離效率變化引起的的不準(zhǔn)確問題。本發(fā)明可以在不采用同位素內(nèi)標(biāo)的情況下，達(dá)到95%以 上準(zhǔn)確度；本發(fā)明大范圍擴展了質(zhì)譜定量分析的線性響應(yīng)范圍。另外，本發(fā)明的方法和裝置 可對患者用藥后藥物在患者血樣中的濃度進行準(zhǔn)確測定從而確定所用藥物對特定患者是 否有效，以此達(dá)到精準(zhǔn)用藥的目的。
【附圖說明】
[0034] 圖1為本發(fā)明實施例一的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0035] 圖2為本發(fā)明實施例一的另一結(jié)構(gòu)示意圖
[0036] 圖3為本發(fā)明實施例一的色譜圖。
[0037] 圖4為本發(fā)明實施例一起始時的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0038] 圖5為本發(fā)明實施例一 2小時后的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0039] 圖6為本發(fā)明實施例二的色譜圖。
[0040] 圖7為本發(fā)明實施例二起始時的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0041] 圖8為本發(fā)明實施例二2小時后的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0042] 圖9為本發(fā)明實施例二中六通切換閥的狀態(tài)變化圖。
[0043] 圖10為本發(fā)明實施例二中內(nèi)標(biāo)進樣裝置的狀態(tài)變化圖。
[0044] 圖11為本發(fā)明實施例三的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0045] 圖12為本發(fā)明實施例三的色譜圖。
[0046] 圖13為本發(fā)明實施例三另一結(jié)構(gòu)示意圖。
[0047] 圖14為本發(fā)明實施例三起始時的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0048] 圖15為本發(fā)明實施例三7小時后的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實施方式】
[0049] 本發(fā)明提供一種質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)方法及裝置，為使本發(fā)明的目的、技術(shù) 方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體 實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0050] 本發(fā)明所提供的一種質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)方法，其包括步驟：
[0051] 取一標(biāo)準(zhǔn)物用待測樣品的空白基底配置成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再取同樣標(biāo)準(zhǔn)物 用待測樣品的空白基底配置一至若干個固定濃度的內(nèi)標(biāo)溶液，內(nèi)標(biāo)系列的濃度范圍和跨度 與標(biāo)準(zhǔn)溶液一致；
[0052] 將所述不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液經(jīng)樣品處理步驟處理成標(biāo)準(zhǔn)樣品和內(nèi)標(biāo) 樣品；
[0053] 將標(biāo)準(zhǔn)樣品和內(nèi)標(biāo)樣品先后注射到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進行分析測定；
[0054] 將測定到的標(biāo)準(zhǔn)樣品與內(nèi)標(biāo)樣品兩者峰面積之比對濃度作圖得到模擬內(nèi)標(biāo)法定 量的校準(zhǔn)曲線；
[0055] 將待測樣品經(jīng)樣品處理步驟進行處理后注射到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進行測定，然 后將測得信號的峰面積與校準(zhǔn)曲線比對確定出待測樣品的濃度。
[0056] 在具體實施過程中，可以每次進完一個標(biāo)準(zhǔn)樣品之后停頓片刻（等到測定完標(biāo)準(zhǔn) 樣品所需的時間之后，如30s，以保證標(biāo)準(zhǔn)樣品信號與后繼的內(nèi)標(biāo)樣品信號不發(fā)生重疊）， 再注射內(nèi)標(biāo)樣品使內(nèi)標(biāo)樣品通過色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的色譜柱，標(biāo)準(zhǔn)樣品和內(nèi)標(biāo)樣品在同 一個檢測周期中完成分離分析。也可以每次進完一個標(biāo)準(zhǔn)樣品之后，再進內(nèi)標(biāo)樣品，并使內(nèi) 標(biāo)樣品繞過色譜柱以流動注射的方式直接進入質(zhì)譜儀進行測定?；蛘呙看芜M完一個標(biāo)準(zhǔn)樣 品之后，在檢測到標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜峰之后，再進與該標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度最接近的內(nèi)標(biāo)樣品，并使 內(nèi)標(biāo)樣品繞過色譜柱以流動注射的方式直接進入質(zhì)譜儀進行測定。原則是得到的內(nèi)標(biāo)樣品 信號與標(biāo)準(zhǔn)樣品信號盡量靠近而又不重疊。
[0057] 在注射內(nèi)標(biāo)樣品時，使注射流速減低20%，或者提高注射時噴霧氣體的流量，從 60升/分鐘提高到70-100升/分鐘（如優(yōu)選的80升/分鐘）。柱前注射比柱后注射在同 樣濃度的情況下靈敏度更高，究其原因，主要是噴霧離子化效率的改變，為此通過臨時改善 噴霧條件，提高柱后注射的噴霧效率，達(dá)到了消除靈敏度差異的目的。具體做法一是降低柱 后注射的流速，使得噴霧更完全，流速減低20%左右就可以消除掉這個靈敏度的差異；二 是提高噴霧氣體的流量，從60升/分鐘提高到70-100升/分鐘可以把差異減少到5%以 內(nèi)。
