一種尿液hcg定量檢測試紙條的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫診斷領(lǐng)域，具體地說，特別涉及到一種尿液HCG定量檢測試紙條的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人絨毛膜促性腺激素(HCG)是婦女受精卵著床后由胎盤絨毛膜細(xì)胞分泌的一種糖蛋白激素，可通過血液循環(huán)進(jìn)入血液和尿液。HCG在受精后第6日開始分泌，受精后第7日，就能在孕婦血清中和尿中測出，可用于早期妊娠的診斷。至妊娠8?10周血清濃度達(dá)到高峰，約50000-20000mIU/L，持續(xù)10日后迅速下降，持續(xù)至分娩。因此，還可根據(jù)尿液或血清中HCG的濃度，對(duì)妊娠正常與否進(jìn)行輔助診斷。
[0003]樣本中待檢抗原的含量很高時(shí)，過量抗原和金標(biāo)抗體結(jié)合，與檢測線位置上的抗體不再形成"夾心復(fù)合物"。此時(shí)，如按常法測讀，所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量，這種現(xiàn)象被稱為HOOK效應(yīng)(鉤狀效應(yīng))，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。HOOK效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)，反應(yīng)甚至可不顯色，而出現(xiàn)假陰性的臨床結(jié)果。這在早孕試紙條中較常見，測試高值的HCG樣品時(shí)，結(jié)果反而呈陰性。
[0004]市場上現(xiàn)有的HCG體外診斷試劑很多，包括定性和定量檢測試劑，定量的檢測試劑主要包括放射性免疫方法，酶聯(lián)免疫吸附方法，化學(xué)發(fā)光法和免疫熒光法等，但定量試劑都需要配備專用的儀器，適合醫(yī)院和診所等，不適合患者家庭自測。而定性的試紙條只能判斷妊娠與否，無法滿足妊娠后的監(jiān)控。
[0005]目前，已有一些專利對(duì)HCG進(jìn)行了定量的研究，在一定程度上，能滿足患者自測的需要。如CN203275417U通過利用數(shù)碼相機(jī)和電腦，進(jìn)行像素比較，可測得HCG線性到600ng/ml (約12720mIU/ml)。專利CN203551567U涉及的HCG濃度比較裝置，對(duì)HCG濃度小于100mIU/ml、約等于1000mIU/ml和大于1000mIU/ml的樣本，能進(jìn)行初步的判斷，無法對(duì)妊娠進(jìn)行跟細(xì)致的判斷。CN2442271Y 和 CN2443378Y 僅對(duì) HCG 濃度小于 25mIU/ml，HCG 濃度在 25 ?1250mIU/ml之間，或者在1250?10000mIU/ml之間或者大于10000mIU/ml的范圍的樣本進(jìn)行了粗略的定量。上述幾種方法多是通過質(zhì)控線C包被羊抗鼠IgG實(shí)現(xiàn)的，對(duì)樣本的濃度只能定量在某個(gè)濃度范圍內(nèi)，而且該范圍太寬，并且沒有對(duì)Η00Κ效應(yīng)以上的濃度進(jìn)行定量，因此對(duì)于大于15000mIU/ml的樣本不能定量，所以難以對(duì)妊娠進(jìn)行詳細(xì)的監(jiān)控。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供了一種檢測尿液樣本中HCG濃度的膠體金免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l，該試紙條用HCG抗原作為質(zhì)控線，發(fā)生的反應(yīng)是質(zhì)控線上的HCG抗原和與檢測線反應(yīng)后剩余的金標(biāo)抗體。隨樣本中HCG濃度的增加，檢測線T出現(xiàn)典型的Η00Κ效應(yīng)，而發(fā)生Η00Κ效應(yīng)的濃度范圍，質(zhì)控線C條帶的顏色隨之變淺。本發(fā)明通過T線和C線兩個(gè)條帶的顏色變化，可實(shí)現(xiàn)對(duì)0-200000mIU/mL濃度范圍的HCG尿液樣本進(jìn)行定量檢測，并避免了因Η00Κ效應(yīng)而導(dǎo)致的假陰性現(xiàn)象，提高了臨床診斷的準(zhǔn)確度。
[0007]本發(fā)明所解決的技術(shù)問題可以采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
[0008]一種尿液HCG定量檢測試紙條的制備方法，包括如下步驟:
[0009]I)劃膜；
[0010]2)處理結(jié)合墊；
[0011]3)處理樣品墊；
[0012]4)制備膠體金結(jié)合墊；
[0013]5)組裝大卡；
[0014]6)切割裝袋；
[0015]7)制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡;其包括如下步驟:
