+ (干膏得率+最 高干膏得率）X0. 2X100。
[0047] 表3醇提工藝方差分析
[0048]
[0049] F0.05 (2, 6) = 5. 140
[0050] 直觀分析結(jié)果顯示三因素的主次關(guān)系為A>C>B，最佳的工藝搭配為A2C 3B2。由于因 素B、C的離差平方和均小于誤差項因素D，故將其并入誤差項計算。綜合評價方差分析結(jié) 果表明，醇提過程中，乙醇濃度（A)為顯著性影響因素，選擇A 2，加醇量（B)、回流時間（C)無 顯著性影響，加醇量（B)選擇B2，從極差分析C 2與C3相差不大，二者均明顯優(yōu)于C1，從節(jié)省 時間和能源角度考慮，選擇C 2 ;因此最佳提取工藝為A2C2B2，即8倍量70 %乙醇，提取兩次， 每次lh。
[0051] 2、最佳條件驗證
[0052] 稱取1/10處方量的菟絲子等藥材，按最佳工藝進行提取，試驗結(jié)果見表4。
[0053] 表4醇提驗證結(jié)果
[0055] (二）水提工藝的研究
[0056] 1、正交設(shè)計
[0057] 為優(yōu)選最佳水提工藝，采用正交試驗法考察浸泡時間、加水量、提取時間對處方君 藥熟地黃中毛蕊花糖苷及干膏得率的影響。選用L9(34)正交表設(shè)計試驗，各因素水平設(shè)計 表見表5〇
[0058] 表5水提工藝因素和水平
[0060] 按1/10處方稱取熟地黃、山藥、枸杞子藥材，與醇提后干燥藥渣混合后，按照正交 設(shè)計條件提取，試驗結(jié)果見表6,方差分析結(jié)果見表7。
[0061 ] 表6 L9 (34)正交設(shè)計及實驗結(jié)果
[0063] *注：毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)移率的權(quán)重系數(shù)為0. 6,干膏得率的權(quán)重系數(shù)為0. 4,綜合評分 (M)=(毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)移率+最高毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)移率）X0. 6 X 100+(干膏得率+最高干 膏得率）X0. 4X100。
[0064] 表7水提工藝方差分析表
[0066] F0.05 (2, 4) = 6.940
[0067] 直觀分析結(jié)果顯示三因素的主次關(guān)系為B>C>A，最佳的工藝搭配為B3C1A 3。由于因 素A的離差平方和小于誤差項因素D，故將其并入誤差項計算。綜合評價方差分析結(jié)果表 明，水提過程中，加水量（B)為顯著性影響因素，選擇B3，藥材的浸泡時間（A)、提取時間（C) 無顯著性影響，可根據(jù)生產(chǎn)實際情況適當調(diào)整。優(yōu)選的工藝條件為浸泡30min，12倍量水， 提取兩次，每次0. 5h。
[0068] 2、最佳條件驗證
[0069] 按1/10處方稱取熟地黃、山藥、枸杞子藥材，與醇提后干燥藥渣混合后，按照正交 設(shè)計優(yōu)選的條件提取，結(jié)果見表8。
[0070] 表8水提驗證結(jié)果
[0071]
[0072] (三）醇沉工藝的研究
[0073] 苯酚-硫酸法測醇沉前后多糖含量，高效液相法測醇沉前后毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)移率， 烘干法測醇沉前后干膏得率，將三指標加權(quán)后綜合評分，優(yōu)選最佳醇沉工藝。
[0074] 1、多糖含量的測定
[0075] (1)樣品制備
