一種煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，屬于煙草檢驗技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，包括如下步驟：將煙葉浸取、過濾制得待測溶液；采用高效液相色譜法對待測溶液進行分析，色譜柱采用C18色譜柱，采用紫外檢測器進行檢測，外標法進行定量；流動相A為乙酸銨溶液，流動相B為乙腈，流動相采用梯度洗脫程序；根據(jù)待測溶液的分析結(jié)果及標準曲線計算煙葉中的著色劑的含量。本發(fā)明的測試方法能將煙葉中的11中著色劑準確檢測出來，靈敏度和準確性高，重復(fù)性好。
【專利說明】
一種煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，屬于煙草檢驗技術(shù) 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 著色劑又稱色素，一般用來為食品著色，使食品賦予色澤或者改善食品色澤。著色 劑按其來源可分為天然色素和人工合成色素兩大類。天然色素是從一些動植物組織中提取 出來的，如胡蘿卜素、葉綠素等，這些色素一般來說對人體是無害的，但其穩(wěn)定性差，著色能 力弱，且價格昂貴。人工合成著色素主要是以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過一系列化 學(xué)工藝煉成的，如檸檬黃、胭脂紅等。合成色素因穩(wěn)定性強、著色強且價格低廉而受到食品 工業(yè)的青睞。大量的研究報告指出，幾乎所有的合成色素都不能向人體提供營養(yǎng)物質(zhì)，它們 的違規(guī)使用甚至?xí)：θ梭w健康。例如，對莧菜紅的長期動物試驗結(jié)果表明，過量攝入莧菜 紅的致癌率高達22% ;Visweswaran等通過梓檬黃對大鼠睪丸的氧化應(yīng)激實驗證明了梓檬 黃對DNA有一定的誘變性。
[0003] 再造煙葉是利用煙梗、煙末、煙絲碎片、廢次煙葉等煙草廢料為基本原材料，通過 造紙工藝生產(chǎn)出的煙草薄片，通常在煙草制品中作為葉組配方原料或填充料使用。為了使 產(chǎn)品的色澤與卷煙煙絲相近，生產(chǎn)者常添加黃色系與紅色系著色劑來調(diào)配再造煙葉色澤。 由于著色劑對于再造煙葉的使用必要性不強，且燃燒裂解后的安全性風險未知，因此，對于 再造煙葉紅著色劑使用的控制很有必要。從目前世界范圍內(nèi)的煙草相關(guān)法規(guī)的規(guī)定來看， 德國等發(fā)達國家的煙草相關(guān)法律法規(guī)中，已經(jīng)禁止對煙草直接染色或者使用合成著色劑。 所以，對于再造煙葉中著色劑的使用情況的檢測對于保障卷煙產(chǎn)品的安全性是十分有必要 的。
[0004] 目前對色素的測定方法包括薄層色譜法、極譜法、分光光度法、毛細管電泳法、高 效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法等。高效液相色譜對合成色素的最小檢出量可達ng水平， 該方法已成為色素分析測定的主流方法，被廣泛應(yīng)用于飲品、糕點、肉制品、化妝品等樣品 中著色劑的檢測。
[0005] 申請公布號為CN102944627A的中國發(fā)明專利（申請公布日為2013年2月27日）公開 了一種煙用卷煙煙絲中四種色素含量的測定方法，主要用來測定檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、 日落黃四種色素的含量，其方法為先配制具有濃度梯度的檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃 的混合標準工作溶液，然后配制內(nèi)標溶液，使用純水作萃取劑萃取煙絲樣品，過C-18固相萃 取柱凈化樣品溶液，利用液相色譜儀分別對標準工作溶液和樣品溶液進行檢測分析，最后 計算色素的含量。該方法能夠?qū)ι鲜鏊姆N著色劑具有較好的檢出效果，但是對于使用著色 劑種類較多的煙葉則無法準確檢出各種著色劑的含量。特別是對于再造煙葉，其色澤與正 常卷煙煙絲相差較大，會使用多種著色劑進行著色，除了上述四種著色劑外，還可能使用誘 惑紅、酸性紅、亮藍、赤蘚紅、去二甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素等多種著色劑，而 上述方法無法對其進行準確檢驗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種能夠同時檢測煙葉中的11種著色劑的煙葉中11種著 色劑的高效液相色譜測試方法。