[0016]先將HCG抗原標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，配置成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品，將試紙條標(biāo)記MAX線的一端浸入所述標(biāo)準(zhǔn)品，液面不得超過MAX線，待樣本上到硝酸纖維素膜時(shí)，將試紙放平，反應(yīng)完畢后，利用像素分析軟件分析一系列試紙條上的C和T兩個(gè)條帶，模擬出與C和T兩個(gè)色素相同的兩個(gè)紅色條帶，從而得出一系列HCG標(biāo)準(zhǔn)品濃度的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
[0017]進(jìn)一步的，所述步驟I)的工藝為在帶有背膠的PVC底板上粘貼硝酸纖維素膜，然后用劃膜儀將檢測線T溶液和質(zhì)控線C溶液同時(shí)劃在在硝酸纖維素膜上，烘干，切割，與干燥劑裝袋，備用。
[0018]進(jìn)一步的，所述一系列HCG標(biāo)準(zhǔn)品濃度的標(biāo)準(zhǔn)比色卡包括濃度為0、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、25000、50000、100000 和 200000mIU/mL 的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下:
[0020]1.本發(fā)明制備的試紙條可克服HOOK效應(yīng)導(dǎo)致的假陰性現(xiàn)象，提高了臨床診斷的準(zhǔn)確度。
[0021]2.通過C和T線兩個(gè)條帶組合實(shí)現(xiàn)了對(duì)高濃度HCG的定量，范圍達(dá)到了 0-200000mIU/mlo
[0022]3.可以定性，判斷受檢者是否妊娠。HCG的量2 25mIU/ml，可初步判斷為妊娠。
[0023 ] 4.尿液的取樣方便，無創(chuàng)取樣，對(duì)孕婦安全性高。
[0024]5.如使用羊抗鼠IgG做C線，其制備需要飼養(yǎng)動(dòng)物，消耗資源較多。而本發(fā)明使用HCG抗原做C線，HCG抗原是從孕婦尿液中提取，可變廢為寶，符合國家低碳環(huán)保的倡議。
[0025]6.適合家庭自檢，比較方便的建立個(gè)體化檢驗(yàn)診斷。
[0026]7.檢測時(shí)，將試紙條直接插入待測尿液樣本中，操作簡單，方便，檢測成本低。
【附圖說明】
[0027]圖1為本發(fā)明所述的尿液HCG定量檢測試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0028]圖2為本發(fā)明所述的標(biāo)準(zhǔn)比色卡的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029]為使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0030]參見圖1，本發(fā)明所述的一種尿液HCG定量檢測試紙條的制備方法，包括如下步驟:
[0031]I)劃膜
[0032]在帶有背膠的PVC底板上粘貼硝酸纖維素膜，然后用劃膜儀將檢測線T溶液和質(zhì)控線C溶液同時(shí)劃在在硝酸纖維素膜上，在恒溫烘箱37 °C烘干12-24小時(shí);所述T線溶液中HCG抗體的終濃度為l_2mg/ml，C線溶液抗原的終濃度為l_2mg/ml，T線溶液和C線溶液的噴膜量為0.5_1μ1/cm。
[0033]2)處理結(jié)合墊
[0034]將聚酯膜通過結(jié)合墊處理液浸潤后，切成lcm±0.1cm的寬度，在恒溫烘箱37°C烘干12-24小時(shí);所述結(jié)合墊處理液的組分為BSA 0.5?1%，蔗糖1%?20%，NaN30.15%。
[0035]3)處理樣品墊
[0036]將樣品墊處理液浸潤后，切成2.0cm ± 0.1 cm的寬度，恒溫烘箱中37 °C烘干12_24小時(shí)。
[0037]4)制備膠體金結(jié)合墊
[0038]將待標(biāo)記的HCG單克隆抗體加入空白膠體金溶液中，顛倒混勻后，離心去除上清液，沉淀物中加入含有濃度為0.2%-0.5%的BSA水溶液封閉，離心去除上清液，然后用恢復(fù)液濃縮至原體積的1/10-1/5，制得金貯，然后將金貯用噴膜儀噴在結(jié)合墊上制取膠體金結(jié)合墊，金貯噴量為I?ΙΟμΙ/cm;然后在恒溫烘箱37°C烘干12-24小時(shí)；
[0039]所述HCG單克隆抗體與空白膠體金溶液的配比為0.005-0.02mg HCG單抗/毫升膠體金溶液，空白膠體金溶液的溶質(zhì)平均粒徑15-60nm;恢復(fù)液為磷酸緩沖液，其pH值為7.2-7.6，濃度為0.01-0.02mol/L，所述恢復(fù)液中還含有0.5-2%的BSA和1-10%的蔗糖。
[0040]5)組裝大卡
[0041]取出噴好檢測線T溶液和質(zhì)控線C溶液的PVC底板，在硝酸纖維素膜的兩端粘貼的膠體金結(jié)合墊、樣品墊和吸水墊，將一端的膠體金結(jié)合墊、樣品墊以及一部分硝酸纖維素膜通過標(biāo)有MAX線的免疫層析專用膠帶包住，將另一端的另一部分硝酸纖維素膜和吸水墊通過免疫層析專用膠帶包住。
[0042]6)切割裝袋
[0043]用切條機(jī)切成3?5_寬度的試紙條，裝入鋁箔袋，封口。
[0044]7)制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡
