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一種用于鈾酰離子檢測(cè)的傳感器、其制備方法及應(yīng)用

文檔序號(hào):9488285閱讀:1630來源:國知局
一種用于鈾酰離子檢測(cè)的傳感器、其制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及電化學(xué)傳感器領(lǐng)域,尤其鈾酰離子檢測(cè)領(lǐng)域,具體為一種用于鈾酰離 子檢測(cè)的傳感器、其制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鈾是重要的天然放射性元素、核燃料,鈾經(jīng)濃縮后,廣泛應(yīng)用于核電和武器領(lǐng)域。 鈾具有高毒性和放射性的特點(diǎn),在過去半年里引起了很大關(guān)注。
[0003] 鈾的大規(guī)模應(yīng)用使得人類有很大機(jī)會(huì)暴露在鈾環(huán)境中,給自身 帶來了長(zhǎng)期的健康危害(參考文獻(xiàn):Zoriy,P.,Ostapczuk,P.,Dederichs ,Η. ,Hobig.J. ,Lennartz,R. , &Zoriy,M. (2010).Journalofenvironmental radioactivity, 101 (5), 414-420 ;Rozmaric,M. ,Ivsic,A.G. , &Grahek,Z. (2009). Talanta, 80 (1), 352-362. ;Jones,A.D. ,Miller,B.G. ,Walker,S. ,Anderson,J. ,Colvin,A. P.,Hutchison,P.A.,&Soutar,C.A. (2007) ·Environmentalresearch, 104(2),216-223.)〇 為了保護(hù)人類健康和環(huán)境,有必要發(fā)展日常和有效監(jiān)測(cè)鈾的技術(shù)。
[0004] 鈾酰離子作為鈾在水溶液中存在的最穩(wěn)定的化學(xué)形式,其具有很好的生物相容 性,給人類健康帶來了極大的威脅。目前,實(shí)驗(yàn)室中最常用的鈾酰離子探測(cè)方法主要包括: 原子吸收光譜(AAS)、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜(ICP-AES)和電感耦合等離子體質(zhì) 譜(ICP-MS),這些方法具有高選擇性、高靈敏度的特點(diǎn)。然而,現(xiàn)有方法存在分析成本高、設(shè) 備造價(jià)昂貴、儀器笨重等缺陷,根本不適合現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)探測(cè),仍然很有必要發(fā)展一種簡(jiǎn)單、便 攜、可實(shí)時(shí)在線探測(cè)鈾的方法。
[0005] 因此,目前迫切需要一種簡(jiǎn)單、便攜的鈾酰離子檢測(cè)裝置,以實(shí)現(xiàn)其的實(shí)時(shí)、快速 在線檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的發(fā)明目的在于:針對(duì)目前主要采用原子吸收光譜(AAS)、電感耦合等離 子體原子發(fā)射光譜(ICP-AES)和電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)等方法檢測(cè)鈾酰離子,存 在分析成本高、設(shè)備造價(jià)昂貴、儀器笨重等缺陷,根本不適合現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)探測(cè)的問題,提供一 種用于鈾酰離子檢測(cè)的傳感器、其制備方法及應(yīng)用。一方面,本發(fā)明提供一種用于鈾酰離子 檢測(cè)的傳感器及其制備方法;另一方面,本發(fā)明提供一種檢測(cè)鈾酰離子的方法。本發(fā)明首次 提出了利用DNA酶和目標(biāo)催化發(fā)卡組裝放大策略來探測(cè)鈾酰離子的方法,其基于U022+-特 異性DNA酶和目標(biāo)催化發(fā)卡組裝技術(shù)來實(shí)現(xiàn)U022+的超靈敏探測(cè)。本發(fā)明通過結(jié)合目標(biāo)催 化發(fā)卡組裝的放大技術(shù),U022+選擇性得到了極大改善。經(jīng)過優(yōu)化后,該傳感器探測(cè)限值為 2pM,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他方法的探測(cè)限值。本發(fā)明提供了一種簡(jiǎn)單、方便、在線和實(shí)時(shí)探測(cè)鈾的超 靈敏的傳感器及檢測(cè)鈾酰離子的方法,對(duì)于鈾酰離子的檢測(cè),具有重要的意義。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0008] -種用于鈾酰離子檢測(cè)的傳感器,包括金電極、設(shè)置在金電極上的敏感層,所述敏 感層包括通過Au-S鍵修飾到金電極表面的HI。
[0009] 所述HI由巰基修飾的堿基序列組成。