[0007] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法的技術(shù)方 案是：
[0008] -種煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，包括如下步驟：
[0009] 1)將煙葉浸取、過濾制得待測液；
[0010] 2)采用高效液相色譜法對待測液進行分析，色譜柱采用C18色譜柱，采用紫外檢測 器進行檢測，外標法進行定量;流動相A為乙酸銨溶液，流動相B為乙腈，流動相梯度洗脫程 序為:初始A為95%，B為5% ; lOmin時A為55%，B為45% ;20min時A為55%，B為45% ;21min時 A為5%，B為95% ;25min時A為5%，B為95% ;26min時A為95%，B為5% ;30min時A為95%，B為 5%;總洗脫時間為30min;
[0011] 3)將步驟2)中待測溶液的測試結(jié)果代入標準曲線計算煙葉中的檸檬黃、莧菜紅、 胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍、赤蘚紅、去二甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃 素的含量。
[0012] 浸取所用的溶劑為水或有機溶劑，水用來浸取水溶性著色劑，有機溶劑用來浸取 脂溶性著色劑。一般的，有機溶劑使用甲醇。
[0013] 所述待測溶液的制備方法包括:將煙葉加入水中浸取得水相提取液，經(jīng)水相過濾 膜過濾得水相待測液;將煙葉加入有機溶劑中浸取得有機相提取液，經(jīng)有機相過濾膜過濾 得有機相待測液。具體制備時，取兩份煙葉，一份加入水中，另一份加入有機溶劑中。待測溶 液包括水相待測液和有機相待測液，分別進行液相色譜檢測。
[0014] 加入水中的煙葉與水的量的關(guān)系為2g煙葉對應(yīng)2 5mL水，加入有機溶劑中的煙葉與 水的量的關(guān)系為2g煙葉對應(yīng)25mL有機溶劑。
[0015] 所述浸取的時間可以視煙葉的具體狀態(tài)來定，一般的，浸取時間為10-30min。優(yōu)選 的，水相萃取的時間為20_30min。
[0016] 為了促進煙葉中的著色劑被充分浸取并提高浸取效率，所述浸取的同時進行超聲 或者振蕩處理。
[0017] 所述煙葉為再造煙葉。
[0018] 所述煙葉在浸取前在40°c-60°c溫度下烘干10-12h，然后研磨。烘干溫度高則烘干 的速度快，溫度低則烘干的速度慢。研磨時間優(yōu)選為30min。烘干可以避免煙葉中的水分對 后續(xù)待測溶液濃度造成影響，研磨可以促進煙葉中著色劑在溶劑中充分溶解。
[0019] 所述水相過濾膜和有機相過濾膜均為現(xiàn)有技術(shù)中的過濾膜，一般的，水相過濾膜 優(yōu)選為聚醚砜水相針式濾膜。水相過濾膜的孔徑優(yōu)選為0.22-0.45μπι。有機相過濾膜優(yōu)選為 尼龍有機相針式濾膜。有機相過濾膜的孔徑優(yōu)選為0.22-0.45μπι。水相過濾膜和有機相過濾 膜的孔徑均可進一步優(yōu)選為〇. 22μηι和0.45μηι。
[0020] 所述乙酸銨溶液為濃度為0.02mol/L的乙酸銨水溶液。
[0021 ] 所述紫外檢測的波長采用如下設(shè)置：0~4min: 427nm，4 · 35min: 51 lnm，9 · Omin: 625nm，9.8min:511nm，15min:427nm〇
[0022] 所述色譜柱溫度為30°C-40°C，進樣量為10此，流速為1. OmL/min。為了保證實驗數(shù) 據(jù)的可重復(fù)性，以及保證足夠的靈敏度，實驗條件優(yōu)選為色譜柱溫度30°C，進樣量為10yL， 流速為 1.0mL/min〇
[0023] 所述色譜柱的規(guī)格為150mmX 4.6mm，5μηι。
[0024] 用來繪制標準曲線所用的系列標準工作溶液為水溶性系列標準溶液和脂溶性系 列標準溶液，水溶性系列標準溶液中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮 藍、赤蘚紅的濃度均為0.50-10.0 yg/mL，脂溶性系列標準溶液中二甲氧基姜黃素、去甲氧基 姜黃素、姜黃素的濃度均為〇. 50-10.0 yg/mL。
