一種用于生物活性物質(zhì)精確定量檢測的樣品前處理方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物活性物質(zhì)精確定量檢測的樣品前處理方法，具體地說，是對植物組織中具有生物活性的物質(zhì)進(jìn)行定量檢測的精確前處理技術(shù)。該方法可以用于生物樣品的定量檢測前處理、精確定量提取等技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]生物活性物質(zhì)極易變質(zhì)，通常保存在-70°C以下超低溫冰箱中，其轉(zhuǎn)運(yùn)和處理過程一般也對環(huán)境溫度要求極高，通常在液氮或干冰等極低溫的環(huán)境中進(jìn)行。因此，其樣品的準(zhǔn)確定量成為其前處理過程的瓶頸步驟，傳統(tǒng)方法中，通常在低溫稱量室中以(TC冰塊作為預(yù)冷介質(zhì)快速稱量定量，并加入固定體積的萃取試劑進(jìn)行萃取。
[0003]傳統(tǒng)方法缺點在于:
1)由于生物樣品很容易受環(huán)境溫度變化而變質(zhì)，因此全部過程中要求樣品在低溫環(huán)境中不融化不變質(zhì)，所以對稱量室環(huán)境溫度要求高；
2)稱量過程不可能在極低的樣品保存溫度中進(jìn)行，不得不將樣品轉(zhuǎn)移至室溫可控的天平中進(jìn)行，即稱量過程中樣品由-70°C以下轉(zhuǎn)移至(TC，極易發(fā)生質(zhì)變，因此操作失誤風(fēng)險較大；
3)樣品稱量過程需要對樣品進(jìn)行絕對定量，因此需要反復(fù)添加和減量樣品，同時還要保持樣品在低溫環(huán)境中不融化變質(zhì)，因此稱量效率低；
4)采用精確定量樣品質(zhì)量及和萃取溶劑的方法確保料液比的恒定，因此，對樣品稱量過程中的準(zhǔn)確度具有較高的要求，稱量誤差對實驗結(jié)果具有重要影響，可能導(dǎo)致實驗結(jié)果可重復(fù)性不高；
5)由于以上原因，操作過程對操作員技術(shù)熟練程度要求極高。
[0004]因此，采用傳統(tǒng)方法前處理樣品往往所得結(jié)果技術(shù)重復(fù)間差異較大，很難達(dá)到理想效果?？梢?，當(dāng)前所采用的方法對于生物活性物質(zhì)的精確定量運(yùn)用具有較大缺陷，急需更加有效的定量前處理技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對【背景技術(shù)】中存在的技術(shù)缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種生物活性物質(zhì)精確定量檢測的樣品前處理方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的樣品質(zhì)變的風(fēng)險，克服了現(xiàn)有技術(shù)中環(huán)境要求高、技術(shù)水平要求高、效率低、技術(shù)重復(fù)間重復(fù)性低等缺陷。
[0006]實現(xiàn)本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
一種用于生物活性物質(zhì)精確定量檢測的樣品前處理方法，其特征在于主要包括如下步驟:
1)樣品管準(zhǔn)備:在編好號的離心管中加入提取試劑和鋼珠，蓋好蓋子；
2)樣品管第一次計重:對加入提取試劑和鋼珠的離心管進(jìn)行稱重并記錄；
3)樣品管預(yù)冷:將以上裝入提取試劑和鋼珠的離心管放入-20°C預(yù)冷30min; 4)半定量取樣:使用微量藥匙取固定體積樣品小心裝入預(yù)冷后的樣品管中；
5)精細(xì)研磨:將球磨儀適配器放入_20°C預(yù)冷30min，將樣品管裝入球磨儀適配器中，采用微量球磨儀進(jìn)行研磨，研磨頻率為30Hz，時間為30s;
6)樣品管二次計重:對加入樣品的樣品管二次稱重，并記錄重量，與樣品管第一次計重取差值即為樣品凈重；
7)微量配平:按照樣品凈重及固定料液比計算所需提取試劑的體積，并使用微量加液器配平每管樣品的料液比；
