干燥綜合征特異自身抗體免疫印跡試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種干燥綜合征特異自身抗體免疫印跡試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]干燥綜合征為一種常見的自身免疫性疾病，主要累及唾液腺、淚腺以及其它多個重要器官。自身抗體是干燥綜合征診斷中的重要生物標志物，目前主要用于干燥綜合征診斷的自身抗體為SSA及SSB。但由于SSA及SSB仍缺乏較高的敏感性，對于很大一部分干燥綜合征患者(尤其是早期患者)的診斷仍需要通過又創(chuàng)的唇腺活檢，為干燥綜合征的診治帶來極大的障礙。
[0003]目前，尚無專門針對干燥綜合征特異自身抗體檢測的免疫印跡試劑盒。大多數(shù)免疫印跡膜條涵蓋多種自身免疫病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、皮肌炎/多發(fā)性肌炎相關(guān)的自身抗體，缺乏疾病特異性，造成臨床資源的浪費?？筍P1、CA6、PSP抗體為新的可用于干燥綜合征早期診斷的自身抗體，目前尚無檢測抗SP1、CA6和PSP自身抗體的免疫印跡膜條。將SP1、CA6、PSP和抗SSA、SSB抗體聯(lián)合用于干燥綜合征的診斷，將極大地提高干燥綜合征的早期檢出率；針對干燥綜合征特異自身抗體所開發(fā)的免疫印跡膜條將提高診斷試劑的使用效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種干燥綜合征自身抗體免疫印跡試劑盒，利用免疫印跡技術(shù)，在一條印跡膜條上同時檢測針對干燥綜合征特異的自身抗體(SSA、SSB、SP1、CA6、PSP抗體)，為干燥綜合征的診斷和鑒別診斷提供可靠的實驗室依據(jù)。
[0005]為了達到上述目的，本發(fā)明由以下的技術(shù)方法來實現(xiàn):
一種干燥綜合征特異自身抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于:所述的試劑盒組成成份包括:置反應(yīng)槽內(nèi)的印跡膜條、酶結(jié)合物、顯色劑A、顯色劑B、終止液、濃縮洗滌液、標準區(qū)帶；將干燥綜合征特異的自身抗原SSA (Ro)、SSB (La)、唾液腺蛋白質(zhì)1 (salivary glandprotein 1，SP1)、碳酸酐酶 6 (carbonic anhydrase 6，CA6)、聰腺分泌蛋白(parotidsecretory protein，PSP)中的至少兩種天然或重組抗原用SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳(PAGE)，按分子量大小依次分開，再通過印跡技術(shù)轉(zhuǎn)移至印跡膜上，其印跡膜條上即含有按分子量大小不同排列的各種干燥綜合征特異自身抗原；或?qū)⑸鲜鲎陨砜乖ㄟ^其它物理吸附或共價結(jié)合的方式，以一定的排列次序固定在膜條上。將膜條放入反應(yīng)槽與待測血清反應(yīng)，如待測血清含有相應(yīng)的自身抗體，將會與相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入酶結(jié)合物及顯色劑，與標準帶對照即可判斷血清中是否含有干燥綜合征特異自身抗體。干燥綜合征特異自身抗體的有無及抗體的種類和數(shù)量，對干燥綜合征診斷和鑒別診斷有重要的臨床意義。
【具體實施方式】
[0006]以下的實施例和制劑實施例可更詳細地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
[0007]實施例1
本試劑盒組成成份包括:置反應(yīng)槽內(nèi)的印跡膜條5板每板8條、酶聯(lián)試劑0.5ml、顯色劑A50ml、顯色劑B50ml、終止液50ml、濃縮洗滌液50ml、標準區(qū)帶。樣品要求:靜脈血
2-5ml，置試管待凝固后離心分離血清，血清標本保存于2-8°C，24小時內(nèi)不能測試的標本應(yīng)放_20°C保存，嚴重溶血，有絮狀物或霉變的標本會影響測試。
[0008]測定步驟
1)洗滌工作液的配制
在2-8°C儲存的20X濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋至1000ml，放入試劑瓶中，標簽上注明配制時間，保存于4°C ;
