一種測(cè)定尿中砷的新型方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測(cè)定尿中砷的新型方法，采用AFS?230E型雙道原子熒光光度計(jì)儀器，用濕法消化?氫化物發(fā)生原子熒光法對(duì)尿中砷進(jìn)行定量測(cè)定。選擇最佳的儀器條件，通過在樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、樣品測(cè)定等實(shí)驗(yàn)操作過程中，優(yōu)化了消化液組成、改用了消化儀器及消化器皿，降低了試劑的濃度和用量，有效縮短了樣品前處理的操作過程和處理時(shí)間，拓寬樣品檢測(cè)范圍，降低檢測(cè)限，使其適用于尿樣中低砷、適砷和高砷的測(cè)定以及大批量尿樣中砷等不同情形的檢測(cè)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法具有精密度高、靈敏度好、準(zhǔn)確可靠、簡便快捷、干擾少、線性范圍寬、實(shí)用性強(qiáng)、成本低等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
-種測(cè)定尿中神的新型方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明設(shè)及一種測(cè)定尿中神的新型方法，屬于原子巧光光度計(jì)法測(cè)定尿中神的技 術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002 ]尿中神水平直接反應(yīng)神在個(gè)體水平的吸收量，它可W定量估計(jì)近期個(gè)體對(duì)神的吸 收量，是研究近期個(gè)體對(duì)神接觸最可靠的指標(biāo)，也被用作主要神接觸的生物學(xué)指標(biāo)。通過對(duì) 不同行業(yè)個(gè)體對(duì)神接觸的量與尿中各形態(tài)神及總神量的關(guān)系研究顯示，尿中神水平是檢測(cè) 和評(píng)價(jià)職業(yè)性神接觸的重要指標(biāo);近年來我國出現(xiàn)了較多高神地方性病區(qū)，高神地區(qū)人群 相當(dāng)大比率的尿樣含神量較高，需要進(jìn)行長期的監(jiān)測(cè)，即也是作為地方性神中毒檢測(cè)和評(píng) 價(jià)的主要指標(biāo)之一。通過對(duì)尿中神的測(cè)定分析是防控神中毒的重要技術(shù)保證，那么開展尿 中神的檢測(cè)工作尤顯得重要。
[0003] 檢測(cè)尿神的方法有很多種，如①神斑檢測(cè)法、②分光光度檢測(cè)法、③催化極譜檢測(cè) 法、④原子吸收檢測(cè)法、⑤氨化物發(fā)生-原子巧光光譜檢測(cè)法化G-AFS)、⑥電感禪合等離子 檢測(cè)法、⑦聯(lián)用技術(shù)化PLC與ICP-AESaCP-MS聯(lián)用，HPLC與HG-AFS聯(lián)用）等，其中①-④種方 法或存在反應(yīng)干擾、精密度不高，或存在靈敏度低、溶劑毒性大，或存在操作繁瑣、時(shí)間長、 污染大，或存在最低檢測(cè)限較高、設(shè)備昂貴等缺陷，⑥、⑦雖然作為能夠進(jìn)行化學(xué)形態(tài)等分 析的最新發(fā)展方法，但同樣具有設(shè)備價(jià)格昂貴、一般實(shí)驗(yàn)室不具備、經(jīng)濟(jì)性和實(shí)用性較低的 缺陷。因此，對(duì)于現(xiàn)有廣泛采用和推廣的尿神檢測(cè)方法，應(yīng)具備經(jīng)濟(jì)性、適用性、準(zhǔn)確性等幾 大因素，而現(xiàn)行我國訂立的最新衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)為WS/T 474-2015《尿中神的測(cè)定氨化物發(fā) 生原子巧光法》，其采用服-AFS，也很好的印證了運(yùn)一點(diǎn)。
[0004] WS/T 474-2015標(biāo)準(zhǔn)適用于地方性神中毒病區(qū)劃分和防治效果判定，最低檢測(cè)限 為0.化g/L，測(cè)定范圍為0-40iig/L。但此法在操作過程中，存在樣本前處理取樣量大、酸用量 多、使用器材多、操作繁瑣、產(chǎn)生酸霧多易造成環(huán)境污染等缺點(diǎn)。肖軍濤在《用AFS-230E型原 子巧光光度計(jì)測(cè)定尿中的神K W下簡稱文獻(xiàn)1)(世界最新醫(yī)藥信息文摘2016,16(4))-文 中公開了用AFS-230E型原子巧光光度計(jì)，采用濕法消化-HG-A!