[0058] 本發(fā)明還提供一種質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其包括：
[0059] 色譜流動相及流動相輸送裝置；
[0060] 連接于流動相輸送裝置的進樣器；
[0061] 連接于進樣器的色譜柱；
[0062] 與色譜柱相配合的流動相切換裝置；
[0063] 連接于色譜柱的質(zhì)譜儀；
[0064] 控制以上硬件實施模擬內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜定量過程的軟件系統(tǒng)；
[0065] 所述進樣器包括進樣針以及連接于進樣針的用于在進樣狀態(tài)和注樣狀態(tài)之間切 換的進樣閥，所述進樣針與進樣閥之間通過樣品環(huán)連接。
[0066] 所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其中流動相切換裝置是兩個連接在色譜柱 前后的三通切換閥。
[0067] 所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其中流動相切換裝置是一個連接在色譜柱 的四通切換閥。
[0068] 所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其中流動相切換裝置是連接在色譜柱的六 通切換閥。
[0069] 所述的照片定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，其中流動相切換裝置就是用于內(nèi)標(biāo)樣品注 射的內(nèi)標(biāo)進樣器中的六通進樣閥。
[0070] 所述的質(zhì)譜定量分析的模擬內(nèi)標(biāo)裝置，還包括連接在四通切換閥上的內(nèi)標(biāo)進樣裝 置，所述內(nèi)標(biāo)進樣裝置包括一連接于四通切換閥的內(nèi)標(biāo)進樣器、連接于內(nèi)標(biāo)進樣器的第二 流動相輸送裝置、連接于第二流動相輸送裝置的第二流動相存儲裝置。
[0071] 本發(fā)明還提供一種如上所述的模擬內(nèi)標(biāo)裝置的應(yīng)用，將所述模擬內(nèi)標(biāo)裝置應(yīng)用于 血樣檢測中。
[0072] 下面通過具體實施例來對本發(fā)明進行詳細(xì)說明。
[0073] 實施例一：柱前內(nèi)標(biāo)注射
[0074] 取一標(biāo)準(zhǔn)物以甲醇做溶劑配置7個濃度：0. 250、0. 500、1. 00, 2. 00, 5. 00,8. 00， 10. 0yg/ml(微克/毫升）的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再取標(biāo)準(zhǔn)物配置一個2. 50yg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為 內(nèi)標(biāo)。標(biāo)準(zhǔn)樣品是取50微升上述標(biāo)準(zhǔn)溶液（7個濃度）加入到50微升人血血清并混勻，再 加入100微升（冷）甲醇，在震動器上震動5分鐘，讓血清中的蛋白沉淀，離心分離后取出 上層清液注射到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進行分析測定。本實施例所用到的硬件和通常的LC/ MS(液-質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)）并無二至，但需要在系統(tǒng)控制系統(tǒng)中加入一控制軟件，用于控制進樣， 使得每次進完一個標(biāo)準(zhǔn)樣品（不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液）之后停頓片刻再注射內(nèi)標(biāo)樣品，標(biāo)準(zhǔn) 樣品和內(nèi)標(biāo)樣品在同一個檢測周期中完成分離分析，只是內(nèi)標(biāo)樣品滯后于標(biāo)準(zhǔn)樣品被引入 到系統(tǒng)。內(nèi)標(biāo)樣品注入的滯后時間是在分析方法的開發(fā)過程中確定的，在色譜分離條件優(yōu) 化好以后，只要測定出待測物信號的基線寬度，滯后時間就設(shè)置為比基線寬度稍大一些就 可以了，關(guān)鍵是后面注進去的標(biāo)樣所產(chǎn)生的信號不與之前注進去的樣品信號產(chǎn)生重疊。
[0075] 如圖1所示，其工作過程是：1)進樣器200中的進樣針210在機器手（未示出）驅(qū) 動之下先插到樣品溶液（未示出），進樣器200中與進樣針210直接相連的針栗（未示出） 迅即啟動，通過進樣針210定量吸取標(biāo)準(zhǔn)樣品，本實施例是吸取5y1 (微升），與此同時進樣 閥230切換到加樣狀態(tài)。接下來機器手將吸好樣品的進樣針210插入與進樣閥230連接的 進樣口 220,針栗迅即把針內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)樣品通過進樣口 220推送進入樣品環(huán)240,樣品環(huán)240 環(huán)內(nèi)原有液體則被推進廢液。此過程稱作"上樣"或"加樣";2)完成加樣后，進樣閥隨即切 換到注樣狀態(tài)（如圖1中圓形虛線所示），裝了樣品的進樣環(huán)240此時一頭與高壓液相栗 100連通、另一頭通到色譜柱300,與此同時，流動相存儲裝置400中的溶劑（流動相）由高 壓液相栗100輸送通過樣品環(huán)240,把樣品環(huán)240里的標(biāo)準(zhǔn)樣品送入色譜柱300。此過程為 注樣過程，加樣與注樣的組合過程通稱為"進樣"；3)標(biāo)準(zhǔn)樣品通過進樣過程被送進色譜柱 300,標(biāo)準(zhǔn)樣品內(nèi)的各個化學(xué)組分會和色譜柱300內(nèi)的填充材料相互作用產(chǎn)生吸附，而流動 相在高壓液相栗100的推動下連續(xù)沖洗色譜柱300,使得吸附狀態(tài)的組分不斷被沖脫而產(chǎn) 生解吸附，各個樣品組分在色譜柱300固定相與流動相之間反復(fù)進行吸附-解吸附，但始終 被流動相帶動往色譜柱300的出口方向移動，由于移動速度與物質(zhì)在流動相與固定相之間 的分布系數(shù)相關(guān)，標(biāo)準(zhǔn)樣品中的組分因各自的分布系數(shù)不同最終分先后從色譜柱流出，相 互分離開來；4)分離后的標(biāo)準(zhǔn)樣品組分先后進入質(zhì)譜離子源進行離子化，產(chǎn)生的離子被質(zhì) 譜儀500分離然后一一測定。