專利名稱：心肌肌鈣蛋白Ⅰ快速定量測定用標(biāo)準(zhǔn)條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種新的心肌肌鈣蛋白I快速定量測定試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)條構(gòu)造與加工，應(yīng)用于酶聯(lián)測定方法中，使測定更為方便、準(zhǔn)確與快速。
背景技術(shù)：
心肌缺血性損傷，特別是急性心肌梗塞(AMI)是威協(xié)人類生命的主要疾病之一，臨床化學(xué)家和臨床科學(xué)家一直努力尋找和探索特異性好、靈敏度高的血清指標(biāo)。心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)具有高度的心肌特異性，當(dāng)心肌細(xì)胞受損時(shí)，血液中cTnI出現(xiàn)時(shí)間早，持續(xù)時(shí)間長，與心肌損傷程度及預(yù)后密切相關(guān)。因此，它可作為心肌損傷的一種特異性指標(biāo)，在心臟病的診斷及預(yù)后判斷中具有十分重要的意義。
心肌肌鈣蛋白I測定可分為定性與定量測定兩種方法。定性測定主要運(yùn)用層析原理，制作試紙片完成，其優(yōu)點(diǎn)是速度快、操作方便，但其缺點(diǎn)是僅能顯示陽性、陰性結(jié)果，無具體數(shù)值，不能觀察其動態(tài)變化和根據(jù)數(shù)值判斷梗死時(shí)間、面積及預(yù)后，且敏感性低，易受多種因素干擾。定量測定主要依據(jù)酶聯(lián)免疫與化學(xué)發(fā)光原理設(shè)計(jì)，絕大部分運(yùn)用了二株單克隆抗體(少部分僅用一株單克隆抗體或其中一株用多克隆抗體)，一株單克隆抗體為捕獲抗體，另一株單克隆抗體為標(biāo)記抗體，二株單克隆抗體與標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本結(jié)合，形成酶聯(lián)夾心法測定。測定中一般需通過數(shù)個(gè)從低到高或從高到低的已知標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)來制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來精確計(jì)算待測樣本的心肌肌鈣蛋白I的含量。已知標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)加樣采取兩種方法(1).給一個(gè)最高濃度標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，測定時(shí)對倍稀釋后對應(yīng)加入；(2).預(yù)先配置各個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，測定時(shí)對應(yīng)加入酶聯(lián)孔內(nèi)。第一種辦法很繁鎖，第二種辦法增加了試劑盒內(nèi)瓶子的數(shù)量；上述兩種辦法都增加了用戶操作的負(fù)擔(dān)，且標(biāo)準(zhǔn)品打開后易降解，一般僅能使用一次，不能靈活用于臨床不同數(shù)量標(biāo)本的測定。

發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型的目的是提供一種能有效克服上述測定方法的不足，且能快速定量測定人體心肌肌鈣蛋白I的含量的標(biāo)準(zhǔn)條，并同時(shí)提供一種該標(biāo)準(zhǔn)條的加工方法。
本實(shí)用新型的目的是通過如下技術(shù)解決方案實(shí)現(xiàn)的1、心肌肌鈣蛋白I快速定量測定用標(biāo)準(zhǔn)條，采用8-12孔常用酶聯(lián)條，其特征在于在酶聯(lián)條的各孔中附著有濃度按常規(guī)量遞增或遞減的心肌肌鈣蛋白I混合物。
2、上述的標(biāo)準(zhǔn)條，所述的選定孔為1-6孔或2-7孔。
3、上述的標(biāo)準(zhǔn)條，所述的選定孔中的心肌肌鈣蛋白I的含量經(jīng)加工后為0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2μg/L；或0、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2μg/L；或0、0.1、0.3、0.9、2.7μg/L；或0、2.7、0.9、0.3、0.1μg/L。
酶聯(lián)條各孔中的混合物系經(jīng)先后聯(lián)結(jié)鏈親和素與生物素標(biāo)記的心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體或直接聯(lián)結(jié)心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體后，加入不同濃度的心肌肌鈣蛋白I，再經(jīng)真空干燥、降解后而得。