8)震蕩提取、離心、過濾、分析:根據(jù)實驗要求采用超聲浸提、離心、并過濾后進(jìn)行分析。
[0007]作為優(yōu)選，離心管規(guī)格為2mL離心管，加入的鋼珠直徑為5mm，每個離心管加入2粒；提取試劑加入量為0.5ml。
[0008]本發(fā)明所設(shè)計的微量藥匙由取樣器和手柄構(gòu)成，所述的取樣器為中空圓筒狀，上端開口，其側(cè)壁上部設(shè)有開口槽，取樣器的下底面設(shè)有具內(nèi)螺紋的調(diào)節(jié)孔;取樣器的側(cè)壁上設(shè)有刻度;所述的手柄由圓形的定量片和與之固定連接的調(diào)節(jié)桿組成，定量片位于取樣器的腔體內(nèi)，調(diào)節(jié)桿靠近的定量片的一端設(shè)有與調(diào)節(jié)孔相配合的調(diào)節(jié)螺紋，調(diào)節(jié)桿另一端穿過調(diào)節(jié)孔并伸出到取樣器的外側(cè)。作為優(yōu)選，定量取樣器的內(nèi)徑為3 _，長度為25 mm，調(diào)節(jié)桿的直徑為3 mm，長度為100 _，開口槽的開口寬度為取樣器周長的1/6，定量片的直徑為3 mm;定量調(diào)節(jié)螺紋的外徑等于調(diào)節(jié)孔的內(nèi)徑，為2 _。
[0009]上述的一種用于生物活性物質(zhì)精確定量檢測的樣品前處理方法在提取茶樹新梢組織的代謝組學(xué)分析前處理上的應(yīng)用，此時提取試劑為80%甲醇(重量)和1%甲酸(重量)的混合液。
[0010]上述的一種用于生物活性物質(zhì)精確定量檢測的樣品前處理方法在茶樹新梢組織的兒茶素組分分析前處理上的應(yīng)用，此時提取試劑為80%(重量)甲醇和1%(重量)甲酸的混合液。
[0011 ]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:I)改變傳統(tǒng)方法中精確定量樣品質(zhì)量及和萃取溶劑的方法，采用以樣品質(zhì)量調(diào)節(jié)萃取溶劑用量來穩(wěn)定料液比的提取思路，降低了傳統(tǒng)實驗中對絕對量的要求而改為相對量的恒定，因此簡化了實驗操作過程，提高了工作效率;2)該方法對于環(huán)境要求低，不需要在極低的環(huán)境溫度中進(jìn)行，可以在任何室溫進(jìn)行操作，不影響實驗結(jié)果;3)步驟簡單，可操作性強(qiáng)，降低了傳統(tǒng)稱量過程中反復(fù)添加和減量造成的樣品質(zhì)變風(fēng)險。因此實驗結(jié)果一致性強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定性高；
說明書附圖
圖1為微量藥匙的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖2為取樣器的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖3為手柄的結(jié)構(gòu)不意圖；
圖中:1-取樣器;2-手柄，3-開口槽、4-調(diào)節(jié)孔;5-刻度;6-定量片;7-調(diào)節(jié)桿;8-調(diào)節(jié)螺紋。
【具體實施方式】
[0012]實施例1茶樹新梢組織的代謝組學(xué)分析前處理。
[0013]采收茶樹I芽2葉新鮮組織，立即放入液氮中滅活;使用研缽將新鮮組織研磨成粉末；在編好號的2mL離心管中加入提取試劑(0.5mL80%甲醇+1%甲酸)和2粒直徑為5mm的鋼珠，蓋好蓋子;對每個編號的離心管(已加入提取試劑和鋼珠)進(jìn)行稱重并記錄，即樣品管第一次計重;然后將以上編號并裝入提取試劑和鋼珠的離心管放入_20°C預(yù)冷30min;將球磨儀適配器放入-20°C預(yù)冷30 min；
使用微量藥匙取100 mg左右樣品小心裝入預(yù)冷后的樣品管中；將樣品管裝入球磨儀適配器中，采用微量球磨儀30 Hz，研磨30 s;對加入樣品的樣品管二次稱重，并記錄重量，與樣品管第一次計重取差值即為樣品凈重;按照樣品凈重及固定料液比10mg:1mL提取試劑的比例計算所需提取試劑的體積，并使用微量加液器配平每管樣品的料液比；