0066] 應(yīng)用本發(fā)明的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性復(fù)合娃球?qū)ρ?丙種球蛋白和HSA在不同鹽 濃度條件下的吸附情況的比較
[0067] 蛋白質(zhì)在理想的疏水電荷誘導(dǎo)吸附劑上保留時(shí)，應(yīng)該只與蛋白質(zhì)與吸附劑間的疏 水作用力有關(guān)，但在實(shí)際上，往往有不同程度的偏離，運(yùn)種反常行為可能是由于疏水電荷誘 導(dǎo)吸附劑具有離子交換的性質(zhì)造成的，在疏水電荷誘導(dǎo)吸附劑上除了疏水作用外還有微弱 的范德華力，氨鍵和靜電作用力等存在，雖然HCIC具有非鹽依賴性，但是為了避免運(yùn)些作 用力對(duì)疏水作用力的影響，本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了化C1濃度從0. 5moL/L至3. Omol/L時(shí)，鹽濃度對(duì) 吸附平衡的影響。 W側(cè)分別稱取四份lOmg鍵合MEP的化3〇4@Si〇2@MEP磁性復(fù)合微球，并分別放于四個(gè) 2血離屯、管中，然后，分別向四個(gè)離屯、管中加入100 y L 丫-丙種球蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（lOmg/mL)， 將20mmol/L抑=7. 4的憐酸鹽緩沖液中化Cl的濃度分別調(diào)節(jié)為0. 5mol/L，1. Omol/L， 2. 0mol/L，3. Omol/L，分別補(bǔ)加不同化Cl濃度的PBS溶液分于四個(gè)離屯、管中至2血，置于搖 床中25°C下恒溫緩慢震蕩3.化，然后進(jìn)行磁分離，留取每個(gè)吸附上清液于4°C冰箱保存，參 比液為不含蛋白質(zhì)的空白緩沖液，用紫外-分光光度計(jì)在595nm下測(cè)定各體系吸附蛋白質(zhì) 后的吸光度，HSA的測(cè)試方法同丫-丙種球蛋白。
[0069] 從附圖8可W看出，當(dāng)化C1濃度從0.5mol/L變至3. Omol/L時(shí)，丫 -丙種球蛋白 和HSA的吸附量也隨之增加，丫-