^對(duì)尿中神進(jìn)行測(cè)定，尿樣同 樣經(jīng)硝酸-高氯酸消化后，在酸性的條件下加入硫脈-抗壞血酸溶液將5價(jià)神還原為3價(jià)神， 在棚氨化鐘作用下生成氨化物，由氣氣帶入石英原子化器中分解為原子態(tài)神，在神空屯、陰 極燈的發(fā)射光激發(fā)下產(chǎn)生原子巧光，其巧光強(qiáng)度在固定條件下與被測(cè)樣品中的神濃度成正 比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。該方法與WS/T 474-2015標(biāo)準(zhǔn)方法相比，簡化了樣品處理步驟， 調(diào)整了標(biāo)準(zhǔn)曲線制備過程中神標(biāo)準(zhǔn)使用液的加入量，并對(duì)儀器操作條件進(jìn)行部分調(diào)整，進(jìn) 一步優(yōu)化HG-AK的檢測(cè)方法。結(jié)果顯示該方法最低檢測(cè)濃度為0.07化g/L，測(cè)定的范圍0-40 yg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在3.86 % W下，加標(biāo)回收率為90 % -102 %。該方法仍存在樣品前處理 試劑用量多、繁瑣，且在消化時(shí)易蒸發(fā)干，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性W及前處理好的樣品需要轉(zhuǎn)移 等缺陷。
[0005] 因此，優(yōu)化現(xiàn)有WS/T 474-2015《尿中神的測(cè)定氨化物發(fā)生原子巧光法》方法，是 對(duì)尿中神測(cè)定技術(shù)的進(jìn)一步提升，是拓寬檢測(cè)范圍、簡化前處理、降低成本、縮短操作時(shí)間 的一種新技術(shù)，是為不同行業(yè)個(gè)體對(duì)神接觸的量及病區(qū)人群尿中神提供快速、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的 尿神檢測(cè)方法，是本領(lǐng)域工作者致力于研究的主要方向之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本研究人員通過在長期開展地方性神中毒的防治研究工作中，對(duì)尿神檢測(cè)方法進(jìn) 行了長期研究，發(fā)明了一種既能測(cè)定尿中神、又經(jīng)濟(jì)高效、且所測(cè)定的結(jié)果能滿足行業(yè)分析 偏差要求的測(cè)定尿中神的新方法。此方法具有操作簡便、穩(wěn)定性好、靈敏度高、干擾少、線性 范圍寬、樣品前處理簡單、成本低、環(huán)境污染小等特點(diǎn)，克服了現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)中測(cè)定尿神 技術(shù)的不足。
[0007] 本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0008] -種測(cè)定尿中神的新型方法，包括W下步驟：
[0009] 1)儀器操作條件:AFS-230E雙道原子巧光光度計(jì)，光電倍增管負(fù)高壓為280V，燈電 流50mA，輔陰極電流25mA，原子儀器高度8mm，載氣流量400mL/min，屏蔽氣流量900mL/min， 壓氣流量0.2MPa; 2 %棚氨化鐘溶液，5 %鹽酸溶液；
[0010] 2)樣品前處理：取1. OmL尿樣放入10.0 mL消化器皿中，加入消化液1. OmL,混勻，然 后將消化器皿置于溫度為200°C的消化儀上消化40~60分鐘，至體積約為0.2ml，液面平靜， 消化器皿中黃色或明顯的白色氣體消失，液體呈無色或淡黃色透明狀態(tài)，備用；
[001U 3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：取6支10 . OmL消化器皿，分別加入0.00、0.10、0.30、0.50、 0.70、1.00血濃度為0.化g/L的神標(biāo)準(zhǔn)工作液，然后各加入1. OmL正常人混合尿液，再加入消 化液1.0血，混勻，置于溫度為200°C的消化儀上消化40~60分鐘，至體積約為0.2mL，溶液呈 無色或淡黃色，冷卻后分別加5 %硫脈-5 %抗壞血酸混合溶液1. OmL，1. OmL鹽酸（18 % )，然 后用超純水定容至10.01111的刻度位置，配制成神濃度分別為0.00、10.0、30.0、50.0、70.0、 100.Oiig/L系列神標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，靜置20-30分鐘，取1.0ml進(jìn)樣量，上配置神空屯、陰極燈及 配套分析軟件的雙道原子巧光光度計(jì)，分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0012] 4)樣品測(cè)定：W5%鹽酸為載流液，2%棚氨化鐘為還原劑，氣氣為載氣;在步驟2) 消化好的尿樣中加入1. OmL鹽酸（18 % )，5 %硫脈-5 %抗壞血酸混合溶液1. OmL，加超純水至 10.OmL,充分混勻，靜置20-30分鐘，取1.OmL進(jìn)樣量，上配置神空屯、陰極燈及配套分析軟件 的雙道原子巧光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。
