一種心肌肌鈣蛋白i檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒，包括質(zhì)量比為3:1的試劑1和試劑2，試劑1的組分為MOPSO緩沖液，氯化鎂，脂肪醇聚氧乙烯醚，PC?300；試劑2的組分為MOPSO緩沖液，曲拉通?308，EMULGEN?A90，牛血清白蛋白，PC?300；TnI抗體包被膠乳顆粒。限定抗體所包被的膠乳微球顆粒粒徑為60?65nm，在提高檢測靈敏度的前提下，檢測試劑的檢測準確性也得到相應的保證，有效改善了膠乳增強免疫比濁法的檢測缺陷，提高檢測結(jié)果的接受程度；對緩沖液、表面活性劑等進行優(yōu)化選擇，提高了檢測試劑體系的穩(wěn)定性，使采用的檢測試劑檢測靈敏度高，精密度和抗干擾性明顯增強。
【專利說明】
-種心肌肌巧蛋白I檢測試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種屯、肌肌巧蛋白I檢測試劑盒，屬于體外檢測技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 屯、肌肌巧蛋白Kcardiac troponin I，c化I)是屯、肌肌巧蛋白復合物的亞單位之 一，具有較高的屯、肌特異性及敏感度，已越來越多地用于屯、肌梗死、屯、絞痛的診斷和鑒別診 斷。屯、肌肌巧蛋白I測定開始于20世紀80年代中期，最早使用的是多克隆抗體檢測的放射免 疫比濁法，隨后相繼出現(xiàn)了運用單克隆抗體檢測的各種不同的免疫法。
[0003] 目前檢測的方法有肌巧蛋白I的測定主要有免疫學方法，檢測方法則包括膠乳增 強免疫比濁法，夾屯、免疫放射法、夾屯、酶聯(lián)免疫法，化學發(fā)光W及電化學發(fā)光等相關(guān)方法， 其中普通夾屯、免疫放射法、夾屯、酶聯(lián)免疫法兩種方法成本相對較低，操作相對較簡單，但是 若試驗中所用的抗體為多克隆抗體，會交叉反應，且分析靈敏度較低。而化學發(fā)光和電化學 發(fā)光運兩種方法，準確度較好且反應的分析靈敏度高，能夠快速準確的檢測出結(jié)果，但是運 兩種方法需要特定的化學發(fā)光儀器，并且對實驗室操作人員的要求相對較高，因此在臨床 中無法真正的普及使用，只有一些相對較大的實驗室才具備相應的條件。后期逐漸研發(fā)和 使用的膠乳增強免疫比濁法操作簡單，成本較低，能夠較好的結(jié)合全自動生化分析儀器進 行操作，方便快捷，但是同樣具有分析靈敏度低的缺陷，在臨床使用過程中針對于低濃度的 臨床樣本，容易出現(xiàn)零值，甚至出現(xiàn)負值，運給臨床使用者帶來很大不方便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了解決W上膠乳增強免疫比濁法檢測屯、肌肌巧蛋白I中存在的靈敏度低的問 題，本發(fā)明提供了一種靈敏度高、檢測更準確的檢測屯、肌肌巧蛋白I的檢測方法。
[0005] 本發(fā)明是通過W下步驟得到的： 本發(fā)明提供的肌巧蛋白I的檢測試劑盒，包括體積比為3:1的試劑1和試劑2 試劑1的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 氯化儀 0. lmmol/L-〇.5mmol/L， 脂肪醇聚氧乙締酸 lml/l-3ml/L， PC-300 0.5ml/L-l ml/l; 2)試劑2的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 曲拉通-308 ml/L， EMULGEN-A90 lml/L-5 ml/L, 牛血清白蛋白（BSA) lg/L-5 g/L， PC-300 0.5ml/L-l ml/l; TnI抗體包被膠乳顆粒 15g/L。 所述的肌巧蛋白I檢測試劑，所述化I抗體包被膠乳顆粒為羊抗人單抗體化I抗體，抗體 所包被的膠乳微球顆粒粒徑為60-65nm。
[0006] 所述的肌巧蛋白I檢測試劑來檢測肌巧蛋白I的檢測方法，使用全自動生化分析儀 利用終點法進行測定，檢測主波長為505nm。
[0007] 本發(fā)明的有益效果： 1、 本發(fā)明中限定抗體所包被的膠乳微球顆粒粒徑為60-65nm，在提高檢測靈敏度(達到 0.040-0.050)的前提下，檢測試劑的檢測準確性也得到相應的保證，偏差小于5%，有效改善 了膠乳增強免疫比濁法的檢測缺陷，提高檢測結(jié)果的接受程度； 2、 本發(fā)明對緩沖液、表面活性劑等進行優(yōu)化選擇，提高了檢測試劑體系的穩(wěn)定性，儲存 13個月后，使采用的檢測試劑檢測靈敏度高，精密度和抗干擾性明顯增強，低至0.0化g/L仍 能靈敏的檢測。
