效果就越好。但是，質(zhì)譜電離效率并非瞬 息萬變，一分鐘左右的時(shí)間范圍之內(nèi)的變化幅度通常可以忽略不計(jì)，所以內(nèi)標(biāo)的注入時(shí)間 沒有必要高精度控制，精度在秒范圍就足夠了。
[0093] 本發(fā)明采用軟件控制，讓多個(gè)樣品分析的色譜數(shù)據(jù)存儲(chǔ)在同一個(gè)數(shù)據(jù)文件中并保 持時(shí)間軸連續(xù)。為了測試出質(zhì)譜隨時(shí)間推移靈敏度的變化情況，對(duì)樣品系列的測試重復(fù)了 10遍，每遍之間還加了 15分鐘的間隙，總共歷時(shí)接近7小時(shí)。測得的色譜圖如圖12所示。
[0094] 在實(shí)施過程中每次內(nèi)標(biāo)的選擇均沒出現(xiàn)錯(cuò)誤，亦即，軟件每次都準(zhǔn)確無誤地計(jì)算 出了用哪個(gè)內(nèi)標(biāo)樣品進(jìn)行內(nèi)標(biāo)注射。然而從得到的結(jié)果看，雖然內(nèi)標(biāo)樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品實(shí)際 上是同樣的濃度，用的流速也一樣，得到的內(nèi)標(biāo)峰卻比樣品峰低了 20%左右，亦即，在質(zhì)譜 測定中，物質(zhì)通過色譜柱分離比直接注射靈敏度更高。用同樣的樣品在氣_質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)上 做同樣的實(shí)驗(yàn)，沒有出現(xiàn)同類問題。進(jìn)一步本實(shí)施例證明，通過色譜柱的液體由于柱壓很 高，IOOMPa(兆帕）左右，柱前的流速因液體體積壓縮而變小，柱后則會(huì)產(chǎn)生體積膨脹流速 加大，但總流速不變。造成進(jìn)入質(zhì)譜儀時(shí)的線速度比流動(dòng)注射要高。因?yàn)楸緦?shí)施例用的是 電噴霧離子化源，噴霧效果越好離子化效率就越高，得到的質(zhì)譜信號(hào)也就越強(qiáng)。液體從噴霧 口出來時(shí)的線速度越大，噴霧效果則越好。由此可見，用上述柱后流動(dòng)注射引進(jìn)內(nèi)標(biāo)的方法 不能補(bǔ)償樣品分析過程中因壓力變化而產(chǎn)生的信號(hào)強(qiáng)度波動(dòng)。但是，上述系統(tǒng)有一個(gè)很大 的好處：分析峰后面出現(xiàn)的任何干擾都不會(huì)影響到內(nèi)標(biāo)峰，因?yàn)閮?nèi)標(biāo)用的是獨(dú)立的流動(dòng)注 射系統(tǒng)引入質(zhì)譜儀的。
[0095] 本實(shí)施例采用如圖13所示的系統(tǒng)，將內(nèi)標(biāo)樣品直接引入色譜柱300后的溶劑流 中，成功解決了上述內(nèi)標(biāo)峰矮于樣品峰的問題。本實(shí)施例系統(tǒng)的運(yùn)行過程與前述系統(tǒng)基本 一樣，只是把內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣器600的樣品閥直接連接到分析管路中，在上述切換四通切換閥的 時(shí)刻把內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣器600的六通切換閥切換到注樣位置，讓內(nèi)標(biāo)樣品在分析流動(dòng)相的推動(dòng)下 得到同樣的線速度進(jìn)入質(zhì)譜儀，所得到的信號(hào)強(qiáng)度也就一樣了。
[0096] 本實(shí)施例中對(duì)樣品的分析重復(fù)了 10次，得到10個(gè)校準(zhǔn)曲線，時(shí)間跨度大約7小 時(shí)。圖14和圖15分別為第一個(gè)（起始時(shí)）和第十個(gè)（7小時(shí)后）校準(zhǔn)曲線的圖像。
[0097] 從圖中可以清楚看到，沒有內(nèi)標(biāo)時(shí)校準(zhǔn)曲線只能用二次項(xiàng)擬合曲線去代表所得數(shù) 據(jù)，而且擬合度并不理想，擬合系數(shù)R2小數(shù)點(diǎn)后面只有兩個(gè)9,尤其是比較起始時(shí)間收集的 數(shù)據(jù)和7小時(shí)候收集的數(shù)據(jù)，擬合函數(shù)的系數(shù)相差甚遠(yuǎn)，形狀也可以明顯看出差異，而使用 本實(shí)施例的動(dòng)態(tài)內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣方法后，內(nèi)標(biāo)樣品信號(hào)幾乎完全校正了標(biāo)準(zhǔn)樣品信號(hào)的波動(dòng)，同 時(shí)還把儀器的非線性相應(yīng)問題完全解決，使得儀器的線性響應(yīng)范圍極大地?cái)U(kuò)展了。用了內(nèi) 標(biāo)后的校正曲線幾乎是理想直線R值小數(shù)點(diǎn)后有四個(gè)9,理想是1。而且直線的斜率變化不 到千分之一，斜率代表靈敏度，靈敏度的變化是造成結(jié)果不準(zhǔn)確的關(guān)鍵因素，不用內(nèi)標(biāo)時(shí)， 分析靈敏度不僅隨時(shí)間在變而且隨濃度在變。僅僅10倍濃度范圍（如實(shí)施例一和二）沒 有內(nèi)標(biāo)時(shí)的校準(zhǔn)曲線就是彎的。