五味子乙素在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種預(yù)防和治療糖尿病的藥物，特別涉及一 種五味子乙素在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 根據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟（International Diabetes Federatio，IDF)統(tǒng)計，2014 年 全球的糖尿病患者有3. 87億，全球發(fā)病率為8. 3%，估計到2035年，全球糖尿病人數(shù)會達(dá)到 5. 92億。中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會于2007至2008年在我國部分地區(qū)開展的糖尿病流行病 學(xué)調(diào)查顯示：我國20歲以上人群糖尿病患病率為9. 7%，糖尿病前期的比例為15. 5%。糖 尿病是一種慢性疾病，伴隨著病程的延長，各種代謝紊亂能導(dǎo)致各種組織，特別是眼、腎、心 臟、血管、神經(jīng)的慢性損害和功能障礙，由此引發(fā)的心腦血管病變、腎功能衰竭、失明、下肢 壞疽等成為糖尿病致殘致死的主要原因。2014年全球有490萬人死于糖尿病。糖尿病不僅 給患病個體帶來了肉體和精神上的損害并導(dǎo)致壽命的縮短，還給個人、國家?guī)砹顺林氐?經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。預(yù)防糖尿病前期向糖尿病轉(zhuǎn)化以及對已診斷患者進(jìn)行良好的治療時糖尿病防治 指南中最重要的策略。
[0003] 2型糖尿病占所有糖尿病90 %以上，其發(fā)病機(jī)制有兩個基本環(huán)節(jié)：胰島素抵抗和 胰島0細(xì)胞胰島素分泌相對不足。胰島素抵抗是指肝、肌肉、脂肪等胰島素作用的靶器官 對正常濃度的胰島素產(chǎn)生反應(yīng)不足的病理生理狀態(tài)。在這種狀態(tài)下，胰島0細(xì)胞需要分泌 更多的胰島素（高胰島素血征）來抵抗高血糖。胰島0細(xì)胞不能夠產(chǎn)生足夠的胰島素來 抵抗越發(fā)嚴(yán)重的胰島素抵抗，最終導(dǎo)致胰島0細(xì)胞衰竭。
[0004] 2型糖尿病是一種慢性進(jìn)行性的疾病，絕大部分患者需要終身用藥。
[0005] 五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz. )Baill?或華中五味 子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.的干燥成熟果實(shí)。五味子的功效是斂肺，滋 腎，生津，收汗，澀精。中醫(yī)稱糖尿病為消渴癥，基本病機(jī)為陰津虧耗，燥熱偏盛。很多治療糖 尿病中藥方劑中都含有五味子，一些研究表明五味子的提取物有降低糖尿病血糖的作用， 不過五味子中的單體成分抗糖尿病作用未見任何報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了五味子乙素在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用，并提供了一種以五味 子乙素為有效成分的藥物組合物，利用該藥物組合物可有效控制血糖水平。
[0007] 五味子乙素在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
[0008] 申請人研究發(fā)現(xiàn)五味子乙素可顯著改善胰島素抵抗，增加胰島素抵抗肝細(xì)胞的葡 萄糖吸收，降低糖尿病患者的血糖水平，改善葡萄糖耐受水平，其效果顯著。五味子乙素能 很好地應(yīng)用于治療糖尿病，尤其是2型糖尿病和與糖尿病相關(guān)的疾病，達(dá)到改善糖尿病的 目的。
[0009] -種治療糖尿病的藥物組合物，包含作為有效成分的五味子乙素。
[0010] 作為優(yōu)選，五味子乙素有效作用濃度為5~20 yM。
[0011] 作為優(yōu)選，藥物組合物中五味子乙素的百分比含量為22~25%。
[0012] 作為優(yōu)選，藥物組合物包括可藥用輔料。藥物輔料可以賦予藥物一定劑型，有效保 證藥物有效成分的釋放和吸收。
[0013] 作為優(yōu)選，所述藥物組合物為口服給藥的劑型。口服給藥方式簡便，不直接損傷皮 膚或黏膜，減少感染風(fēng)險。由于糖尿病患者需要長期用藥，故口服給藥是一種經(jīng)濟(jì)安全的方 式。
[0014] 更為優(yōu)選，所述口服給藥的劑型為溶液劑、片劑、膠囊劑或顆粒劑。
[0015] 本發(fā)明具備的有益效果：以五味子乙素為有效成分的藥物可顯著降低糖尿病患者 的血糖水平，其有效作用濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于市場一線用藥二甲雙胍。
【附圖說明】
[0016] 圖1為5 iiM的五味子乙素對胰島素抵抗的BNL CL. 2細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響， 其中N為正常對照組，M為模型組，縱坐標(biāo)表示葡萄糖相對消耗量的百分比；
[0017] 圖2為10 iiM的五味子乙素對胰島素抵抗的BNL CL. 2細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響， 其中N為正常對照組，M為模型組，縱坐標(biāo)表示葡萄糖相對消耗量的百分比；