[0013] 所述測(cè)定尿中神的新型方法，所用溶劑的單位均為質(zhì)量體積百分比；
[0014] 進(jìn)一步地，所述步驟2)、3)中消化儀為ADE-DI多孔自控電熱消解儀;消化液為硫酸 (96 % )、硝酸(66 % )、過氧化氨(30 % )按2:3:5體積進(jìn)行混合的混合液；
[001引消化器皿為10.0 mL具塞磨口帶刻度的硬質(zhì)玻璃消化管。
[0016] 進(jìn)一步地，所述步驟2)中消化后若液體顏色較深或有棟黃色煙，說明有機(jī)物質(zhì)較 多，此時(shí)取出樣品冷卻后補(bǔ)加30%過氧化氨0.5mL，再加熱分解，直至管壁內(nèi)無回流現(xiàn)象或 白煙，液面平靜，同時(shí)看到消化管中黃色或明顯的白色氣體消失，液體呈無色透明狀態(tài)，消 化結(jié)束。
[0017] 進(jìn)一步地，所述步驟4)的2%棚氨化鐘溶液中，含有0.5%氨氧化鋼或0.2%氨氧化 鐘；
[0018] 所述步驟4)中在進(jìn)行樣品測(cè)定之前，先將儀器預(yù)熱20-30min，再測(cè)定試劑空白，在 獲得穩(wěn)定的試劑空白巧光強(qiáng)度后，再依次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列，儀器自動(dòng)扣除空白，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲 線，算出回歸方程和相關(guān)系數(shù)，最后測(cè)定樣品。
[0019] 所述步驟3)、4)所用的超純水>18.2MQ.CM@25°C。
[0020] 采用前述方法對(duì)樣品測(cè)試完畢后，神空屯、陰極燈及配套分析軟件會(huì)根據(jù)線性方程 和相關(guān)系數(shù)自動(dòng)計(jì)算出結(jié)果。
[0021] 與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明具有W下優(yōu)點(diǎn)：
[0022] 1、樣品處理方面:新發(fā)明提高了樣品前處理的速度，優(yōu)化了消化液的組成，減少了 消化液用量及還原劑的濃度和用量，降低了成本，提高了經(jīng)濟(jì)效益。具體見表1、2。
[0023] 表1樣本取樣量與消化液用量情況表(單位:mU
[0024]
[C
[C
[0027] 從表1、2可見，①在樣品前處理中，本發(fā)明方法比現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)WT/T474-2015方法和文 獻(xiàn)1在消化液的用量上大大降低了。消化1份樣品可W節(jié)約2mL或14mL，從而降低了消化液用 量 66.7% 或 93.3%。
[0028] ②本發(fā)明方法優(yōu)化了消化液組成，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)1的消化液中均使用高氯酸，本 發(fā)明方法使用過氧化氨，不僅能獲得比高氯酸更加理想的消化效果，而且從價(jià)格上也大幅 度降低:具體見下表3。
[0029] 表3試劑一覽表
[0mn1
[0031] 因此，選擇過氧化氨更加合理、經(jīng)濟(jì)。
[0032] ③本發(fā)明優(yōu)化了操作步驟，避免了現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)WT/T474-2015及文獻(xiàn)1中還需將消化 好的樣品再次進(jìn)行取樣轉(zhuǎn)移的操作過程，也無需如文獻(xiàn)1中消化后再進(jìn)行水溶解加熱，所W 本法縮短了操作步驟及時(shí)間，達(dá)到簡便、快速的目的；
[0033] ④本發(fā)明降低了還原劑的濃度和使用量，使成本再次降低。再者文獻(xiàn)1消化液里未 使用硫酸，因硫酸沸點(diǎn)rC ):315~338,在消化過程中比較穩(wěn)定，而硝酸沸點(diǎn)：78°C，高氯酸 沸點(diǎn)rC) :130(注意:大于130時(shí)爆炸），在消化過程中容易蒸發(fā)干，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，本發(fā) 明很好地解決了該問題。