實(shí)施例一和二還表明2小時(shí)內(nèi)質(zhì)譜的靈敏度下降了 14%， 而實(shí)施例三7小時(shí)后上升了 25.4%。由此可見，測定靈敏度的變化很可能是由多種不確定 因素造成的，隨時(shí)間變化的方向無法預(yù)測。采用本實(shí)施例的內(nèi)標(biāo)法能非常有效地消除這些 變化因素，而且直接用待測物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)去做內(nèi)標(biāo)，大大節(jié)省了尋找內(nèi)標(biāo)的麻煩，尤其對(duì)于 藥物分析，本發(fā)明避免了使用同位素內(nèi)標(biāo)，可以節(jié)省大量費(fèi)用和加快藥物臨床實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程。
[0098] 本發(fā)明特別適合于藥物在血樣中的濃度分析，尤其適合于藥-時(shí)曲線的確立。在 用藥或藥物開發(fā)中，患者或?qū)嶒?yàn)對(duì)象用藥以后按時(shí)間抽取血樣，對(duì)血樣進(jìn)行測定后得到藥 物在各個(gè)血樣中的濃度對(duì)時(shí)間作圖，這樣的圖譜就叫藥-時(shí)曲線。在本發(fā)明的三個(gè)實(shí)施例 中，所有樣品處理與分析都是按血樣分析的規(guī)范完成的。開辟質(zhì)譜定量在臨床藥物檢測領(lǐng) 域里的應(yīng)用也是本發(fā)明的一個(gè)既定目標(biāo)。
[0099] 應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可 以根據(jù)上述說明加以改進(jìn)或變換，所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保 護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)方法，其特征在于，包括步驟： 取一標(biāo)準(zhǔn)物用待測樣品的空白基底配置成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再取同樣標(biāo)準(zhǔn)物用待 測樣品的空白基底配置成一至若干個(gè)濃度的內(nèi)標(biāo)溶液，內(nèi)標(biāo)系列的濃度范圍和跨度與標(biāo)準(zhǔn) 溶液一致； 將所述不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液經(jīng)樣品處理步驟處理成標(biāo)準(zhǔn)樣品和內(nèi)標(biāo)樣 品； 將標(biāo)準(zhǔn)樣品和內(nèi)標(biāo)樣品注射到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)行分析測定； 將測定到的標(biāo)準(zhǔn)樣品與內(nèi)標(biāo)樣品兩者的峰面積之比對(duì)濃度作圖得到模擬內(nèi)標(biāo)法定量 的校準(zhǔn)曲線； 將待測樣品經(jīng)樣品處理步驟進(jìn)行處理后注射到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)行分析測定，然 后將測得信號(hào)的峰面積與校準(zhǔn)曲線比對(duì)確定出待測樣品的濃度。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)方法，其特征在于，每次進(jìn)完一個(gè) 標(biāo)準(zhǔn)樣品之后停頓片刻，等到測定完標(biāo)準(zhǔn)樣品所需的時(shí)間之后，再注射內(nèi)標(biāo)樣品使內(nèi)標(biāo)樣 品通過色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的色譜柱，標(biāo)準(zhǔn)樣品和內(nèi)標(biāo)樣品在同一個(gè)檢測周期中完成分離 分析。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)方法，其特征在于，每次進(jìn)完一個(gè) 標(biāo)準(zhǔn)樣品之后，再進(jìn)內(nèi)標(biāo)樣品，并使內(nèi)標(biāo)樣品繞過色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的色譜柱以流動(dòng)注 射的方式直接進(jìn)入質(zhì)譜儀進(jìn)行測定。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)方法，其特征在于，每次進(jìn)完一個(gè) 標(biāo)準(zhǔn)樣品之后，在檢測到標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜峰之后，再進(jìn)與該標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度最接近的內(nèi)標(biāo)樣 品，并使內(nèi)標(biāo)樣品繞過色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的色譜柱以流動(dòng)注射的方式直接進(jìn)入質(zhì)譜儀進(jìn) 行測定。