[0025] 用來繪制標準曲線所用的系列標準工作溶液的配制步驟包括:分別制得水溶性著 色劑檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍、赤蘚紅的濃度為〇. 5mg/mL的水 溶性單一標準儲備液;取各水溶性單一標準儲備液混合后，用水稀釋制得各水溶性著色劑 濃度為10yg/mL的水溶性混合標準溶液，將水溶性混合標準溶液用水稀釋分別制得濃度為 0 · 50yg/mL、1 · 0yg/mL、2 · 5yg/mL、5 · 0yg/mL、7 · 5yg/mL 和10 · 0yg/mL 的水溶性著色劑的系列 標準工作溶液;分別制得脂溶性著色劑二甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的濃度為 SOyg/mL的脂溶性單一標準儲備液;取各脂溶性單一標準儲備液混合后，用有機溶劑稀釋制 得各脂溶性著色劑濃度為l〇yg/mL的脂溶性混合標準溶液，將脂溶性混合標準溶液用有機 溶劑稀釋分別制得濃度為〇 · 50yg/mL、1 · 0yg/mL、2 · 5yg/mL、5 · 0yg/mL、7 · 5yg/mL和 10 · Oyg/ mL的脂溶性著色劑的系列標準工作溶液。
[0026] 具體的，所述系列標準工作溶液的配制步驟包括:將檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落 黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍、赤蘚紅各5. Omg分別溶于水中，在10mL容量瓶中用水定容得到濃 度為0.5mg/mL水溶性單一標準儲備液;將水溶性單一標準儲備液各取lmL加入一個50mL容 量瓶中，用水定容得到各水溶性著色劑濃度濃度均為10yg/mL的水溶性混合標準液;將水溶 性混合標準液分別移取0.5mL、lmL、2.5mL、5mL、7.5mL、1 OmL，分別加入6個1 OmL的容量瓶中， 用水定容得到濃度分別為0 · 50yg/mL、1 · 0yg/mL、2 · 5yg/mL、5 · 0yg/mL、7 · 5yg/mL和 10 · Oyg/ mL水溶性著色劑的系列標準工作溶液;將去二甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素各 5.〇11^分別溶于有機溶劑中，在10〇1^容量瓶中用有機溶劑定容得到濃度為5(^8/1^脂溶性 單一標準儲備液;將脂溶性單一標準儲備液各取20mL加入一個100mL的容量瓶中，用有機溶 劑定容得到脂溶性混合標準液；將脂溶性混合標準液分別移取0.5mL、lmL、2.5mL、5mL、 7.5mL、10mL，分別加入6個10mL的容量瓶中，用有機溶劑定容得到脂溶性著色劑的系列標準 工作溶液。有機溶劑為甲醇。
[0027] 煙葉中著色劑的含量按下式計算：
[0028] C = cV/m，
[0029] 式中，C為煙葉中著色劑的含量，單位為yg/g; V為用來浸取煙葉的溶劑的體積，單 位為mL; c為由標準曲線得到的待測溶液中的被測著色劑的濃度，單位為yg/mL ;m為煙葉的 質(zhì)量，單位為g。
[0030] 本發(fā)明的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法采用特定的流動相梯度洗 脫程序，將煙葉中的11中著色劑均可以分離并準確檢測出來，本發(fā)明的方法靈敏度和準確 性高，重復(fù)性好。該方法的標準曲線目標物在0.5~10yg/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好，方法的 平均加標回收率及重復(fù)性良好。本發(fā)明的方法可以作為再造煙葉中檸檬黃、莧菜紅、胭脂 紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍、赤蘚紅8種水溶性著色劑和去二甲氧基姜黃素、去甲氧基 姜黃素、姜黃素3種脂溶性著色劑的通用分析方法，為再造煙葉中著色劑殘留的快速定量提 供檢測依據(jù)。
[0031] 進一步的，本發(fā)明的樣品處理過程簡單、快速，大大節(jié)省了分析時間，便于批量樣 品分析。
【附圖說明】
[0032] 圖1為本發(fā)明實施例1的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法流程圖；