4、心肌肌鈣蛋白I快速定量測定用標(biāo)準(zhǔn)條的加工方法，包括如下工藝步驟方案一(1).采用數(shù)條8-12孔常用酶聯(lián)條(一般用8孔條)，1-6或2-7孔聯(lián)結(jié)好鏈親和素(5-20μg/ml)，常用洗液(如PBS，含0.05％Tween-20)洗1-3次。
(2).0.5～1％白蛋白或其它常用封閉液封閉，洗液洗1-3次。
(3).加入1000-3000ng/ml(優(yōu)選1500ng/ml)含量的生物素標(biāo)記的捕獲單克隆抗體，孵育一定時(shí)間60分鐘)或4℃過夜，洗液洗1-3次。
(4).酶聯(lián)條選定孔內(nèi)加入零濃度與從低到高或從高到低的心肌肌鈣蛋白I標(biāo)準(zhǔn)(高出需要濃度(5-20倍)，37℃孵育一定時(shí)間(優(yōu)選60分鐘)，洗液洗1-3次。
(5).真空干燥箱內(nèi)30-45℃(優(yōu)選37℃)干燥0.5-2小時(shí)(優(yōu)選1小時(shí))。
(6).密封后置37℃水浴降解12-48小時(shí)(優(yōu)選24小時(shí))。
(7).隨機(jī)取出1條降解后標(biāo)準(zhǔn)條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液)校標(biāo)，因不同的血清濃度對標(biāo)準(zhǔn)品有不同的抑制作用，使加工后的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)成為所需的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)濃度。
(8).分條密封包裝備用。
方案二(1).采用數(shù)條8-12孔常用酶聯(lián)條(一般用8孔條)，1-6或2-7孔聯(lián)結(jié)好抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體(5-20μg/ml)，37℃孵育一定時(shí)間(優(yōu)選60分鐘)或4℃過夜，常用洗液(如PBS，含0.05％Tween-20)洗1-3次。
(2).0.5～1％白蛋白或其它常用封閉液封閉，洗液洗1-3次。
(3).酶聯(lián)條選定孔內(nèi)加入零濃度與從低到高或從高到低的心肌肌鈣蛋白I標(biāo)準(zhǔn)(高出需要濃度(5-20倍)，37℃孵育一定時(shí)間(優(yōu)選60分鐘)，洗液洗1-3次。
(4).真空干燥箱內(nèi)30-45℃(優(yōu)選37℃)干燥0.5-2小時(shí)(優(yōu)選1小時(shí))。
(5).密封后置37℃水浴降解12-48小時(shí)(優(yōu)選24小時(shí))。
(6).隨機(jī)取出1條降解后標(biāo)準(zhǔn)條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液)校標(biāo)，因不同的血清濃度對標(biāo)準(zhǔn)品有不同的抑制作用，使加工后的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)成為所需的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)濃度。
(7).分條密封包裝備用。
本發(fā)明的有益效果是標(biāo)準(zhǔn)條內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品性能極其穩(wěn)定，用戶使用極其方便、準(zhǔn)確與快速，且試劑盒內(nèi)配置多條標(biāo)準(zhǔn)條，可靈活分次用于臨床不同數(shù)量標(biāo)本的測定。


圖1為本實(shí)用新型標(biāo)準(zhǔn)條的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2為本實(shí)用新型另一種標(biāo)準(zhǔn)條的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖中1.標(biāo)準(zhǔn)條標(biāo)記，2.非標(biāo)準(zhǔn)條加工孔，3.標(biāo)準(zhǔn)條加工孔(圖1為1-6孔、圖2為2-7孔)。
具體實(shí)施方式
標(biāo)準(zhǔn)條加工步驟如下方案一如圖2所示(1).數(shù)條8孔常用酶聯(lián)條2-7孔聯(lián)結(jié)好鏈親和素(10μg/ml)，洗液(PBS，含0.05％Tween-20)洗2次。
(2).0.5～1％白蛋白封閉，洗液洗2次。
(3).加入1500ng/ml生物素標(biāo)記的捕獲單克隆抗體，孵育60分鐘)4℃過夜，洗液洗3次。