[0010]所述H1 的序列為hs- (ch2) 6atagtgagttgtagaagtcactatccattgacttctacaact。
[0011] 前述用于鈾酰離子檢測(cè)的傳感器的制備方法,包括如下步驟:將HI加熱形成HI發(fā) 卡結(jié)構(gòu),同時(shí)將干凈的金電極放入硫酸溶液中進(jìn)行電化學(xué)清洗,并用氮?dú)飧稍?,再將干燥?金電極插入到H1發(fā)卡結(jié)構(gòu)溶液中靜置2~6小時(shí),得第一金電極,然后用6-巰基正己醇浸 泡第一金電極1~5h,去除第一金電極上特異性吸附的DNA,即得傳感器。
[0012] 將H1加熱至80-95°C保溫3-9min后,冷卻至室溫,形成H1發(fā)卡結(jié)構(gòu)。
[0013] 將金電極用氧化鋁粉末拋光后,依次采用超純水、無水乙醇超聲洗滌,得到干凈的 金電極,再將干凈的金電極放入硫酸溶液中進(jìn)行電化學(xué)清洗。
[0014] 將金電極用氧化鋁粉末拋光后,依次采用超純水、無水乙醇超聲洗滌3-5min,氧化 鋁粉末的粒徑為〇. 04-0. 1μm。
[0015] 將干凈的金電極放入0. 3~0. 8mol/L的硫酸溶液中進(jìn)行電化學(xué)清洗,并用氮?dú)飧?燥,再將干燥的金電極插入到50~150μΜ的H1溶液中中靜置2~6小時(shí),得第一金電極。
[0016] 前述用于鈾酰離子檢測(cè)的傳感器的應(yīng)用,將該傳感器用于鈾酰離子的檢測(cè)。
[0017] 前述用于鈾酰離子檢測(cè)的傳感器的應(yīng)用,包括如下步驟:
[0018] (1)將Η2加熱至80-95°C保溫3-9min后,冷卻至室溫,形成Η2發(fā)卡結(jié)構(gòu),備用;
[0019] (2)將傳感器浸泡于PBS緩沖液中,備用;
[0020] (3)向反應(yīng)器中加入巰基修飾的底物DNA、酶鏈DNA、第一緩沖液,混合均勻,得第 一溶液,備用;
[0021] (4)將待測(cè)樣品加熱至70-100°C后,在1~4h內(nèi)冷卻至室溫,將冷卻后的待測(cè)樣 品加入第一溶液中,室溫反應(yīng)6~18min,得第二溶液;
[0022] (5)將步驟2的傳感器在35~40°C下浸泡于第二溶液20~40min,得第一傳感 器,然后用超純水洗滌第一傳感器表面,再向第一傳感器上滴加第一反應(yīng)液,使第一傳感器 與第一反應(yīng)液在35~40 °C下1. 5-3. 5h,得到第二傳感器;
[0023] (6)將第二傳感器浸泡于第二緩沖液中5-20min,然后將浸泡后的第二傳感器用 超純水清洗,去除第二傳感器上非特異性吸附的亞甲基藍(lán);
[0024](7)將步驟6處理后的第二傳感器進(jìn)行方波伏安法測(cè)試,測(cè)定電流強(qiáng)度;
[0025](8)根據(jù)步驟7測(cè)定的結(jié)果,得出鈾酰離子濃度;
[0026] 所述第一緩沖液為含NaCl的2- (N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液,2- (N-嗎啡啉)乙磺 酸的摩爾濃度為5-15mmol/L,NaCl的摩爾濃度為0. 2-0. 5mol/L,該第一緩沖液的pH值為 4-6 ;
[0027] 所述步驟5中,第一反應(yīng)液為含H2發(fā)卡結(jié)構(gòu)和NaCl的PBS反應(yīng)液,其中PBS的濃 度為40~60mmol/L,其中NaCl的濃度為0. 3~0. 7mol/L,第一反應(yīng)液的pH值為6. 8-7. 8 ;
[0028] 所述步驟6中,第二緩沖溶液為含亞甲基藍(lán)的PBS緩沖液,PBS的摩爾濃度為 8-12mmol/L,亞甲基藍(lán)的摩爾濃度為15-25ymol/L;
[0029]所述H2 的序列為AGAAGTCAATGGATAGTGACTTCTACAACTCACTATCCATTG;
[0030]所述巰基修飾的底物DNA的序列為ACTTCTACAACTCACTATrAGGAAGAGATGGACGTG;
[0031]所述酶鏈DNA的序列為CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAGTG AGT〇
[0032] 所述步驟3中,向反應(yīng)器中加入巰基修飾的底物DNA、與巰基修飾的底物DNA等摩 爾量的酶鏈DNA、第一緩沖液,混合均勻,得第一溶液。
[0033] 所述第一緩沖液為含NaCl的2- (N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液,2- (N-嗎啡啉)乙磺 酸的摩爾濃度為10mm〇l/L,NaCl的摩爾濃度為0. 3mol/L,該第一緩沖液的pH值為5. 5。
[0034] 所述步驟5中,第一反應(yīng)液為含H2發(fā)卡結(jié)構(gòu)和NaCl的PBS反應(yīng)液,其中PBS的濃 度為50mmol/L,其中NaCl的濃度為0. 5mol/L,第一反應(yīng)液的pH值為6. 8-7. 8。
[0035] 所述步驟7中,將步驟6處理后的第二傳感器進(jìn)行方波伏安法測(cè)試,掃描電壓范圍 為-0. 40到0. 00V,掃描振幅為50mV,得到電流強(qiáng)度。
