一種熒光顯微成像納米孔檢測(cè)池的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及納米孔電分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種熒光顯微成像納米孔檢測(cè)池。
【背景技術(shù)】
[0002]納米孔是生物內(nèi)外物質(zhì)和能量交換的基礎(chǔ)，在生命過(guò)程中扮演著重要角色。納米孔分析技術(shù)融合了納米技術(shù)、生物技術(shù)和微電子技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，在基因測(cè)序、生物分析、疾病診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)和公共安全等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]納米孔分析技術(shù)的測(cè)量方式通常采用膜片鉗直流恒電位模式來(lái)記錄離子的電導(dǎo)電流。分析物穿過(guò)納米孔時(shí)，會(huì)引起孔道內(nèi)部電解質(zhì)環(huán)境的改變而產(chǎn)生脈沖離子電導(dǎo)電流的變化，這種電導(dǎo)電流變化的大小和持續(xù)的時(shí)間反映了分析物穿過(guò)納米孔的信息。通過(guò)對(duì)大量脈沖電流的統(tǒng)計(jì)分析可實(shí)現(xiàn)對(duì)分析物的檢測(cè)。
[0004]目前，納米孔分析技術(shù)采用的直流恒電位測(cè)量模式獲取的信號(hào)比較單一，在數(shù)據(jù)分析時(shí)缺乏分子穿孔機(jī)理與結(jié)構(gòu)信息；并且，獲取的電信號(hào)一般為單通道記錄結(jié)果，難以實(shí)現(xiàn)未來(lái)的高通量檢測(cè)的目標(biāo)。因此，在納米孔單分子檢測(cè)獲得離子電導(dǎo)電流及阻斷時(shí)間的過(guò)程中，若能夠提供更多的單分子成像信息，將有利于研宄單分子與納米孔的相互作用，豐富實(shí)時(shí)追蹤穿孔過(guò)程與穿孔動(dòng)力學(xué)信息。
[0005]而成像方面，熒光成像技術(shù)就是一種很好的單分子成像技術(shù)，尤其是全內(nèi)反射熒光成像(TIRF)，它是利用入射光在界面發(fā)生全內(nèi)反射時(shí)所產(chǎn)生的隱失波來(lái)激發(fā)樣品熒光。由于全內(nèi)反射的激發(fā)區(qū)域僅限于界面附近幾百納米的一小薄層，因此，TIRF成像技術(shù)能夠大大降低背景信號(hào)，從而利于研宄界面附近單分子動(dòng)態(tài)過(guò)程。
[0006]目前，將納米孔分析技術(shù)和熒光成像技術(shù)結(jié)合起來(lái)研宄單分子過(guò)孔的信息，需要解決的一大核心問(wèn)題就是:設(shè)計(jì)和加工一種可以配合熒光顯微鏡(尤其是符合物鏡的工作距離)使用的器件，以實(shí)現(xiàn)對(duì)納米孔進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)的同時(shí)，記錄單分子穿過(guò)納米孔過(guò)程的熒光圖像。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型的目的在于提供一種熒光顯微成像納米孔檢測(cè)池，可放置在熒光顯微鏡載物臺(tái)上，與熒光顯微鏡物鏡相匹配，用于單分子穿過(guò)納米孔實(shí)時(shí)熒光成像。
[0008]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采取了以下技術(shù)方案:
[0009]一種熒光顯微成像納米孔檢測(cè)池，包括Cis池1，Cis池I底部和蓋玻片3連接，Trans池2連接在Cis池I中部，Trans池2的底面、Cis池I與蓋玻片3的上面共同組成納米孔檢測(cè)的Cis腔室，熒光顯微鏡透過(guò)蓋玻片3進(jìn)行觀察；