[0034] 2、儀器操作條件方面:從表4可見，新發(fā)明方法調(diào)整了光電倍增管負(fù)高壓、載氣流 量、原子化器高度及屏蔽氣流量等參數(shù)，使儀器的操作參數(shù)條件更適合于不同情況尿樣的 測(cè)定。
[00巧]表4巧巾方法儀器工作條件
[0。。為1
[0037] 3、測(cè)定過程方面:①采用ADE-DI多孔自控電熱消解儀和10.OmL具塞磨口帶刻度的 硬質(zhì)玻璃消化管消化好的樣品不需要轉(zhuǎn)移(注：其它方法用的消化器皿是25mkl50mL的S 角燒瓶），直接加還原劑、鹽酸進(jìn)行5+至3+神的還原后定容上機(jī)測(cè)定。減少了容量瓶、移液管 等器皿的使用，提高了檢測(cè)效率、降低了檢測(cè)成本;②拓寬了尿樣測(cè)定范圍，使其由現(xiàn)有技 術(shù)的0-40]ig/L調(diào)整至0-10化g/L，當(dāng)遇到尿樣中神含量較高(如超出40]ig/L)時(shí)，不需稀釋測(cè) 定;③將樣品的最低檢測(cè)濃度由現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的〇.5yg/L降低至0.07yg/L，更加適合于尿樣中低 神的測(cè)定。
[0038] 本發(fā)明方法和現(xiàn)有方法對(duì)比，試劑用量上大大減少，測(cè)定時(shí)樣品不需要轉(zhuǎn)移和再 加熱過程，減少了繁瑣的操作，縮短了測(cè)定時(shí)間；再者改用價(jià)格低性能好的試劑，運(yùn)樣既降 低了成本，又提高了經(jīng)濟(jì)效益。同時(shí)適用于大批量尿樣中神的測(cè)定和尿樣中低神、適神和高 神的測(cè)定，具有精密度高、靈敏度好、準(zhǔn)確可靠、簡便快捷、干擾少、線性范圍寬、實(shí)用性強(qiáng)、 成本低等優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 為使本領(lǐng)域技術(shù)人員更加清楚的了解本發(fā)明方法，
【申請(qǐng)人】在具體實(shí)施例中W證明 實(shí)驗(yàn)的方式做進(jìn)一步的描述。
[0040] 1.實(shí)驗(yàn)部分
[0041] 1.1原理
[0042] 尿樣經(jīng)濕法消化后，在酸性介質(zhì)中，加入抗壞血酸-硫脈混合液使五價(jià)神還原成= 價(jià)神，再W棚氨化鐘作還原劑，生成神化氨，由氣氣載入石英原子化器中分解為原子態(tài)神， 在特制神空屯、陰極燈的發(fā)射光激發(fā)下產(chǎn)生原子巧光，其巧光強(qiáng)度在固定條件下與被測(cè)液中 的神濃度成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。
[0043] 1.2儀器與試劑
[0044] 1.2.1儀器:AFS-230E雙道原子巧光光度計(jì)，神空屯、陰極燈及配套分析軟件（北京 瑞利分析儀器公司），ADE-DI多孔自控電熱消解儀(北京薄瑞賽科有限責(zé)任公司），10.OmL具 刻度和磨砂口塞的硬質(zhì)玻璃消化管，百分之一電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公 司）
[0045] 1.2.2 試劑：
[0046] 5 %鹽酸，30 %過氧化氨，96 %硫酸，66 %硝酸，18 %鹽酸等，W上試劑均為優(yōu)級(jí)純 (GR);
[0047] 2 %棚氨化鐘（內(nèi)含0.5 %氨氧化鋼或0.2 %氨氧化鐘），5 %硫脈-5 %抗壞血酸混合 溶液，試劑為分析純(AR);
[004引神標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(濃度1.化g/mL):取神標(biāo)準(zhǔn)液(濃度為100.化g/L，購于國家標(biāo)準(zhǔn)物 質(zhì)中屯、，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)GSB 04-1714-2004)，逐級(jí)配制至濃度為1.化g/mL的應(yīng)用液；
[0049] 實(shí)驗(yàn)用水為>18.2M Q .CM@25°C的超純水；
[00加]載氣為>99.99 %高純氣氣；
[0051 ]試驗(yàn)使用尿液:用正常人尿液混合成。
[0化2] 1.3儀器工作條件:見表5。
[0化3]表5儀器工作條件表
[0化4]
[00￡
[0化6] 1.4數(shù)據(jù)和結(jié)果分析
[0化7] 采用Excel和SPSS10.0進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。
