一種檢測硒離子的試劑盒及其檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種檢測硒離子的試劑盒及其檢測方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 硒是"生命的火種"，在人體中含量雖少，但它對人體的生理機(jī)能的調(diào)控和維持人 體最佳營養(yǎng)狀態(tài)起到很大的作用。研究表明，硒在人體內(nèi)具有防癌抗癌、清除體內(nèi)自由基、 抗氧化、防衰老作用；硒能增強(qiáng)人體免疫力，如果缺少硒，人體的免疫力會大大降低，感染各 種疾病的危險明顯增加；硒還可以有效降低放療化療對人體的危害。
[0003] 硒是生物二重性元素，既是人體內(nèi)必需微量元素，又是一種毒性元素，其二重性與 生物體內(nèi)硒的含量有關(guān)。硒的生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的發(fā)展迫切需要詳細(xì)了解生物樣品中硒的含 量。因此，生物體中硒含量的測定具有重要的意義。
[0004] 目前測定生物樣品中硒離子的方法有多種，主要為化學(xué)法檢測和酶法檢測?；瘜W(xué) 法測定操作復(fù)雜，要求測定溫度在70°C以上，臨床上很難實現(xiàn)；采用酶法檢測不需要加熱， 在常溫下即可反應(yīng)，但是現(xiàn)有的酶法測定的試劑反應(yīng)復(fù)雜，成本較高，且檢測靈敏度低。因 此，研發(fā)一種檢測方便、試劑簡單、靈敏度高的檢測硒離子的產(chǎn)品具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明提供了一種檢測硒離子的試劑盒，該試劑盒采用酶循環(huán)法檢測， 檢測方便；此試劑盒只需兩步反應(yīng)，節(jié)省了原料和成本，適用于臨床檢測；本發(fā)明提供的試 劑盒靈敏度高、準(zhǔn)確性好，線性范圍寬，使用范圍廣，優(yōu)于以前的檢測方法，是臨床檢測的技 術(shù)性更新。
[0006] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明提供了一種檢測硒離子的試劑盒，其試劑包括pH為7. 0~7. 4的緩沖液、 谷胱甘肽、谷胱甘肽過氧化物酶、還原型輔酶II和谷胱甘肽還原酶。
[0008] 該試劑盒的反應(yīng)原理如下：
[0009]
[0010] 本發(fā)明的試劑盒采用酶循環(huán)法檢測，加入谷胱甘肽過氧化物酶、還原型輔酶 II、谷胱甘肽還原酶和底物谷胱甘肽即可重復(fù)反應(yīng)，反應(yīng)中消耗還原型輔酶II生成輔酶 II，在生化分析儀405nm波長下可檢測還原型輔酶II，進(jìn)而可計算還原型輔酶II的減 少速度，還原型輔酶II的減少速度與谷胱甘肽過氧化物酶的活性有關(guān)，谷胱甘肽過氧化 物酶的活性與樣本中硒離子的濃度相關(guān)，因此，此方法可準(zhǔn)確檢測出樣本中硒離子的濃 度。
[0011] 此試劑盒只需兩步反應(yīng)，反應(yīng)簡單，所需原料少，成本低，且在常溫下即可完成反 應(yīng)，適用于臨床檢測。
[0012] 本試劑盒采用具有生物活性的酶及一些鹽，對檢測后的醫(yī)療廢物的處理直接按照 醫(yī)療廢棄物處理即可，不增加多余處理步驟。
[0013] 作為優(yōu)選，緩沖液為磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液或MPOS緩沖液。
[0014] 作為優(yōu)選，緩沖液為磷酸鹽緩沖液。
[0015] 作為優(yōu)選，磷酸鹽緩沖液中包含磷酸二氫鈉或磷酸二氫鉀中的任意一種或兩者的 混合物。
[0016] 作為優(yōu)選，緩沖液的濃度為30~200mmol/L。
[0017] 作為優(yōu)選，谷胱甘肽的濃度為0. 1~2. Ommol/L。
[0018] 作為優(yōu)選，谷胱甘肽過氧化物酶的濃度為800~3000U/L。
[0019] 試劑中加入了谷胱甘肽過氧化物酶，可以與血清中的谷胱甘肽過氧化物酶一起作 用，增進(jìn)了反應(yīng)速度，試劑盒的加測靈敏度大大提升，同時提升了檢測的準(zhǔn)確性。
[0020] 作為優(yōu)選，還原型輔酶II的濃度為0. 1-0. 3mmol/L。
[0021] 作為優(yōu)選，谷胱甘肽還原酶的濃度為800~2500U/L。
[0022] 作為優(yōu)選，試劑盒中試劑還包括過氧化氫酶。
[0023] 作為優(yōu)選，過氧化氫酶的濃度為2~10KU/L。
[0024] 試劑中加入過氧化氫酶，可以有效的清除反應(yīng)過程產(chǎn)物過氧化氫及血清中的過氧 化氫對酶促反應(yīng)的干擾，因此，加入過氧化氫酶的試劑盒抗干擾能力強(qiáng)，檢測準(zhǔn)確度高。