[0076] 取1個處方量菟絲子（粗粉）與山茱萸、牛膝，加8倍量70%乙醇提取2次，每次 1小時，藥渣揮干后與另三位藥合并，加12倍量水提取0. 5小時，2次，藥液濃縮至Ig生藥/ ml。各取20ml濃縮液，分別加95 %乙醇至乙醇濃度0 %、30 %、50 %、70 %，醇沉12小時后， 濾過，量取濾液體積，在濾液中加相應(yīng)體積的95%乙醇，使濾液中乙醇濃度為80%，醇沉12 小時，濾過，取殘渣加水溶解，超聲20min，水浴助溶20min，離心，上清液加水定容至50ml， 稀釋適當倍數(shù)，待測，平行3份。
[0077] (2)樣品溶液多糖含量測定
[0078] 各精密吸取樣品溶液2ml，精密加入5 %苯酚溶液Iml.搖勻，迅速精密加入硫酸 5ml，搖勻，放置10分鐘后，40°C水浴中保溫15分鐘，取出，迅速冷卻至室溫，以相應(yīng)的試劑 為空白，照紫外-可見分光光度法（附錄VA).在490nm的波長處測定吸光度。
[0079] 結(jié)果見下表9。
[0080] 表9不同醇沉濃度多糖轉(zhuǎn)移率考察結(jié)果（η = 3)
[0082] 2、毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)移率
[0083] 取1/10處方量菟絲子（粗粉）與山茱萸、牛膝，加8倍量70%乙醇提取2次，每次 1小時，藥渣揮干后與另三位藥合并，加12倍量水提取0. 5小時，2次。濃縮至Ig生藥/ml。 各取20ml濃縮液，分別加95 %乙醇至乙醇濃度30 %、50 %、70 %，醇沉12小時后，濾過，濾 液水浴揮干后加流動相復(fù)溶后，測毛蕊花糖苷含量。
[0084] 表10不同濃度醇沉前后毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)移率（η = 3)
[0085]
[0086] 3、干膏得率
[0087] 取1/10處方量菟絲子（粗粉）與山茱萸、牛膝，加8倍量70%乙醇提取2次，每次 1小時，殘渣揮干后與另三位藥合并，加12倍量水提取0. 5小時，2次。濃縮至Ig生藥/ml。 各取20ml濃縮液，分別加95 %乙醇至乙醇濃度30 %、50 %、70 %，醇沉12小時后，濾過，取 濾液測干膏得率。
[0088] 表11不同濃度醇沉前后干膏得率（η = 3)
[0090] 4、綜合評價
[0091] 根據(jù)毛蕊花糖苷是熟地黃的有效成分之一，也是中國藥典2010年版一部中熟地 黃項下的含量測定指標，多糖為活性成分，干膏得率是評價提取效率的直接手段，兼顧上述 三個關(guān)鍵指標加權(quán)后進行綜合評分，多糖轉(zhuǎn)移率的權(quán)重系數(shù)為〇. 4,毛蕊花糖苷含量的權(quán)重 系數(shù)為〇. 4,干膏得率的權(quán)重系數(shù)為0. 2,綜合評分（M)=(多糖轉(zhuǎn)移率+最高多糖轉(zhuǎn)移 率）X 0· 4 X 100+ (毛蕊花糖苷含量+最高毛蕊花糖苷含量）X 0· 4 X 100+ (干膏得率+最 高干膏得率）Χ0. 2X100
[0092] 表12不同濃度醇沉前后綜合評分結(jié)果
[0094] 隨著醇沉濃度的增加，多糖含量減少，毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)移率增加，50%乙醇沉淀既可 以保留大部分多糖和毛蕊花糖苷，又可以有效的去除雜質(zhì)，減少干膏得率。綜合評分顯示， 50%乙醇沉淀效果最佳。
[0095](四）制劑成型工藝研究 [0096] 1、煉條溫度的優(yōu)選
[0097] 煉條溫度對丸劑成型影響較大，在室溫下煉條時，軟條粗糙，松散易斷，隨著機器 運轉(zhuǎn)自身產(chǎn)熱，所制軟條趨于平滑，而后當機器自身溫度過高時，軟條質(zhì)黏，不易切斷，丸子 有拖尾現(xiàn)象，圓整度不佳。基于此，對煉條溫度進行考察，結(jié)果見表13。
[0098] 表13煉條溫度的優(yōu)選