[005引 2.結(jié)果
[0059] 2.1載流-鹽酸度濃度的選擇
[0060] 在其它條件一定的情況下，改變載流鹽酸的濃度(在2%~20%范圍內(nèi)）測(cè)定相應(yīng) 的巧光強(qiáng)度，當(dāng)鹽酸的體積分?jǐn)?shù)為5%時(shí)，巧光強(qiáng)度最高，即靈敏度最高，因此選擇鹽酸的體 積分?jǐn)?shù)為5 %。
[0061] 2.2棚氨化鐘的濃度
[0062] 試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，棚氨化鐘的濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果有較大影響。我們使用內(nèi)控樣濃度為 25.0yg/L(GSBZ 5004-88環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)批號(hào)：200432)作為比對(duì)，當(dāng)棚氨化鐘溶液濃度為30yg/L 時(shí)，巧光強(qiáng)度最好，其次是濃度為20iig/L?？紤]到試劑用量的經(jīng)濟(jì)性，故選用濃度為20iig/L， 良P2%。特別注意，棚氨化鐘穩(wěn)定性較差，溶解時(shí)需加入濃度為2g/L(0.2%)氨氧化鐘或5g/L (0.5% )氨氧化鋼，W保證溶液的穩(wěn)定性。
[0063] 2.3干擾試驗(yàn)
[0064] 從實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分析中，研究人員發(fā)現(xiàn)堿金屬和堿±金屬類共存物不干擾測(cè)定，如 測(cè)定20yg/L的神時(shí)，600倍的。63+，化2+，413+，]\1112+，￥5+，化6+，5114,200倍的564+^64+，加2+，化2 %Bi3+，Ge4+均不干擾神的測(cè)定。即加入運(yùn)些離子后，測(cè)定的巧光值與不加的相比較，巧光強(qiáng) 度值的改變均小于10%，同時(shí)硫脈和抗壞血酸混合溶液不僅能將（V)價(jià)神還原成（虹）價(jià)， 而且具有抗干擾隱蔽劑作用。另外使用尿樣加標(biāo)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線也足W消除可能存在的干 擾，一般尿樣中的干擾元素的含量均未達(dá)到干擾水平。
[0065] 2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍
[0066] 取6支10 . OmL具塞磨口帶刻度的硬質(zhì)玻璃消化管，分別加入0.00、0.10、0.30、 0.50、0.70、1.00血神標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.1化g/L)，后各加入1. OmL正常人混合尿溶液，加30 %過 氧化氨0.5mL、96 %硫酸0.2血和66 %硝酸0.3mL，置于200°C的ADE-DL自控電熱消化儀上消 化40~60分鐘，至體積約為0.2血，溶液呈無色或淡黃色。冷卻后分別加5%硫脈-5%抗壞血 酸混合溶液1. OmL，鹽酸（18 % ) 1. OmL，然后用超純水定容至10.0 mL的位置，配制成神濃度分 別為O . O、10.0、30 . O、50.0、70.0、100 . Oiig/L系列神標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，靜置20~30分鐘，取 1.0ml上機(jī)測(cè)定。W神濃度C為橫坐標(biāo)，W巧光強(qiáng)度If為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性方程為 If = 79.192*C+100.843，相關(guān)系數(shù)丫 =0.9999。
[0067] 2.5檢出限
[006引在儀器表5工作條件下，對(duì)含量恒定的〔p(As)) = 10.0]ig/L標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行11次評(píng)價(jià)測(cè) 定，計(jì)算得測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD = I.96%，W3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差除W斜率，求得檢出限為 O.OWg/L。
[0069] 2.6精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)