[0033] 圖2為本發(fā)明實施例1的標準工作溶液的色譜圖；其中，圖（a)中1為檸檬黃，2為莧 菜紅，3為胭脂紅，4為日落黃，5為誘惑紅，6為酸性紅，7為亮藍，8為赤蘚紅，圖（b)中9為去二 甲氧基姜黃素，10為去甲氧基姜黃素，11為姜黃素；
[0034] 圖3為姜黃素的不同萃取方式的萃取效果比較；
[0035] 圖4為姜黃素的不同的萃取時間的萃取效果比較；
[0036] 圖5為本發(fā)明實施例1的煙葉樣品分析色譜圖。
【具體實施方式】
[0037] 下面對本發(fā)明的實施方式作進一步說明。
[0038] 實施例1
[0039] 本實施例的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，包括如下步驟：
[0040] 1)取再造煙葉置于烘箱中，在40°C下烘干12h，至可用手指捻碎的程度，取出，研磨 30min后作為煙葉樣品；
[0041] 2)準確稱取0.2g步驟1)中得到的煙葉樣品，加入25mL水中，超聲萃?。ü桃狠腿。?或稱浸取)20min，取上清液用水相濾膜聚醚砜水相針式濾膜過濾得水相待測液，水相濾膜 的孔徑為〇.45μπι;準確稱取0.2g步驟1)中得到的煙葉樣品，加入25mL甲醇中超聲萃取(固液 萃取，或稱浸?。﹍〇min，取上清液用有機相濾膜尼龍有機相針式濾膜過濾得有機相待測液， 有機相濾膜的孔徑為〇.45μπι;
[0042]準確稱取水溶性著色劑檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍、赤 蘚紅各5.0mg(精確到O.lmg)，分別溶于水中，并分別在10mL的容量瓶中用水定容至刻度，配 制成濃度為〇. 50mg/mL的水溶性單一標準儲備液;準確稱取脂溶性著色劑去二甲氧基姜黃 素、去甲氧基姜黃素、姜黃素各5.0mg(精確到O.lmg)，分別溶于甲醇中，并分別在100mL的容 量瓶中用甲醇定容至刻度，配制成濃度為50yg/mL的脂溶性單一標準儲備液；
[0043] 將上述8中水溶性單一標準儲備液各準確移取lmL，加入一個50mL容量瓶中，用水 定容至刻度，配制成各著色劑濃度為l〇yg/mL的水溶性混合標準液;將上述3種脂溶性單一 標準儲備液各準確移取20mL，加入一個100mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成各著 色劑濃度為1 〇yg/mL的脂溶性混合標準液；
[0044] 將上述水溶性混合標準液中的準確移取0.5mL、lmL、2.5mL、5mL、7.5mL、10mL，分別 加入6個lOmL的容量瓶中，用水定容至刻度線，得到濃度分別為0.50yg/mL、1.0yg/mL、2.5μ g/mL、5 · 0yg/mL、7 · 5yg/mL和10 · 0yg/mL的該水溶性著色劑的系列標準工作溶液;將上述脂 溶性混合標準液分別準確移取0.5mL、lmL、2.5mL、5mL、7.5mL、10mL，分別加入6個10mL的容 量瓶中，用甲醇定容至刻度線，得到濃度分別為ο. 50yg/mL、1.0yg/mL、2.5yg/mL、5. Oyg/mL、 7.5yg/mL和10.0 yg/mL的該脂溶性著色劑的系列標準工作溶液；
[0045] 3)將步驟2)中制得的水溶性著色劑系列標準工作溶液、脂溶性著色劑系列標準工 作溶液、水相待測液、有機相待測液分別采用高效液相色譜法進行分析，色譜柱為C18柱(規(guī) 格為150mmX4.6mm，5ym);用紫外檢測器進行檢測，檢測時，所述紫外檢測的波長采用變化 設(shè)置，具體如下：〇 ~4min: 427nm，4.35min:511nm，9. Omin: 625nm，9 · 8min: 51 lnm，15min: 427nm;采用外標法進行定量；標準工作溶液的色譜圖如圖2所示，圖中縱坐標為豐度 (abundance)，橫坐標為時間（time，min);
[0046] 高效液相色譜條件為：色譜柱溫度為30°C，進樣量為10此；流動相A為濃度為 0.02m〇VL的乙酸銨水溶液，流動相B為乙腈，流速為1. OmL/min，流動相采用梯度洗脫程序， 具體如表1所示：
[0047] 表1梯度洗脫程序
[0049] 根據(jù)各著色劑的標準工作溶液的高效液相色譜分析結(jié)果，用外標法繪制標準曲 線，縱坐標為各著色劑對應(yīng)的峰面積，橫坐標為各著色劑的濃度(mg/L)，然后進行回歸分析 得到上述11中著色劑對應(yīng)的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)，利用加標稀釋法得到方法的檢出限 (S/N = 3)和定量限（S/N=10)，ll種著色劑的檢出限和定量限為5~30mg/kg，具體如表2所 示：