[0100] 結(jié)論：煉條溫度過高或過低時，制丸工藝都會受到影響。只有當煉條溫度控制在 35~45°C時，左歸濃縮丸成型工藝才能順利進行。
[0101] 2、稀釋劑種類的優(yōu)選
[0102] 對常用稀釋劑進行篩選，使用淀粉、糊精、微晶纖維素、乳糖、PVP時，素丸能成型。 對稀釋劑的不同加入量進行考察，優(yōu)選不同稀釋劑的最佳加入量，優(yōu)選結(jié)果見表14。
[0103] 表14不同稀釋劑優(yōu)選結(jié)果
[0105] (1)不同處方左歸丸吸濕率
[0106] 恒溫30°C，將樣品置于裝有KNO3飽和溶液的干燥器中（RH90% ) 5小時，測定其平 均吸濕率，結(jié)果見表15。
[0107] 表15不同處方左歸丸吸濕率
[0109] (2)不同處方左歸丸溶散時限檢查
[0110] 照2010版藥典附錄IA丸劑項下溶散時限檢測方法，對5個處方的溶散時限進行 考察，結(jié)果見表16。
[0111] 表16不同處方左歸丸溶散時限檢查結(jié)果
[0112]
[0113] (3)綜合評價
[0114] 從藥輔比、素丸外觀、吸濕率、溶散時限等方面分別對其評分，最佳者5分，最劣者 1分，對以上4指標的評分相加后得綜合評分，選擇評分最高的處方為最優(yōu)處方。
[0115] 表17綜合評價
[0117] 結(jié)論：不同處方左歸丸均符合2010版藥典規(guī)定。即微晶纖維素、乳糖、糊精、淀粉、 PVP-K30均可作為左歸丸的稀釋劑，但從稀釋劑加入量、素丸外觀、吸濕率、溶散時限等方面 綜合評價，微晶纖維素為最佳稀釋劑類型。
[0118] 3、崩解劑的優(yōu)選
[0119] 含膠濃縮丸在長久儲存過程中，可能會出現(xiàn)溶散時間延長的現(xiàn)象，為了使左歸丸 長久儲存但不影響其溶散時限，在處方中可加入適量的崩解劑。微晶纖維素：崩解劑= 10:1時，以素丸外觀、溶散時限、吸濕率為指標，對崩解劑類型進行優(yōu)選，結(jié)果見表18。
[0120] 表18崩解劑類型考察
[0122] 結(jié)論：制丸過程中加入CMS-Na、L-HPC、CMC_Na等三種崩解劑，丸子成型性好，達到 了減少溶散時限的目的，綜合評價，CMC-Na為最佳崩解劑。
[0123] 4、稀釋劑與崩解劑加入比優(yōu)選
[0124] 崩解劑的加入可以減少溶散時限，但當崩解劑加入過量時，會影響丸劑成型，且所 得素丸吸濕率也顯著增加。因此，有必要對崩解劑和稀釋劑的比例進行考察。以素丸外觀、 溶散時間、吸濕率為指標，對崩解劑與稀釋劑的最佳加入比進行考察，結(jié)果見表19。
[0125] 表19崩解劑加入量考察
[0127] 結(jié)論：稀釋劑：崩解劑=10:0~3時，素丸成型性佳，溶散時限與吸濕率均符合規(guī) 定。在稀釋劑：崩解劑=10:2(即5:1)時，成型性最佳，縮短溶散時限的同時，對吸濕率影 響不大，為最佳比例。
[0128] (五）與左歸顆粒比較
[0129] (1)吸濕率
[0130] 恒溫30°C，將左歸顆粒（包衣）和本發(fā)明的左歸濃縮丸（未包衣）樣品置于裝有 不同飽和溶液的干燥器中5小時，測定其平均吸濕率，結(jié)果見表20。
[0131] 表20不同相對濕度下兩劑型吸濕率比較（η = 3)
[0133] 與左歸顆粒相比，卞〈0. 05有統(tǒng)計學(xué)差異，#P〈0. 01有顯著性差異
[0134] 結(jié)果表明，相對濕度90%、96. 3%、100%時，P = 0.000,小于0.01，表明左歸顆粒 與左歸濃縮丸的在相對濕度90%、96. 3%、100%時吸濕率有顯著性差異，即包衣后的左歸 顆粒較左歸濃縮素丸在高濕環(huán)境下，顯著性更易吸濕。
[0135] (2)臨界相對濕度
[0136] 研究表明，水溶性藥物在相對濕度較低的環(huán)境下，幾乎不吸濕，而當環(huán)境相對濕度 增大到一定值時