[0036] 所述步驟8中,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,將步驟7測(cè)定的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對(duì)比,得出鈾 酰離子濃度。
[0037] 針對(duì)前述問題,本發(fā)明提供一種用于鈾酰離子檢測(cè)的傳感器、其制備方法及應(yīng)用。 本發(fā)明以鈾酰特異性DNA酶為基礎(chǔ)進(jìn)行設(shè)計(jì),其包括金電極、設(shè)置在金電極上的敏感層,敏 感層包括通過Au-S鍵修飾到金電極表面的HI,H1由巰基修飾的堿基序列組成,其序列為HS -(CH2)6ATAGTGAGTTGTAGAAGTCACTATCCATTGACTTCTACAACT。
[0038] 同時(shí),本發(fā)明提供基于前述傳感器在檢測(cè)鈾酰離子的應(yīng)用,具體為采用該傳感器 檢測(cè)鈾酰離子的方法。本發(fā)明利用鈾酰離子特異性DNA酶和兩個(gè)無標(biāo)記分子發(fā)卡探測(cè)鈾酰 離子,其結(jié)合了DNA酶的高特異性和目標(biāo)催化發(fā)卡組裝的等溫和無酶優(yōu)點(diǎn),能夠?qū)崿F(xiàn)鈾酰 離子的超靈敏探測(cè)。其中,鈾酰離子特異性DNA酶由酶鏈DNA(記為E-DNA)和底物DNA(記 為S-DNA)組成;H1和H2在使用前先分別加熱至80-95°C反應(yīng)3-9min,逐漸冷卻至室溫,形 成發(fā)卡結(jié)構(gòu)。該傳感器中,H1由疏基修飾的堿基序列組成,其通過Au-S鍵修飾到金電極表 面。當(dāng)有鈾酰離子存在時(shí),鈾酰離子會(huì)催化DNA酶剪切S-DNA,釋放S-DNA碎片鏈,釋放的 S-DNA碎片和固定在金電極表面的發(fā)卡H1雜交,打開H1,雜交部分生成雙鏈,打開的H1誘 導(dǎo)發(fā)卡H2雜交。S-DNA碎片自發(fā)地從發(fā)卡H1分離,繼續(xù)觸發(fā)下一個(gè)雜交循環(huán)過程。再將MB 嵌入雙鏈DNA(dsDNA)的小溝里,產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。U022+濃度不同,DNA酶剪切釋放的S-DNA 碎片量不同,一定時(shí)間內(nèi)通過目標(biāo)催化發(fā)卡組裝生成的dsDNA的量也不相同,導(dǎo)致產(chǎn)生的 MB的信號(hào)不同。基于此,本發(fā)明通過監(jiān)測(cè)MB電化學(xué)信號(hào)的變化可以間接探測(cè)U022+。由于信 號(hào)放大和高特異性DNA酶的集成,本發(fā)明的傳感器具有超高的鈾酰離子探測(cè)靈敏度。可見, 本發(fā)明具有分析成本低的優(yōu)點(diǎn),同時(shí)解決了設(shè)備造價(jià)昂貴、儀器笨重等缺陷,能夠滿足現(xiàn)場(chǎng) 實(shí)時(shí)探測(cè)的需要,具有較好的應(yīng)用前景。
[0039] 綜上所述,本發(fā)明提出了一種新穎的基于U022+-特異性DNA酶和目標(biāo)催化發(fā)卡組 裝技術(shù)來實(shí)現(xiàn)超靈敏探測(cè)U022+的傳感方法,通過結(jié)合目標(biāo)催化發(fā)卡組裝的放大技術(shù),U0 22+ 選擇性得到了極大改善。經(jīng)過優(yōu)化后,本發(fā)明的傳感器探測(cè)限值為2pM,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他方法 的探測(cè)限值。
[0040] 本發(fā)明首次提出了利用DNA酶和目標(biāo)催化發(fā)卡組裝放大策略來探測(cè)鈾酰離子的 方法,同時(shí)通過選用相應(yīng)的特異性酶,這種方法有望用于探測(cè)其他金屬離子和小分子。此 外,基于電化學(xué)方法便宜、容易使用和易于小型化的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn),本發(fā)明有望發(fā)展為一種可用 來評(píng)估環(huán)境污染和監(jiān)測(cè)環(huán)境修復(fù)的在線和實(shí)時(shí)探測(cè)鈾酰離子的便攜式商業(yè)傳感器。
【附圖說明】
[0041] 本發(fā)明將通過例子并參照附圖的方式說明,其中:
[0042] 圖1為鈾酰離子傳感器制作、檢測(cè)過程示意圖。
[0043] 圖2為不同濃度的鈾酰離子溶液的SWV圖。
[0044] 圖3為標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0045] 圖4為干擾離子測(cè)試結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0046] 本說明書中公開的所有特征,或公開的所有方法或過程中的步驟,除了互相排斥 的特征和/或步驟以外,均可以以任何方式組合。
[0047] 本說明書中公開的任一特征,除非特別敘述,均可被其他等效或具有類似目的的 替代特征加以替換。即,除非特別敘述,每個(gè)特征只是一系列等效或類似特征中的一個(gè)例子 而已。
[0048](一)原料
[0049] 本發(fā)明的
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