[0050] 表2標準曲線和檢測限
[0052]根據(jù)標準曲線可以看出，目標物在0.5~lOyg/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好；
[0053] 4)根據(jù)水相待測液和有機相待測液的高效液相分析結(jié)果及標準曲線，按照如下公 式計算煙葉試樣中著色劑的含量：
[0054] C = 25c/m，
[0055] 式中，C為煙葉試樣中著色劑的含量，單位為yg/g;c為由標準曲線得到的待測溶液 中的被測著色劑的濃度，單位為yg/mL; m為煙葉試樣的質(zhì)量，單位為g。
[0056] 實施例2
[0057]本實施例的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，包括如下步驟：
[0058] 1)取再造煙葉置于烘箱中，在60°C下烘干10h，至可用手指捻碎的程度，取出，研磨 30min后作為煙葉樣品；
[0059] 2)準確稱取0.2g步驟1)中得到的煙葉樣品，加入25mL水中，超聲萃取（固液萃取， 或稱浸取)30min，取上清液用水相濾膜聚醚砜水相針式濾膜過濾得水相待測液，水相濾膜 的孔徑為〇.45μπι;準確稱取0.2g步驟1)中得到的煙葉樣品，加入25mL甲醇中超聲萃取(固液 萃取，或稱浸?。﹍〇min，取上清液用有機相濾膜尼龍有機相針式濾膜過濾得有機相待測液， 有機相濾膜的孔徑為〇.45μπι;
[0060] 標準工作溶液的配制步驟同實施例1。
[0061] 3)將步驟2)中制得的各種著色劑的系列標準工作溶液及制得的兩種待測液分別 采用高效液相色譜法進行分析，色譜柱為C18柱(規(guī)格為150mmX4.6mm，5 ym);用紫外檢測器 進行檢測，檢測時，所述紫外檢測的波長采用變化設(shè)置，具體如下：〇~4min:427nm， 4.35min:511nm，9.0min:625nm，9.8min:511nm，15min:427nm;米用外標法進行定量；
[0062]其余均同實施例1。
[0063] 實施例3
[0064] 本實施例的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，包括如下步驟：
[0065] 1)取再造煙葉置于烘箱中，在50°C下烘干llh，至可用手指捻碎的程度，取出，研磨 30min后作為煙葉樣品；
[0066] 2)準確稱取0.2g步驟1)中得到的煙葉樣品，加入25mL水中，超聲萃?。ü桃狠腿。?或稱浸取)25min，取上清液用水相濾膜聚醚砜水相針式濾膜過濾得水相待測液，水相濾膜 的孔徑為〇.22μπι;準確稱取0.2g步驟1)中得到的煙葉樣品，加入25mL甲醇中超聲萃取(固液 萃取，或稱浸取）l〇min，取上清液用有機相濾膜尼龍有機相針式濾膜過濾得有機相待測液， 有機相濾膜的孔徑為〇.22μπι;
[0067] 標準工作溶液的配制步驟同實施例1。
[0068] 3)將步驟2)中制得的各種著色劑的系列標準工作溶液及制得的兩種待測液分別 采用高效液相色譜法進行分析，色譜柱為C18柱(規(guī)格為150mmX4.6mm，5 ym);用紫外檢測器 進行檢測，檢測時，所述紫外檢測的波長采用變化設(shè)置，具體如下：〇~4min:427nm， 4.35min:511nm，9.0min:625nm，9.8min:511nm，15min:427nm;米用外標法進行定量；
[0069]其余均同實施例1。
[0070] 實施例4
[0071] 本實施例中的待測溶液制備時，采用振蕩萃取方式替代超聲萃取，其余的均同實 施例1。
[0072] 實驗例
[0073] 1)為了對比在對煙葉樣品萃取(固液萃取或稱浸取)處理時著色劑的萃取效果，以 姜黃素為例進行對比：
[0074] 在甲醇浸取煙葉樣品時分別采用超聲、振蕩兩種方法處理，在足夠長的時間后對 比二者中姜黃素的萃取效率，如圖3所示；
[0075] 在甲醇浸取煙葉樣品時采用超聲處理，萃取效率與時間的關(guān)系如圖4所示。
[0076]從圖3中可以看出，對于姜黃素來說，超聲處理的萃取效率明顯高于振蕩處理。從 圖4中可以看出，對于姜黃素來說，在10-30min內(nèi)萃取量基本趨于穩(wěn)定。
[0077] 2)采用標準加入法測定方法的回收率。準確稱取0.2g煙葉樣品，分別加入著色劑 的三種不同濃度的混合標準溶液，按照與實施例1中相同的方法處理，3次平行實驗，測定平 均加標回收率及重復(fù)性，結(jié)果如表3所示：