[0070] 2.6.1精密度:分別配制10.0、50.0、100.0 iig/L巧中不同濃度的神標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè) 濃度測(cè)定11次，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.96 %、3.97 %、2.73 %，符合《生物材料分 析方法研準(zhǔn)則》的要求;而文獻(xiàn)1的精密度為2.21 % (資料中獲得），標(biāo)準(zhǔn)WT/T474-2015中精 密度為2.5 % -4.9 % (資料中獲得），說明本法比文獻(xiàn)及標(biāo)準(zhǔn)WT/T474-2015精密度高。
[0071] 本方面與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)WS/T 474-2015及文獻(xiàn)1對(duì)同一尿樣進(jìn)行6次平行測(cè)定的分析比 較，見表6。
[0072] 表6立種方法對(duì)同一尿樣測(cè)定的對(duì)比分析
[0074]由表6可知本發(fā)明方法測(cè)定均值與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)WS/T 474-2015方法及文獻(xiàn)1均在標(biāo)準(zhǔn) 差偏差范圍內(nèi)，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，說明分析過程有較高的精密度和準(zhǔn)確度。另一方 面，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)WS/T 474-2015《尿中神的測(cè)定氨化物發(fā)生原子巧光法》的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 4.9%，文獻(xiàn)1的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差4.0%，而本發(fā)明方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.8%，再次證明本發(fā) 明方法比標(biāo)準(zhǔn)WT/T474-2015及文獻(xiàn)1的精密度高。
[00巧]將本發(fā)明數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)WT/T474-2015數(shù)據(jù)分別進(jìn)行Grubbs檢驗(yàn)(GB/T 4883-2008 《數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理和分析正態(tài)樣本離群值的判斷和處理》及GB/T 4882-2001《數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處 理和解釋正態(tài)性檢驗(yàn)》），均無異常數(shù)據(jù)。同時(shí)將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行F雙邊檢驗(yàn)，給定a = 0.05，查F 表得臨界值為:F0.0 25 (5.5) = 7.15，根據(jù)表5兩組數(shù)據(jù)計(jì)算F = S2maVS2min = 0.12^0.072 =2.939，F(xiàn)<F0.025(5.5)，因此兩種方法的精密度無顯著性差異。對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。計(jì) 算統(tǒng)計(jì)量t = 0.353，當(dāng)a = 0.05，自由度f = 10時(shí)，查表得to. 05( 10) = 2.228，t<0.05( 10)，說 明現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)WS/T 474-2015《尿中神的測(cè)定氨化物發(fā)生原子巧光法》與本發(fā)明方法的測(cè)定結(jié) 果無顯著性差異，說明本方法準(zhǔn)確可靠。
[0076] 2.6.2準(zhǔn)確度:新方法取正常人混合尿液加入高中低不同濃度的神標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行 測(cè)定。結(jié)果測(cè)定值在標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍內(nèi)，回收率在95.1 %~105 %之間，即準(zhǔn)確度高。具體見表 7。