[0045]先將HCG抗原標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，配置成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品，將試紙條標(biāo)記MAX線的一端浸入所述標(biāo)準(zhǔn)品，液面不得超過MAX線，待樣本上到硝酸纖維素膜時(shí)，將試紙放平，反應(yīng)完畢后，利用像素分析軟件分析一系列試紙條上的C和T兩個(gè)條帶，模擬出與C和T兩個(gè)色素相同的兩個(gè)紅色條帶，從而得出一系列HCG標(biāo)準(zhǔn)品濃度的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
[0046]參見圖2，所述一系列HCG標(biāo)準(zhǔn)品濃度的標(biāo)準(zhǔn)比色卡包括濃度為O、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、25000、50000、100000 和 200000mIU/mL 的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
[0047]本發(fā)明的使用過程如下:
[0048]撕開鋁箔袋，取出試紙條，將試紙條標(biāo)記MAX的一端浸入尿液樣本，液面不得超過MAX線，保持10秒鐘，將試紙放平，10分鐘后，與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)，根據(jù)檢測線T和質(zhì)控線C兩條線的條帶對(duì)HCG的濃度進(jìn)行定量，從而對(duì)妊娠狀態(tài)進(jìn)行判斷。
[0049]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種尿液HCG定量檢測試紙條的制備方法，包括如下步驟: . 1)劃膜； . 2)處理結(jié)合墊； .3)處理樣品墊； . 4)制備膠體金結(jié)合墊； . 5)組裝大卡； . 6)切割裝袋； .7)制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡，其包括如下步驟: 先將HCG抗原標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，配置成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品，將試紙條標(biāo)記MAX線的一端浸入所述標(biāo)準(zhǔn)品，液面不得超過MAX線，待樣本上到硝酸纖維素膜時(shí)，將試紙放平，反應(yīng)完畢后，利用像素分析軟件分析一系列試紙條上的C和T兩個(gè)條帶，模擬出與C和T兩個(gè)色素相同的兩個(gè)紅色條帶，從而得出一系列HCG標(biāo)準(zhǔn)品濃度的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液HCG定量檢測試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟I)的工藝為在帶有背膠的PVC底板上粘貼硝酸纖維素膜，然后用劃膜儀將檢測線T溶液和質(zhì)控線C溶液同時(shí)劃在在硝酸纖維素膜上，烘干，切割，與干燥劑裝袋，備用。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液HCG定量檢測試紙條的制備方法，其特征在于，所述一系列HCG標(biāo)準(zhǔn)品濃度的標(biāo)準(zhǔn)比色卡包括濃度為O、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、.10000、25000、50000、100000 和 200000mIU/mL 的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測尿液樣本中HCG濃度的膠體金免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l的制備方法，其采用HCG抗原作為質(zhì)控線C的材料，發(fā)生的反應(yīng)是質(zhì)控線C上的HCG抗原和與檢測線T反應(yīng)后剩余的金標(biāo)抗體。隨樣本中HCG濃度的增加，檢測線T出現(xiàn)典型的HOOK效應(yīng)，而發(fā)生HOOK效應(yīng)的濃度范圍，質(zhì)控線C條帶的顏色隨之變淺。本發(fā)明通過T線和C線兩個(gè)條帶的顏色變化，可實(shí)現(xiàn)對(duì)0-200000mIU/mL濃度范圍的HCG尿液樣本進(jìn)行定量檢測，并避免了因HOOK效應(yīng)而導(dǎo)致的假陰性現(xiàn)象，提高了臨床診斷的準(zhǔn)確度。
【IPC分類】G01N33/76
【公開號(hào)】CN105572394
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610037592
【發(fā)明人】于靈芝, 楊晶, 李福剛, 袁曉航, 沈旭輝, 韓思超
【申請(qǐng)人】上海奧普生物醫(yī)藥有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2016年1月20日