一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于載藥膠束形態(tài)測定領(lǐng)域，涉及一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法，尤其涉及一種利用CPS圓盤離心式納米粒度分析儀進(jìn)行的載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]聚合物膠束是納米范圍內(nèi)的藥物載體，與脂質(zhì)體、納米微球等藥物載體相比，具有如下優(yōu)勢:①大分子膠束具有良好的生物相容性，膠束能夠有效隔離藥物與外部介質(zhì)，削弱副作用較大的藥物對人體的影響；②由于大分子膠束外部有親水部分的保護(hù)，其不易與蛋白質(zhì)和吞噬細(xì)胞吸附和識別，保證了其在血漿和組織中的停留時(shí)間，體內(nèi)循環(huán)時(shí)間長，穩(wěn)定性好大分子膠束具有被動靶向性，表面修飾靶向基團(tuán)后具有主動靶向性粒徑小，狹窄區(qū)能夠富集滲透；⑤便于制備，保存方便。
[0003]膠束粒子的大小影響著其在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間、在器官組織中的分布，進(jìn)入細(xì)胞的機(jī)理以及細(xì)胞攝取動力學(xué)等等。例如，尺寸小于200nm的膠束例子比較難被RES系統(tǒng)清楚，而小于5 μπι的可以通過毛細(xì)血管，粒徑在10?lOOnm之間的聚合物膠束能夠獲得足夠長的循環(huán)時(shí)間，小于200nm的膠束能夠通過脾臟中內(nèi)皮細(xì)胞的過濾。因此，對于載藥膠束形態(tài)的粒徑的測定具有非常重要的意義。
[0004]CPS圓盤離心式納米粒度分析儀為圓盤離心式納米粒度分析儀，采用的是差示離心沉降法進(jìn)行顆粒粒度的測量和分析。CPS圓盤離心式納米粒度分析儀在高速旋轉(zhuǎn)的離心轉(zhuǎn)盤中建立起梯度溶液，之后注入待測樣品，測定樣品的沉降速度，根據(jù)斯多克斯定律(Stokes Law)測定樣品的粒徑。
[0005]但是，利用CPS圓盤離心式納米粒度分析儀測定粒徑時(shí)，要求待測樣品大于梯度溶液密度，且具有較大的密度差，這樣才能保證順利發(fā)生沉降，測定出沉降速度。而對于載藥膠束形態(tài)，密度一般較小，采用常規(guī)的CPS圓盤離心式納米粒度分析儀無法獲得其粒徑大小。
[0006]本領(lǐng)域需要開發(fā)一種能夠快速測定載藥膠束形態(tài)粒度的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法，所述方法采用常規(guī)的CPS圓盤離心式納米粒度分析儀，即可讀取載藥膠束形態(tài)粒徑。
[0008]本發(fā)明具體通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0009]一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法包括如下步驟:
[0010](1)配制氯化銫梯度溶液，所述氯化銫梯度溶液的平均密度為P p;向CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的低密度擴(kuò)展盤由高濃度向低濃度依次注入氯化銫梯度溶液，建立梯度；
[0011](2)待梯度溶液梯度穩(wěn)定后，將待測載藥膠束溶液從低密度擴(kuò)展盤邊緣上樣至CPS離心粒度儀，測定待測載藥膠束的沉降速率，獲得載藥膠束的形態(tài)粒徑；
[0012]其中，所述氯化銫梯度溶液的最低密度大于載藥膠束密度。
[0013]本發(fā)明通過改變載藥膠束的上樣位置，獲得了載藥膠束在梯度溶液中的沉降速度，進(jìn)而得到載藥膠束的形態(tài)粒徑。
[0014]本發(fā)明所述氯化銫梯度溶液的平均密度為1.1?1.5g/mL，例如1.2g/mL、l.3g/mL、1.4g/mL等，優(yōu)選1.25g/mL。平均密度太大，會降低測試粒徑的分辨率；若平均密度太小，則測試時(shí)間會太長。
[0015]本發(fā)明所述氯化銫梯度溶液的梯度個(gè)數(shù)為7?11，例如8、9、10，優(yōu)選9。
[0016]本發(fā)明所述待測載藥膠束的密度為P s，P p-p 0.lg/mL。0.lg/mL以上的密度差，在高速離心過程中，能夠有效實(shí)現(xiàn)載藥膠束的運(yùn)動軌跡的測定。
[0017]本發(fā)明所述待測載藥膠束溶液的濃度為1.25?100mg/mL，例如1.5mg/mL、8mg/mL、25mg/mL、40mg/mL、530mg/mL、60mg/mL、7Omg/mL、85mg/mL、90mg/mL 等。
[0018]本發(fā)明所述CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的轉(zhuǎn)速彡20000轉(zhuǎn)/min，例如25000轉(zhuǎn)/min、28000轉(zhuǎn)/min、30000轉(zhuǎn)/min、33000轉(zhuǎn)/min等。轉(zhuǎn)速太小，對于測試小粒徑的膠束來說，會大大增加測試時(shí)間。
[0019]本發(fā)明所述CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的離心時(shí)間^ 30min，例如35min、42min、50min、65min等。所述離心時(shí)間根據(jù)待測載藥膠束密度和梯度溶液平均密度的差值增大而縮短，此外，加大離心轉(zhuǎn)速，會縮短測試時(shí)間。
[0020]本發(fā)明步驟⑵所述上樣量為90?llOyL，例如93yL、96yL、99yL、103yL、108 μ L 等，優(yōu)選 10yLo
[0021]作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法包括如下步驟:
[0022](I)配制氯化銫梯度溶液，所述氯化銫梯度溶液的平均密度為P 口為1.25g/mL，所述梯度為9層；向CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的低密度擴(kuò)張盤由高濃度向低濃度依次注入氯化銫梯度溶液，建立梯度；
[0023](2)待梯度溶液梯度穩(wěn)定后，將待測載藥膠束溶液從低密度擴(kuò)張盤邊緣上樣至CPS圓盤離心式納米粒度分析儀，上樣量為100 μ L，測定待測載藥膠束的沉降速率，獲得載藥膠束的形態(tài)粒徑；所述CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的轉(zhuǎn)速多20000轉(zhuǎn)/min，所述CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的離心時(shí)間^ 30min。
[0024]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
[0025]本發(fā)明采用密度梯度離心法測試載藥膠束的形態(tài)粒徑，通過改變轉(zhuǎn)速和梯度液濃度，克服載藥膠束密度小的缺點(diǎn)，準(zhǔn)確測試出載藥膠束的形態(tài)粒徑，檢測下限為5nm，檢測上限為70nm，測定偏差在0.6±0.01%o
【附圖說明】
[0026]圖1是本發(fā)明實(shí)施例1提供的DSPE-PEG載藥膠束的粒徑；
[0027]圖2是本發(fā)明實(shí)施例2提供的DSPE-PEG載藥膠束的粒徑；
[0028]圖3是本發(fā)明實(shí)施例3提供的DSPE-PEG載藥膠束的粒徑。
【具體實(shí)施方式】
[0029]為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實(shí)施例如下。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明了，所述實(shí)施例僅僅是幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對本發(fā)明的具體限制。
[0030]制備例1
[0031]DSPE