[0078] 表3樣品回收率和重復(fù)性(n = 3)
[0080] 從表3可以看出，該方法的平均加標回收率及重復(fù)性良好。
[0081] 3)按照實施例1中的方法進行煙葉樣品分析，所得色譜圖如圖5所示，圖中縱坐標 為豐度(abundance)，橫坐標為時間（time，min)。由圖5可以看出，該樣品中含有梓檬黃和胭 脂紅兩種合成著色劑，檢出效果良好。
【主權(quán)項】
1. 一種煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 將煙葉浸取、過濾制得待測液； 2) 采用高效液相色譜法對待測液進行分析，色譜柱采用C18色譜柱，采用紫外檢測器進 行檢測，外標法進行定量;流動相A為乙酸銨溶液，流動相B為乙腈，流動相梯度洗脫程序為： 初始A為95%，B為 5%;10min 時 A為 55%，B為 45%;20min 時 A為 55%，B為45%;21min 時 A為 5%，B為95% ;25min時A為5%，B為95% ;26min時A為95%，B為5% ;30min時A為95%，B為 5%;總洗脫時間為30min; 3) 將步驟2)中待測溶液的測試結(jié)果代入標準曲線計算煙葉中的檸檬黃、莧菜紅、胭脂 紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍、赤蘚紅、去二甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的 含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特征在于:所 述浸取的時間為10_30min。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特征在于:所 述浸取的同時進行超聲或者振蕩處理。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特征在于:所 述煙葉在浸取前在40°C_60°C溫度下烘干10_12h，然后研磨。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特 征在于:所述待測溶液的制備方法包括:將煙葉加入水中浸取、過濾得水相待測液;將煙葉 加入有機溶劑中浸取、過濾得有機相待測液。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特征在于:加 入水中的煙葉與水的量的關(guān)系為2g煙葉對應(yīng)25mL水，加入有機溶劑中的煙葉與水的量的關(guān) 系為2g煙葉對應(yīng)25mL有機溶劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特征在于:所 述紫外檢測的波長采用如下設(shè)置:〇 ~4min:427nm，4.35min:511nm，9.0min:625nm，9.8min: 511nm，15min:427nm〇8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特征在于:所 述色譜柱溫度為30 °C -40 °C，進樣量為1 OyL，流速為1. OmL/min。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中11種著色劑的高效液相色譜測試方法，其特征在于：用 來繪制標準曲線所用的系列標準工作溶液為水溶性系列標準溶液和脂溶性系列標準溶液， 水溶性系列標準溶液中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍、赤蘚紅的濃 度均為0.50-10.Oyg/mL，脂溶性系列標準溶液中二甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素 的濃度均為〇. 50-10.0 yg/mL。
【文檔編號】G01N30/02GK106093216SQ201610365549
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】鄧惠敏, 李中皓, 孫瑩瑩, 楊飛, 劉珊珊, 范子彥, 邊照陽, 王穎, 劉巖順, 唐綱嶺
【申請人】國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心