(4).酶聯(lián)條2-7孔內(nèi)加入0、2、4、8、16、32μg/L的心肌肌鈣蛋白I標(biāo)準(zhǔn)，37℃孵育60分鐘，洗液洗3次。
(5).真空干燥箱內(nèi)37℃干燥1小時(shí)。
(6).密封后置37℃水浴降解24小時(shí)。
(7).每塊隨機(jī)取出1條降解后標(biāo)準(zhǔn)條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液)校標(biāo)，因不同的血清濃度對標(biāo)準(zhǔn)品有不同的抑制作用，使加工后的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)成為所需的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)濃度，同時(shí)注意檢測其均一性、準(zhǔn)確性及標(biāo)準(zhǔn)曲線的質(zhì)量。
(8).分條密封包裝備用。
方案二如圖2所示(1).數(shù)條8孔常用酶聯(lián)條2-7孔聯(lián)結(jié)好抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體(10μg/ml)，孵育60分鐘或4℃過夜，洗液洗3次。
(2).酶聯(lián)條2-7孔內(nèi)加入0、2、4、8、16、32μg/L的心肌肌鈣蛋白I標(biāo)準(zhǔn)，37℃孵育60分鐘，洗液洗3次。
(3).真空干燥箱內(nèi)37℃干燥1小時(shí)。
(4).密封后置37℃水浴降解24小時(shí)。
(5).每塊隨機(jī)取出1條降解后標(biāo)準(zhǔn)條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液)校標(biāo)，因不同的血清濃度對標(biāo)準(zhǔn)品有不同的抑制作用，使加工后的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)成為所需的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)濃度，同時(shí)注意檢測其均一性、準(zhǔn)確性及標(biāo)準(zhǔn)曲線的質(zhì)量。
(6).分條密封包裝備用。
權(quán)利要求1.心肌肌鈣蛋白I快速定量測定用標(biāo)準(zhǔn)條，采用8-12孔常用酶聯(lián)條，其特征在于在酶聯(lián)條的各孔中附著有濃度按常規(guī)量遞增或遞減的心肌肌鈣蛋白I混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的標(biāo)準(zhǔn)條，其特征在于上述的標(biāo)準(zhǔn)條的選定孔為1-6孔或2-7孔。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的標(biāo)準(zhǔn)條，其特征在于上述的標(biāo)準(zhǔn)條的選定孔中心肌肌鈣蛋白I的含量為0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2μg/L；或0、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2μg/L；或0、0.1、0.3、0.9、2.7μg/L；或0、2.7、0.9、0.3、0.1μg/L。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種新的心肌肌鈣蛋白Ⅰ快速定量測定用標(biāo)準(zhǔn)條，應(yīng)用于酶聯(lián)測定方法中，該標(biāo)準(zhǔn)條，采用8－12孔常用酶聯(lián)條，在酶聯(lián)條的各孔中附著有濃度按常規(guī)量遞增或遞減的心肌肌鈣蛋白Ⅰ混合物。它利用心肌肌鈣蛋白Ⅰ經(jīng)一定程序加工、干燥、降解后極其穩(wěn)定的特性，把零濃度與數(shù)個(gè)從低到高或從高到低的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)濃度預(yù)先加工在數(shù)條酶聯(lián)條的反應(yīng)孔內(nèi)(此酶聯(lián)條稱為標(biāo)準(zhǔn)條)，并應(yīng)用于心肌肌鈣蛋白Ⅰ快速定量測定試劑盒，使用戶使用極其方便、準(zhǔn)確與快速，且試劑盒內(nèi)配置多條標(biāo)準(zhǔn)條，可靈活分次用于臨床不同數(shù)量標(biāo)本的測定。
文檔編號G01N33/543GK2682417SQ0327840
公開日2005年3月2日 申請日期2003年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月9日
發(fā)明者蘇恩本, 劉希勝, 蘇恩奎 申請人:蘇恩本, 南京強(qiáng)欣生物技術(shù)有限責(zé)任公司