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)方法，其特征在于，在使用流動(dòng)注 射注入內(nèi)標(biāo)樣品時(shí)，使流動(dòng)注射流速比樣品分析中流動(dòng)相的流速低20 %，或者提高注射時(shí) 噴霧氣體的流量，從60升/分鐘提高到70-100升/分鐘。6. -種質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其特征在于，包括： 色譜流動(dòng)相及流動(dòng)相輸送裝置； 連接于流動(dòng)相輸送裝置的進(jìn)樣器； 連接于進(jìn)樣器的色譜柱； 與色譜柱相配合的流動(dòng)相切換裝置； 連接于色譜柱的質(zhì)譜儀； 控制以上硬件實(shí)施模擬內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜定量過程的軟件系統(tǒng)； 所述進(jìn)樣器包括進(jìn)樣針以及連接于進(jìn)樣針的用于在進(jìn)樣狀態(tài)和注樣狀態(tài)之間切換的 進(jìn)樣閥，所述進(jìn)樣針與進(jìn)樣閥之間通過樣品環(huán)連接。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其特征在于，流動(dòng)相切換裝 置是兩個(gè)連接在色譜柱前后的三通切換閥。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其特征在于，流動(dòng)相切換裝 置是一個(gè)連接在色譜柱的四通切換閥。9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其特征在于，流動(dòng)相切換裝 置是連接在色譜柱的六通切換閥。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其特征在于，所述六通切換 閥是用于內(nèi)標(biāo)樣品注射的內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣器中的六通進(jìn)樣閥。11. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其特征在于，還包括連接 在四通切換閥上的內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣裝置，所述內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣裝置包括一連接于四通切換閥的內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣 器、連接于內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣器的第二流動(dòng)相輸送裝置、連接于第二流動(dòng)相輸送裝置的第二流動(dòng)相 存儲(chǔ)裝置。12. -種如權(quán)利要求6-11任一項(xiàng)所述的模擬內(nèi)標(biāo)裝置的應(yīng)用，其特征在于，將所述模 擬內(nèi)標(biāo)裝置應(yīng)用于血樣檢測中。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)方法、裝置及應(yīng)用。方法包括步驟：取一標(biāo)準(zhǔn)物用待測樣品的空白基底配置成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再取同樣標(biāo)準(zhǔn)物用待測樣品的空白基底配置成一至若干個(gè)濃濃度的內(nèi)標(biāo)溶液；將所述不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液經(jīng)樣品處理步驟處理成標(biāo)準(zhǔn)樣品和內(nèi)標(biāo)樣品；將標(biāo)準(zhǔn)樣品和內(nèi)標(biāo)樣品先后注射到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)行分析測定；將標(biāo)準(zhǔn)樣品與內(nèi)標(biāo)樣品兩者的峰面積之比對(duì)濃度作圖得到模擬內(nèi)標(biāo)法定量的校準(zhǔn)曲線；將待測樣品經(jīng)樣品處理步驟進(jìn)行處理后注射到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)行分析測定，然后將測得信號(hào)的峰面積與校準(zhǔn)曲線比對(duì)確定出待測樣品的濃度。本發(fā)明在不采用同位素內(nèi)標(biāo)的情況下，使質(zhì)譜定量分析達(dá)到95％以上準(zhǔn)確度。
【IPC分類】G01N27/62
【公開號(hào)】CN105223264
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510603885
【發(fā)明人】朱建雄
【申請(qǐng)人】廣東聯(lián)捷生物科技有限公司
【公開日】2016年1月6日
【申請(qǐng)日】2015年9月21日