[0077] 表7準(zhǔn)確度試驗(yàn)
[0。7口1
[0079] 2.7穩(wěn)定性試驗(yàn):取尿樣42份，各加入神標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液，使之加標(biāo)濃度為10.0 iig/L。 測(cè)定6份，其他在4°C下保存，然后分別在第2、4、6、8、10、12、14天各測(cè)定6份。結(jié)果表明，樣品 在4°C下至少可保存2周。
[0080] 2.8樣品測(cè)定
[0081] 2.8.1樣品前處理：取1.OmL尿樣于10.0 mL具塞刻度磨口硬質(zhì)玻璃消化管中，加 0.5血過30 %氧化氨，96 %硫酸0.2mL和66 %硝酸0.3mL，置于200°C的ADE-DL自控電熱消化 儀上消化40-60分鐘左右，至體積約為0.2mL，此時(shí)溶液呈無色或淡黃色。若顏色較深或有棟 黃色煙，說明有機(jī)物質(zhì)較多，此時(shí)取出冷卻，然后補(bǔ)加〇.5mL過氧化氨，再加熱分解，直至管 壁內(nèi)無回流現(xiàn)象，液面平靜，同時(shí)看到消化管中黃色或明顯的白色氣體消失，液體呈無色透 明狀態(tài)，消化結(jié)束（即樣品前處理完成），然后取下放冷卻至常溫。同時(shí)作3個(gè)空白實(shí)驗(yàn)。
[0082] 2.8.2測(cè)定：W鹽酸(5%)為載流，棚氨化鐘(2%)為還原劑，氣氣為載氣。把消化好 的尿樣加入1. OmL鹽酸（18 % )，5 %硫脈-5 %抗壞血酸溶液1. OmL，加超純水至10.0血，充分 混勻，靜置20-30分鐘，開機(jī)待測(cè);測(cè)定之前儀器先預(yù)熱20min，在測(cè)定試劑空白。在獲得穩(wěn)定 的試劑空白巧光強(qiáng)度后，再依次測(cè)標(biāo)準(zhǔn)系列，儀器自動(dòng)扣除空白，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，算出回歸 方程和相關(guān)系數(shù)，最后測(cè)定樣品。但測(cè)定樣品之前，儀器需再測(cè)定一次試劑空白和樣品空 白，才測(cè)定樣品，樣品進(jìn)樣量為1.0ml。儀器根據(jù)已給的參數(shù)自動(dòng)計(jì)算出結(jié)果。測(cè)定完畢，立 即清洗儀器。
[0083] 2.9 計(jì)算
[0084] 2.9.1按式（1)巧尿樣換算成標(biāo)準(zhǔn)比重（1.020)下的濃度校正系數(shù)K。
[0085] W ? (1 )
[0086] 2.9.2計(jì)算尿中神的濃度，X = C體……（2)
[0087] 式中:X，是尿中神濃度(mg/L); K由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的神濃度(mg/L)。
[008引 3.結(jié)論
[0089] W上結(jié)果顯示，本發(fā)明方法和現(xiàn)有方法對(duì)比，試劑用量上大大減少，測(cè)定時(shí)樣品不 需要轉(zhuǎn)移和再加熱過程，減少了繁瑣的操作，縮短了測(cè)定時(shí)間;再者改用價(jià)格低性能好的試 劑，運(yùn)樣既降低了成本，又提高了經(jīng)濟(jì)效益。其方法的最低檢測(cè)濃度為〇.〇7yg/L，測(cè)定精密 度(n = 6)尿樣加標(biāo)回收率在95.1 %~105.0 %之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.8 % W下。它同時(shí)適 用于大批量尿樣中神的測(cè)定和尿樣中低神、適神和高神的測(cè)定。相對(duì)于其它方法具有精密 度高、靈敏度好、準(zhǔn)確可靠、簡便快捷、干擾少、線性范圍寬、實(shí)用性強(qiáng)、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在尿 神的測(cè)定分析中，簡單易行，值得推廣和應(yīng)用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定尿中砷的新型方法，包括以下步驟： 1) 儀器操作條件:AFS-230E雙道原子熒光光度計(jì)，光電倍增管負(fù)高壓為280V，燈電流 50mA，輔陰極電流25mA，原子儀器高度8mm，載氣流量400mL/min，屏蔽氣流量900mL/min，壓 氣流量0.2MPa; 2 %硼氫化鉀溶液，5 %鹽酸溶液； 2) 樣品前處理：取1.0 mL尿樣放入10.0 mL消化器皿中，加入消化液1.0 mL，混勻，然后將 消化器皿置于溫度為200°C的消化儀上消化40~60分鐘，至體積約為0.2ml，液面平靜，消化 