[0025] 作為優(yōu)選，試劑盒中試劑還包括表面活性劑。
[0026] 作為優(yōu)選，表面活性劑為曲拉通X-100。。
[0027] 作為優(yōu)選，表面活性劑的濃度為0. 1~0. 5ml/L。
[0028] 在試劑中加入表面活性劑，可進(jìn)一步加快試劑盒檢測硒離子的過程的反應(yīng)速度。
[0029] 作為優(yōu)選，試劑盒中試劑還包括防腐劑。
[0030] 作為優(yōu)選，防腐劑為硫柳汞鈉鹽。
[0031] 作為優(yōu)選，防腐劑的濃度為0. 1~0. 5g/L。
[0032] 試劑盒中的試劑變質(zhì)后會導(dǎo)致試驗結(jié)果不準(zhǔn)確，在試劑中添加防腐劑可以防止試 劑的變質(zhì)，從而保證了試劑盒性能的穩(wěn)定。
[0033] 作為優(yōu)選，試劑盒中試劑為單試劑或雙試劑。
[0034] 作為優(yōu)選，試劑為雙試劑，包括Rl試劑和R2試劑。
[0035] 作為優(yōu)選，Rl試劑包括pH為7. 0~7. 4緩沖液、谷胱甘肽、谷胱甘肽過氧化物酶 和還原型輔酶II。
[0036] 作為優(yōu)選，Rl試劑還包括過氧化氫酶。
[0037] 作為優(yōu)選，Rl試劑還包括表面活性劑。
[0038] 作為優(yōu)選，Rl試劑還包括防腐劑。
[0039] 在本發(fā)明的一些實施例中，Rl試劑如下：
[0040]
[0041] 作為優(yōu)選，R2試劑包括pH為7. 0~7. 4緩沖液和谷胱甘肽還原酶。
[0042] 作為優(yōu)選，R2試劑還包括防腐劑。
[0043] 在本發(fā)明的一些實施例中，R2試劑如下：
[0044] 緩沖液 30 ~200mmol/L
[0045] 谷胱甘肽還原酶800~2500U/L
[0046] 防腐劑 0· 1 ~0· 5g/L。
[0047] 本發(fā)明還提供了一種采用本發(fā)明試劑盒檢測硒離子的方法，此方法為：取試劑與 樣品混合，孵育，在波長為405nm下讀取吸光度值，計算樣品中硒離子的濃度。
[0048] 作為優(yōu)選，當(dāng)試劑為雙試劑時，分為Rl試劑和R2試劑，Rl試劑包括pH為7. 0~ 7. 4緩沖液、谷胱甘肽、谷胱甘肽過氧化物酶和還原型輔酶II ;R2試劑包括pH為7. 0~7. 4 緩沖液和谷胱甘肽還原酶時，采用本發(fā)明試劑盒檢測硒離子的方法包括如下步驟：
[0049] 取Rl試劑與樣品混合，孵育Imin~5min，再與R2試劑混合，延遲2min，在波長為 405nm下讀取吸光度值，計算樣品中硒離子的濃度。
[0050] 本發(fā)明提供了一種檢測硒離子的試劑盒，其包括pH為7. 0~7. 4的緩沖液、谷 胱甘肽、谷胱甘肽過氧化物酶、還原型輔酶II和谷胱甘肽還原酶。試劑盒中加入的谷胱甘 肽過氧化物酶，可以與血清中的谷胱甘肽過氧化物酶一起作用，增進(jìn)了反應(yīng)速度，試劑盒的 檢測靈敏度大大提升，同時提升了檢測的準(zhǔn)確性。由實施例11的靈敏度檢測試驗可知， 本發(fā)明提供的試劑盒檢測硒離子的最低濃度為〇.〇lug/L，顯著（P〈0.05)低于現(xiàn)有硒離子 檢測試劑盒最低濃度〇. lug/L，因此，本發(fā)明試劑盒的檢測靈敏度和現(xiàn)有試劑盒相比顯著 (P〈0. 05)提高了。由實施例12可知，該試劑盒有效的檢測人血清中的硒離子的濃度，結(jié)果 準(zhǔn)確。由實施例13可知，本發(fā)明提供的試劑盒線性范圍寬，使用范圍廣。在本發(fā)明的一些 實施例中，由于試劑中加入過氧化氫酶，可以有效的清除反應(yīng)過程產(chǎn)物過氧化氫及血清中 的過氧化氫對酶促反應(yīng)的干擾，進(jìn)一步提高了檢測的準(zhǔn)確性。
[0051] 本發(fā)明的試劑盒采用酶循環(huán)法檢測，加入谷胱甘肽過氧化物酶、還原型輔酶II、谷 胱甘肽還原酶和底物谷胱甘肽在常溫下即可重復(fù)反應(yīng)，檢測方便。此試劑盒只需兩步反應(yīng)， 試劑簡單，節(jié)省了原料和成本，適用于臨床檢測。本發(fā)明還提供了一種采用本發(fā)明試劑盒檢 測硒離子的方法，該方法污染小，操作簡單。
【具體實施方式】
[0052] 本發(fā)明提供了一種檢測硒離子的試劑盒及其檢測方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒 本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技 術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較 佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】