[0010]所述Cis池I為矩形結(jié)構(gòu)件，在Cis池I中部開(kāi)置Trans池插槽4，Trans池插槽4是一個(gè)圓柱形空腔，內(nèi)部為細(xì)牙螺紋，Trans池插槽4與Trans池2配合使用，在Cis池I底面，以Trans池插槽4中心為起點(diǎn)沿Cis池I長(zhǎng)度的方向上開(kāi)置兩段液流導(dǎo)流凹槽5，在Cis池I左側(cè)面正中心，及正面、背面上距所在面中心偏離Trans池插槽4靠右位置處開(kāi)置螺絲孔，依次為液流入口 6、液流出口 7、電極插口 8 ;在液流導(dǎo)流凹槽5的末端，分別開(kāi)置豎直圓柱形通道，并在液流入口 6、液流出口 7、電極插口 8位置向內(nèi)開(kāi)置圓柱形通道，這些圓柱形通道相連通為液流通道10，在Cis池I的底面，開(kāi)置長(zhǎng)方形邊框狀凹槽為粘合劑凹槽9 ；
[0011]所述Trans池2為圓柱形結(jié)構(gòu)件，外部為細(xì)牙螺紋，在Trans池2上面開(kāi)置Trans腔室11，Trans腔室11為圓柱形空腔，在Trans池2底部開(kāi)置芯片凹槽12，芯片凹槽12為圓柱形凹槽；在芯片凹槽12兩邊開(kāi)有便于安裝芯片及輔助導(dǎo)流的矩形輔助凹槽14，在Trans腔室11及芯片凹槽12之間設(shè)有連通小孔13，連通小孔13是錐孔結(jié)構(gòu)，在孔的上側(cè)做錐角處理。
[0012]所述的Cis池I和Trans池2均為PTFE或者PEEK結(jié)構(gòu)件，Cis池I的長(zhǎng)30?120mm、寬20?80臟、高5?3Ctam，Trans池2的直徑6?16臟、高10?35臟。
[0013]所述Trans池插槽4直徑為6?16mm。
[0014]所述液流導(dǎo)流凹槽5長(zhǎng)10?40_，寬I?4mm，深為0.2?0.5_。
[0015]所述液流入口 6、液流出口 7、電極插口 8直徑相同，直徑為2?10mm，需要和相應(yīng)的接頭配合使用。
[0016]所述液流通道10，直徑為I?4mm。
[0017]所述粘合劑凹槽9的長(zhǎng)方形框狀的框長(zhǎng)20?80mm，框?qū)??35mm，凹槽寬度為I ?4mm，深度 0.2 ?0.5mm。
[0018]所述Trans腔室11直徑4?14mm,高8?33臟。
[0019]所述芯片凹槽12直徑為4?8臟，深0.2?0.5臟。
[0020]所述矩形輔助凹槽14寬I?4mm，深0.2?0.5mm。
[0021]所述連通小孔13最小處直徑為0.5?2mm。
[0022]本實(shí)用新型的積極效果是:
[0023](I)將檢測(cè)池分成可以緊密組裝的兩部分，引入螺紋連接的方式，利于調(diào)節(jié)Trans池和Cis池底部蓋玻片之間的距離，從而調(diào)節(jié)Cis腔室液膜的厚度，方便達(dá)到熒光顯微鏡物鏡的工作距離的要求。
[0024](2)使用液流的流動(dòng)設(shè)計(jì)，不斷供給新的溶液，可以大大降低實(shí)驗(yàn)過(guò)程中熒光漂白的影響，使熒光信號(hào)更穩(wěn)定可靠。
[0025](3)可在納米孔電化學(xué)檢測(cè)的同時(shí)，通過(guò)熒光顯微鏡對(duì)單分子過(guò)孔時(shí)的熒光圖像信號(hào)進(jìn)行同步采集。
【附圖說(shuō)明】
[0026]圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0027]圖2為本實(shí)用新型的Cis池I示意圖。
[0028]圖3為本實(shí)用新型的Trans池2示意圖，圖(a)為T(mén)rans池正置示意圖；圖(b)為T(mén)rans池倒置示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029]以下結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0030]參見(jiàn)圖1，一種熒光顯微成像納米孔檢測(cè)池，包括Cis池l，Cis池I底部和蓋玻片3連接，Trans池2連接在Cis池I中部，Trans池2的底面、Cis池I與蓋玻片3的上面共同組成納米孔檢測(cè)的Cis腔室，熒光顯微鏡透過(guò)蓋玻片3進(jìn)行觀察；
[0031]參見(jiàn)圖2，所述Cis池I為長(zhǎng)54mm、寬35_、高1mm的PTFE或PEEK矩形結(jié)構(gòu)件；在Cis池I中部開(kāi)置Trans池插槽4，Trans池插槽4是一個(gè)圓柱形空腔，直徑為8mm，內(nèi)部為M8細(xì)牙螺紋，螺距0.5mm，Trans池插槽4與Trans池2配合使用，在Cis池I底面，以Trans池插槽4中心為起點(diǎn)沿Cis池I長(zhǎng)度的方向上開(kāi)置兩段長(zhǎng)為13mm，寬