器皿中黃色或明顯的白色氣體消失，液體呈無色或淡黃色透明狀態(tài)，備用； 3) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：取6支10.011^消化器皿，分別加入0.00、0.10、0.30、0.50、0.70、 I .OOmL濃度為0. lyg/L的砷標(biāo)準(zhǔn)工作液，然后各加入I .OmL正常人混合尿液，再加入消化液 1.0 mL，混勻，置于溫度為200°C的消化儀上消化40~60分鐘，至體積約為0.2mL，溶液呈無色 或淡黃色，冷卻后分別加5%硫脲-5%抗壞血酸混合溶液1.0 mL，1.0 mL鹽酸（18% )，然后用 超純水在消化器皿中定容至10.0 mL刻度位置，配制成砷濃度分別為0.00、10.0、30.0、50.0、 70.0、100.0 yg/L系列砷標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，靜置20-30分鐘，取1.0 ml進(jìn)樣量，上配置砷空心陰 極燈及配套分析軟件的AFS-230E雙道原子熒光光度計(jì)，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 4) 樣品測(cè)定：以5%鹽酸為載流，2%硼氫化鉀為還原劑，氬氣為載氣；在步驟2)消化好 的尿樣中加入I .OmL鹽酸（18% )，5%硫脲-5%抗壞血酸混合溶液I .OmL，加超純水至 10.OmU充分混勻，靜置20-30分鐘，取I.OmL進(jìn)樣量，上配置砷空心陰極燈及配套分析軟件 的AFS-230E雙道原子熒光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定尿中砷的新型方法，其特征在于:所用溶劑的單位均為質(zhì) 量體積百分比。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定尿中砷的新型方法，其特征在于:所述步驟2)、3)中消化 儀為ADE-DI多孔自控電熱消解儀。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定尿中砷的新型方法，其特征在于:所述步驟2)、3)中消化 液為硫酸(96 % )、硝酸(66 % )、過氧化氫(30 % )按2:3:5體積進(jìn)行混合的混合液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定尿中砷的新型方法，其特征在于:所述步驟2)、3)中消化 器皿為10.0 mL具塞磨口帶刻度的硬質(zhì)玻璃消化管。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定尿中砷的新型方法，其特征在于:所述步驟2)中消化后若 液體顏色較深或有棕黃色煙，說明有機(jī)物質(zhì)較多，此時(shí)取出消化樣冷卻后補(bǔ)加〇.5mL過氧化 氫(30%)，再加熱分解，直至管壁內(nèi)無回流現(xiàn)象或白煙，液面平靜，同時(shí)看到消化管中黃色 或明顯的白色氣體消失，液體呈無色透明狀態(tài)，消化結(jié)束。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定尿中砷的新型方法，其特征在于:所述步驟4)的2%硼氫 化鉀溶液中，含有0.5 %氫氧化鈉或0.2 %氫氧化鉀。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定尿中砷的新型方法，其特征在于:所述步驟4)中在進(jìn)行樣 品測(cè)定之前，先將儀器預(yù)熱20-30min，再測(cè)定試劑空白，在獲得穩(wěn)定的試劑空白熒光強(qiáng)度 后，再依次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列，儀器自動(dòng)扣除空白，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，算出回歸方程和相關(guān)系數(shù)，最 后測(cè)定樣品。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定尿中砷的新型方法，其特征在于:所述步驟3)、4)所用的 超純水彡 18.2M Ω .CM@25°C。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK105954250SQ201610525065
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年7月6日
【發(fā)明人】潘月華, 黃伊彥文
【申請(qǐng)人】潘月華