【具體實施方式】
[0008] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0009] 實施例1 試劑1中含有 MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 氯化儀 0.1 mmol/L， 脂肪醇聚氧乙締酸 Iml/L 防腐劑 0.5ml/l; 2)試劑2的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 曲拉通-308 Iml/L， EMULGEN-A90 Iml/L， 牛血清白蛋白（BSA) Ig/L， 防腐劑 0.5ml/l; TnI抗體包被膠乳顆粒 Ig/L。
[0010] 實施例2 試劑1中含有 咪挫緩沖液 lOOmmol/L， 氯化儀 0.5mmol/L， 脂肪醇聚氧乙締酸 3ml/L， 防腐劑 1 ml/l; 2)試劑2的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 曲拉通-308 5 ml/L， EMULGEN-A90 3ml/L， 牛血清白蛋白（BSA) 5 g/L， 防腐劑 1 ml/l; TnI抗體包被膠乳顆粒 3g/L。
[00川實施例3 試劑1中含有 MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 氯化儀 0.3mmol/L， 脂肪醇聚氧乙締酸 2ml/L 防腐劑 0.8/1; 2)試劑2的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 曲拉通-308 4 ml/L， EMULGEN-A90 5ml/L， 牛血清白蛋白（BSA) 3 g/L， 防腐劑 0.8 ml/l; TnI抗體包被膠乳顆粒 5g/L。
[0012] 對比例1 同實施例2相比，試劑2中的EMULGEN-A90替換為脂肪醇聚氧乙締酸，其余同實施例2相 同。 對比例2 同實施例2相比，試劑2中抗體所包被的膠乳微球顆粒粒徑為50-55nm。
[001引對比例3 同實施例2相比，試劑2中抗體所包被的膠乳微球顆粒粒徑為80-85nm。
[0014] 準確度試驗 分別配制下表中理論濃度的7個肌巧蛋白I樣本，分別利用實施例1、2、3、對比例1、2、3 的試劑進行檢測，每個濃度水平各樣本分別測定=次，分別取其平均值。其具體數(shù)據(jù)如下表 1： 表1 7個濃度準確度檢測結(jié)果
從W上數(shù)據(jù)可W看出，實施例1、2、3、對比例I的檢測結(jié)果與理論濃度沒有顯著性的差 異，說明膠乳微球顆粒粒徑為60-65nm時，檢測結(jié)果準確度較高，偏差小于5%，而低比例2、3 的檢測結(jié)果同理論濃度差異顯著，特別是在濃度較低時，說明膠乳微球顆粒粒徑為50-55nm 或80-85nm時，對肌巧蛋白I的檢測準確度較差。
[0015] 靈敏度實驗 用已知濃度的樣本測試試劑，記錄在試劑規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變即為吸光度差 值(AA)，換算為濃度5ng/mL的吸光度差值，結(jié)果如下表2: 賈輸駐的、》1吿
從表納容可W看出，實施例1、2、巧P對比例1靈敏度較好，對比例2、3靈敏度較差，說明 乳膠顆粒的粒徑分布，對靈敏度影響較大，而實施例1、2、3和對比例1中選擇的乳膠顆粒的 粒徑分布，使試劑盒具有更高的靈敏度。
[0016] 穩(wěn)定性評價 將實施例1、2、3及對比例1、2、3的試劑在2~8°C避光冷藏儲存13個月，然后配制10個已 知不同濃度的肌巧蛋白I樣本(如表3)，然后將分別使用實施例1、2、3和對比例1、2、3的試劑 檢測肌巧蛋白，檢測結(jié)果如下表3: 表3 10個不同低濃度梯度的肌巧蛋白四種方法檢測結(jié)果對比情況
從W上數(shù)據(jù)可W看出，經(jīng)過13個月的儲存，實施例1、2、3的試劑對肌巧蛋白I濃度低至 0.01 yg/L仍能靈敏的檢測，而對比例1的試劑在0.化g/L時已不能準確檢測，對比例2、3在 O.Uig/L時已不能準確檢測，說明本發(fā)明的試劑相對于對比例1、2、3具有更高的穩(wěn)定性。