2)在含有印跡膜條的反應(yīng)槽中加入1ml樣本稀釋液濕潤膜條，1分鐘后移棄稀釋液；
3)加入1ml已稀釋的樣本(含待測血清10ul)，置搖床上室溫搖動30分鐘或置37°C溫箱30分鐘;
4)棄去反應(yīng)槽液體，加入洗滌工作液1ml，搖床輕晃，洗滌5分鐘棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌3次；
5)在反應(yīng)槽中加入已稀釋的酶結(jié)合物溶液，置搖床上室溫搖動30分鐘或置37°C溫箱30分鐘;
6)棄去反應(yīng)槽液體，加入洗滌工作液1ml，搖床輕晃，洗滌5分鐘棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌3次；
7)在反應(yīng)槽中分別加入顯色劑A0.5ml，顯色劑B 0.5ml ；
8)在搖床上室溫搖動2-10分鐘，顯色；
9)待質(zhì)控帶和陽性區(qū)帶顯色清晰后加終止液0.5ml，在搖床上搖動2分鐘；
10)用自來水沖去槽中液體，取出印跡膜條，置吸水紙上，待干后與標準帶對照判斷結(jié)果;
11)結(jié)果判斷:將印跡膜條上起始線與標準帶起始線對齊，觀察陽性顯色區(qū)帶與對應(yīng)的標準帶位置即可判斷顯色區(qū)帶是何種自身抗體。
【主權(quán)項】
1.一種干燥綜合征特異自身抗體免疫印跡試劑盒。2.權(quán)利1所述的干燥綜合征特異自身抗體免疫印跡試劑盒特征在于:所述的試劑盒組成成份包括:置反應(yīng)槽內(nèi)的印跡膜條、酶結(jié)合物、顯色劑A、顯色劑B、終止液、稀釋液、濃縮洗滌液、標準區(qū)帶。3.權(quán)利2所述的印跡膜條特征在于:將干燥綜合征特異的自身抗原SSA(Ro)、SSB(La)、唾液腺蛋白質(zhì) 1 (salivary gland protein 1，SP1)、碳酸酐酶 6 (carbonic anhydrase.6，CA6)、聰腺分泌蛋白(parotid secretory protein，PSP)中的至少兩種天然或重組抗原用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，按分子量大小依次分開，再通過印跡技術(shù)轉(zhuǎn)移至印跡膜上，其印跡膜條上即含有按分子量大小不同排列的各種干燥綜合征特異自身抗原；或?qū)⑸鲜鲎陨砜乖ㄟ^其它物理吸附或共價結(jié)合的方式，以一定的排列次序固定在膜條上；將膜條放入反應(yīng)槽與待測血清反應(yīng)，如待測血清含有相應(yīng)的自身抗體，將會與相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入酶結(jié)合物及顯色劑，與標準帶對照即可判斷血清中是否含有干燥綜合征特異自身抗體；干燥綜合征特異自身抗體的有無及抗體的種類和數(shù)量，對干燥綜合征診斷和鑒別診斷有重要的臨床意義。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種干燥綜合征特異自身抗體檢測的免疫印跡試劑盒。包括；置反應(yīng)槽內(nèi)的印跡膜條、酶結(jié)合物、顯色劑A、顯色劑B、終止液、稀釋液、濃縮洗滌液、標準區(qū)帶。將膜條放入反應(yīng)槽與待測血清反應(yīng)，如待測血清含有相應(yīng)的自身抗體，將會與相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入酶結(jié)合物及顯色劑，與標準帶對照即可判斷血清中是否含有干燥綜合征特異自身抗體：抗SSA（Ro）、SSB（La）、唾液腺蛋白質(zhì)1（salivary？gland？protein？1，SP1）、碳酸酐酶6（carbonic？anhydrase？6，CA6）、腮腺分泌蛋白（parotid？secretory？protein，PSP）。干燥綜合征特異自身抗體的有無及抗體的種類和數(shù)量，對干燥綜合征診斷和鑒別診斷有重要的臨床意義。
【IPC分類】G01N33/564
【公開號】CN105353122
【申請?zhí)枴緾N201510742995
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請人】廈門敖依生物科技有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月5日