[0018] 圖3為20 y M的五味子乙素對胰島素抵抗的BNL CL. 2細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響， 其中N為正常對照組，M為模型組，縱坐標(biāo)表示葡萄糖相對消耗量的百分比；
[0019] 圖4為五味子乙素對KKAy小鼠空腹血糖的影響；
[0020] 圖5為五味子乙素對KKAy小鼠口服糖耐量的影響，其中A為0GTT檢測結(jié)果圖，B 為計算血糖時間曲線下面積結(jié)果圖；
[0021] 其中，顯著性檢驗(yàn)方法為t檢驗(yàn)，*表示p〈0. 05vs模型組、**表示p〈0.0 lvs模型 組、***表示p〈0.0 Olvs模型組。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0023] 實(shí)施例1
[0024] 五味子乙素對胰島素抵抗肝細(xì)胞降糖活性研究
[0025] 小鼠胚胎肝細(xì)胞BNL CL. 2用含10%胎牛血清的低糖型DMEM培養(yǎng)基于37°C、5% C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，隔天更換新鮮培養(yǎng)液。待細(xì)胞生長至80-90%時，棄去培養(yǎng)液，加 入3mLPBS潤洗一次，加入lmL 0. 05 %胰蛋白酶-EDTA溶液消化約2min，加入三倍量培養(yǎng)液 終止消化，將細(xì)胞液900r/min離心5min，棄去上清液，加入一定量培養(yǎng)液，將細(xì)胞吹散，取 10 y L計數(shù)，將BNL CL. 2細(xì)胞接種于96孔板中，每孔2萬細(xì)胞，并設(shè)無細(xì)胞空白對照孔。培 養(yǎng)24小時后，棄去原培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS)洗一遍，換上無血清無酚紅的低糖DMEM 培養(yǎng)液，分組加受試藥。
[0026] 設(shè)空白對照組（加入正常細(xì)胞培養(yǎng)液100yL)，模型組（加入含liiM的胰島素的 細(xì)胞培養(yǎng)液100 y L)，五味子乙素組（加入含1 ii M的胰島素及5 ii M的五味子乙素的細(xì)胞培 養(yǎng)液100 y L)，以及二甲雙胍陽性對照組（加入含1 yM的胰島素及ImM的二甲雙胍的細(xì)胞 培養(yǎng)液100 y L)。作用24小時后，用葡萄糖氧化酶法測定每孔培養(yǎng)液的葡萄糖含量，即每 孔取5 y L培養(yǎng)液于另一 96孔板中，加入200 y L葡萄糖氧化酶測試液，37°C孵育30min，于 492nm波長下測定每孔吸光度。在葡萄糖0-10mM濃度范圍內(nèi)按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算每孔葡萄糖 含量。每孔葡萄糖消耗量=無細(xì)胞空白孔培養(yǎng)液葡萄糖含量-每孔培養(yǎng)液葡萄糖含量，每 組設(shè)3個或3個以上復(fù)孔，相同實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0027] 葡萄糖含量測定后，原培養(yǎng)孔棄去原培養(yǎng)液，每孔加入含有0. 5mg/mL MTT溶液的 培養(yǎng)液，于37°C、5% C02的條件下孵育4h。棄去上清液，每孔加入100 y LDMS0,37°C，振蕩 lOmin，于550nm波長下測定每孔的吸光度值，用于反映細(xì)胞的增殖狀況，以矯正細(xì)胞數(shù)目 差異引起的葡萄糖吸收差異。最后計算各組葡萄糖消耗量相對于模型組消耗量的百分比。
[0028] 結(jié)果見圖1，五味子乙素為5 yM作用于胰島素抵抗的BNL CL. 2細(xì)胞24小時后均 可增加葡萄糖消耗量，經(jīng)t檢驗(yàn)，與模型組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異。本實(shí)驗(yàn)中，陽性藥二甲雙 胍的有效作用濃度為ImM。五味子乙素的有效作用濃度為5 yM。
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 五味子乙素對胰島素抵抗肝細(xì)胞降糖活性研究
[0031] 小鼠胚胎肝細(xì)胞BNL CL. 2用含10%胎牛血清的低糖型DMEM培養(yǎng)基于37°C、5% C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，隔天更換新鮮培養(yǎng)液。待細(xì)胞生長至80-90%時，棄去培養(yǎng)液，加 入3mLPBS潤洗一次，加入lmL 0. 05 %胰蛋白酶-EDTA溶液消化約2min，加入三倍量培養(yǎng)液 終止消化，將細(xì)胞液900r/min離心5min，棄去上清液，加入一定量培養(yǎng)液，將細(xì)胞吹散，取 10 y L計數(shù)，將BNL CL. 2細(xì)胞接種于96孔板中，每孔2萬細(xì)胞，并設(shè)無細(xì)胞空白對照孔。培 養(yǎng)24小時后，棄去原培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