[0017] 上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受實施例的限 審IJ，其它任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所做的改變、修飾、組合、替代、簡化均應為 等效替換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種檢測心肌肌鈣蛋白I的檢測試劑，其特征在于包括體積比為3:1的試劑1和試劑 2， 試劑1中的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 氣化儀 0.1 mmol /T-Q. 5mmol/L, 脂肪醇聚氧乙稀醚 lml/L-3ml/L， EMULGEN-A90 lml/L-5 ml/L， PC-300 0.5ml/L-l ml/L； 試劑2中的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 曲拉通-308 lml/L-5 ml/L， 牛血清白蛋白 lg/L-5 g/L， PC-300 0.5ml/L-l ml/L； TnI抗體包被膠乳顆粒 l-5g/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肌鈣蛋白I檢測試劑，其特征在于TnI抗體包被膠乳顆粒為羊 抗人單抗體Tn I抗體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肌鈣蛋白I檢測試劑，其特征在于TnI抗體所包被的膠乳微球 顆粒粒徑為60_65nm。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的肌鈣蛋白I檢測試劑，其特征在于使用全自動生化 分析儀利用終點法進行測定，檢測主波長為505nm。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的肌鈣蛋白I檢測試劑，其特征在于 試劑1中的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 氯化鎂 O.lmmol/L， 脂肪醇聚氧乙烯醚 lml/L 防腐劑 0.5ml/L; 試劑2中的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 曲拉通-308 lml/L， EMULGEN-A90 lml/L， 牛血清白蛋白 lg/L， 防腐劑 0.5ml/L; TnI抗體包被膠乳顆粒 lg/L。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的肌鈣蛋白I檢測試劑，其特征在于 試劑1中的組分為： 咪唑緩沖液 100mmol/L， 氯化鎂 0.5mmol/L， 脂肪醇聚氧乙烯醚 3ml/L， 防腐劑 I ml/L; 2)試劑2的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 曲拉通-308 5 ml/L， EMULGEN-A90 3ml/L, 牛血清白蛋白 5 g/L， 防腐劑 I ml/L; TnI抗體包被膠乳顆粒 3g/L。7.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的肌鈣蛋白I檢測試劑，其特征在于 試劑1中的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 氯化鎂 0.3mmol/L， 脂肪醇聚氧乙烯醚 2ml/L 防腐劑 0.8/L; 2)試劑2的組分為： MOPSO 緩沖液 50mmol/L， 曲拉通-308 4 ml/L， EMULGEN-A90 5ml/L, 牛血清白蛋白 3 g/L， 防腐劑 0.8 ml/L; TnI抗體包被膠乳顆粒 5g/L。
【文檔編號】G01N33/546GK105954523SQ201610553929
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年7月14日
【發(fā)明人】王保全, 靳峰, 法凱, 孫立
【申請人】宏葵生物（中國）有限公司